青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响

摘 要 目的:探讨青蒿琥酯（Artesunate,Art）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖和凋亡的影响。方法: 选用活性良好的HSC-T6细胞进行体外培养,应用倒置显微镜观察药物作用后的细胞形态改变;用CCK-8测定不同浓度、不同时间Art对该细胞增殖的抑制作用的影响;用Annexin Ⅴ和PI双染的流式细胞术检测HSC-T6的细胞凋亡率的影响。结果:①倒置显微镜结果显示,Art作用过的贴壁细胞数目变少、突触变短变细、细胞表面变皱、由星形变成圆形。②12.5～200 μg·ml^-1的Art在0～72 h范围内对HSC的增殖有明显的抑制作用（P＜0.01）,抑制率有时间和剂量依赖性。③流式细胞仪结果显示随着剂量、时间的增加,凋亡率显著增加（P＜0.05）。结论:Art能抑制HSC T6细胞的增殖,并可促进细胞凋亡。     

Cobra Venom NGF Inhibits Proliferation and Induces Apoptosis of Hepatic Stellate Cell

目的:从眼镜蛇毒中分离纯化神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF),观察眼镜NGF对肝星状细胞HSC-T6增殖、调亡活性的影响,进一步为蛇毒NGF在抗肝纤维化治疗提供依据.方法:采用shephadex G-75和CM Sepharose CL-6B二步柱色谱对眼镜蛇毒NGF进行纯化分离;PC12细胞测定各洗脱峰的活性,再用SDS-PAGE鉴定具有NGF活性洗脱峰的纯度和相对分子质量.实验设立空白对照和NGF处理组,分别作用于HSC-T6,培育相应时间,MTT检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞活力影响;HE染色、紫外激光显微镜与透射电镜观察HSC-T6细胞的形态学变化;TUNEL、流式细胞技术检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞凋亡的影响.结果:眼镜蛇毒经PC-12细胞鉴定第Ⅵ峰具有NGF活性;SDS-PAGE检测为电泳纯,相对分子质量为22.3KD;NGF对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用(2μg/ml NGF的抑制率为49.66％±6.50％,P＜0.05;6.25 μg/ml NGF的抑制率为71.33％±1.53％,P＜0.05);TUNEL法检测发现NGF干预组的凋亡率28.71％±1.59％(2ug/ml NGF)和34.4％±2.49％(5 μg/mlNGF)明显高于对照组的15.85％±1.58％(P＜0.05);流式细胞仪也有同样的发现,NGF干预组的凋亡率16.12％±3.02％(2 ug/mlNGF)和21.15％±3.31％(5 μg/ml NGF)明显高于对照组的2.7％±1.55％( P＜0.05).结论:眼镜蛇毒NGF能抑制肝星状细胞HSC-T6增殖并诱导其凋亡.     

盐酸多西环素联合碘油对兔VX2肝瘤凋亡、增殖及肝功能的影响研究

目的:研究盐酸多西环素(DOXY)联合碘油对兔VX2肝瘤凋亡、增殖及肝功能的影响。方法:取兔建立兔VX2肝瘤模型,2周后,随机分为A(生理盐水)组、B(碘油0.3mL.kg-1)组、C(阿霉素2mg·kg-1+碘油0.3mL.kg-1)组和D(DOXY3mg.kg-1+碘油0.3mL·kg-1)组,每组8只,经股动脉-肝动脉插管给予相应药物。测定治疗前1d及治疗后4、7d各组血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)含量,以及治疗后7d肿瘤细胞凋亡指数和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达、残存肿瘤增殖细胞的增殖指数。结果:与A组比较,B、C、D组治疗后4dAST、ALT含量均明显升高(P<0.05),治疗后7dAST、ALT含量逐渐下降,但3个组的AST含量仍明显偏高(P<0.05),C组ALT含量明显偏高(P<0.05);3个组凋亡指数和Caspase-3表达均明显升高(P<0.05),增殖指数明显降低(P<0.05)。与B组比较,C组治疗后4、7dAST、ALT含量均明显升高(P<0.05);D组凋亡指数和Caspase-3表达均明显升高(P<0.05),增殖指数明显降低(P<0.05)。结论:DOXY联合碘油对肝功能无明显损害,可加速肿瘤细胞凋亡,降低其增殖能力。DOXY促进肿瘤细胞凋亡可能与其上调Caspase-3表达有关。     

