高温对体外培养的兔视网膜色素上皮细胞的影响

目的:观察高温对体外培养的兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial cells,RPE)细胞的影响。方法:以体外培养的兔RPE细胞为研究对象,采用55℃水浴加热法对细胞进行不同时间(3、5、8min)加温处理,处理结束后立即进行CCK-8法检测细胞活性、流式细胞仪测定细胞凋亡、透射电镜观察细胞形态学变化。结果:55℃水浴各时间组OD值明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),且55℃水浴各时间组组间差异也均较显著(P0.05)。对照组(37℃)细胞凋亡率为(5.92±0.87)%,55℃水浴3min组细胞凋亡率为(13.28±0.61)%,55℃水浴5min组细胞凋亡率为(50.82±3.72)%,55℃水浴8min组细胞凋亡率为(64.90±0.59)%。与对照组比较,55℃水浴各时间组细胞凋亡率均明显增高,且组间差异具有统计学意义(P0.05),在温度恒定的前提下,表现为随着水浴时间的延长,兔RPE细胞凋亡率越来越高。透射电镜能明显看到细胞凋亡形态的改变。结论:55℃水浴加热3、5、8min均可造成兔RPE细胞凋亡,水浴时间越长,细胞凋亡率越高。     

野生和林下种植金线莲的体外抗氧化活性研究

目的:研究野生和林下种植金线莲的体外抗氧化活性。方法:采用紫外分光光度法,检测野生金线莲和林下种植金线莲水提液及醇提液对DPPH自由基的清除能力。结果:野生金线莲和林下种植金线莲对DPPH自由基具有一定的清除作用,其活性均为水提液优于醇提液;野生金线莲与林下种植金线莲对DPPH自由基的清除活性总体差异不大。结论:林下种植可以作为缓解金线莲资源紧张的重要途径。     

CCK-8法与MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的比较研究

目的 探讨CCK-8法和MTT法的最佳实验条件.方法 以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,采用CCK-8和MTT法检测抗肿瘤药物阿霉素(ADM)对PC3细胞增殖的影响.结果 CCK-8法的最佳检测波长为450 nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4 h,适宜细胞数量范围为8×102～1×105个.结论 CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法.     

阿司匹林对人宫颈癌Hela细胞BCL-6mRNA表达的影响

目的:研究阿司匹林对人宫颈癌Hela细胞增殖及BCL-6 mRNA表达量的影响。方法:不同剂量的阿司匹林干预人宫颈癌Hela细胞24h后,用MTS法观察其对人宫颈癌Hela细胞增殖状态的影响及采用逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测阿司匹林作用后Hela细胞BCL-6 mRNA量的变化。结果:阿司匹林能抑制Hela细胞增殖及促进细胞中BCL-6 mRNA的表达,且促进强度随阿司匹林的浓度的增加而增加。结论:阿司匹林能够抑制人宫颈癌Hela细胞的生长,并从mRNA水平促进BCL-6蛋白的表达。     

枸杞子含药血清对兔视网膜色素上皮细胞光损伤保护的实验研究

目的:观察枸杞子含药血清对受损兔色素上皮细胞(RPE)中超氧化物歧化酶(SOD)活性及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法:常规细胞培养,建立兔RPE细胞光损伤模型,设正常对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,分别于光照结束后24、48、72h进行指标的检测。结果:模型组各时间点兔RPE细胞中SOD活性及Bcl-2/Bax蛋白的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);低剂量组及高剂量组各时间点兔RPE细胞中SOD活性及Bcl-2/Bax蛋白表达与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05),且随时间的延长,SOD活性逐渐增高,Bcl-2蛋白表达逐渐增高,Bax蛋白表达依次降低,同时高、低剂量组之间存在量效关系。结论:枸杞子对兔RPE细胞具有一定的保护作用,这与其具有抗氧化性且能提高受损兔RPE细胞中SOD的活性有关。     

乳香挥发油及地塞米松对IL-1β介导的兔视网膜色素上皮细胞增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响

