单次大剂量与多次小剂量输注CIK治疗鼠肠癌效应的实验研究

探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)单次大剂量与分次小剂量输注两种治疗模式的抗肿瘤的作用。建立BALB/c小鼠结肠癌模型;体外诱导培养小鼠CIK细胞,7天后CIK单次大剂量组荷瘤鼠接受总剂量为1×107的CIK细胞一次性输注;CIK分次小剂量组荷瘤鼠分5次(隔天1次)接受总剂量与单次组相同的CIK细胞输注,绘制肿瘤生长曲线;治疗后第14天,采用流式细胞术检测各治疗组小鼠脾细胞CD3+、CD4+、CD8+、NK1.1+、DX5+等细胞表型;建立CIK治疗后小鼠脾细胞对C26皮下移植瘤的预防和治疗模型,预防模型统计一周出瘤率,治疗模型生存资料分析采用Kaplan-Meier法及log-rank检验;ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞经C26抗原刺激后分泌IFN-γ的能力。结果CIK单次治疗组小鼠肿瘤生长平均体积(253.30±43.59)mm3明显小于CIK分次治疗组(384.36±43.59)mm3,差异有统计学意义(P=0.042);CIK单次治疗组小鼠脾细胞相对于CIK分次治疗组、PBS对照组对C26结肠癌移植瘤表现出更好的预防和治疗效应(P0.05);CIK单次治疗组小鼠脾细胞较其余各组CD4+T细胞比例下调,而CD8+T细胞比例上调,差异有统计学意义(P0.05),而CD3+、NK1.1+、DX5+等细胞表型各组之间差异无统计学意义(P0.05);CIK单次治疗组小鼠脾细胞在经C26抗原刺激后分泌IFN-γ的能力最强,差异较其余各组有统计学意义(P0.05)。提示CIK单次大剂量输注较分次小剂量输注对BALB/c皮下结肠癌(C26)荷瘤小鼠具有更好的激发机体免疫应答效应以及肿瘤预防和治疗作用。     

重组人血管内皮抑制素对小鼠胃癌c-Myc,bFGF表达的影响

目的 通过构建荷胃癌小鼠模型研究重组人血管内皮抑制素对癌基因c-Myc和成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及可能机制.方法 20只小鼠皮下注射MFC小鼠前胃癌细胞从而构建小鼠胃癌移植瘤模型,后随机分成两组,每组10只,观察组腹腔注射0.8mg/kg重组人血管内皮抑素,对照组腹腔注射等量生理盐水.每天观察小鼠的一般情况,每3天测量肿瘤体积,绘制肿瘤体积生长曲线并对两实验组肿瘤体积进行比较;应用RT-PCR、Western bolt及免疫组织化学法检测两组小鼠肿瘤组织中c-Myc和bFGF的表达,免疫组织化学染色法检测肿瘤组织微血管密度(MVD)的表达,并通过Spearman分析c-Myc和bFGF两者的相关性.结果 在用药的过程中,对照组小鼠随着移植瘤结节的增大而发生行为明显改变,但观察组小鼠精神、反应、活动及进食饮水均如初,未见明显不良反应.治疗后第9d开始,观察组小鼠移植瘤体积明显小于对照组(P＜0.05),在第21 d最明显(P＜0.01).RT-PCR检测显示e-Myc,bFGF mRNA相对表达量明显低于对照组(P＜0.05);Western blot检测显也显示观察组c-Myc,bFGF蛋白的表达量明显低于对照组(P＜0.05);免疫组织化学检测显示c-Myc,bFGF阳性细胞数均明显低于对照组(P＜0.05),c-Myc,bFGF平均灰度值明显高于对照组(P＜0.05);对照组平均MVD为9.2±1.3,观察组为2.9±1.0,两组之间差异亦具有统计学差异(P＜0.05).且Spearman分析得出小鼠胃移植瘤中e-Myc和bFGF mRNA存在正相关(r=0.853,P=0.000).结论 重组人血管内皮抑制素通过抑制胃癌组织c-Myc,bFGF基因表达和血管生成.     

