IL-35对慢性阻塞性肺疾病患者Treg/Th17平衡的影响北大核心CSCD

目的:观察IL-35在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血中的表达及其对CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg和辅助性T细胞17(Th17)的调控作用。方法:选取44例COPD患者和25例健康对照者,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),ELISA检测血浆IL-35水平,流式细胞术检测PBMC中CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg和Th17水平,计算Treg/Th17。重组人IL-35刺激COPD患者PBMC,流式细胞术检测CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg和Th17比例,ELISA检测培养上清中IL-10、IL-17和IL-22水平,RT-PCR检测FoxP3和RORγt mRNA表达。磁力分选COPD患者PBMC中的CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg,重组人IL-35刺激后与自体PBMC共培养,CCK-8检测细胞增殖。结果:与对照组相比,COPD组血浆IL-35水平降低[(108.20±12.13)pg/ml vs(133.30±22.91)pg/ml,t=5.980,P<0.000 1],CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg比例降低[(4.71±1.00)%vs(6.07±1.03)%,t=5.362,P<0.000 1],Th17比例升高[(2.97±0.72)%vs(2.28±0.61)%,t=4.060,P=0.000 1],Treg/Th17降低(1.69±0.60 vs 2.86±0.91,t=6.279,P<0.000 1)。重组人IL-35刺激后,CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg比例升高(P=0.000 2),Treg/Th17升高(P=0.015 0),而Th17比例无明显变化(P=0.391 0),培养上清中IL-10水平升高[(145.10±24.40)pg/ml vs(123.50±24.11)pg/ml,t=4.520,P<0.000 1],而IL-17和IL-22水平均无明显变化(P>0.05),FoxP3 mRNA表达显著升高(1.27±0.19 vs 0.96±0.10,t=7.600,P<0.000 1),而RORγt mRNA表达无明显变化(P=0.447 0)。重组人IL-35刺激COPD患者分选的CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg免疫抑制活性增强。结论:IL-35主要通过提高CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg比例和活性影响Treg/Th17平衡,在COPD过程中可能发挥免疫保护作用。     

补肾益气方调控TGF-β1对反复自然流产患者外周血Treg/Th17细胞平衡的影响

为探讨补肾益气方通过调控TGF-β1对反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者外周血Treg和Th17细胞平衡的影响,选取了15例RSA患者,孕42d起诊断为正常宫内妊娠后服中药,在服药前以及服药一个月后以流式细胞术检测Treg和Th17细胞数量,ELISA方法检测外周血TGF-β1及IL-10、IL-17水平。结果显示,中药治疗后RSA患者外周血Treg数量上升至(5.94±1.37)%,明显高于服药前(3.45±0.93)%(P0.05)。Th17细胞数量下降至(1.12±0.32)%,低于治疗前(2.61±0.70)%。中药治疗后,Treg/Th17细胞比值上升,从1.43±0.66升高至5.64±1.84%(P0.05)。Treg相关细胞因子IL-10水平从(17.90±4.18)pg/ml上升至(28.80±7.18)pg/ml,Th17细胞相关细胞因子IL-17则从(45.83±4.15)pg/ml下降至(31.21±5.62)pg/ml,同时发现中药治疗后血TGF-β1水平从(192.73±13.97)pg/ml上升为(334.07±61.53)pg/ml(P0.05),TGF-β1/IL-17比值从4.23±0.43提高至11.20±3.56,IL-10/IL-17比值从0.39±0.09上升至0.94±0.28(P0.05),差异有统计学意义。以上结果表明补肾益气方能够调控Treg/Th17细胞平衡,改变母体细胞因子分泌状态,保护胎儿不被排斥,其机制可能与母体TGF-β1水平上调有关。     