目的观察IL-1β对兔视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并研究乳香挥发油及地塞米松对IL-1β介导的兔视网膜色素上皮细胞增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响。方法MTT法检测IL-1β(2.5、5、10、15、20、30 g/L)作用兔视网膜色素上皮(RPE)细胞24、48、72 h后对其增殖的影响,以及乳香挥发油(0.15、0.3、0.45、0.6、0.75 mg/mL)、地塞米松(50、100、200、400、600 mg/L)对IL-1β介导的兔RPE细胞增殖的影响。流式细胞仪检测乳香挥发油及地塞米松对IL-1β介导的细胞凋亡的影响。根据MTT检测结果及凋亡率检测结果筛选乳香挥发油及地塞米松低、中、高剂量组。免疫细胞化学染色法观察乳香挥发油对IL-1β作用下兔RPE细胞NF-κBp65、p-IκBα、COX-2蛋白表达的影响。结果与空白对照组比较,除外20、30 g/L IL-1β组24 h,其余IL-1β组24、48、72 h细胞存活率均显著增高(P<0.05,P<0.01),尤以浓度为10 g/L时最为明显;与本组24 h比较,20 g/L IL-1β组48 h及15、20、30 g/L IL-1β组72 h细胞存活率增高(P<0.05,P<0.01),同时30 g/L IL-1β组72 h细胞存活率高于本组48 h(P<0.01)。综合以上,选取浓度为10 g/L的IL-1β进行后续实验。与空白对照组比较,IL-1β对照组及溶媒对照组OD值及细胞存活率增高,早期及晚期凋亡率降低(P<0.01)。与IL-1β对照组比较,乳香挥发油各剂量组及地塞米松各剂量组OD值及细胞存活率降低,早期及晚期凋亡率增高(P<0.05,P<0.01),同时均具有浓度依赖性(P<0.05,P<0.01)。与空白对照组比较,IL-1β对照组NF-κBp65、p-IκBα、COX-2蛋白表达增高(P<0.01)。与IL-1β对照组比较,低、中、高剂量乳香挥发油组及低、中、高剂量地塞米松组NF-κBp65、p-IκBα、COX-2蛋白表达降低(P<0.01)。同时乳香挥发油组及地塞米松组各剂量间存在剂量依赖性(P<0.01)。结论IL-1β可明显促进兔RPE细胞增殖,其中浓度为10 g/L时促增殖作用最为明显;乳香挥发油及地塞米松可显著抑制IL-1β介导的兔RPE细胞增殖;乳香挥发油及地塞米松干预24 h可显著提高IL-1β介导的兔RPE细胞的早期及晚期凋亡率并可有效抑制IL-1β干预后所致的NF-κBp65核转移及p-IκBα、COX-2蛋白表达量增加。     

枸杞子含药血清对兔视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡线粒体信号传导途径的影响

目的:研究兔视网膜色素(RPE)上皮细胞光损伤以及枸杞子含药血清干预防治后细胞中参与凋亡的蛋白分子表达量的变化,探讨枸杞子含药血清对兔视网膜色素上皮细胞光损伤保护可能的信号传导途径,为临床应用枸杞子治疗年龄相关性黄斑变性等视网膜光损伤性疾病提供理论依据。方法:体外培养兔RPE细胞,用三基色冷光灯模拟自然光源,选取(2500±500)Lux作为基础光照强度,照射4h建立光损伤模型。制备含不同效量的枸杞子含药血清,光照前1h孵育体外培养的兔RPE细胞后进行光照实验,设置四个实验分组:A组:空白对照组;B组:光损伤模型组;C组:低剂量组;D组:高剂量组。通过透射电子显微镜进行兔RPE细胞超微结构的观察及拍片;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测兔RPE细胞内细胞色素C(Cyt-C)、caspase-9及caspase-3蛋白的表达量。结果:与空白对照组相比,光损模型组细胞内的Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达水平明显上调(P0.05);枸杞子含药血清能有效的抑制细胞内Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达,与光损模型组比较,差异有统计学意义(均P0.05),其中高浓度组可显著抑制细胞内Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达,与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:枸杞子对RPE细胞具有一定的保护作用,这一保护作用可能是通过线粒体信号传导途径来实现的。     

仙茅多糖对巨噬细胞分泌几种活性因子的影响

目的:观察仙茅多糖对体外培养的巨噬细胞分泌几种活性因子的影响,以期探索仙茅多糖活化巨噬细胞的部分机制。方法:将仙茅多糖体外与RAW264.7巨噬细胞共同培养36h,ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-1的含量,Griess比色法检测培养上清中NO的含量。结果:与空白对照组比较,仙茅多糖高、中剂量组TNF-α、IL-1和NO等活性因子的水平明显升高(P0.05或P0.01),且与阳性对照组的调节趋势相似。结论:仙茅多糖刺激巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1和NO等活性因子可能是其活化巨噬细胞的重要机制。     

