树突状细胞疫苗联合Imiquimod对小鼠乳腺肿瘤的治疗作用

目的观察局部应用TLR7激动剂Imiquimod对树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗治疗小鼠肿瘤的影响,寻找增强DC肿瘤疫苗疗效的佐剂。方法培养乳腺肿瘤细胞株EMT-6,反复冻融法制备肿瘤相关抗原,小鼠乳腺区注射EMT-6制备荷瘤动物模型。用含重组小鼠GM-CSF和IL-4的培养液扩增培养Balb/c小鼠来源的BM-DC,负载肿瘤相关抗原(Ag-DC)后进行肿瘤治疗实验。荷瘤小鼠分别采用Imiquimod局部涂抹、Ag-DC皮内注射、Imiquimod联合Ag-DC进行治疗,检测不同处理方法小鼠的肿瘤生长情况。采用上述方案免疫Balb/c小鼠后细胞增殖抑制实验检测小鼠脾脏淋巴细胞对EMT-6细胞的杀伤效应。流式细胞术检测Imiquimod处理局部皮肤对BM-DC向局部引流淋巴结(DLN)迁移的影响。结果 Imiquimod联合Ag-DC治疗荷瘤小鼠可明显抑制肿瘤生长,与单纯Imiquimod、Ag-DC治疗组及NS处理对照组比较差异具有显著性。Imiquimod联合Ag-DC免疫小鼠后脾脏淋巴细胞杀伤肿瘤细胞能力较其它组明显增强。局部涂抹Imiquimod后注射BM-DC,24 h后DLN内BM-DC数量较对照组明显增多。结论 TLR7激动剂Imiquimod可增强BM-DC疫苗诱导的免疫应答,提高肿瘤治疗效果。其机制可能与Imiquimod诱导DLN BM-DC细胞数量增多有关。     

局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠CD4~+ CD25~+调节性T淋巴细胞比例和功能的影响

目的探讨局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)比例和功能的影响。方法小鼠随机分为荷瘤组、局部湿热/微波消融处理组和局部湿热联合微波消融处理组共4组,每组12只。先建立小鼠乳腺癌实验动物模型,分别进行局部湿热、微波消融或局部湿热联合微波消融处理。用FACS检测脾细胞中Tregs的比例变化;real-time PCR检测Foxp3 mRNA水平;FACS检测CTLA-4和GITR的表达;ELISA法检测TGF-β和IL-10的含量;增殖抑制实验观察CD4+CD25-T细胞体外增殖。结果与单一局部湿热处理组和微波消融处理组相比,Tregs在局部湿热联合微波消融处理组中的比例显著降低(P0.05)。并且,Tregs细胞的Foxp3、CTLA-4和GITR的表达也明显降低(P0.05),同时TGF-β和IL-10的分泌及抑制功能也显著削弱(P0.05)。结论湿热联合微波消融可以较单一治疗方法更有效的抑制肿瘤生长,这与其降低CD4+CD25+调节性T细胞的比例和功能密切相关。     

Th17细胞和调节性T细胞失衡参与实验性自身免疫性脑脊髓炎的发病

目的探讨Th17细胞和调节性T细胞(Treg)失衡在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病过程中的作用。方法建立EAE小鼠模型,在EAE发病的不同时期运用流式细胞术检测小鼠脾脏Treg比例变化,用实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测小鼠脾淋巴细胞Foxp3、视黄酸相关的孤儿受体γt(RoR-γt)以及脑组织IL-17 mRNA表达,ELISA检测小鼠外周血IL-6、转化生长因子β(TGF-β)及IL-17A含量变化。结果与佐剂对照组比较,CD4+CD25+Foxp3+Treg比例和Foxp3 mRNA的表达,在EAE发病初期及高峰期明显下降,而在慢性期明显升高(P0.05);RoR-γt mRNA表达量在发病初期与佐剂对照组比较显著增加(P0.05),而高峰期及慢性期与佐剂对照组比较则无显著差异(P0.05)。EAE组小鼠外周血中TGF-β、IL-6浓度在发病初期和高峰期明显升高(P0.05);随病情发展,IL-6浓度逐渐降低,在发病慢性期与佐剂对照组比较无明显差异(P0.05),而TGF-β浓度在发病慢性期仍较高,与佐剂对照组比较明显升高(P0.05)。EAE组小鼠外周血中IL-17A含量在EAE不同时期均有明显升高,且高峰期升高最明显(P0.05)。结论 Th17细胞/Treg失衡参与了EAE发病过程。     