淫羊藿苷抑制β-catenin 和NF-κB p65 的活性对小鼠胰腺癌皮下移植瘤生长和运动的调节

目的:研究淫羊藿苷调控小鼠胰腺癌皮下移植瘤生长和运动的机制。方法:建立BALB/c小鼠皮下胰腺癌移植瘤模型后,分别给予生理盐水(对照组)、10 mg/kg淫羊藿苷(低剂量组)、20 mg/kg淫羊藿苷(中剂量组)、40 mg/kg淫羊藿苷(高剂量组)、5 mg/kg阿霉素(阿霉素组)腹腔给药干预,干预25 d后取出瘤体,检测瘤体重量和体积,并根据小鼠存活情况绘制生存曲线;TUNEL染色观察瘤组织凋亡情况,免疫组化检测Ki67、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白阳性表达率;qRT-PCR检测瘤组织中生长和运动标记分子基因相对表达情况,Western blot检测Wnt/β-catenin和核因子κB(NF-κB) p65信号通路关键蛋白表达情况。结果:与对照组相比,中、高剂量淫羊藿苷及阿霉素干预后,移植瘤的重量、体积,瘤组织中Ki67、VEGF的阳性表达率,Ki67、VEGF、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA相对表达量,β-catenin蛋白表达量、NF-κB p65蛋白磷酸化水平均显著降低(P0.05),小鼠的25 d存活率、瘤组织细胞凋亡率以及Caspase-3的mRNA相对表达量均显著升高(P0.05)。结论:淫羊藿苷可能通过抑制β-catenin和NF-κB p65的活性下调增殖及运动相关基因表达,上调凋亡相关基因表达从而调节小鼠胰腺癌皮下移植瘤的生长和运动。     

黄芪甲苷对人源宫颈癌细胞C4-1的生长抑制作用及机制研究

目的 研究黄芪甲苷对人源宫颈癌细胞C4-1接种的裸鼠移植瘤的生长抑制作用并探讨其作用机制。方法 Balb/C裸鼠随机分为对照组（不做建模处理）、模型组和黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组，C4-1皮下接种裸鼠建立宫颈癌模型，黄芪甲苷干预治疗后，检测各组小鼠的体质量、肿瘤体积、抑瘤率、血清中MMP-9、Gal-3和VEGF水平、肿瘤组织中微血管密度、miR-21和Stat-3基因表达，以及肿瘤组织中VEGFR和Stat-3蛋白表达水平。结果 与对照组相比，模型组小鼠血清中MMP-9、Gal-3和VEGF水平、组织中微血管密度、肿瘤组织中miR-21和Stat-3基因表达水平、VEGFR和Stat-3蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）；与模型组相比，黄芪甲苷干预治疗后肿瘤体积、MMP-9、Gal-3和VEGF水平、组织中微血管密度、肿瘤组织中miR-21和Stat-3基因表达水平，以及肿瘤组织中VEGFR和Stat-3蛋白均显著减小（P<0.05），高剂量组上述作用效果均显著高于低剂量组（P<0.05），且高剂量组抑瘤率显著大于低剂量组（P<0.05）。结论 黄...     

NS-398抑制肝癌SMMC-7721细胞及组织MVD值、VEGF、MMP-9的表达

目的探讨NS-398对肝细胞癌MVD值、VEGF、MMP-9表达的影响。方法采用RT-PCR和流式细胞术检测肝癌SMMC-7721细胞VEGF、MMP-9表达。采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤MVD,ELISA法测定血清中PGE2水平。结果在体外,NS-398可以呈剂量和时间依赖性显著抑制SMMC-7721细胞的VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达;在体内,可显著降低裸鼠移植瘤MVD、VEGF、MMP-9基因和蛋白表达(P<0.001),并能降低裸鼠血清中PGE2水平(P<0.001)。结论COX-2与肝细胞癌血管生成密切相关,NS-398可通过下调VEGF和MMP-9的表达而抑制肝细胞癌血管生成。     

