超抗原SEB对角质形成细胞糖皮质激素受体的作用研究

目的探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对人永生化角质形成细胞(Ha Ca T细胞)糖皮质激素受体表达及核转移的影响。方法采用不同浓度SEB作用于体外培养的Ha Ca T细胞,RT-PCR、Western blot分别检测Ha Ca T细胞糖皮质激素受体α、β(GRα、GRβ)m RNA、蛋白的表达;随后用SEB预处理Ha Ca T细胞,地塞米松再作用Ha Ca T细胞8 h后,免疫荧光法检测Ha Ca T细胞GRα细胞内分布情况。结果 SEB作用Ha Ca T细胞后,其GRαm RNA、蛋白表达无明显变化,GRβm RNA、蛋白表达随SEB的浓度增高呈上升趋势,且在SEB质量浓度为100 ng/ml时达到最高值。10-6mol/L地塞米松作用8 h后能够诱导Ha Ca T细胞GRα由胞浆向胞核转移,该效应能够维持到24 h。与地塞米松组Ha Ca T细胞内GRα分布出现向核内转移现象不同,地塞米松+SEB组部分细胞GRα分布仍局限于胞质,并未出现核转移现象。结论 SEB可能通过诱导角质形成细胞GRβ表达上调及抑制地塞米松诱导的GRα由胞浆向胞核转移参与炎症性皮肤病外用糖皮质激素抵抗。     

细菌超抗原SEB抑制小鼠角质形成细胞糖皮质激素受体核转移的实验研究

目的探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对小鼠角质形成细胞糖皮质激素受体GRα核转移的影响。方法 1%二硝基氯苯重复刺激Balb/c小鼠背部皮肤构建变应性接触性皮炎动物模型,分别用SEB、地塞米松、SEB+地塞米松处理该模型鼠背部局部皮肤,处理48 h后HE染色计数真皮内炎性细胞数量,免疫荧光和Western blot法观察GRα在各组角质形成细胞的胞浆和核浆分布,ELISA法观察IL-2、4、13和TNF-α等炎症因子在各组的表达变化。结果 SEB处理后真皮内炎性细胞显著增加。地塞米松可显著减少炎性细胞数目,而SEB可部分拮抗地塞米松的抗炎作用;激光共聚焦显示正常角质形成细胞GRα主要存在于细胞浆,少量存在于胞核。地塞米松可显著增加GRα核/浆阳性比值,而SEB可显著减弱地塞米松诱导的GRα核/浆阳性比值;Western blot检测也显示地塞米松处理后GRα蛋白入核量显著增多,而SEB可显著抑制地塞米松诱导的GRα蛋白入核量,并增加GRα蛋白胞浆滞留;与正常组相比,皮炎组IL-2、4、13和TNF-α表达均显著升高,地塞米松可显著抑制各炎症因子增多,而SEB可显著拮抗地塞米松对炎性因子的抑制作用。结论 SEB在局部皮炎诱导的激素减敏与其抑制角质形成细胞GRα核转移障碍有关。     

超抗原SEB体外诱导胸腺细胞凋亡的研究

目的：观察超抗原SEB能否在APC的辅助下体外诱导胸腺细胞凋亡，并研究其机制。方法：SEB作用于与APC混合培养的胸腺细胞，用DNA凝胶电泳、DNA片段测定等判定胸腺细胞凋亡并作定量分析；用间接免疫荧光法标记并以流式细胞仪检测Fas、FasL的表达。结果：SEB处理组胸腺细胞有凋亡表现且凋亡率明显高于对照组，Fas、FasL的表达明显高于对照组。结论：SEB可以于体外在APC辅助下诱导胸腺细胞凋亡，Fas、FasL的高表达可能在凋亡中起重要作用，这可能为体外研究胸腺细胞阴性选择过程提供一种方法。     