中孕期小鼠CD4~+Foxp~(3+)调节性T细胞的比例变化

本实验通过检测中孕期小鼠全身及局部CD4+Foxp3+调节性T细胞的比例变化,探讨妊娠状态下CD4+Foxp3+调节性T细胞与异基因胎儿抗原刺激之间的相互关系。将成熟B ALB/c雌鼠与BALB/c雄鼠或C57BL/6雄鼠交配作为实验组,选取未孕BALB/c雌鼠为对照组。受孕10~12 d后分离小鼠的外周血、脾脏、淋巴结、胎盘,分别用流式细胞学、免疫组化、RT-PCR法检测相关组织中的CD4+Foxp3+调节性T细胞的变化。结果:(1)流式检测实验组中同基因孕鼠和异基因孕鼠脾脏的CD4+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例较对照组明显增高(P<0.01);但是同基因和异基因孕鼠之间这类细胞比例的变化并无明显差异(P>0.05)。同样,在淋巴结和外周血中也取得类似结果;(2)免疫组化S-P法显示对照组和实验组均可在脾脏、髂淋巴结组织中表达Foxp3,但是对照组Foxp3+调节性细胞的数目显著低于实验组(P<0.01),但是同基因和异基因妊娠组间无明显差异(P>0.05);(3)RT-PCR法从同基因孕鼠和异基因孕鼠的胎盘局部检出Foxp3 mR-NA的表达。中孕期小鼠全身相关组织中CD4+Foxp3+调节性T细胞的比例显著增高,其扩增并非由于父系来源的MHC抗原所致,而是由妊娠本身所介导。另外,在胎盘局部有Foxp3 mRNA的高表达,由此推测CD4+Foxp3+调节性T细胞可能在母胎界面的局部发挥作用,抑制针对胎儿的免疫排斥。     

IGF-2通过调控Treg/Th17免疫平衡促进小鼠结肠癌细胞移植瘤生长

目的 探讨胰岛素样生长因子-2(IGF-2)对结肠癌荷瘤小鼠Treg免疫活性的影响。方法 将24只Balb/c小鼠左侧腋部皮下注射小鼠结肠癌细胞CT26制备结肠癌荷瘤小鼠模型,并随机分为对照组（生理盐水）和IGF-2低、中、高浓度组（25μg/kg、50μg/kg、100μg/kg IGF-2）。检测胸腺指数和脾脏指数,酶联免疫（ELISA）法检测血清IL-10、IL-18、TGF-β1、IFN-γ水平,流式细胞仪检测血液Treg、Th17细胞比例,瘤组织称质量、计算小鼠促瘤率,TUNEL染色检测瘤组织细胞凋亡率,Western blot法检测瘤组织中Ki67、Caspase-3蛋白表达。结果 与对照组相比,IGF-2低、中、高浓度组结肠癌荷瘤小鼠血清IL-10、TGF-β1水平、血液Treg、Th17、Treg/Th17细胞比例、促瘤率及瘤组织中Ki67蛋白水平显著升高（P<0.05）,血清IL-18、IFN-γ水平、胸腺指数和脾脏指数及瘤组织细胞凋亡率、Caspase-3蛋白水平显著降低（P<0.05）;随着IGF-2浓度的升高,结肠癌荷瘤小鼠血清IL-10、TGF-β...     