奥沙利铂结合 CIK 细胞对人胃癌裸鼠腹膜移植模型体内抗肿瘤作用的实验研究

目的 比较单独应用奥沙利铂(L-OHP)、细胞因子诱导的杀伤(CIK细胞)和L-OHP联合CIK细胞对人胃癌裸鼠腹膜移植瘤生长的抑制作用,为临床上联合应用L-OHP和CIK细胞治疗胃癌提供实验依据.方法 通过提取健康供血者的PBMC,分别加入γ-IFN、IL-2、抗-CD3单克隆抗体和IL-1培养CIK细胞;用药效学体内实验法和病理形态学方法分别观察正常对照组、生理盐水对照组、不同剂量的L-OHP组、不同剂量的CIK细胞组和L-OHP CIK组对人胃癌裸鼠腹膜移植模型的体内抗肿瘤作用.结果 与NS对照组相比,L-OHP组(1.125、2.25 mg/kg)、CIK细胞组[(1～2)×108 mL-1]组人胃癌裸鼠腹膜移植模型治疗后生存期均明显延长,腹围明显减小(P＜0.01);L-OHP CIK组人胃癌裸鼠腹膜移植模型治疗后生存期进一步明显延长,腹围明显减小(P＜0.01),与正常对照组相比,上述指标无明显差异(P＞0.01).病理形态学结果显示,L-OHP组、CIK细胞组及L-OHP CIK组癌细胞坏死、凋亡改变逐渐加重.结论 L-OHP联合CIK细胞对人胃癌裸鼠腹膜移植瘤生长的抑制作用大于单独应用L-OHP或CIK细胞.     

NS-398对肝癌SMMC-7721细胞血管生成影响的体内体外实验研究

目的 探讨NS-398对肝细胞癌MVD值、VEGF、MMP-9表达的影响。方法 采用RT-PCR和流式细胞术检测肝癌SMMC-7721细胞VEGF、MMP-9表达。采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤MVD，ELISA法测定血清中PGE2水平。结果 在体外，NS-398可以呈剂量和时间依赖性显著抑制SMMC-7721细胞的VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达；在体内，可显著降低裸鼠移植瘤MVD、VEGF、MMP-9基因和蛋白表达(P<0.001)，并能降低裸鼠血清中PGE2 水平(P<0.001)。结论 COX-2与肝细胞癌血管生成密切相关，NS-398可通过下调VEGF和MMP-9的表达而抑制肝细胞癌血管生成。     

氟尿嘧啶联合CIK细胞在小鼠结肠癌模型中抗肿瘤效应的研究

探讨氟尿嘧啶(5-FU)、CIK细胞以及5-FU联合CIK细胞对小鼠结肠癌移植瘤生长的作用,为临床上联合应用5-FU和CIK细胞治疗结肠癌提供理论依据。建立BALB/C小鼠结肠癌模型,在体外诱导培养小鼠CIK细胞,5-FU(12.5mg/kg,d0)联合CIK细胞(1×107,d3)处理小鼠结肠癌荷瘤模型,并绘制肿瘤生长曲线,生存分析采用Kaplan-Meier法及logrank检验,应用流式细胞仪分析荷瘤鼠肿瘤组织中淋巴细胞CTLA-4和非淋巴细胞CD80、CD86表达;RT-PCR法检测肿瘤组织中IFN-γ和TNF-α表达量。5-FU联合CIK细胞治疗组小鼠肿瘤生长速度明显慢于单治疗组,差异有统计学意义(P<0.05);5-FU处理后小鼠移植瘤组织中CD45+细胞表面CTLA-4表达量提高,且CD45-细胞CD80和CD86表达量增加;5-FU联合CIK细胞治疗可提高肿瘤组织IFN-γ与TNF-α表达量,且联合治疗组与单治疗组中IFN-γ的表达量之间的差异有统计学意义(P<0.05)。5-FU联合CIK细胞治疗对结肠癌移植瘤生长的抑制作用大于单独应用5-FU或CIK细胞,且可提高BALB/C小鼠结肠癌模型免疫功能。     