染料木素对人宫颈癌Siha细胞增殖凋亡和周期的影响

［摘要］目的探讨染料木素对人宫颈癌Siha细胞增殖、凋亡和周期的影响及机制。方法50 mol&#8226;mL 1染料木素处理Siha细胞,用噻唑蓝（MTT）法检测细胞生长抑制率,用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡、周期及周期蛋白cyclin A和cyclin B表达的变化。结果染料木素作用于Siha细胞后,增殖抑制率比对照组明显升高（P＜0.05）;染料木素处理48 h后,实验组凋亡率较对照组升高,分别为（67.45±1.54）%和（45.37±1.65）%（P＜0.01）。染料木素处理后的Siha细胞G2/M期的细胞比例显著上升,由（9.55±0.71）%升至（79.54±1.09）%（P＜0.01）;cyclin A和cyclin B表达上调,分别由（1.84±0.11）%升至（37.38±0.71）%（P＜0.01）,由（69.44±1.84）%升至（97.70±1.20）%（P＜0.01）。结论染料木素在体外可有效抑制人宫颈癌细胞生长,其抗肿瘤机制可能是上调cyclin A和cyclin B蛋白表达和引起G2/M期细胞周期阻滞。     

吲哚美辛对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡作用的影响

目的:研究吲哚美辛对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响。方法:以体外培养的Hela细胞为试验对象,分别用0(空白对照)、200、400、600、800、1 000μmol/L吲哚美辛作用24、48、72 h后,采用MTT法检测吲哚美辛对Hela细胞的增殖抑制率;用0(空白对照)、400、600、800μmol/L吲哚美辛作用24 h后,采用倒置显微镜观察细胞形态的改变,并用流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡情况。结果:600、800、1 000μmol/L吲哚美辛可抑制Hela细胞的增殖,增殖抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关。与空白对照比较,吲哚美辛可使Hela细胞形态由多角形逐渐向圆形转变且细胞呈现凋亡和坏死状态;其中细胞G0/G1期比例增加、S期比例减少,细胞凋亡率增加。结论:吲哚美辛可抑制Hela细胞增殖,诱导其凋亡,主要阻滞细胞于G0/G1期。     

非布司他对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响

目的 探讨不同浓度非布司他对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖、凋亡及胞内信号通路的影响.方法 通过CCK8法和流式细胞术观察不同浓度非布司他对高糖诱导的HK-2增殖与凋亡的作用.采用蛋白免疫印迹法检测p22、p47磷酸化蛋白表达水平.结果 100 μmol/L非布司他具有最佳的逆转高糖抑制HK-2细胞增殖的作用,可改善高糖诱导的HK-2细胞凋亡,降低高糖介导的HK-2的p22、p47磷酸化蛋白表达水平(P＜0.01).结论 非布司他可通过抑制p22、p47磷酸化蛋白表达,改善高糖诱导的HK-2凋亡,以100 μmol/L浓度效果最优.     

Subchronic Effects of Dieldrin and Phenobarbital on Hepatic DNA Synthesis in Mice and Rats

Dieldrin, an organochlorine pesticide, has been shown to behepatocarcinogenic in mice but not rats. Phenobarbital, in contrast,induces hepatic tumors in both mice and rats. Previous studieshave shown that acute dietary exposure of rats or mice to eitherdieldrin or phenobarbital produces several liver changes, includingcentrilobular hypertrophy, induction of hepatic cytochrome P450,and increased liver weight. The present study examined the subchroniceffect of dieldrin (0.1, 1.0, 3.0, 10.0 mg dieldrin/kg diet)and phenobarbital (10, 50, 100, 500 mg phenobarbital/kg diet)on the induction of hepatic DNA synthesis and hepatocyte lethalityin male B6C3F1 mice and male F344 rats. Eight-week-old animalswere treated as above and evaluated for hepatic DNA synthesisafter 7, 14, 21, 28, and 90 days of continual treatment to dieldrinor phenobarbital. Maximal induction of hepatic DNA synthesisin mice was seen at the 14-, 21-, and 28-day sampling times.In rats, no significant increase in hepatic DNA synthesis orhepatocyte lethality was observed at any dose of dieldrin investigated.Phenobarbital produced a significant increase in hepatic DNAsynthesis in both rat and mouse liver following 7 days of treatment.The induction of DNA synthesis in rat liver was transient, withthe labeling index returning to control levels by 14 days oftreatment. In contrast, mice treated with phenobarbital showeda significant increase in hepatic DNA synthesis throughout thetreatment. In both mice and rats, dieldrin and phenobarbitalinduced hepatic DNA synthesis selectively in the centrilobularregion of the hepatic lobule. The lack of an increase in serumenzymes indicative of hepatic damage and the absence of liverhistopathology in mice or rats fed dieldrin or phenobarbitalindicate that the induction of DNA synthesis was not mediatedby a cytolethal, compensatory hyperplastic response, suggestinga mitogenic mechanism. Therefore, the species-specific inductionof hepatic DNA synthesis by either dieldrin or phenobarbitalcorrelated with the previously observed species-specific inductionof hepatic cancer by these two compounds.     