体外扩增的Treg细胞抑制NK细胞介导的抗肿瘤免疫

目的研究CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)对NK细胞肿瘤杀伤力的影响及Treg细胞介导的抗肿瘤免疫抑制的机制;初步探讨过继输注NK细胞逆转Treg细胞介导的抗肿瘤免疫抑制的作用。方法免疫磁珠分离法(MACS)分离得小鼠脾脏Treg细胞及NK细胞,用流式细胞术检测其纯度。以CD3/CD28单克隆抗体磁珠和重组小鼠白介素2(rm IL-2)联合刺激体外扩增Treg细胞,重组小鼠白介素15(rm IL-15)、rm IL-2以及氢化可的松联合刺激体外扩增NK细胞。将扩增后Treg细胞及NK细胞按不同比例混合淋巴细胞培养,MTT比色法检测NK细胞的杀伤活性。将B16-F10小鼠黑色瘤细胞输注至Balb/c小鼠体内建立肺移植瘤模型[1],将荷瘤小鼠分为4组:A组单独接种B16-F10小鼠黑色瘤细胞;B组接种Treg细胞+B16-F10黑色素瘤细胞;C组接种B16-F10黑色素瘤细胞+NK细胞;D组接种Treg细胞+B16-F10黑色素瘤细胞+NK细胞。MTT比色法测定各实验组小鼠脾脏NK细胞的杀伤活性,并比较不同处理组小鼠肺部肿瘤结节数目。结果体外扩增后的Treg细胞对新鲜分选及扩增后的NK细胞活性均具有明显抑制作用(P0.05),且抑制作用呈剂量依赖关系;A组荷瘤小鼠NK细胞活性低于正常小鼠,且B组荷瘤小鼠NK细胞活性较A组进一步降低(P0.05);D组荷瘤小鼠NK细胞活性高于A组和B组荷瘤小鼠,但仍低于正常小鼠组(P0.05)。B组荷瘤小鼠肺部移植瘤数目(105.33±10.97)较A组明显增多(17±4.58)(P0.01);C组荷瘤小鼠肺部移植瘤数目(2.00±1.00)较A组(17±4.58)明显减少(P=0.037);D组荷瘤小鼠肺移植瘤数目(79.00±8.54)较B组明显降低(105.33±10.97)(P=0.030),但仍高于A组荷瘤小鼠(17±4.58)(P0.001)。结论体内种植肿瘤会抑制机体NK细胞活性;输注体外扩增Treg细胞能够通过抑制NK细胞发挥抗肿瘤免疫抑制;过继输注体外扩增NK细胞能够部分逆转Treg细胞介导的抗肿瘤免疫抑制。     

Ad(E1-).sT治疗乳腺癌移植瘤的作用及体内免疫激活效应

目的研究复制缺陷型腺病毒Ad(E1-).s T治疗小鼠乳腺癌移植瘤的作用,探讨Ad(E1-).sT的免疫激活效应。方法指数生长期的小鼠乳腺癌细胞4T1按2×10~6细胞/100μl PBS皮下荷瘤4～6周龄的BALB/c小鼠,建立具有完全免疫系统的乳腺癌移植瘤模型。荷瘤后第7天,将成瘤小鼠分为Buffer治疗组、Ad(E1-).Null治疗组和Ad(E1-).s T治疗组,分别瘤内给予PBS、Ad(E1-).Null和Ad(E1-).s T(2.5×10~(10) VPs/小鼠)进行治疗;第10天,重复治疗一次。于第7、12、15、19天,分别测定肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,于第12、18天,内眦静脉取血,检测小鼠血象和外周血T淋巴细胞亚型;于第19天处死小鼠,剥离肿瘤,测定肿瘤重量,并分离脾脏细胞,测定树突状细胞(DCs)的比例和数量。结果 Ad(E1-).s T治疗能够有效抑制乳腺癌移植瘤的生长,抑制肿瘤重量的增加。在机制上,Ad(E1-).s T能够调节小鼠外周血的血象,抑制淋巴细胞、粒细胞和中间细胞的增长;同时,Ad(E1-).s T能够促进T淋巴细胞的成熟和分化,降低未成熟淋巴细胞的比例,促进CD4~+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的增殖。此外,Ad(E1-).s T还增强小鼠脾脏DCs的扩增与成熟。结论 Ad(E1-).s T可通过调节机体抗肿瘤免疫反应,抑制乳腺癌移植瘤的生长。     

模拟失重抑制荷黑素瘤小鼠的T淋巴细胞抗肿瘤免疫功能

目的 研究模拟失重对小鼠T淋巴细胞抗肿瘤免疫功能的影响.方法 小鼠右后肢皮下注射B16细胞建立移植性恶性黑素瘤模型,采用头低位-15°～20°尾吊小鼠模拟失重模型.观察模拟失重对荷瘤小鼠肿瘤体积和生存时间的影响;采用全自动血细胞分析仪和流式细胞仪分别检测模拟失重条件下荷瘤小鼠外周血白细胞、淋巴细胞的变化和T淋巴细胞亚群的变化;采用ELISA法和LDH释放法分别检测模拟失重对肿瘤细胞诱导T淋巴细胞产生IL-2、TNF-α、IFN-γ的水平和肿瘤特异性CTL对肿瘤细胞杀伤活性的影响.结果 与对照组相比,模拟失重组荷瘤小鼠肿瘤生长速度加快,生存期缩短,外周血淋巴细胞总数降低,淋巴细胞比例降低,CD3+、CD4 +/CD3+、CD8+/CD3+T淋巴细胞所占比例降低,丝裂原诱导的脾脏T淋巴细胞增殖能力降低(P＜0.05或P＜0.01).模拟失重条件下,肿瘤细胞诱导产生的细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α水平降低,肿瘤特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤活性降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 模拟失重抑制小鼠T淋巴细胞抗肿瘤免疫功能.     