N-去硫酸肝素对胃癌碱性成纤维细胞生长因子基因表达和血管形成的影响

目的 研究N-去硫酸肝素对人胃癌组织原位移植NOD-SCID小鼠转移模型的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因表达、血管形成和肿瘤转移影响.方法 建立人胃癌组织原位移植NOD SCID小鼠胃癌转移模型.移植后一周,20只小鼠随机分成两组,分别静脉注射生理盐水(0.9%氯化钠组)与10 mg/kg N-去硫酸肝素(N-去硫酸肝素组),每周两次,共3周.第6周处死动物,观察肿瘤转移情况,免疫组织化学检测肿瘤组织微血管密度表达,荧光定量PCR检测肿瘤组织bFGF基因mR-NA表达.结果0.9%氯化钠溶液组10只小鼠9只有肿瘤转移,N-去硫酸肝素组10只小鼠只有2只转移,两组间差异有统计学意义(P《0.05).未发现出血等不良反应.0.9%氯化钠溶液组平均微血管密度为9.1士3.4,N-去硫酸肝素组为4.7±1.8,两组间差异有统计学意义(t=3.617,P《0.05).荧光定量PCR测定显示,N.去硫酸肝素组bFGF mRNA(2.60±0.56%)相对表达量较0.9%氯化钠溶液组(30.65±6.84%)低,两组差异有统计学意义(t=4.08,P《0.01).结论 N-去硫酸肝素通过抑制肿瘤组织bFGF基因表达和血管生成,抑制肿瘤转移.N-去硫酸肝素无明显出血等不良反应.     

麻杏石甘汤对哮喘模型小鼠气道重塑及肺组织MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:观察麻杏石甘汤对哮喘模型小鼠气道重塑及肺组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)表达的影响,探讨其治疗哮喘的可能机制。方法:将72只健康雌性BALB/c小鼠随机分为:空白对照组,模型组,麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组,阳性对照组。采用卵清蛋白致敏激发建立小鼠哮喘模型。空白对照组和模型组于激发前30 min以生理盐水灌胃;麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组分别于激发前30 min以麻杏石甘汤按5.0 g/kg、10.0 g/kg和20.0 g/kg剂量灌胃;阳性对照组于激发前30 min以地塞米松按0.005 g/kg剂量灌胃。连续给药7 d后,观察气道反应性、支气管肺泡冲洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)计数、杯状细胞百分比和胶原沉积的变化;ELISA法检测MMP-9和TIMP-1水平;Western blot法检测MMP-9和TIMP-1的蛋白表达;RT-qPCR法分析检测MMP-9和TIMP-1的mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型组的气道反应性、杯状细胞百分比、胶原沉积、BALF中EOS计数及肺组织MMP-9和TIMP-1的mRNA和蛋白水平均显著升高(P 0.01);与模型组比较,麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组及阳性对照组上述指标则明显降低(P 0.05或P 0.01)。结论:麻杏石甘汤可能通过降低MMP-9和TIMP-1的表达改善哮喘模型小鼠气道重塑状态。     

