三参三草合剂减轻溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜组织损伤并降低肠黏膜炎症因子水平

目的探讨三参三草合剂对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道黏膜组织损伤及白细胞介素12P70(IL-12P70)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)水平的影响。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、三参三草合剂组,每组10只。对照组给予正常饲喂,模型组及三参三草合剂组采用三硝基苯磺酸钠(TNBS)-乙醇诱导法建立UC大鼠模型,随后三参三草合剂组给予4. 5 g/(kg·d)三参三草合剂灌胃,模型组给予等量生理盐水灌胃。治疗结束后,对所有大鼠进行结肠黏膜组织学损伤(TDI)评分,并采用ELISA测定大鼠结肠组织IL-12P70、TNF-α、IFN-γ水平。结果与对照组相比,UC模型组TDI评分显著增加,IL-12P70、TNF-α、IFN-γ水平显著升高;与UC模型组比较,三参三草合剂组TDI评分显著下降,IL-12P70、TNF-α、IFN-γ水平显著降低。结论三参三草合剂可减轻UC大鼠结肠黏膜组织损伤,降低肠黏膜IL-12P70、TNF-α、IFN-γ水平。     

丙泊酚抑制NF-κB p65的磷酸化缓解葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠病理损伤和免疫反应

为探讨丙泊酚对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)诱导的结肠炎小鼠病理损伤和免疫反应的影响,构建DSS诱导的结肠炎小鼠模型,将小鼠随机分为5组:对照组、模型组、丙泊酚低剂量组、丙泊酚中剂量组和丙泊酚高剂量组。采用疾病活动指数评分检测小鼠体质量变化和结肠长度,H-E染色检测病理损伤程度并进行组织病理学评分,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)染色检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10 mRNA水平,ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平,Western blotting检测p65、p-p65蛋白表达。结果显示,与对照组比较,模型组小鼠体质量显著降低(P0.05),结肠长度显著缩短(P0.05),病理学评分显著升高(P0.05),结肠细胞凋亡率显著增加(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平显著升高(P0.05),IL-10 mRNA水平显著降低(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(P0.05),p-p65/p65比值显著升高(P0.05);与模型组比较,丙泊酚中、高剂量组小鼠体质量显著升高(P0.05),结肠长度显著增加(P0.05),病理学评分显著降低(P0.05),结肠细胞凋亡率显著降低(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平显著降低(P0.05),IL-10 mRNA水平显著升高(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低(P0.05),IL-10水平显著升高(P0.05),p-p65/p65比值显著降低(P0.05)。该研究提示,丙泊酚通过抑制NF-κB p65的磷酸化缓解DSS诱导的结肠炎小鼠病理损伤和免疫反应。     

参苓白术散通过TLR4 / NF-κB 通路对溃疡性结肠炎小鼠的抑制作用研究

目的:从TLR4/NF-κB信号通路角度观察参苓白术散对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用及机制。方法:实验小鼠分为空白组、模型组、参苓白术散高、中、低剂量组和美沙拉嗪组。除空白组外,其余各组均自由饮用3%DSS溶液一周以建立UC模型。造模成功后各给药组予相应药物灌胃,空白组与模型组给予0.5 ml生理盐水灌胃。观察各组小鼠疾病活动指数(DAI)和结肠病理改变,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清TNF-α、MIF、IL-10、EGF水平,免疫组化法检测小鼠结肠组织内TLR4、NF-κB p65蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠DAI评分升高,结肠单位重量增加、长度变短,结肠黏膜病理受损严重,血清TNF-α、MIF含量显著升高,IL-10、EGF含量明显下降;结肠组织中NF-κB与TLR4蛋白表达上调(P0.01)。与模型组相比,参苓白术散低、中、高剂量组和美沙拉嗪组小鼠血清TNF-α、MIF含量显著降低,IL-10、EGF含量明显上升;结肠组织中NF-κB、TLR4蛋白表达下调(P0.01)。结论:参苓白术散对DSS诱导的小鼠UC有治疗作用,其作用可能与其调节TLR4/NF-κB通路及相关炎症因子,从而减轻肠道炎症反应,缓解肠黏膜损伤有关。     