肝脏泡型包虫病患者外周血中调节性T细胞及IL-35的表达水平

目的探讨肝脏泡型包虫病患者外周血中调节性T细胞(Treg)及相关细胞因子白介素-35(IL-35)的表达及意义。方法采用流式细胞技术、酶联免疫吸附法(ELISA)对2017年1月至2017年9月四川省人民医院的17例肝脏泡型包虫病患者和17例健康志愿者外周血中Treg细胞和IL-35表达进行检测。结果肝脏泡型包虫病患者外周血中Treg细胞占CD4+~T细胞的比例(CD4~+CD25~+CD127~(low)/CD4~+T cells)为4.68%~10.30%(7.97%±1.47%),对照组为5.09%~9.25%(6.65%±0.99%),2组差异有统计学意义(P0.05)。肝脏泡型包虫病患者外周血IL-35水平为66.24~101.23 pg/ml(81.26 pg/ml±10.42 pg/ml),对照组IL-35为19.59~79.64 pg/ml(42.61 pg/ml±17.80 pg/ml),差异有统计学意义(P0.05)。肝脏泡型包虫病患者外周血IL-35与Treg细胞同步升高,并且呈正相关(R=0.566 7,P=0.010 1)。结论肝脏泡型包虫病患者外周血中Treg细胞和IL-35表达水平上调,两者可能与泡型包虫病的发生发展有关。     

细菌生物膜对Th17免疫细胞的刺激作用

目的:探讨细菌生物膜对感染机体Th17细胞的刺激作用。方法:将临床肺泡灌洗液标本中分离到的细菌测定其生物膜形成能力;检测健康人群和生物膜细菌感染人群以及非生物膜细菌感染人群的外周血Th17细胞表达率和IL-17细胞因子水平以及生物膜细菌感染人群的肺泡灌洗液中Th17细胞表达率和IL-17细胞因子水平,用SPSS17.0统计学软件分析上述数据的差异。结果:生物膜细菌感染人群和非生物膜细菌感染人群以及健康对照人群外周血Th17细胞表达率和IL-17细胞因子水平分别是:(0.59±0.18)%和(108.8±20.5)pg/ml、(0.58±0.18)%和(100.1±20.7)pg/ml、(0.55±0.17)%和(100.0±21.4)pg/ml,相互之间没有统计学差异,P0.05;生物膜感染人群肺泡灌洗液中Th17细胞表达率和IL-17细胞因子水平分别是(1.37±0.34)%和(157.4±30.8)pg/ml,非生物膜感染人群肺泡灌洗液中Th17细胞表达率和IL-17细胞因子水平分别是(1.11±0.21)%和(136.2±24.3)mg/ml,相互之间有统计学差异,P0.05。结论:细菌生物膜能够引起机体感染局部Th17细胞表达增高以及IL-17细胞因子升高,这可能是生物膜引起感染慢性化损伤的机制。     

肺结核患者外周血Th17/Treg的表达及其病理意义

为探讨肺结核患者外周血Th17与Treg的表达及其病理意义,收集2017年1月至2018年6月青海省第四人民医院收治的80例肺结核患者作为结核组,同期收集80例健康成人作为对照组。观察两组外周血Th17与Treg及其细胞因子的表达情况,同时分析Th17与Treg及其细胞因子与肺结核患者病情严重程度的相关性。结果显示,与对照组比较,结核组Th17降低[(2.69±0.93)%vs(1.94±0.91)%,P=0.000],Treg升高[(7.88±2.65)%vs(9.60±2.59)%,P=0.000],IL-17降低[(32.89±8.92) pg/mL vs(25.72±9.62) pg/mL,P=0.000],IL-10升高[(22.80±6.81) pg/mL vs(26.61±7.62) pg/mL,P=0.001]。肺结核患者病灶数目、直径总和与Th17、IL-17呈显著负相关(P0.05),与Treg、IL-10呈显著正相关(P0.05)。与无空洞形成的患者比较,空洞形成的患者Th17降低[(2.06±0.62)%vs(1.76±0.68)%,P=0.045],Treg升高[(8.79±2.12)%vs(10.81±2.41)%,P=0.000],IL-17和IL-10差异无统计学意义(P0.05)。提示外周血中Th17与Treg在肺结核患者中表达异常,与结核病情严重度相关。     

溃疡性结肠炎患者外周血IL-22及相关CD4+ T细胞亚群的表达

目的 通过检测溃疡性结肠炎(UC)患者外周血中IL-22及相关CD4+T细胞亚群的表达,探讨其在UC发病机制中的可能作用.方法 以我院住院治疗的35例UC患者及35例健康对照者为研究对象,应用ELISA法检测外周血血浆中IL-22的含量,采用流式细胞术检测Th1、Th17、Th22细胞亚群的比例,并分析其与疾病活动度的关系.结果 UC组患者血浆中IL-22的含量为(354.12±104.22) pg/ml,显著高于对照组(P＜0.05),其中重度患者增高明显;UC组患者外周血Th17细胞比例[(2.36±0.94)％]显著高于对照组(P＜0.05),其中,中、重度患者增高明显;UC组患者外周血Th22细胞比例[(2.27±0.87)％]显著高于对照组(P＜0.05),其中,重度患者增高明显;而UC组患者Th1细胞比例与对照组比较尤明显差异.结论 UC患者外周血中IL-22水平、Th17、Th22细胞比例明显升高,且与疾病活动度密切相关.     