阿米福汀对苯并[a]芘诱导腹主动脉瘤形成的作用

目的:研究阿米福汀对苯并[a]芘(Ba P)诱导C57BL/6J小鼠腹主动脉瘤(AAA)形成的作用,并探讨相关机制。方法:体外培养RAW264.7单核巨噬细胞,分为正常对照组,溶剂对照组(即DMSO组),Ba P组,低剂量(1μmol/L)阿米福汀组,中剂量(5μmol/L)阿米福汀组及高剂量(25μmol/L)阿米福汀组,应用Western blot法检测体外培养的RAW264.7单核巨噬细胞基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-12、TNF-α、NF-κB表达。48只C57BL/6J小鼠(8月龄,雄性)随机分为对照组、模型组(AngⅡ+Ba P组)、低剂量(50 mg/kg)阿米福汀组、高剂量(100 mg/kg)阿米福汀组。6周后取腹主动脉察看标本形态;行HE、Masson染色观察血管形态结构;测定腹主动脉的血管周长。Western blot、免疫组化法评价腹主动脉组织中的巨噬细胞浸润情况及MMP-9、MMP-12、TNF-α、NF-κB的表达。结果:Western blot发现Ba P刺激使巨噬细胞MMP-9、MMP-12、TNF-α、NF-κB的表达升高,而阿米福汀对此有显著抑制作用,且呈剂量依赖性(P0.05)。动物实验可见对照组成瘤率为0,高剂量阿米福汀组成瘤率为16.67%,与模型组(58.33%)和低剂量阿米福汀组(33.33%)相比显著降低(P0.05)。免疫组化结果显示高剂量阿米福汀组腹主动脉壁的巨噬细胞浸润程度及TNF-α、MMP-9、MMP-12、NF-κB的表达较模型组和低剂量阿米福汀组相比显著下降(P0.05)。Western blot实验结果证实高剂量阿米福汀组腹主动脉壁TNF-α、MMP-9、MMP-12、NF-κB的表达较模型组和低剂量阿米福汀组相比显著下降(P0.05)。结论:阿米福汀可以抑制Ba P诱导的巨噬细胞的活化,同时可以抑制Ba P诱导的小鼠腹主动脉瘤发生、发展,其机制可能跟抑制NF-κB途径、巨噬细胞浸润及MMPs、TNF-α的表达有关。     

Decorin基因转染对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:探讨核心蛋白聚糖(DCN)对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的影响及可能的机制。方法:构建裸鼠胃癌移植瘤模型,将重组质粒pEGFP-N1-DCN注入肿瘤中央及基底部,以空质粒组和生理盐水组作为对照,测量肿瘤体积和质量的变化,RT-PCR及Western blot法检测DCN的表达,Western blot法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,免疫组织化学染色方法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:裸鼠胃癌移植瘤模型构建成功,与对照组比较,重组质粒组肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积和质量明显变小(P<0.05);RT-PCR显示重组质粒组DCN表达增强(P<0.05),Western blot结果显示重组质粒组有融合蛋白的表达,重组质粒组TGF-β1及MMP-9蛋白表达均降低(P<0.05);免疫组化显示重组质粒组VEGF表达降低(P<0.05)。结论:DCN基因可以抑制裸鼠移植瘤生长,其机制可能与转化生长因子-β1及基质金属蛋白酶-9蛋白的表达降低和肿瘤新生血管形成抑制有关。     

抗HER-2工程抗体chA21对人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤血管生成的影响

目的 探讨抗HER-2工程抗体chA21对过表达HER-2的人卵巢癌细胞株SKOV3裸小鼠移植瘤血管生成的影响.方法 建立人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤模型,随机分成阴性对照组和chA21组,连续5周尾静脉注射给药,观察肿瘤生长变化;5周后处死裸鼠取下瘤体,利用组织芯片及免疫组化方法结合显微图像分析系统定量检测VEGF、DLL4表达情况,并用CD31免疫组化染色比较两组微血管密度(MVD)值.结果 chA21组肿瘤组织中VEGF、DLL4的表达及MVD值均显著低于阴性对照组(P<0.05).结论 抗HER-2工程抗体chA21能显著抑制人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤的血管生成.     