超抗原SEB和SEC诱导的树突状细胞对T细胞的影响

目的：阐明超抗原葡萄球菌肠毒素B（SEB）和葡萄球菌肠毒素C（SEC）诱导树突状细胞(dendritic cells，DC)促进T细胞活化、增殖、分泌及其对肝癌HcaF细胞的杀伤作用。 方法： 以SEB或SEC诱导DC刺激T细胞，免疫组化染色检测DC表达S-100蛋白；流式细胞术检测DC表达I-Eκ和CD80分子水平，检测T细胞受刺激后CD69的表达、IL-2和TNF-α的生成；用MTT法检测T细胞增殖及其对HcaF细胞的杀伤效应。 结果： 体外试验表明，DC高表达S-100蛋白，SEB或SEC诱导的DC高表达I-Eκ和CD80分子；SEB或SEC能诱导DC促进T细胞活化，其浓度以100 μg/L时作用最强；SEB或SEC能诱导DC促进T细胞增殖、大量分泌IL-2和TNF-α, 被激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤率高达83.2%±12.8%，明显优于肿瘤抗原诱导的DC所激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤作用；SEB与SEC的诱导作用无明显差异。 结论： 超抗原SEB或SEC能诱导DC显著增强T细胞活化、增殖、分泌和杀伤肿瘤细胞，并优于肿瘤抗原的诱导作用，SEB和SEC的作用相似，为超抗原SEB或SEC与DC联合应用于临床肿瘤的治疗提供了证据。     

超抗原SEB诱导的免疫耐受与细胞因子无关

目的 研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)诱导的耐受效应和耐受调节机制.方法 收集SEB活化10天的细胞,充分洗涤后做为效应细胞,分别与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养,用MTT方法测定细胞的耐受性应答反应.正常淋巴细胞在与ConA、LPS、IL-2共同培养的同时添加效应细胞,用MTF方法测定效应细胞的抑制性应答反应功能.流式细胞技术解析耐受性效应细胞类型.结果 效应细胞对ConA、LPS和IL-2的应答反应能力明显降低(P<0.01,n=3),但保持对ConA的应答反应能力.效应细胞抑制正常淋巴细胞与ConA、LPS和IL-2的应答反应(P<0.01,n=3),尤其抑制ConA和IL-2诱导的细胞增殖.SEB活化的效应细胞中CD8+NK1.1+、TcRVβ8+NK1.1+和CD4+NK1.1+NKT细胞以及TcRVβ8+T、CD8+T细胞数量明显增加(P<0.01和P<0.05,n=4).结论 超抗原SEB诱导的耐受性应答反应是效应细胞的直接作用,与细胞因子无关;这些效应细胞能抑制T淋巴细胞增殖,并保存识别ConA的受体功能.     

超抗原SEB诱导外周血单个核细胞对糖皮质激素抵抗的研究

目的:建立超抗原SEB诱导儿童外周血单个核细胞糖皮质激素抵抗的实验模型,并探讨ERK信号通路在该模型中的作用。方法:分离单个核细胞,经不同浓度SEB刺激,通过检测不同浓度地塞米松下的细胞增殖率和激光共聚焦显微镜观察糖皮质激素受体α(GRα)亚细胞定位构建糖皮质激素抵抗的实验模型,Western blotting检测该模型中T-ERK1/2及p-ERK1/2表达。结果:10-500μg/L的SEB可明显降低PBMCs对DEX的抑制作用的反应性,各剂量间差异无显著。SEB刺激组DEX作用前后GRα均趋向分布于胞浆。ERK抑制剂UO126可增加GRα核内分布。SEB可更早更强地诱导ERK1/2磷酸化。结论:超抗原SEB通过阻碍GRα核转位诱导PBMCs产生糖皮质激素抵抗,其机制可能与ERK信号通路持续活化有关。     

肝癌细胞外泌体诱导肝癌细胞炎症因子的表达

目的探讨肝癌细胞HepG2和SMMC-7721外泌体对同源细胞HepG2和SMMC-7721的TLR8信号通路及细胞因子的调节作用。方法利用SBI试剂盒收集肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721外泌体,利用透射电镜和Western blot检测鉴定外泌体的形态和标志蛋白的表达。利用CCK-8法检测外泌体对细胞增殖活性的影响。利用荧光定量PCR和Western blot检测TLR8、MyD88、NF-κB的表达。利用ELISA法测定培养液上清中细胞因子TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ质量浓度的变化。结果与空白对照组相比,肝癌细胞HepG2和SMMC-7721外泌体对细胞的增殖活性没有引起显著性变化(P>0.05)。荧光定量PCR和Western blot结果显示外泌体作用后,TLR8、MyD88、NF-κB的m RNA表达量和蛋白质量浓度明显增多(P<0.05)。ELISA结果显示外泌体作用后细胞因子TNF-α、IL-12、IL-6和IFN-γ的分泌也有显著性增加(P<0.05)。结论肝癌细胞来源的外泌体可调节肝癌细胞的炎症反应。     