齐墩果酸诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡作用研究

目的研究齐墩果酸（oleanolic acid,OA）诱导人结肠癌LoVo细胞株凋亡的机制。方法应用浓度为2.00～32.00 mg&#8226;L 1OA作用于人结肠癌LoVo细胞12～96 h后,采用噻唑蓝（MTT）法检测OA对LoVo细胞的抑制作用,采用流式细胞术、Western blot印迹法等检测细胞周期变化、凋亡及Bcl 2、Bax、p53、Caspase 3蛋白表达,在光镜及电镜下观察细胞形态学变化。结果OA呈时间 剂量依赖性抑制LoVo细胞增殖,能诱导LoVo细胞凋亡及阻滞细胞于G2/M期,OA作用LoVo细胞48 h后,各组的细胞凋亡率为10.32%～14.24%（P＜0.05),并出现Bcl 2蛋白表达抑制, p53、Bax及Caspase 3活性增强。结论OA可以促进人结肠癌LoVo细胞凋亡,其促凋亡机制与抑制Bcl 2表达及促进p53、Bax及Caspase 3表达有关。     

L-氨基酸氧化酶对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响研究

目的:探讨L-氨基酸氧化酶(LAAO)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,为临床上寻找新的肺癌治疗方法提供参考。方法:将A549细胞制成浓度为5×104个/mL的细胞悬液,根据LAAO干预浓度的不同,将其分为4组:2.41、4.82、9.64、19.28mg·mL-1干预组,各组均干预24、48、72h。镜下观察各组细胞形态学改变,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,另设立阴性对照组进行比较。结果:LAAO对A549细胞增殖的抑制率随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05),凋亡指数随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05)。结论:LAAO可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。     

新辅助化疗治疗宫颈癌对细胞增殖与凋亡的影响分析

目的探讨新辅助化疗治疗宫颈癌对细胞增殖与凋亡的影响,从而了解新辅助动脉化疗的作用机制,为宫颈癌的治疗提供参考。方法 52例Ib-IIb期宫颈癌患者平分两组,观察组施行动脉灌注栓塞化疗后手术,对照组直接手术治疗,观察临床疗效。分别记录两组手术病例的术中出血量,并作比较;同时检测动脉灌注栓塞化疗前、后及直接手术患者的肿瘤细胞增殖指数（Ki-67）及凋亡指数（AI）。结果观察组宫颈癌动脉灌注栓塞化疗总有效率为80.8%,对照组术后须行放疗或化疗者20例,占76.9%。观察组手术病例手术出血量为（362.5±11.5）ml,对照组手术出血量为（524.5±15.0）ml,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。观察组动脉化疗前活检标本,Ki-67指数（%）为（67.5±76）,对照组直接手术病理标本,Ki-67指数（%）为（80.1±8.5）。观察组AI（%）为（3.5±1.3）,对照组检测AI（%）为（0.8±0.3）。结论 Ib-IIb期宫颈癌行新辅助动脉灌注栓塞化疗,可显著缩小病灶体积,从而提高患者生活质量。可明显减少手术中出血量,有利于患者康复。同时促进肿瘤细胞增殖显著下降、凋亡显著增加,提示动脉化疗有抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡的作用。     

苦参碱对人突变肉瘤细胞系MS0812的抑制增殖和诱导凋亡体外实验

目的:观察苦参碱(matrine)对体外培养的人肉瘤细胞系MS0812细胞的增殖和诱导调亡作用.方法:苦参碱处理人肉瘤细胞系MS0812后,应用MTT比色法检测不同浓度苦参碱和不同作用时间对MS0812细胞的增殖作用的影响,TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:苦参碱浓度大于500.0 mg·L-1作用24h对MS0812 细胞增殖有抑制作用;通过TUNEL试剂盒可以发现凋亡阳性细胞;流式细胞仪检测随着苦参碱浓度的增加,凋亡率逐渐升高.结论:苦生碱体外对肿瘤细胞系MS0812的生长抑制和诱导凋亡作用有限.     