rhGH联合5-FU治疗人胃癌裸小鼠皮下移植瘤的作用及机制

目的探讨重组人生长激素(rhGH)联合氟尿嘧啶(5-FU)治疗人胃癌裸小鼠皮下移植瘤的效果及作用机制。方法选取成功建模的人胃癌MKN-45裸鼠皮下移植瘤模型小鼠72只,采用随机数字表法分为空白组(等量生理盐水处理)、GH组(rhGH2IU/(kg·d))、5-FU组(5-FU25mg/(kg·d))、联合组(rhGH2IU/(kg·d)+5-FU25mg/(kg·d)),每组18只,对比各组小鼠的体质量、荷瘤体积、抑瘤率、肿瘤细胞周期占比、肿瘤组织中Caspase-8、Caspase-9蛋白的表达,观察小鼠的血生化指标。结果 5-FU组、联合组小鼠荷瘤体积、荷瘤质量、S期细胞占比显著的低于空白组和GH组(P0.05),抑瘤率、肿瘤细胞G0期/G1期、G2期/M期占比、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达水平显著的高于空白组和GH组(P0.05);5-FU组与联合组小鼠荷瘤体积、荷瘤质量及抑瘤率、肿瘤细胞G0期/G1期、G2期/M期、S期占比、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05);5-FU组的白蛋白、总蛋白、白细胞、红细胞、血小板水平均低于空白组、GH组及联合组(P0.05),谷丙转氨酶水平高于空白组、GH组及联合组(P0.05);联合组白细胞水平较空白组和GH组降低(P0.05)。结论 rhGH联合5-FU治疗人胃癌裸小鼠皮下移植瘤不影响5-FU的抗癌效果,同时可以改善5-FU引起的体质量减低及相关化疗毒副作用。     

瑞舒伐他汀通过抑制PI3K/AKT信号通路活性缓解小鼠颈动脉粥样硬化

目的探讨瑞舒伐他汀缓解小鼠颈动脉粥样硬化的机制及相关信号通路。方法将75只Apo E-/-小鼠随机分为5组,采取不同的干预措施,分别为对照组、颈动脉粥样硬化模型组、瑞舒伐他汀低剂量组、中剂量组、高剂量组。检测5组小鼠的血脂相关指标;实验结束后,处死小鼠,采用PCR技术,检测各组小鼠颈动脉组织中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA的表达差异;采用Western-blot检测颈动脉组织中p-PI3K蛋白、p-AKT蛋白、PI3K蛋白、AKT蛋白的表达水平。结果①与模型组相比,3个瑞舒伐他汀治疗组小鼠的TC、TG、LDL-C水平明显下降,HDL-C明显升高(P0.05)。3个治疗组小鼠颈动脉总面积与模型组相比差异无统计学意义(P0.05),但斑块面积显著较小(P0.05),且高剂量组的斑块面积最小。②对照组小鼠颈动脉组织中MMP-2的阳性率较低,模型组的MMP-2的阳性率及染色强度明显较高。低、中、高剂量组的的染色阳性率及染色强度较模型组有明显下降。③模型组小鼠颈动脉组织中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA的相对表达量显著最高,低剂量组次之,高剂量组表达水平最低。Western-blot检测结果趋势与RT-PCR一致。④与对照组相比,模型组小鼠颈动脉组织中p-PI3K蛋白、p-AKT蛋白表达量明显升高(P0.05)。与模型组比较,瑞舒伐他汀3个治疗组的小鼠颈动脉组织中p-PI3K蛋白、p-AKT蛋白表达量逐渐下降。结论瑞舒伐他汀可通过抑制PI3K/AKT信号通路活性对颈动脉粥样硬化小鼠发挥保护作用。     