髓样抑制细胞免疫抑制机理的研究

目的:研究荷瘤小鼠来源的髓样抑制细胞(Myeloid derived suppressor cell,MDSC)在肿瘤免疫抑制中的作用机理。方法:用Percoll分离法从荷瘤小鼠的脾脏和骨髓中分离Gr-1+CD11b+MDSC;用流式细胞术检测MDSC对T细胞增殖的抑制作用;分别用生化法和ELISA技术检测MDSC体外培养上清中抑制性因子NO、ROS和IL-10、TGF-β的含量。结果:MDSC在荷瘤小鼠的脾脏和骨髓中聚集增多,且其在骨髓中所占的比例显著高于脾脏;MDSC可以明显抑制脾脏细胞的增殖,体外培养6小时的MDSC可以分泌大量NO、ROS和IL-10、TGF-β。结论:本实验进一步证实MDSC可以通过分泌大量NO、ROS和IL-10、TGF-β抑制T细胞增殖。     

红景天乙醇提取物调节Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤浸润T细胞数量并增强抗肿瘤免疫效应

目的探讨藏药红景天(RRL)的抗肿瘤免疫功能。方法将Lewis肺癌荷瘤小鼠随机分为生理盐水组、 500 mg/kg RRL乙醇提取物处理组和10 mg/kg环磷酰胺(CTX)处理组,处理10 d。计算小鼠生存率和肿瘤生长抑制率;流式细胞术检测肿瘤浸润的CD4~+T、 CD8~+ T细胞数量及FOXP3~+调节性T细胞(Treg)占CD4~+CD25~+Treg的比例; ELISA检测荷瘤小鼠血清中白细胞介素2 (IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)水平,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果 RRL乙醇提取物处理的Lewis荷瘤小鼠生存率显著提高,肿瘤生长受到抑制,肿瘤浸润的CD4~+T细胞和CD8~+T细胞数量增加, FOXP3~+ Treg占CD4~+CD25~+Treg的比例降低。荷瘤小鼠血清IFN-γ和IL-2水平提高,脾脏CTL的杀伤能力增强。结论 RRL乙醇提取物通过调节免疫细胞数量和功能增强抗肿瘤免疫效果。     

促红细胞生成素对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:检测促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对荷黑色素瘤小鼠免疫功能的影响.方法:将C57BL/6小鼠随机分为3组:正常对照组、盐水处理组和EPO处理组,盐水处理组和EPO处理组小鼠皮下接种黑色素瘤细胞B16.17天后,检测各组小鼠外周血中红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hct)和白细胞(WBC)数量及脾脏脏器指数;应用流式细胞术检测脾细胞CD4+、CD8+T细胞亚群的分布;ELISA检测血清中IL-2和TNF-α细胞因子的水平.结果:盐水处理组荷瘤小鼠外周血中RBC、Hb和Hct含量明显低于正常对照组小鼠(P＜0.05),应用EPO可明显提高荷瘤小鼠外周血中RBC、Hb和Hct含量及脾脏脏器指数(P＜0.05),三组小鼠外周血中WBC数量无明显差别(P＞0.05);盐水处理组及EPO处理组荷瘤小鼠脾脏CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+T细胞比值明显低于正常小鼠(P＜0.05).EPO处理组与盐水处理组相比,CD4+T细胞百分率无差别(P＞0.05),而CD8+T细胞百分率下降(P＜0.05),致使EPO处理组小鼠CD4 +/CD8+T细胞比值升高(P＜0.05);盐水处理组及EPO处理组荷瘤小鼠血清中TNF-α、IL-2含量明显低于正常小鼠(P＜0.05),EPO处理组小鼠血清中IL-2水平与盐水处理组相比增高(P＜0.05),但该两组小鼠血清中TNF-α含量无明显差别(P＞0.05).结论:EPO在改善荷瘤小鼠贫血状态的同时,还可通过提高外周血CD4 +/CD8+T细胞比值和IL-2含量而增强小鼠的免疫功能.     