超抗原SEB在同种异体细胞移植小鼠中诱导的免疫耐受及其特征

目的 探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B（SEB）体内诱导的免疫耐受性及其特征。方法 采用MHC不同的两种小鼠进行淋巴细胞移植。用流式细胞术和混合淋巴细胞培养技术，检测受体鼠T细胞亚群的变化，供体鼠H－2K^d分子在受体鼠体内表达的阳性率与免疫应答性。结果 （1）注射SEB可选择性地降低CD4^ T细胞和CD4^ T/H-2K^b 细胞的百分率，而不影响CD8^ T细胞的数量。在SEB注射的21d，抑制作用最强，其对CD4^ T细胞和CD4^ T/H-2K^b 细胞的抑制率分别是6.24%和23.38%。（2）在进行异源性MHC淋巴细胞移植时注射SEB，于移植细胞后21d，受体小鼠肝脏淋巴细胞上开始表达供体小鼠H－2K^d分子，至移植后40d，表达率达到高峰7.90%。与此同时，受体鼠外周淋巴细胞对供体鼠淋巴细胞的免疫应答能力也明显降低。结论 SEB能诱导小鼠产生免疫耐受，免疫耐受的形成与受体鼠内CD4^ T细胞克隆的明显减少有关。     

超抗原SEB对CD8+T细胞凋亡诱导配体表达的影响

为了探讨超抗原SEB对CD8 T细胞凋亡诱导配体在细胞胞内和膜表面表达的影响,以SEB及PHA刺激PBMC,用免疫荧光染色结合三色流式细胞术,分析比较刺激前后PBMC中CD8 T细胞三种主要的凋亡诱导配体TRAIL、FasL和TNF-α在细胞胞内和膜表面表达的变化.结果表明,SEB上调FasL在CD8 T细胞胞内(34.8%至42.5%)和TRAIL在CD8 T细胞膜表面(7%至20.7%)的表达,SEB还可同时上调TNF-α在CD8 T细胞膜表面(7%至45.7%)及胞内(23.9%至88.7%)的表达.说明SEB能上调不同凋亡诱导配体在CD8 T细胞膜表面或胞内的表达,这可能是SEB影响CD8 T细胞效应功能的方式之一.     

超抗原SEB激活诱导CD4^＋T细胞凋亡模型的建立

目的 为了探讨超抗原活化诱导ＣＤ４＾＋Ｔ淋巴细胞凋亡分子机理及其信号传导途径,有必要建立超抗原活化诱导ＣＤ４＾＋Ｔ细胞凋亡模型。方法 采用电镜观察细胞凋亡的形态学特征,借助流式细胞仪ＰＩ染色观察细胞凋亡的光散射特征及亚二倍体核型峰特征,琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的ＤＮＡ片段化图谱,最后采用改进的二苯胺（ＤＰＡ）法定量分析细胞凋亡ＤＮＡ片段化百分率。结果 ４ｕｇ／ｍＬ ＳＥＢ刺激静息的ＳＥＢ应答ＣＤ４＾＋Ｔ细胞１２ｈ后,电镜下观察呈现典型的凋亡形态学特征;流式细胞仪ＰＩ染色分析表明,在二倍体峰的左侧出现亚二倍体核型峰典型凋亡特征,在光散射图谱上呈现低于正常细胞的前向散射和高于正常细胞的侧向散射;琼脂糖凝胶电泳分析呈现典型的凋亡ＤＮＡ梯状图谱;ＤＮＡ片段化百分率分析表明,超抗原ＳＥＢ活化诱导ＣＤ４＾＋Ｔ细胞凋亡率的     

超抗原SEB激活诱导CD4~+T细胞凋亡模型的建立

目的为了探讨超抗原活化诱导 CD4+ T淋巴细胞凋亡分子机理及其信号传导途径 ,有必要建立超抗原活化诱导 CD4+ T细胞凋亡模型。方法采用电镜观察细胞凋亡的形态学特征 ,借助流式细胞仪 PI染色观察细胞凋亡的光散射特征及亚二倍体核型峰特征 ,琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的 DNA片段化图谱 ,最后采用改进的二苯胺 (DPA)法定量分析细胞凋亡 DNA片段化百分率。结果 4μg/ m L SEB刺激静息的 SEB应答 CD4+ T细胞 12 h后 ,电镜下观察呈现典型的凋亡形态学特征 ;流式细胞仪 PI染色分析表明 ,在二倍体峰的左侧出现亚二倍体核型峰典型凋亡特征 ,在光散射图谱上呈现低于正常细胞的前向散射和高于正常细胞的侧向散射 ;琼脂糖凝胶电泳分析呈现典型的凋亡 DNA梯状图谱 ;DNA片段化百分率分析表明 ,超抗原 SEB活化诱导 CD4+ T细胞凋亡率的升高具有时间依赖性 ,添加 Fas- Ig融合蛋白能够特异性抑制凋亡 DNA片段化百分率的升高。结论超抗原 SEB活化诱导 CD4+ T细胞凋亡模型的建立 ,为进一步深入探讨超抗原活化诱导 T细胞死亡的分子机理和信号通路奠定了坚实基础     