TLR2和TLR4单克隆抗体对DSS诱导的小鼠结肠炎肠黏膜细胞因子及肠道菌群的影响

目的 研究Toll样受体2单克隆抗体(Toll-like receptor 2 monoclonal antibody,TLR2McAb)、Toll样受体4单克隆抗体(TLR4McAb)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎组织学改变及肠道菌群结构的影响.方法 雄性BALB/c小鼠分为正常对照组(A)、急性期溃疡性结肠炎模型组(B)、TLR2McAb干预组(C)、TLR4McAb干预组(D)、TLR2McAb+TLR4McAb共同干预组(E),每组10只.A组饮用蒸馏水,B～E组饮用5%DSS水溶液以产生急性期溃疡性结肠炎,造模开始同时,每隔48 h予A、B两组小鼠腹腔内注射生理盐水,C～E组小鼠分别予以10μg的TLR2McAb、TLR4McAb、TLR2McAb+TLR4McAb,期间观察小鼠的疾病活动指数(disease activity index,DAI).干预7 d后处死小鼠,HE染色观察结肠炎症,并进行结肠组织病理学评分(histopathological score,HS);使用real-time PCR法检测各组结肠黏膜中IFN-γ、IL-4、IL-17表达;留取盲肠内粪便对大肠杆菌、双歧杆菌及乳酸杆菌进行培养并比较各菌群菌落计数(colony forming units,CFU)的变化.应用SPSS13.0软件进行统计学分析,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 (1)与A组比较,B组的DAI及HS显著增高(DAI:9.700±2.406 vs 0.500±0.707,P<0.01;HS:16.500±2.991 vs 6.400±3.273,P<0.01);C、D组与B组比较DAI及HS差异均无统计学意义(P>0.05);E组的DAI及HS明显低于B组(DAI:5.700±3.498 vs 9.700±2.406,P<0.05;HS:9.500±3.308 vs 16.500±2.991,P<0.01).(2)与A组比较,B组小鼠结肠黏膜IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达明显增高;而C～E组结肠黏膜三种细胞因子的表达均有不同程度的降低.(3)A组大肠杆菌数量较少,B～E四组大肠杆菌均明显生长(与A组比较P<0.05),C～E组大肠杆菌数值与B组比较有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05);B组双歧杆菌及乳酸杆菌数量均明显少于A组及C～E组(P<0.05),使用TLR2McAb、TLR4McAb干预后,C～E组双歧杆菌及乳酸杆菌数量上升,与A组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 TLR2McAb、TLR4McAb同时干预对DSS诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎有显著改善作用;两种McAb均能明显提高小鼠肠道内双歧杆菌及乳酸杆菌的菌群数量,从而改善肠道菌群结构,但对大肠杆菌数量无明显影响,且两抗体同时干预对肠道菌群结构的改善未见显著协同作用.     

IL-12单克隆抗体通过调节肠黏膜免疫缓解克罗恩病模型小鼠肠道炎症

目的观察白细胞介素12单克隆抗体(IL-12 mAb)对IL-10敲除(IL-10 KO)的克罗恩病(CD)小鼠模型肠道炎症的治疗作用并分析可能的机制。方法选取15周龄雄性IL-10 KO小鼠16只,随机分为对照组及IL-12 mAb处理组。IL-12 mAb处理组小鼠给予腹腔注射IL-12 mAb(25 mg/kg,每周1次),对照组给予0. 2 m L生理盐水腹腔注射。处理4周后,采用炎症性肠病疾病活动度指数(DAI)及HE染色结合Spencer结肠炎组织学评分评估两组小鼠肠道炎症程度及组织学改变;采用活体肠黏膜异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)通透性实验评估两组小鼠肠黏膜屏障功能,并采用Western blot法检测肠黏膜密封蛋白1(claudin-1)的蛋白水平;采用流式细胞术检测肠黏膜CD3、CD4、γ干扰素(IFN-γ)和IL-4,评估Th1细胞/Th2细胞平衡。采用ELISA检测两组小鼠肠黏膜IL-13及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot法检测肠黏膜磷酸化的信号转导子与转录激活子6(p-STAT6)的蛋白水平。结果 IL-12 mAb治疗后第3周及第4周,IL-12 mAb处理组小鼠DAI及肠道炎症评分均显著低于对照组。同时,IL-12 mAb处理组小鼠肠黏膜通透性显著低于对照组,且肠黏膜claudin-1表达显著高于对照组。同时,IL-12 mAb治疗抑制肠黏膜Th1细胞比例,上调Th2细胞比例。信号通路分析中发现,IL-12 mAb治疗提高肠黏膜p-STAT6及IL-13水平,而抑制TNF-α水平。结论 IL-12 mAb可有效缓解CD小鼠模型的肠道炎症并保护肠黏膜屏障,可能与抑制肠黏膜Th1细胞免疫反应及上调STAT6信号有关。     