白细胞介素-7调控T细胞表面TIM-3的表达在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的作用

目的观察T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域的分子-3(TIM-3)和白细胞介素(IL)-7在冠心病患者中的表达变化,以及IL-7对T细胞表面TIM-3的调控作用,为阐明炎症应答在冠心病发病中的机制提供实验依据。方法 82例冠心病患者[包括:稳定性心绞痛(SA)22例、不稳定性心绞痛(UA)39例、急性心肌梗死(AMI)21例]和20例健康志愿者入组本研究。利用流式细胞术检测T细胞表面TIM-3的水平,利用酶联免疫吸附试验检测血清IL-7的水平。应用重组人IL-7刺激外周血单个核细胞后观察T细胞表面TIM-3的变化,并应用Western blot法检测IL-7信号通路中STAT-5磷酸化和SOCS3的水平。结果 T细胞表面TIM-3表达的平均荧光强度(mean fluoresent intensity,MFI)在SA(118.7±16.50)、UA(246.8±70.62)和AMI(332.7±55.92)中均较健康志愿者(40.60±9.76)显著升高(P0.001)。CD4~+T细胞表面TIM-3的比例在SA(1.32%±0.51%)、UA(2.35%±1.66%)和AMI(5.72%±1.79%)中均较健康志愿者(0.76%±0.24%)显著升高(P0.05),CD8~+T细胞表面TIM-3的比例在SA(0.98%±0.35%)中与健康志愿者(0.77%±0.26%)无明显变化,而在UA(1.23%±0.39%)和AMI(1.64%±0.55%)中显著升高(P0.05)。血清IL-7的水平在SA(47.11 pg/ml±33.90 pg/ml)和UA(43.76 pg/ml±25.20 pg/ml)中与健康志愿者(35.17 pg/ml±13.30 pg/ml)未见明显升高,而在AMI(66.64 pg/ml±26.38 pg/ml)中显著升高(P=0.004 5)。重组人IL-7刺激可显著提升AMI患者CD4+和CD8~+T细胞表面TIM-3的表达,而仅升高健康志愿者CD8~+T细胞TIM-3的表达。同时,IL-7刺激可促进外周血单个核细胞中STAT-5的磷酸化和SOCS3的表达。结论 IL-7可升高TIM-3的表达,在冠心病中可能发挥抑制炎症应答的作用,预防疾病的进展恶化。     

Th17细胞在抗NMDAR脑炎脑脊液中的免疫调节作用

目的探讨Th17细胞在抗NMDAR脑炎脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中积累情况以及潜在的细胞分化和趋化性。方法研究招募了在2014年10月至2018年10月期间被本院确诊为抗NMDAR脑炎的患者(n=22)作为NMDAR组。选择其他非炎症性神经系统疾病和抗NMDAR抗体阴性的20例年龄和性别与NMDAR组匹配的患者作为对照组。患者入院后立即采集CSF标本,进行细胞因子/趋化因子分析。结果与对照组相比,NMDAR组患者的CSF中Th17细胞明显聚集(P0.001),并且NMDAR组患者的CD45RO、CD62L和CCR7蛋白表达水平均显著增加(均P0.001)。ELISA测定结果显示,NMDAR组患者的CSF中IL-1β、IL-6、CXCL-13和IL-17水平较对照组显著增加(P0.001)。IL-6和IL-17可促进CD4+T细胞向Th17系分化。趋化性分析表明,CCL20和CCL22在Th17细胞迁移中起着重要作用。不良预后(MRS≥2,n=9)患者的CSF中IL-17水平明显高于良好预后(MRS2,n=11)患者(140.8 pg/ml±4.6 pg/ml vs 37.3 pg/ml±1.1 pg/ml,P0.05)。对6例患者的纵向研究表明,急性期患者CSF中IL-17(99.3 pg/ml±2.1 pg/ml)的平均水平高于恢复期(49.1 pg/ml±1.2 pg/ml,P0.05)。结论抗NMDAR脑炎患者的CSF中Th17细胞明显升高,并且IL-17水平与患者对治疗的反应相关,提示Th17细胞相关的细胞因子可能是评估抗NMDAR脑炎临床结果的潜在生物标志物。     