与脐血多能干细胞共培养的小鼠淋巴细胞对AD小鼠的免疫调节作用

目的探讨与脐血多能干细胞(CB-SCs)共培养的淋巴细胞对阿尔兹海默病(AD)小鼠的免疫调节作用及治疗潜能。方法从人脐血中分离培养CB-SCs;从小鼠脾脏分离淋巴细胞;淋巴细胞与CB-SCs共同培养72 h或淋巴细胞单独培养;将AD小鼠随机分为实验组与对照组,实验组尾静脉注射与CB-SCs共培养的淋巴细胞,对照组尾静脉注射单独培养的淋巴细胞。注射结束后进行行为学实验,流式细胞学检测外周血淋巴细胞中调节性T细胞(Tregs)比例,ELISA检测小鼠外周血血浆中TNF-α和IL-10的表达,PCR检测AD小鼠脑内炎性因子的表达,免疫荧光染色检测AD小鼠脑内淀粉样斑块(β-amyloid,Aβ)含量。结果 1)实验组小鼠的空间学习记忆能力得到改善;2)实验组小鼠脑内的Aβ沉积量低于对照组;3)实验组外周血淋巴细胞中Tregs百分比及血浆中的抗炎因子IL-10浓度高于对照组(P0.05),而血浆中的促炎因子TNF-α浓度低于对照组(P0.001);4)实验组小鼠脑内IL-10的mRNA表达量高于对照组(P0.05),而TNF-α的mRNA表达量低于对照组(P0.05)。结论与脐血多能干细胞共培养的淋巴细胞对AD小鼠具有免疫治疗作用,主要通过增加Tregs细胞的比例并增强其抗炎功能来发挥作用。     

龙须菜对小鼠脾脏淋巴细胞内TGF-β表达的影响

目的 研究大型海藻龙须菜提取物对小鼠脾脏淋巴细胞内TGV-β表达的影响,并初探其免疫调控作用机制.方法 以大型海藻龙须菜为实验材料,采用流式细胞术对Balb/c 小鼠脾脏淋巴细胞进行表型分析,检测了不同浓度龙须菜提取物共培养条件下CD45+细胞内转化生长因子(TGF-β)表达水平的变化,并对产生TGF-β的细胞进行身份鉴定.结果 龙须菜提取物不同反应浓度处理条件下Balb/c 小鼠脾脏淋巴细胞中CD45+CD83+/CD45+及CD45+CD80+/CD45+细胞百分率与对照组比较无显著性差异(P＞0.05),但CD45+TGF-β/CD45+细胞百分率与龙须菜提取物反应液浓度则呈明显的线性剂量依赖关系(r2=0.814 5,P＜0.05),最适反应相对百分浓度为2%.TGV-β主要来源于CD3+T细胞(约占35.4%)和CD49b+NK细胞(约占46.6%).结论 提示龙须菜提取物具有通过TGF-β进行免疫抑制或生物调节的功能.     

髓源性抑制细胞在鼻咽癌患者外周血及荷瘤小鼠体内的水平及作用初探

目的探讨髓源性抑制细胞(MDSCs)在鼻咽癌患者外周血中的表达水平及其临床意义,并在荷瘤小鼠体内探讨MDSCs可能的作用。方法采用流式细胞术分析49例鼻咽癌患者外周血及荷瘤小鼠脾脏MDSCs的比例,采用ELISA分析鼻咽癌患者及荷瘤小鼠中MDSCs对T细胞分泌细胞因子的影响。结果鼻咽癌患者外周血中MDSCs的比例显著高于健康对照组,并且鼻咽癌患者外周血中MDSCs的比例与肿瘤的分期有关,晚期患者外周血中MDSCs的比例高于早期患者;鼻咽癌荷瘤小鼠脾脏内MDSCs的数量明显高于对照组;研究表明MDSCs可明显抑制T细胞分泌细胞因子。结论鼻咽癌患者外周血中MDSCs的比例较健康人高,且与鼻咽癌分期密切相关,荷瘤小鼠实验表明肿瘤组小鼠脾脏MDSCs的数量明显高于对照组,并且MDSCs可影响荷瘤小鼠细胞因子的分泌。MDSCs可能作为鼻咽癌生物治疗的1个靶点。     