绿原酸对溃疡性结肠炎的治疗作用及对IL-6/STAT3信号通路的影响

目的 探讨绿原酸对溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）小鼠的治疗作用及对IL-6/STAT3信号通路的影响。方法 SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组（control）、模型组（model）、绿原酸低及高剂量组（CGA-L、CGA-H）,每组8只。检测小鼠疾病活动指数（DAI）评分;HE染色观察小鼠结肠病理损伤;ELISA检测结肠组织中白介素-17A(IL-17A)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-4及IL-10水平;Western blot检测小鼠结肠组织中孤独核受体γt(RORγt)、叉头状转录因子（Foxp3）、IL-6、信号传导与转录激活因子3(STAT3)及磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白的表达。结果 CGA-L与CGA-H能降低小鼠DAI评分,明显减轻结肠组织病理损伤;降低IL-17A与TNF-α水平,上调IL-4与IL-10水平（P<0.05）;CGA-L与CGA-H能降低RORγt蛋白表达,上调FOXP3蛋白表达（P<0.05）;降低小鼠结肠组织中IL-6与及p-STAT3蛋白表达（P<0.05）。结论 绿原酸可有效治疗DSS诱导的小鼠UC,调控Th17/Treg平衡,其作用机制可能与抑制IL-6/STAT3信号通路有关。     

芳香烃受体对小鼠结肠炎的缓解作用及机制研究

目的研究芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,Ah R)及其激动剂吲哚并[3,2-B]咔唑-6-甲醛[6-formylindolo(3,2-b)carbazole,FICZ]对葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的小鼠结肠炎的缓解作用及其机制。方法将成年雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、DSS组(每天给予DSS喂养,连续7 d)、DSS+FICZ组(给予DSS喂养连续7 d,从第3天开始腹腔注射1 mg芳香烃受体激动剂FICZ)。每天检测小鼠体质量变化,7 d后HE染色观察结肠病理学变化,q PCR检测小鼠结肠上皮细胞炎性因子的表达。结果与正常对照组相比,模型组中小鼠体质量明显减轻(P0.05),结肠长度缩短,肠黏膜明显损伤,促炎因子IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的表达升高(P0.05),保护性的细胞因子IL-10的表达变化不明显;与模型组相比,实验组中小鼠体质量下降明显减少(P0.05),结肠长度增加,肠黏膜损伤减轻,同时促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达降低(P0.05),保护性细胞因子IL-10明显升高(P0.05)。结论芳香烃受体(AhR)对小鼠结肠炎具有抑制作用,可能是通过下调促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,上调抗炎因子IL-10的表达发挥作用。     

IL-27在小鼠结肠炎中的作用及对NLRP3炎性小体的影响

目的:观察白细胞介素27(IL-27)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠结肠组织学及NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的影响。方法:将48只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(自由进食饮水)、DSS模型组(饮用3%DSS溶液)、低剂量IL-27组和高剂量IL-27组(在饮用DSS溶液的基础上分别腹腔注射500ng和1μg IL-27)。12 d后行疾病活动指数(DAI)及组织损伤指数(HI)评分评估炎症程度,取结肠组织行免疫组化、Western blot及qPCR检测,取血清行ELISA检测IL-1β和IL-18水平。结果:与对照组相比,模型组的DAI评分和HI评分提示小鼠的结肠炎症明显增强(P0.05),NLRP3和IL-1β的mRNA表达水平增高,NLRP3和cleaved caspase-1的蛋白水平增高,血清中IL-1β和IL-18的含量增加;与模型组相比,高剂量IL-27组的DAI评分和HI评分提示小鼠的结肠炎症明显减轻(P0.05),NLRP3和IL-1β的mRNA表达水平下降,NLRP3和cleaved caspase-1的蛋白水平降低,血清中IL-1β中和IL-18的含量也减少;与模型组比较,低剂量IL-27组除了血清中IL-1β和IL-18含量减少外,上述各项指标的差异无统计学显著性。结论:IL-27可减轻DSS结肠炎模型小鼠的炎症程度并且可抑制NLRP3炎性小体的表达和激活。     