三七总皂苷对人胃癌细胞株MKN-28增殖和凋亡的影响

目的观察三七总皂苷(Total Saponins of Panax notoginseng,TSPN)对人胃癌细胞株MKN-28增殖和凋亡的影响,探讨其诱导细胞凋亡是否涉及上调死亡受体5(DR5)的表达。方法体外培养人胃癌细胞株MKN-28,平皿克隆形成法测定细胞锚定依赖性生长能力,PI染色流式细胞术(Flow cytometry,FCM)分析细胞周期和凋亡率,Hoechst 33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞的形态,Western Bloting检测分析药物对DR5蛋白表达的影响。结果平皿集落形成法检测显示TSPN对MKN-28细胞生长有抑制作用,且呈浓度依赖性。PI染色FCM结果表明TSPN以时间和浓度依赖性方式诱导MKN-28细胞凋亡,且使细胞周期阻滞于G1期。Hoechst 33258染色荧光显微镜观察可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染,与对照组相比,TSPN处理后,凋亡细胞比例增加,且呈时间和浓度依赖性。Western Bloting检测显示TSPN诱导细胞凋亡的机制涉及上调死亡受体5的表达活性。结论 TSPN在体外对人胃癌MKN-28细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,初步推断TSPN诱发胃癌细胞凋亡与其上调死亡受体5的表达活性有关。     

紫杉醇对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨紫杉醇在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用48h后的细胞周期和凋亡率;Western Blot检测的Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:紫杉醇抑制A549细胞增殖呈时效和量效关系;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后可见凋亡细胞;紫杉醇作用48h后药物组G2～M期细胞百分比均高于对照组(均P<0.01),药物组细胞凋亡率高于对照组(均P<0.01),且凋亡率随药物浓度增加而增加;Western Blot显示,不同浓度紫杉醇作用于A549细胞48h,Bax的表达随药物浓度增加而增加,Bcl-2的表达随药物浓度增加而减低。结论:紫杉醇能抑制肺腺癌A549细胞株的增殖,其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G2～M期和通过上调Bax、下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的,并且紫杉醇抑制A549细胞增殖和诱导凋亡作用随药物浓度增加而增加。     

丙氨瑞林对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨丙氨瑞林对卵巢癌细胞株CoC1／cDDP增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法：将丙氨瑞林与CoC1／cDDP一起培养，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖抑制率，流式细胞仪进行细胞周期时相及凋亡分析，瑞氏-姬姆萨染色后观察凋亡细胞形态，放射免疫法测定培养液中CA125的变化，半定量RT—PCR法检测作用前后CoC1／cDDP细胞Survivin—△Ex3及Caspase-3 mRNA的表达。结果：（1）随着丙氨瑞林浓度的升高，作用时间的延长，细胞生长抑制率逐渐上升（P〈0．01）。（2）丙氨瑞林作用后的CoC1／cDDP细胞，G0/G1期细胞比例增加，S期及G2/M期细胞比例减少，细胞增殖指数（PI）降低（P〈0．01）；培养液中CA125的水平下降，与PI正相关（r=0．893，P〈0．05）；并且这些变化与丙氨瑞林的浓度相关。（3）作用后亚G1期及Annexin V^＋／PI^-细胞的百分率较对照组明显升高（P〈0．01），并出现明显的凋亡细胞形态的改变；Survivin—△Ex3 mRNA表达与对照组比较无明显变化（P〉0．05），而Caspase-3 mRNA的表达上调，并随着丙氨瑞林浓度的升高而表达增加（P〈0．01），且与亚G1期及Annexin V^＋／PI^-胞的比例呈正相关（r分别为0．994及0．978，P〈0．01）。结论：丙氨瑞林能直接抑制卵巢癌细胞株CoC1／cDDP细胞的增殖，并诱导其凋亡，作用机制与丙氨瑞林上调Caspase-3 mRNA的表达有关。     

脑力苏对血管性痴呆小鼠海马细胞增殖及凋亡表达的影响

目的:探讨脑力苏胶囊对小鼠脑组织海马细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用双侧颈总动脉结扎反复脑缺血再灌注的方法制备血管性痴呆小鼠模型.模型成功建立后将其随机分为模型组、假手术组、西药喜得镇组、脑力苏高剂量组、脑力苏低剂量组,后3组为治疗组.给药15 d后进行行为学测验,并采用流式细胞术检测各组海马细胞增殖指数及凋亡率的变化...     