超抗原SEB活化耐受性NKT细胞亚群的研究

目的:探讨超抗原SEB活化的效应细胞参与免疫耐受的NKT细胞亚群及分化特征.方法:采用C57BL/J小鼠脾细胞经SEB诱导, 收集体外扩增10 d的淋巴细胞为效应细胞, 与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养3 d, 测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力.在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加效应细胞, 3 d后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激原的应答反应能力.用MTT染色方法记录细胞增殖的A值.以ConA活化的淋巴细胞做参照, 用流式细胞术(FCM)解析了耐受性效应细胞中NKT细胞亚群并显示分化来源与功能的相关性.结果:与正常淋巴细胞对抗原应答反应能力相比, SEB活化的效应细胞对ConA、LPS和IL-2的应答反应能力明显降低, 细胞生长的A值从正常组的0.80±0.04、0.60±0.03和0.55±0.07下降到0.60±0.05、0.30±0.05及0.27±0.04 (P＜0.01, n=3).效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述抗原的应答反应, 尤其抑制ConA 活化的T淋巴细胞的应答反应;A值分别由正常值降低到0.26±0.002、0.48±0.04及0.34±0.02(P＜0.01, n=3).效应细胞中CD4 NK1.1 、CD8 NK1.1 、TcRVβ8 /NK1.1 NKT细胞亚群显著增加(P＜0.05和P＜0.01, n=4).ConA活化的淋巴细胞是T淋巴细胞并包括CD4-CD8-/CD3 NK1.1 NKT细胞.结论:超抗原SEB活化的耐受功能与CD4 NK1.1 、CD8 NK1.1 、TcRVβ8 NK1.1 NKT细胞亚群有关, 它们由T细胞分化而来. CD4-CD8-/CD3 NK1.1 NKT细胞没有参与耐受性调节.     

硫化氢抑制丙酮醛诱导的人皮肤角质形成细胞损伤

目的 观察硫化氢(H2S)对丙酮醛(MGO)诱导的人皮肤角质形成细胞(HaCaT)损伤的影响.方法 HaCaT细胞分为MGO组、对照组和MGO+NSHD(H2S供体)组.MGO组用200、400、600 μmol/LMGO处理HaCaT细胞48 h造成细胞损伤;对照组给予等体积培养基;MGO+NSHD组应用400 μmol/LMGO处理,48 h前用50、100、200μmol/LNSHD预处理1h.通过CCK-8检测各组细胞活性.HaCaT细胞经100 μmol/LNSHD预处理1h,用20 μmol/L的H2S荧光探针WSP-1染色结合荧光照相术检测NSHD预处理1h组和对照组培养基和细胞内的H2S含量.将HaCaT细胞分为MGO组、MGO+NSHD组、NSHD组和对照组.MGO组仅用400 μmol/L MGO处理48 h;MGO+NSHD组在400 μmol/L MGO处理48 h前用100 μmol/L NSHD预处理1 h;NSHD组的细胞仅用100 μmol/L NSHD处理1h;对照组则给予等体积培养基.Hoechst 33258核染色结合荧光照相术检测细胞凋亡.Rh123染色结合荧光照相术检测线粒体膜电位(MMP).结果 HaCaT细胞经200、400和600 μmol/L MGO处理48 h,细胞活性依次为0.325±0.023、0.224±0.009和0.095±0.102,均低于对照组0.415±0.031(F=37.866,P＜0.05),其中400 μmol/LMGO组细胞活性约为对照组的1/2,选用此浓度的MGO作为有效损伤浓度.100 μmol/L NSHD处理1h可使培养基和细胞内的H2S含量较对照组均增加.在400μmol/L MGO处理48 h前,分别用50、100和200 μnol/L NSHD预处理1h,细胞活性依次为0.235±0.028、0.314±0.017、0.346±0.020,均高于单独400μmol/L MGO处理组0.224±0.009(F=61.209,P＜0.05).400 μmol/L MGO处理48 h后细胞凋亡率高于对照组和NSHD组[(32.6±3.5)％比(5.1±1.2)％、(3.4±0.8)％,均P＜0.05],MMP低于对照组和NSHD组(28.5±2.9比46.1±3.8、48.6±4.3,均P＜0.05).MGO+ NSHD组细胞凋亡率(18.3±2.6)％,低于MGO组但高于对照组和NSHD组(均P＜0.05),MMP为38.9±3.2,高于MGO组但低于对照组和NSHD组(均P＜0.05).结论 NSHD能通过释放H2S拮抗MGO诱导的皮肤细胞损伤.     