巴柳氮对结肠炎小鼠肠TNF-α、IFN-γ和黏膜通透性影响的研究

目的 探讨结肠炎小鼠肠黏膜中TNF-α和IFN-γ的含量与肠黏膜通透性的关系及抗结肠炎药物巴柳氮的影响.方法 将45只C57BL/6J小鼠,分成正常对照组、葡聚糖硫酸钠(dextran-sulfatesodium,DSS)模型组、巴柳氮不同剂量组(42、141、423 ms/ks),正常对照组自由饮水,其余各组自由饮用5%DSS溶液7 d.巴柳氮采用灌胃给药7 d.实验结束后取结肠进行HE染色评分,结肠匀浆检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性,小肠匀浆检测TNF-α和IFN-γ含量,小肠黏膜进行透射电镜检查.Evans-蓝方法检测小肠黏膜通透性.结果 DSS结肠炎组小鼠病理评分(histo-logical index,HI)增高(P<0.01),结肠黏膜MPO活性增高,小肠匀浆TNF-α和IFN-γ含量明显增高(P<0.05).透射电镜检查小肠黏膜绒毛变短、萎缩,细胞间连接复合体缩短、变宽,细胞间隙扩大;小肠组织中Evans-蓝含量增高,提示肠黏膜通透性增加.巴柳氮组小鼠HI降低(P<0.05),MPO活性减低,同时TNF-α和IFN-γ含量降低.小肠黏膜绒毛形态和细胞间隙接近正常,小肠组织中Evans-蓝含量明显减少.结论 DSS结肠炎小鼠中肠黏膜TNF-α和IFN-γ含量与肠黏膜通透性增加一致,巴柳氮在其抗结肠炎作用同时修复肠黏膜屏障.     

CD1d基因敲除小鼠拮抗DSS诱导结肠炎

目的以葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的CD1d~(-/-)小鼠实验性结肠炎模型为研究对象,探究CD1d分子在小鼠结肠炎进程中的作用。方法取SPF级C57BL/6小鼠和CD1d~(-/-)(C57BL/6背景)小鼠,每天给予2.5%DSS喂养,连续6 d,每天记录小鼠的体质量变化、粪便性状、活动情况等,评估小鼠的疾病活动指数(DAI),记录小鼠的生存情况。第6天用FITC-dextran灌胃检测肠通透性,测量结肠长度,并用HE染色法观察结肠组织病理学变化,免疫组化法与免疫荧光法检测肠上皮增殖情况,免疫印迹(Western blot)检测小鼠结肠组织细胞炎性因子的表达。结果与C57/BL6小鼠相比,CD1d~(-/-)小鼠生存率高(P0.05),体质量减轻缓慢、疾病活动指数(DAI)低(P0.05),结肠长度长、肠通透性低(P0.01),肠黏膜损伤轻,结肠上皮细胞增殖明显(P0.05),肠组织IL-1beta及IL-18表达高(P0.05)。结论 CD1d基因敲除小鼠拮抗DSS诱导的结肠炎,可能是通过促进结肠表达NLRP3炎性小体及其底物IL-1beta及IL-18。     