枸杞多糖对人视网膜色素上皮细胞光损伤保护的实验研究

目的 观察不同纯度枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides, LBP)对光诱导人视网膜色素上皮(retinalpigment epithelium, RPE)细胞凋亡作用的影响,进一步探究其保护机制。方法 体外培养人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19),建立hRPE细胞光损伤模型,分别用不同纯度的枸杞多糖(50%、65%)对hRPE细胞进行干预,于光照24h后进行相应指标检测。采用CCK-8法检测hRPE细胞活力;通过流式细胞术(FCM)检测光照对hRPE细胞凋亡率的影响;通过蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白分子表达量变化。实验组分为正常组、模型组、不同纯度枸杞多糖(50%、65%)干预组。结果 与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低、细胞凋亡率显著升高,Bax、 Caspase-3、Caspase-9蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01);与模型组比较,枸杞多糖(50%、65%)干预组细胞存活率显著升高,枸杞多糖各纯度组细...     

小半夏加茯苓汤醇提物对BGC-823细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:观察小半夏加茯苓汤醇提物对胃癌细胞BGC-823的凋亡作用以及诱导其凋亡发生的机制。方法:运用MTT法检测不同浓度的小半夏加茯苓汤醇提物对BGC-823的增殖抑制作用并计算抑制率;以罗丹明123为细胞染色剂,采用流式细胞术检测线粒体跨膜电位的改变;实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2和Cyt-c表达的变化。结果:MTT结果显示小半夏加茯苓汤醇提物对BGC-823具有抑制作用,随着给药浓度的增加和作用时间的延长,抑制率逐渐升高,细胞活力逐渐减弱,与空白对照组比较有显著统计学差异(P0.01)。流式细胞术结果显示,与空白对照组相比,小半夏加茯苓汤醇提物能够显著降低线粒体跨膜电位(P0.01);qRT-PCR结果显示,Bax基因表达显著升高(P0.01),Cyt-c基因表达升高(P0.05),Bcl-2基因的表达降低(P0.05)。结论:小半夏加茯苓汤醇提物可以抑制BGC-823细胞活力,诱导细胞凋亡并减小Bcl-2/Bax基因表达比例,增强Cyt-c基因表达,其机制可能与线粒体为核心的凋亡通路相关。     

CCK-8法检测牛膝醇提物体外诱导兔BMSCs增殖活性的研究

目的:研究牛膝醇提物含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖的影响。方法:采用高、中、低剂量牛膝醇提物以及等体积生理盐水对SD级新西兰大白兔进行灌胃,从中提取含药血清,同时采用贴壁筛选法培养兔骨髓间充质干细胞,并以4种不同浓度的含药血清及胎牛血清分别干预第三代骨髓间充质干细胞。于干预后第3、6、9天分别3次采用CCK-8法测定细胞光密度值(OD),比较各组间的差异。结果:高剂量组牛膝醇提物含药血清刺激骨髓间充质干细胞增殖,并促进细胞分化,其OD均值与其他组相比较最高,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:牛膝醇提物含药血清具有促进BMSCs增殖作用,其中高剂量作用最强。     

白族、傣族医药传承与保护的对比研究

通过文献法、分析法等方法,从白族、傣族医药发展的历史特点出发,以白族、傣族医药文献资料为基础,对白族和傣族医药的传承及保护进行对比研究,进一步促进白族医药的传承和保护。     

藏药短穗兔耳草有效部位的抑菌活性研究

目的对短穗兔耳草Lagotis brachystachyM axim挥发油及全草分萃取段进行了抑菌活性研究。方法选择金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为代表菌种,筛选出了对所选细菌的生长具有明显抑制作用的抗菌活性部分。结果短穗兔耳草挥发油、石油醚萃取部分、醋酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分都具有部分活性。结论短穗兔耳草挥发油对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑菌活性,石油醚萃取部分对5种细菌都不敏感,醋酸乙酯萃取部分对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌有抑菌活性,正丁醇萃取部分对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌和铜绿假单胞菌有抑菌活性。     

常见舌苔舌上皮细胞凋亡与bax、bcl-2基因表达关系的研究

目的:研究舌苔厚度变化与舌上皮细胞凋亡、bax、bcl-2mRNA和蛋白质表达的关系.方法:运用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记)技术、原位杂交、免疫组化和图像分析技术.结果:与正常薄苔比较,剥苔bax基因过度表达伴随细胞凋亡增多,而厚苔bax基因低表达伴随细胞凋亡减少.bax基因表达水平变化趋势与细胞凋亡水平变化趋势一致.在各组舌苔中均未检测到bc1-2基因表达.结论:bax基因表达水平的变化可能是影响舌苔上皮细胞凋亡并导致舌苔厚度变化的重要原因.