强直性脊柱炎患者Th17细胞与CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的变化及意义

目的 探讨强直性脊柱炎( ankylosing spondylitis,AS)患者Th17和CD4+ CD25+ FoxP3+调节性T细胞比例及相关细胞因子水平的变化及意义.方法 强直性脊柱炎患者40例,正常同年龄对照37例.采用流式细胞术检测外周血Th17与调节性T细胞的比例,双抗体夹心酶联免疫吸附法( ELISA)检测血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平.结果 AS组患者外周血Th17细胞比例明显高于对照组[(1.02±0.34)％vs(0.68:±0.29)％,P＜0.05],CD+ CD25+ FoxP3+细胞比例明显低于对照组[(3.77±0.81)％ vs (4.69±1.23)％,P＜0.05].AS患者血清中IL-6、IL-23、IL-17水平明显高于对照组[ (6.15±2.71) ng/L vs(3.31±1.65) ng/L; (9.44±3.12) ng/ml vs (5.82±2.61) ng/ml;( 10.53±4.97) ng/L vs (6.78±3、26) ng/L,P均＜0.01];差异有统计学意义.与对照组相比,AS组TGF-β水平有下降的趋势[(4,76±2.15) ng/ml vs(5.16±2.02) ng/ml,P＞0.05],但差异无统计学意义.AS患者血清各细胞因子含量与临床及实验室指标无相关性.结论 强直性脊柱炎患者Th17与CD4+CD35+FoxP3+调节性T细胞比例失衡,血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平变化,这些原因可能参与强直性脊柱炎免疫发病过程.     

血清中IL-6和IL-10变化与慢性乙肝急性发作导致肝衰竭的关系

目的通过分析急性发作慢性乙型肝炎（慢性乙肝）患者体内IL-6、IL-12、γ干扰素和IL-10的变化,探讨急性发作及病情严重程度与细胞因子变化的关系。方法对154例急性发作及免疫耐受慢性乙肝患者采用ELISA法检测IL-6、IL-12、γ干扰素和IL-10的水平,同时检测肝功能、HBV DNA定量等。结果处于急性发作的患者年龄较大,HBV DNA定量较低,促炎症因子和抗炎症因子的水平均高于处于免疫耐受的患者;重型肝炎组IL-6的水平（179.80±134.96）pg/ml高于非重型肝炎组（108.80±113.23）pg/ml（P〈0.05）,而IL-10的水平（12.80±4.96）pg/ml低于非重型肝炎组（20.33±7.35）pg/ml（P〈0.05）。结论慢性乙肝急性发作可能与炎症因子的激活相关,IL-6有促进肝损伤作用,而IL-10可能在避免过强免疫损伤中起重要作用。     

IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-17A在肝癌组织中表达及其与乙肝病毒感染的关系

目的:研究Th17(IL-17A)在肝细胞癌发生发展中的作用,尤其与乙肝病毒感染的关系。方法:收集39例原发性肝细胞癌患者的癌与非癌组织,应用流式细胞微球阵列术(CBA)检测IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-17A细胞因子水平,并与患者临床资料进行统计比较分析。结果:肝癌组织中IL-2、IL-4、IFN-γ表达水平好[分别为(4.61±0.28)、(3.37±0.58)、(3.08±1.08)pg/ml]显著低于非癌组织[分别为(5.57±0.59)、(3.77±0.70)、(3.69±1.20)pg/ml],而IL-6、IL-17A水平[分别为(280.09±254.68)、(2.66±1.66)pg/ml]显著高于非癌组织[分别为(6.58±1.92)、(1.49±0.98)pg/ml],同时无论癌组织还是非癌组织,高乙肝病毒载量(>1 000 U/ml)的组织IL-17A的表达[(3.45±1.86)pg/ml]显著高于低病毒载量(<1 000U/ml)的组织[(1.97±1.16)pg/ml]。结论:Th17细胞分泌的细胞因子IL-17A在肝癌组织中高表达,IL-2、IL-4和IFN-γ可能抑制其表达,而IL-6可能促进其表达;乙肝病毒感染有可能促进Th17的表达,从而降低患者的预后。     