紫甘薯花青素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠肠道屏障损伤的修复作用

目的:探究紫甘薯花青素对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠肠道屏障损伤的修复及治疗作用。方法:将健康雄性BALB/c小鼠分正常饮水组、DSS模型组、紫甘薯花青素不同剂量(12.5、25、50及75mg/kg)组和5-氨基水杨酸(5-ASA)阳性药物对照组。口服含2.5%DSS的饮用水建立小鼠溃疡性结肠炎模型。免疫组织化学技术检测小鼠结肠中紧密连接蛋白ZO-1和occludin以及炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的表达。糖原PAS染色技术观察结肠组织杯状细胞中黏液素的表达的情况,Western blot检测ZO-1、occludin和TNF-α的蛋白表达,天狼星红染色技术检测小鼠结肠纤维化情况。结果:与正常饮水对照组相比,DSS模型小鼠疾病活动指数,组织学损伤明显增加(P0.01);与DSS模型组相比,紫甘薯花青素不同剂量组小鼠的疾病活动指数评分降低,结肠组织中ZO-1和occludin的表达及分布均上升,且TNF-α和IL-6的表达及分布均下降;糖原PAS色显示结肠组织杯状细胞中的黏液素分布及表达在紫甘薯花青素治疗组明显增加;天狼星红染色也显示,紫甘薯花青素治疗组小鼠结肠纤维化程度较模型组降低。结论:紫甘薯花青素具有治疗DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的作用,其主要通过上调紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达,保护肠道屏障的完整性,同时抑制炎症因子TNF-α和IL-6的表达以及肠道纤维化,来抑制结肠炎症的发展。     

金纳多对小鼠急性实验性结肠炎的保护作用及可能机制

目的观察金纳多对小鼠急性实验性结肠炎的保护机制并对比分析其与柳氮磺胺吡啶(SASP)的疗效。方法用3%DSS建立小鼠急性实验性结肠炎动物模型。小鼠随机分为4组:正常组、造模组、金纳多治疗组、柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗组。记录各组小鼠一般情况(饮食、便血、体重)、DAI评分、肠管长度和肠组织学损伤评分;通过免疫组化、Real-time PCR和Western blot检测各组小鼠肠组织中炎症因子(gp130,STAT3, p-STAT3, ROR-γt,IL-6, IL-17, IL-23)的表达。结果金纳多可改善小鼠一般情况(饮食、便血、体重),与造模组比较,可有效降低小鼠DAI评分、组织学损伤评分、炎症因子(gp130, STAT3, p-STAT3, ROR-γt,IL-6, IL-17, IL-23)的表达水平(P0.01)。与SASP治疗组比较,金纳多治疗组小鼠DAI评分、组织学损伤评分、炎症因子(gp130, STAT3, p-STAT3, ROR-γt,IL-6, IL-17, IL-23)的表达均高于SASP治疗组(P0.05)。结论金纳多对小鼠急性实验性结肠炎的保护作用与抑制IL-6/STAT3通路和IL-23/IL-17轴相关,但疗效弱于柳氮磺胺吡啶。     

基于肠道菌群探讨电针对APP/PS1小鼠认知能力的改善机制

目的:观察电针对APP/PS1双转基因小鼠肠道菌群及相关炎症因子表达的影响,探讨其对小鼠认知能力的改善机制。方法:14只5月龄APP/PS1雄性小鼠随机分成模型组和电针组,同月龄C57BL/6雄性小鼠作为对照组,每组7只。电针组选取"百会"、"大肠俞"和"足三里"穴干预,连续波,频率2 Hz,强度1.0 mA,每日1次,每次15 min,1周5次,连续5周。Morris水迷宫评估小鼠认知能力;Western blot检测结肠组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的表达;ELISA检测结肠组织及血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的含量;16S rDNA扩增子测序法检测小鼠粪便菌群。结果:与对照组相比,从训练第2天开始,模型组小鼠逃避潜伏期延长(P0.05),第3天开始,其穿越平台次数显著减少(P0.05);此外,相较对照组,模型组结肠组织中NLRP3表达显著增加,结肠组织及血清中TNF-α,IL-1β和IL-18含量均显著增高(P0.01)。与模型组相比,电针组逃避潜伏期下降趋势显著,第5天其逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增加(P0.05),结肠组织中NLRP3表达,TNF-α、IL-1β和IL-18含量均降低(P0.05),血清TNF-α、IL-1β和IL-18含量降低(P0.05)。肠道菌群结果显示,在门水平,相较于对照组,模型组拟杆菌门相对丰度增高(P0.05),厚壁菌门、Patescibacteria、软壁菌门等相对丰度降低(P0.05);在属水平,模型组乳杆菌、副拟杆菌等相对丰度降低(P0.05),副萨特氏菌、理研菌等相对丰度增高(P0.05)。在门水平,电针组拟杆菌门相对丰度较模型组降低,厚壁菌门、Patescibacteria、软壁菌门等相对丰度较模型组轻度增高,差异均无统计学意义(P0.05);属水平上,相较于模型组,电针组副萨特氏菌、理研菌等相对丰度降低(P0.05),Candidatus Saccharimonas、Muribaculum等相对丰度增高(P0.05),而乳杆菌、副拟杆菌、双歧杆菌等相对丰度增高,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:电针改善APP/PS1小鼠认知能力的机制可能与调节肠道菌群,降低结肠组织NLRP3蛋白表达量,结肠及血清TNF-α,IL-1β和IL-18含量,改善肠源性及外周血炎症反应有关。     