肝宁方含药血清对人肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的研究肝宁方含药血清对人肝星状细胞(HSC-LX2)增殖及凋亡的影响。方法40只SD大鼠随机分为4组,每组10只,空白对照组与TGF-β1组SD大鼠给予生理盐水灌胃,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组SD大鼠给予肝宁方灌胃给药(7mL·kg^-1·d^-1),连续灌胃10d后取血离心,制备干燥血清粉末备用。将HSC-LX2分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组。根据分组加入相应的20%大鼠血清对HSC-LX2进行培养造模。CCK8检测各组HSC-LX2细胞增殖率;流式细胞术检测各组HSC-LX2细胞的周期和细胞凋亡;qRT-PCR以及Western blotting分别检测各组α-SMA、Samd2、Samd3、Samd4、Samd7 mRNA及蛋白的表达。结果CCK8结果显示,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组HSC-LX2增殖受到抑制;流式细胞术结果显示,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组HSC-LX2周期停滞在G0/G1期并能促进细胞凋亡;qRT-PCR及Western blotting结果显示,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组α-SMA、Samd2、Samd3、Samd4 mRNA及蛋白的表达受到抑制,Samd7 mRNA及蛋白的表达增强。结论肝宁方具有抑制HSC-LX2增殖、促进HSC-LX2凋亡的作用,其作用与调控TGF-β1/Samd信号通路相关。     

槟榔碱对细胞增殖、凋亡和炎症反应影响的研究进展

目的与方法综合整理并介绍槟榔碱及其衍生物对细胞增殖和凋亡影响的研究历程及新进展。结果与结论槟榔碱及其衍生物通过产生亚硝胺类和活性氧族的广泛作用,对细胞多个靶点的进攻最终产生系统毒性作用,进一步抑制细胞增殖、阻断细胞周期、诱导细胞的凋亡。通过调节多种具有重要作用的细胞因子的表达,影响机体免疫功能并导致炎症反应的发生。对其结构中的某些基团进行修饰可能导致其生物学效应发生改变,为抗肿瘤新药的开发提供新的思路和途径。     

昆藻调脂胶囊对实验性高脂血症性脂肪肝大鼠肝细胞增殖的影响

目的:探讨昆藻调脂胶囊治疗高脂血症性脂肪肝的作用机制。方法:取59只大鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=11)、阳性对照组(n=10)及昆藻调脂胶囊高、中、低剂量组(n=9、9、10),除正常对照组外,其余各组采用高脂饲料及30%乙醇方法复制脂肪肝模型,同时给予相应溶剂或药物,10wk后运用流式细胞术观察各组大鼠肝细胞DNA的S期细胞比例(SPF)及增殖指数(PI)。结果:与正常对照组比较,造模后大鼠PI、SPF值明显升高(P<0.05);昆藻调脂胶囊能降低造模后大鼠PI、SPF值(P<0.05),尤其对♀大鼠的作用更为显著(P<0.01)。结论:昆藻调脂胶囊通过抑制高血脂大鼠特别是♀大鼠肝细胞的增殖而发挥抗肝纤维化作用。     

守宫硫酸多糖对肝癌SMMC-7721细胞分化和增殖的影响

目的:研究守宫硫酸多糖(Gepsin)对肝癌SMMC-7721细胞分化和增殖的影响,并进一步探讨其可能的机制。方法:将不同浓度的Gepsin加入对数生长的SMMC-7721细胞进行培养,在不同的时间利用台盼兰染色观察细胞的增殖情况。同时,收集细胞培养上清液,利用联合放免法,以溴钾酚绿法分别观察Gepsin对甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)分泌的影响;利用酶联免疫吸附试验法观察Gepsin对转化生长因子(TGF)-β1、血管内皮生长因子(VEGF)分泌的影响;利用光镜观察Gepsin对SMMC-7721细胞形态的影响。结果:随着处理组Gepsin的浓度升高,SMMC-7721细胞的增殖明显受到抑制;而对细胞活率无明显影响。Gepsin可增加培养上清中的ALB分泌量,降低AFP分泌量。光学显微镜下可见加入Gepsin后细胞的形态由圆形变为纺锤形。Gepsin对培养上清分泌的VEGF无影响,但可使TGF-β1增加。结论:Gepsin可明显抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,诱导SMMC-7721细胞分化。其机制可能是通过上调TGF-β1来诱导肝癌细胞分化实现的。