外泌体诱导干细胞分化的研究进展

体外干细胞定向诱导分化方法中,共培养及转化因子诱导均可使干细胞定向分化,但在干细胞定向分化微环境中真正起到诱导分化的关键物质尚未明确。越来越多的研究表明,细胞来源的外泌体在细胞间通讯中表现出独特的功能,其在加快组织的修复,促进细胞的增殖、迁移及调控细胞生理功能等方面都具有显著作用。本文结合国内外研究现状,就外泌体诱导干细胞定向分化进行综述,从宏观上进一步探索诱导干细胞定向分化物质的基础,为体外细胞的定向诱导提供新的思路。     

超抗原SEB诱导的免疫耐受参与免疫赦免部位的应答反应

目的:探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受性是否参与免疫赦免部位的应答反应。方法:以LEW大鼠作为受体,F344大鼠作为供体,进行角膜移植。将受体鼠随机分成5组,即在手术前7 d及移植后7 d,以球旁途径分别注射30μg/kg、60μg/kg、90μg/kg和120μg/kg的SEB组和注射生理盐水的阴性对照组。阳性对照组分别为移植后注射糖皮质激素(GC)、FK506、环孢素A((CsA)和白介素-1受体拮抗剂(IL-1 ra)组。镜下观察移植后30 d内角膜的浑浊、水肿和新生血管,用抗排斥反应指数记录移植片存活天数。采用NK1.1-PE荧光抗体进行组织染色,观察移植后不同时间受体鼠角膜片的炎症细胞浸润和受体鼠眼局部NK细胞的变化。结果:注射120μg/kg SEB的大鼠移植片比生理盐水对照组的存活天数延长了22 d。与FK506、CsA、IL-1ra和GC组相比也明显延长。120μg SEB/kg受体鼠的移植片排斥反应指数为3.42±2.18,明显低于对照组6.58±3.15(P<0.01)。其中水肿指数和新生血管指数明显降低。组织染色结果显示,SEB注射后NK细胞数量增加。结论:注射SEB能降低大鼠角膜移植的排斥反应,提示SEB诱导的耐受性参与了免疫赦免部位的应答反应。     

肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的机制研究

目的 探讨缺氧环境下肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的潜在机制。方法 缺氧环境下,正常肝细胞LO2外泌体或肝癌细胞HepG2外泌体处理,检测单核细胞代谢关键指标葡萄糖摄取和乳酸产生水平。miRNA-seq检测miRNA表达水平并筛选以鉴定诱导单核细胞代谢重编程的关键miRNA。通过HumanTargetScan在线分析预测以及遗传学筛选鉴定miRNA的靶标。结果 缺氧环境下,肝癌细胞外泌体单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生（分别为34856±2944、174±16）高于正常肝细胞外泌体（分别为23454±2194、135±12）(P<0.05)。过表达miR-34b-3p、OMA1及敲低PHB2能够促进单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生（分别为22287±2207与36399±3123;121±10与158±17;22972±2330与32099±2017;121±11与161±16;24020±2156与37901±3084;110±10与151±16,均P<0.05）;敲低miR-34b-3p、OMA1及过表达PHB2能够抑制单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生（分别为22287±22...     