17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素对人胃癌裸鼠移植瘤血管内皮生长因子表达的抑制作用

目的:观察热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响,探讨17-DMAG对胃癌生长和血管生成的抑制作用。方法:用人胃癌细胞HGC-27接种于裸鼠皮下,建立裸鼠胃癌移植瘤模型;将荷瘤裸鼠随机分为3组,每组8只:17-DMAG组(腹腔注射17-DMAG 25 mg/kg)、5-氟尿嘧啶(5-FU)组(腹腔注射5-FU20 mg/kg)及对照组(腹腔注射生理盐水10mL/kg),4周后测量裸鼠移植瘤的体积及重量,HE染色观察形态学变化,同时采用免疫组化方法检测肿瘤组织中CD31(以阳性细胞数计算肿瘤微血管密度)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,采用Western blotting法检测VEGF的表达。结果:17-DMAG组移植瘤体积为(288.10±23.32)mm3,5-FU组移植瘤体积为(366.37±26.42)mm3,对照组移植瘤体积为(957.66±117.51)mm3,前二者与对照组比较,均差异显著(P0.05)。移植瘤重量与对照组比较,17-DMAG组(0.41±0.02)g明显低于对照组(1.12±0.08)g,P0.05;5-FU组(0.48±0.05)g也明显低于对照组(1.12±0.08)g,P0.05;17-DMAG组和5-FU组抑瘤率分别63%和57%,2组抑瘤率无明显差异。17-DMAG组微血管密度(21.72±1.24)比对照组(37.78±1.68)明显减少,P0.05;5-FU组(36.70±1.51)和对照组(37.78±1.68)之间没有显著差异;17-DMAG组肿瘤组织中VEGF的表达(15.39±4.37)明显低于对照组(36.45±7.45)和5-FU组(26.11±6.26)。结论:热休克蛋白90抑制剂17-DMAG可通过降低胃癌组织中血管内皮细胞生长因子的表达抑制肿瘤新生血管的生成,进而抑制裸鼠移植瘤的生长。     

RECK、基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子在子痫前期患者胎盘组织中的表达

目的检测子痫前期患者胎盘组织中RECK、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)的基因表达,探讨它们与胎盘滋养细胞浸润过程的调控关系。方法采用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学检测120例妊娠足月剖宫产(正常妊娠、轻度子痫前期、中度子痫前期、重度子痫前期各30例)胎盘组织中RECK、MMP-9、VEGF的基因表达。结果 3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF的mRNA表达水平均显著低于正常妊娠组(P0.05);重度子痫前期组中RECK mRNA的表达显著高于正常妊娠组(P0.05);3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF蛋白表达均显著低于正常妊娠组(P0.05),中度和重度子痫前期组中RECK蛋白表达显著高于正常妊娠组(P0.05)。结论子痫前期患者胎盘中RECK与MMP-9、VEGF之间存在负相关性,它们可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程的调控。     

中药复方肠复康胶囊通过VEGF / VEGFR2 信号通路干预结肠癌血管生成实验研究

目的:基于VEGF/VEGFR2信号通路探讨中药复方肠复康(CBG)胶囊干预结肠癌血管生成的作用机制。方法:选取人结肠癌细胞HT29作为研究对象,采用低、中、高剂量CBG处理(CBG浓度分别为0.4、0.8、1.6 mmol/L),PBS处理作为溶剂对照组,显微镜下观察各组细胞形态学改变,MTT实验、Transwell小室实验、小管形成实验及ELISA试剂盒法分别检测各组细胞增殖能力、侵袭能力、血管生成能力及VEGF、VEGFR2的表达。构建人结肠癌移植瘤裸鼠模型,实验小鼠随机分为4组,每组12只:CBG低剂量组、CBG中剂量组和CBG高剂量组分别灌胃4.5、9、18 g/kg的CBG,灌胃剂量0.3 ml/d,模型组以等量生理盐水灌胃。实验28 d后杀死小鼠,比较各组小鼠的瘤体平均质量,免疫组化和Western blot法测定各组小鼠肿瘤组织血管密度(MVD)和VEGF、VEGFR2蛋白的表达。结果:经过CBG作用后HT29细胞随CBG浓度的增加发生明显的形态改变;与溶剂对照组比较,低、中、高剂量CBG处理的HT29细胞的增殖、侵袭能力和血管生成能力明显受到抑制(P0.05),VEGF、VEGFR2的表达明显下降(P0.05);与模型组相比,CBG低、中、高剂量组小鼠肿瘤平均质量明显降低(P0.05),肿瘤组织MVD明显减少(P0.05),肿瘤组织中VEGF、VEGFR2蛋白的表达水平明显下降(P0.05),随着CBG浓度增加,体内及体外实验结果均具有剂量依赖性。结论:中药复方肠复康胶囊通过VEGF/VEGFR2信号通路干预结肠癌血管生成。     