苦瓜多糖调节宿主免疫应答缓解右旋糖酐硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎

目的探究苦瓜多糖(Momordica charantia polysaccharide, MCP)对右旋糖酐硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)的保护作用及机制。方法提取MCP, 用其治疗DSS诱导的UC。将小鼠随机分为对照组、DSS组和DSS+MCP组, 每组5只, 每天监测小鼠的体重和疾病活动指数(disease activity index, DAI)。收集小鼠结肠组织和血清, 采用HE染色、ELISA、RT-qPCR和流式细胞术分析肠道组织、炎症因子、CD4+T细胞、中性粒细胞和巨噬细胞变化。结果 MCP通过恢复小鼠体重和大便黏稠度降低DAI, 减少出血, 从而改善DSS诱导的UC。另外, MCP能够修复结肠组织的黏膜屏障功能, 降低炎症细胞浸润, 减轻黏膜层和肌肉层水肿, 保护UC小鼠的肠道。MCP处理后小鼠结肠组织中炎症因子TNF-α和IL-1β的表达水平降低, CD4+T细胞水平也降低。结论 MCP通过抑制小鼠体重下降、修复结肠组织损伤、改善免疫系统紊乱、抑制DSS诱导的炎症...     

骨髓细胞来源的CD1d基因敲除拮抗DSS诱导的结肠炎

目的使用骨髓嵌合小鼠探究骨髓来源细胞的CD1d基因敲除在小鼠结肠炎进程中的调节作用及其可能的作用机制。方法取SPF级C57BL/6、CD1d~(-/-)小鼠全身一次性接受10 Gy剂量~(60)Co的放射源进行γ射线照射3 h后接受骨髓移植构建4组骨髓嵌合小鼠,饮用2.5%DSS连续7 d,每天记录各组小鼠的体质量变化、活动情况、粪便性状等并且评估小鼠的疾病活动指数(DAI)。第7天用FITC-dextran灌胃检测各组小鼠肠通透性、测量其结肠长度,并用HE染色法观察结肠组织的病理学变化。免疫印迹检测各组小鼠肠组织炎性因子的表达。结果骨髓嵌合小鼠模型研究显示,与移植入WT骨髓细胞的小鼠相比,移植入CD1d~(-/-)骨髓细胞的小鼠质量下降缓慢、疾病活动指数(DAI)低(P0.05),结肠长度长(P0.01),肠通透性低(P0.01),肠黏膜损伤轻、浸润的炎性细胞少。肠组织NLRP3蛋白及其底物IL-18表达高(P0.05)。结论骨髓细胞来源的CD1d基因敲除能够拮抗DSS诱导的结肠炎,且可能是通过促进NLRP3炎性小体及其底物IL-18的表达发挥作用。     