循环外泌体抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖及其可能机制研究

目的探讨循环外泌体对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖的影响及其可能机制。方法选择2016年6月至2017年6月遂宁市中心医院血液科13例经病理诊断明确的DLBCL患者,其中男性8例,女性5例;年龄37~68岁,平均年龄55.6岁。同期14例体检中心的健康体检者,其中男性7例,女性7例;年龄44~69岁,平均年龄58.9岁。获得血浆外泌体。通过电子显微镜和qNano分析仪对体检者、DLBCL患者外泌体进行鉴定。设空白对照组(U2932细胞)、对照组(健康体检者外泌体+U2932细胞)、研究组(DLBCL患者外泌体+U2932细胞),用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞法和Western blot检测增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67,综合评估各组细胞的增殖情况;采用高通量技术检测4例DLBCL患者血浆和4例健康体检者血浆外泌体中miRNA表达谱;用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测DLBCL患者和健康体检者血浆外泌体中miR-92b表达水平。结果电子显微镜观察到,健康体检者、DLBCL患者外泌体呈现典型的茶托样结构,qNano分析结果显示所提取的外泌体主要集中在20~100 nm;Western blot结果显示,相比于血浆,外泌体中CD63、CD9这两个外泌体标志蛋白均有明显的表达。流式细胞结果显示,相比于空白对照组,对照组细胞G0/G1期受到抑制(P 0.05);MTT结果显示,相比于空白对照组,对照组细胞增殖能力降低(t=17.3,P 0.05);Western blot结果显示,相比于空白对照组,对照组细胞中PCNA和Ki-67表达减少(t=33.5,P 0.05)。相比于对照组,miRNA芯片分析结果显示,研究组血浆外泌体中miR-92b表达减少,RT-PCR结果显示miR-92b表达减少(t=12.9,P 0.05)。结论循环外泌体通过介导miR-92b抑制DLBCL细胞增殖。     

阿司匹林对早发子痫前期外泌体诱导滋养细胞功能的作用

目的 构建子痫外泌体细胞模型研究阿司匹林改善滋养细胞功能并预防子痫前期（PE）的作用及分子机制。方法 收集早发型PE病例14例和正常孕妇作为对照8例,提取血浆外泌体。体外培养人滋养细胞HTR-8/SVneo,分别加入不同浓度的PE外泌体造模并给予阿司匹林处理;CCK-8法检测滋养细胞增殖情况;细胞划痕和Transwell小室检测滋养细胞迁移、侵袭变化;RT-qPCR和Western blot检测血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和蛋白表达水平情况;ELISA法检测孕妇血浆VEGF水平。结果 PE外泌体可以显著抑制滋养细胞活力,且PE孕妇血浆中VEGF浓度低于NC组。体外PE外泌体滋养细胞模型实验证实,与NC组相比,100μg/mL PE外泌体显著抑制滋养细胞增殖、影响滋养细胞迁移、侵袭能力,抑制内皮细胞HUVEC小管形成功能,降低VEGF的表达（P<0.001）;而给予阿司匹林处理后,滋养细胞增殖、迁移、侵袭能力以及内皮细胞小管形成功能均改善。结论 阿司匹林提高滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力,改善PE外泌体诱导后滋养细胞功能损伤,提高VEGF水平。这为阿司匹林用于早发型PE的预防...     

白血病细胞源外泌体的作用研究进展

<正>白血病(leukemia)是一类造血干/祖细胞恶性克隆性疾病。外泌体是活细胞分泌到胞外的一种纳米级的微囊泡,是细胞间对话的信息和物质载体~([1])。外泌体携带亲本细胞来源的蛋白质、核酸(mRNA、microRNA和DNA等)及脂质等生物信息分子,可近距离和/或经体液流动远距离、特异性调控靶细胞的生理和病理活动~([2-3])。靶细胞摄取外泌体的途径主要有网格蛋白介导的内吞途径、小窝蛋白依赖型内     

自然杀伤细胞来源外泌体的miR-30e-3p抑制人食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭

目的 研究自然杀伤(NK)细胞来源外泌体的miR-30e-3p对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 从健康供体的外周血中分离和扩增NK细胞,并分离NK细胞外泌体(EXO)进行鉴定。NK细胞外泌体与NEC细胞进行共培养,随机分为Exo1和Exo2组。采用透射电子显微镜观察外泌体形态及大小。Western blot法检测外泌体凋亡相关基因2相互作用蛋白X(ALIX)、抗肿瘤易感基因101(TSG101)、 CD81、钙联蛋白(calnexin)表达。将miR-30e-3p模拟物(miR-30e-3p mimic)、 miR-30e-3p抑制物(miR-30e-3p inhibitor)及阴性对照(miR-NC)转入NK细胞,并分离相应的外泌体与NEC细胞进行共培养。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡,Transwell^TM侵袭实验检测细胞侵袭能力。实时定量PCR检测NCE细胞和外泌体中miR-23b、 miR-422a、 miR-133b、 miR-124、 miR-30e...