山仙颗粒对Lewis肺癌荷瘤小鼠抗肿瘤免疫力及外周血中IFN-γ、TNF-β、IL-10的影响

目的:观察山仙颗粒对Lewis肺癌细胞增殖的影响及对Lewis肺癌荷瘤小鼠抗肿瘤免疫力及免疫微环境的影响,以探究山仙颗粒抑瘤及提高机体抗肿瘤免疫力的分子机制,为其临床应用提供深层次的理论依据。方法:腋下皮肤移植Lewis肺癌细胞建立小鼠荷瘤模型,分为空白组、模型组、化疗组和山仙颗粒组;通过对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织称重并计算抑瘤率,采用免疫组织化学法检测脾脏组织中淋巴细胞CD、CD8表达情况,采用CCK-8法检测淋巴细胞对Lewis肺癌细胞增殖的影响,采用ELISA法检测外周血中IFN-γ、TNF-β与IL-10的变化。结果:(1)山仙颗粒组对Lewis肺癌的抑瘤率为45.99%,显著高于化疗组(P0.05);(2)小鼠淋巴细胞可抑制Lewis肺癌细胞的增殖,并与淋巴细胞浓度和作用时间呈正相关;且脾脏组织中CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+比值及淋巴细胞对Lewis肺癌细胞的抑制率,模型组和化疗组显著低于空白组(P0.05),山仙颗粒组显著高于模型组和化疗组(P0.05),而山仙颗粒组与空白组比较无显著差异(P0.05);(3)模型组和化疗组小鼠外周血中的IFN-γ和TNF-β显著低于空白组(P0.05)、而IL-10显著高于空白组(P0.05),山仙颗粒组小鼠外周血中的IFN-γ、TNF-β显著高于模型组和化疗组(P0.05),而IL-10显著低于模型组与化疗组(P0.05);山仙颗粒组小鼠外周血中的IFN-γ、TNF-β、IL-10与空白组比较无明显差异(P0.05)。结论:山仙颗粒能明显抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织的生长,并具有提高小鼠脾脏指数、增强T淋巴细胞活性、使外周血中的IFN-γ、TNF-β上调而IL-10下调,提示山仙颗粒的抗肿瘤作用可能通过调节CD4~+T淋巴细胞含量、CD4~+/CD8~+、Th1/Th2比值,恢复肿瘤患者免疫功能稳态,提高机体免疫力、加强免疫监视功能有关。     

输精管结扎小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化

目的通过输精管结扎小鼠调节性T细胞的变化探讨结扎术对免疫功能的影响。方法雄性Balb/c小鼠120只,分为实验组和对照组,实验组行输精管结扎术。分别于术后10、16、20、24周取外周血,通过流式细胞仪对CD4+CD25+CD127-调节性T细胞进行检测。结果术后10周及16周小鼠外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞百分比与对照组相比差异无统计学意义,术后20及24周小鼠外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞百分比显著高于对照组,有统计学意义。结论输精管结扎术在一定时间内可能会对受试动物的调节性T细胞产生影响。     

体外扩增自体CD4~+CD25~+调节性T细胞促进小鼠供体来源肿瘤的转移

目的研究输注体外扩增自体CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)治疗是否存在增加供体来源肿瘤转移的风险。方法取Balb/c(H-2d)小鼠骨髓细胞,在重组鼠源性GM-CSF和IL-4诱导以及TNF-α刺激下分化为成熟树突状细胞。免疫磁珠法(MACS)从Balb/c(H-2d)小鼠脾脏分选出CD4+CD25+Tregs,加入成熟树突状细胞和高浓度重组鼠源性IL-2,体外扩增7 d。流式细胞术检测新鲜以及扩增后CD4+CD25+Tregs纯度及免疫抑制功能。将Balb/c(H-2d)小鼠随机分为2组,实验组:经尾静脉注射1×107体外扩增后CD4+CD25+Tregs,24 h后注射5×105 B16-F10(H-2b)(鼠源性黑色素瘤细胞);对照组:单独输注5×105 B16-F10(H-2b)。结果新鲜分选和扩增后CD4+CD25+Tregs纯度及免疫抑制功能无明显下降。对照组肺部肿瘤结节为(9±8)个,实验组肺部肿瘤结节为(118±15)个。与对照组相比,实验组肺部肿瘤结节明显增加(P0.01)。结论体外扩增的CD4+CD25+Tregs具有抑制机体抗肿瘤能力,过继输注体外扩增的自体CD4+CD25+Tregs治疗移植后排斥反应,能够增加供体来源肿瘤转移的风险。     