复方蛹虫草改善DSS联合高脂饮食诱导的溃疡性结肠炎的作用和机制

目的探究复方蛹虫草(CCM)对葡聚糖硫酸钠(DSS)联合高脂诱导的溃疡性结肠炎(UC)的改善作用及初步机制。方法C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、巴柳氮钠组及CCM 90、180和540 mg·kg~(-1)·d~(-1)组。采用DSS联合高脂饮食建立UC小鼠模型。造模同时ig给药,每天1次,连续8周,每周称量各组小鼠体质量,联苯胺法检测粪便隐血水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清细胞炎性因子TNF-α、IL-1β。HE染色法比较各组结肠组织病理改变,蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测结肠组织中IκB-α、NF-κBp65、TNF-α的表达。结果与正常组相比,模型组粪便隐血分数在第1、3、5、6周显著增加(P0.05);小鼠结肠组织发生明显炎性细胞浸润(P0.05);血清炎性因子TNF-α、IL-1β含量显著增高(P0.01);结肠组织TNF-α、NF-κBp65表达显著增高(P0.01),IκB-α表达显著降低(P0.01)。与模型组相比,CCM组小鼠体质量均显著降低(P0.05,P0.01);CCM组小鼠粪便隐血显著减少(P0.05);CCM高剂量组小鼠血清TNF-α显著降低(P0.05),CCM中剂量组小鼠血清IL-1β显著降低(P0.05);CCM中剂量组小鼠结肠组织炎性细胞浸润显著减少(P0.05);CCM给药各组小鼠结肠组织TNF-α、NF-κBp65表达显著降低(P0.01),IκB-α表达显著增高(P0.01)。结论 CCM可以改善DSS联合高脂诱导的溃疡性结肠炎,其机制可能与其抑制NF-κB通路的激活有关。     

罗格列酮通过抑制肠系膜脂肪组织炎症改善三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠结肠炎

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS诱导的结肠炎小鼠的治疗作用及可能机制。方法选取雄性BALB/c小鼠20只建立TNBS结肠炎模型,造模成功后随机分为罗格列酮处理组及模型组,每组10只。罗格列酮处理组给予罗格列酮灌胃(0. 2 m L,[20 mg/(kg·d)]),模型组给予生理盐水(0. 2 m L/d)灌胃。处理6周后,处死所有小鼠。采用炎症性肠病疾病活动度指数(DAI)及HE染色结合Spencer结肠炎组织学评分评估两组小鼠肠道炎症程度及组织学改变,ELISA检测肠黏膜白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10水平及肠系膜脂肪组织IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平;脂肪组织HE染色后200倍光镜下拍照依据比例尺计算脂肪细胞直径;免疫组织化学染色法检测小鼠肠系膜脂肪组织F4/80阳性巨噬细胞浸润数量、脂肪细胞成熟标志物外周蛋白(peripherin)、脂连蛋白(adiponectin)及瘦素(leptin)水平。Western blot法检测小鼠肠系膜脂肪组织核因子κB(NF-κB)和信号通路中的NF-κBp65、磷酸化的NF-κBp65(p-NF-κBp65)、磷酸化的NF-κB抑制蛋白(p-IκB)及磷酸化的IκB激酶(p-IKK)的蛋白水平。结果罗格列酮处理后第5及6周,小鼠DAI评分显著低于模型组。同时,处理组小鼠肠黏膜IL-1β及TNF-α水平显著低于模型组,而IL-10水平显著高于模型组。与模型组小鼠相比,罗格列酮处理组小鼠肠系膜脂肪细胞直径及脂肪细胞成熟标志物perilipin水平均显著高于模型组。同时,罗格列酮处理组小鼠肠系膜脂肪组织巨噬细胞浸润数量及炎症介质IL-6、MCP-1水平均显著低于模型组。罗格列酮治疗显著促进处理组小鼠肠系膜脂肪细胞adiponectin的表达,而抑制leptin的水平。罗格列酮处理组小鼠肠系膜脂肪组织NF-κBp65、p-NF-κBp65、p-IKK及p-IκB蛋白水平均显著低于模型组。结论罗格列酮可显著抑制TNBS模型小鼠肠道炎症,可能与抑制肠系膜脂肪组织NF-κBp65通路有关。     