藏红花素促进颈动脉损伤小鼠体内EPCs动员及损伤血管的再内皮化

目的:研究藏红花素对颈动脉损伤小鼠外周血中内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)动员的影响及其作用机制。方法:利用导丝损伤的方法构建C57BL/6小鼠颈动脉损伤模型,动物分为假手术组(sham组)、生理盐水处理模型组(model组)和藏红花素低、中、高剂量(10、50和100μmol·kg~(-1)·L~(-1))处理组。在3 d时,利用流式细胞术检测各组颈动脉损伤小鼠体内外周血中EPCs动员情况;7 d时,利用酶联免疫吸附法检测各组颈动脉损伤小鼠外周血血清中促血管修复因子——血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质细胞衍生因子1(stromal-derived factor-1,SDF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的含量变化;14 d时,利用依文思蓝和苏木精-伊红染色分别检测各组颈动脉损伤小鼠损伤血管再内皮化和内膜增生情况;同时采用real-time PCR检测各组颈动脉损伤小鼠损伤段血管中促修复因子相关受体——血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)、CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor-4,CXCR4)、碱性成纤维细胞生长因子受体(basic fibroblast growth factor receptor,bFGFR)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的mRNA表达水平。结果:与sham组相比,model组颈动脉损伤小鼠外周血中EPCs动员量和促血管修复因子VEGF、SDF-1、bFGF、EGF、MMP-9的含量上升(P0.05);损伤血管再内皮化面积下降而增生内膜面积和增生内膜与中层膜面积比显著升高(P0.05);损伤段血管中促修复因子相关受体VEGFR-2、CXCR4、bFGFR和EGFR的表达水平亦上升(P0.05)。而与model组相比,不同浓度藏红花素处理组颈动脉损伤小鼠外周血中EPCs动员量和促血管修复因子VEGF、SDF-1、bFGF、EGF、MMP-9含量均显著上升(P0.05);损伤血管再内皮化面积逐渐上升而增生内膜面积和增生内膜与中层膜面积比逐渐下降(P0.05);损伤段血管中促修复因子相关受体基因VEGFR-2、CXCR4、bFGF-R和EGFR的表达水平随之逐渐上升(P0.05)。结论:藏红花素能够促进颈动脉损伤小鼠体内EPCs细胞动员及损伤血管的再内皮化,从而对损伤血管发挥修复作用。     

右旋柠烯乳剂对人胃癌移植瘤生长和转移的抑制作用

目的　研究并探讨右旋柠烯乳剂 (D limonene)对人胃癌生长和转移的抑制作用及其机制。　方法　采用人胃癌BGC 82 3细胞株经反复传代成实体瘤的完整组织块 ,建立人胃癌裸小鼠原位移植瘤模型。将 4 0只荷瘤裸小鼠随机分成 4组 ,移植后第 5d开始分别用生理盐水灌胃、5 氟尿嘧啶 (5 FU)腹腔注射、D limonene灌胃、D limonene灌胃 +5 FU腹腔注射共 7周。第 8周处死动物 ,测量原位肿瘤瘤重并计算抑瘤率 ,检测肿瘤细胞凋亡指数 (AI)、肿瘤微血管密度 (MVD)及免疫组织化学测定肿瘤组织血管内皮生长因子 (VEGF)的表达变化 ,光镜与电镜观察组织细胞超微结构变化 ;观察荷瘤鼠腹膜、肝、其他脏器肿瘤转移及腹水情况。　结果　D limonene组、联用组分别与对照组相比 ,胃癌的原位肿瘤瘤重与抑瘤率、AI、MVD、VEGF下调 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。腹膜、肝转移受到明显抑制 (P <0 0 5 )。　结论　D limonene通过抑制肿瘤微血管形成 ,诱导胃癌细胞凋亡 ,抑制了体内胃癌的生长和转移。