激发型4-1BB单抗联合凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞在恶性肿瘤免疫治疗中的作用

目的：研究激发型4-1BB单抗（2A）联合凋亡肿瘤细胞负载的DC（AP-DC）疫苗在小鼠B细胞淋巴瘤免疫治疗中的作用.方法：凋亡小鼠B细胞淋巴瘤细胞A20负载的DC用来制备AP-DC.A20荷瘤小鼠分别被注射AP-DC、2A单抗或二者联合.观察肿瘤生长情况及小鼠生存期.流式细胞术检测免疫治疗后荷瘤鼠脾脏T细胞的表型和胞浆内细胞因子;3H-TdR掺入试验检测T细胞体外增殖能力;ELISA法检测荷瘤鼠血清和脾脏T细胞培养上清中IL-2、IFN-γ和IL-10含量.结果：应用激发型4-1BB单抗2A或AP-DC疫苗对荷瘤小鼠开展免疫治疗,可抑制肿瘤生长,延长荷瘤鼠生存期,获得12.5%或25%的肿瘤完全缓解率.但二者联合应用,治疗效果更好,可获得62.5%的肿瘤完全缓解率,并且荷瘤鼠可长期生存.联合治疗后荷瘤鼠脾脏T细胞体外增殖更为显著,CD4^＋IFN-γ^＋细胞的比例也明显增加.IL-2和IFN-γ的分泌水平在联合治疗荷瘤鼠的血清和脾脏T细胞的培养上清中升高更明显,而IL-10的分泌则降低.结论：激发型4-1BB单抗和AP-DC在肿瘤免疫治疗中有协同作用.     

Sca-1 + bone marrow mesenchymal stem cells transplantation for the alleviation of delayed type hypersensitivity in mouse

目的 探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用.方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组.注射组于0、2及6d腹腔注射Sca-1+ BMSCs,对照组注射0.9％氯化钠注射液.所有小鼠在7和14 d时分别于背部皮下与足跖注射C57BL/6小鼠脾细胞.24h后用千分尺测量小鼠足跖的肿胀,ELISA法测外周血细胞因子及FACS法测脾脏免疫细胞比例.结果 注射组小鼠足跖的肿胀程度[ (0.368 *0.126) mm]显著轻于对照组[(0.731±0.111) mm,P＜0.01].注射组外周血中IL-10和TGF-β含量显著高于对照组(P＜0.05);而IL-12和TNF-α水平显著低于对照组(P＜0.05).注射组小鼠脾脏调节型T细胞和树突细胞的比例均明显高于对照组(P＜0.05).结论 BMSC通过上调抑炎因子和调节型免疫细胞的数量而减轻DTH小鼠的免疫反应.     

注射用免疫核糖核酸Ⅱ的免疫调节及对顺铂的增效减毒作用

目的探讨注射用免疫核糖核酸Ⅱ(BP素)对顺铂(DDP)的增效减毒作用及对S180荷瘤小鼠的免疫调节作用。方法建立小鼠S180皮下移植瘤模型,随机分组,采用腹腔注射给药,连续给药10 d,通过白细胞(WBC)计数、骨髓有核细胞计数,取肿瘤、胸腺、脾脏称重,计算抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数以及MTT法检测刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠脾脏T淋巴细胞增殖,观察BP素对顺铂的增效减毒作用。通过ELISA法检测血清中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平,通过腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬率的测定评价BP素对S180荷瘤小鼠的免疫调节作用。结果 BP素与DDP联合应用可显著提高DDP对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用(P0.01),明显改善DDP化疗所致的脾脏指数下降,外周血WBC数、骨髓有核细胞数的减少及脾脏T淋巴细胞增殖抑制等毒副作用(P0.01或P0.05);单用BP素可显著降低荷瘤小鼠血清中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平(P0.01或P0.05),提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率(P0.01)。结论 BP素对DDP具有增效减毒作用,并对S180荷瘤小鼠具有免疫调节作用。