圣草酚对实验性结肠炎小鼠Nrf2 / HO-1 通路的影响

目的:探讨圣草酚(EDT)干预实验性结肠炎小鼠对Nrf2/HO-1通路的影响。方法:将32只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、DSS模型组、DSS+EDT低剂量组(EDT 20 mg/kg)、DSS+EDT高剂量组(EDT 40 mg/kg)4组,每组8只,小鼠自由饮用3%DSS溶液制成溃疡性结肠炎模型,并同时予以圣草酚腹腔注射7 d。对小鼠进行疾病活动指数(DAI)评分;比较各组小鼠结肠长度;HE染色观察结肠病理学变化;检测结肠组织MDA含量、MPO和SOD活性;Real-time PCR法检测各组小鼠结肠组织Nrf2、HO-1、NOQ1、TNF-α、IL-6 mRNA表达情况;Western blot检测各组小鼠结肠组织中Nrf2、HO-1、NOQ1变化情况。结果:与DSS组比较,空白组、圣草酚低、高浓度治疗组DAI评分、结肠长度及病理学变化明显改善,差异有统计学意义(P0.05)。空白组、圣草酚低、高浓度治疗组炎症因子TNF-α、IL-6水平,MPO活性及MDA含量显著低于模型组,SOD活性显著高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。与DSS组相比,圣草酚低、高浓度组显著增加Nrf2、H0-1、NOQ1表达(P0.01)。结论:圣草酚对小鼠结肠炎可以起到缓解作用,可能与激活Nrf2/HO-1通路发挥抗氧化、抗炎作用有关。     

布拉氏酵母菌对DSS诱导的实验性结肠炎小鼠肠黏膜的屏障作用

目的观察布拉氏酵母菌对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfacte sodium,DSS)诱导的实验性结肠炎小鼠肠黏膜屏障的影响。方法将50只BALB/c小鼠随机分成5组,分别为:正常对照组(A)、模型组(B)、美沙拉嗪组(C)、布拉氏酵母菌组(D)、联合治疗组(E)。采用2.5%DSS溶液诱导小鼠实验性结肠炎动物模型,将C、D、E组小鼠分别给予美沙拉嗪、布拉氏酵母菌、美沙拉嗪加布拉氏酵母菌联合灌胃治疗,计算小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,评估结肠黏膜组织损伤程度,并用Western blot法检测结肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达水平。结果模型组小鼠的DAI评分及结肠黏膜组织损伤程度明显高于正常组(p0.05),ZO-1及Ocluddin表达水平明显低于正常组(p0.05)。与模型组相比,美沙拉嗪组、布拉氏酵母菌组、联合治疗组的DAI评分及结肠黏膜组织损伤程度均明显减低(p0.05),ZO-1及Ocluddin表达水平明显增多(p0.05),联合治疗组效果更好。结论布拉氏酵母菌可对DSS诱导的结肠炎肠黏膜屏障功能起到保护作用,与美沙拉嗪联合应用效果更佳。     

多形螺旋线虫对T细胞诱导的小鼠肠炎CD4+T细胞分泌和浸润的影响

目的 研究多形螺旋线虫对T细胞诱导的小鼠肠炎CD4+T细胞分泌和浸润情况的影响.方法 用卵清蛋白(OVA)特异性的CD4+辅助性T细胞(Th)转入SCID小鼠中制作小鼠实验性肠炎模型.将实验模型小鼠分为多形螺旋线虫感染组和无感染组,观察感染14 d小鼠结肠炎性反应的组织学病理变化;应用实时荧光定量PCR检测感染14 d 小鼠结肠组织中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;以免疫荧光法观察感染3、5、7、14d小鼠结肠组织中CD4+T细胞的数量.结果 与无感染组比较,感染组小鼠结肠炎性反应明显加重,病理评分升高(5.41±0.53比2.12±0.69,P＜0.05).感染组小鼠IL-4、TNF-α较无感染组明显增高,IFN-γ则明显减低(IL-4:10.70±4.85比1.00±1.07,TNF-α:6.54+2.88比1.00±0.48,IFN-γ:0.21±0.10比1.00±0.28,均P＜0.05).各时间点感染组SCID小鼠结肠组织中CD4+T细胞均比同时间点的无感染组明显增多,CD4+T细胞浸润明显增强.结论 多形螺旋线虫感染在CD4+T细胞诱导的小鼠实验性肠炎的早期阶段促进了炎性反应的加重,可能与促进CD4+T细胞浸润、诱导Th2和抑制Th1的分泌有关.