湖南艾滋病患者Th17和Tr细胞及IL-17在抗病毒治疗过程中的变化

目的 观察HIV感染者和AIDS患者血IL-17、CD3+CD4+IL-17+细胞(Th17细胞)和CD4+CD25+Foxp3+T细胞(Tr细胞)的平衡状态及其在1年高效抗反转录病毒治疗(HAART)中的变化.方法 选取经HAART治疗的HIV/AIDS患者33例,同时选取33例健康志愿者为对照,分别于治疗0、6、12个月采集静脉血,检测血清IL-17水平、Th17细胞及Tr细胞百分比,并对比分析其相互关系.结果 HIV/AIDS在HAART治疗前、治疗6个月、12个月及健康对照外周血的Th17细胞在CD4+T细胞中的比例分别为(1.20±0.37)%、(2.50±1.03)%、(3.70±1.56)%和(4.70±1.43)%;Tr细胞在CD4+T细胞中的比例分别为(9.16±3.33)%、(7.19±2.91)%、(5.53±1.88)%和(4.43±0.97)%;血清IL-17水平分别为(5.3±2.5) pg/ml、(7.7±2.4) pg/ml、(10.4±3.1) pg/ml和(17.7±6.6) pg/ml.Th17细胞水平与CD4+T细胞计数正相关,与病毒载量负相关;Tr细胞水平与CD4+T细胞计数负相关,与病毒载量正相关.结论 HIV感染导致IL-17、Th17细胞和Tr细胞的失平衡,而HAART治疗可能逐渐恢复二者的免疫平衡状态.提示三者可能在艾滋病发病机制中起作用,并有可能成为观察艾滋病进展和HAART治疗效果的有效指标.

Abstract：

Objective To observe the Th17, IL-17 and Tr cells equilibrium state as well as their changes of HIV infected or AIDS suffered patients in one-year HAART treatment. Methods Select 33 HIV/AIDS patients received HAART treatment while 33 healthy volunteers as controls. Flow cytometry was used to analyze Th17 and Tr cells in venous blood at the time of pre-therapy, 6th, 12th month when IL-17 levels in serum are tested by ELISA. Results The ratio of Th17 cells in CD4 cells in HIV/AIDS patients and volunteers were (1.20±0.37)%, (2.50±1.03)%, (3.70±1.56)%, (4.70±1.43)%, respectively; The ratio of Tr cells were (9.16±3.33)%, (7.19±2.91)%, (5.53±1.88)%, (4.43±0.97)%, respectively; The levels of IL-17 in serum were (5.3±2.5) pg/ml, (7.7±2.4) pg/ml, (10.4±3.1) pg/ml, (17.7±6.6) pg/ml respectively. The Th17 cells' level was positively correlative with the amount of CD4 cells, negatively correlate with the count of viral load. However, the Tr cells level is positively correlative with the count of viral load, negatively relate to the quantity of CD4 cells. Conclusion HIV could make IL-17, Th17 cells and Tr cells lost their balance, but the immune equilibrium state may gradually recover after HAART treatment. Which indicates the IL-17, Th17 cells and Treg cells may play an important role in the pathogenesis of AIDS, and they are likely to be the effective indexes to observe the progress of AIDS and the treatment effect of highly active antiretroviral therapy(HAART).     

正常人外周血中效应记忆性Th9细胞表型及与其它Th亚群之间的关系

目的探讨正常人外周血中IL-9分泌细胞的表型及Th9细胞与其他Th细胞亚群的关系。方法分离正常人外周血单个核细胞(PBMCs),在不同的刺激条件下,使用ELISA及ELISpot检测IL-9的产生情况,使用流式细胞术(FACS)分析CD3、CD4细胞中IL-9、IL-4、IFN-γ的表达情况。结果正常人外周血PBMCs在不同的刺激条件下均有IL-9的产生,在anti-CD3、anti-CD3+anti-CD28及PMA+Ionomycin的刺激下IL-9的水平分别为(21.73±10.08)pg/ml、(74.14±11.76)pg/ml、(94.76±15.36)pg/ml,各组之间差异具有统计学意义(P0.05)。外周血中CD3-IL-9+及CD3+IL-9+细胞的频率分别为0.17%±0.05%和0.70%±0.23%。在CD3+IL-9+T细胞中,Th9细胞的比例为0.51%±0.22%。正常人外周血中Th9细胞表型以效应记忆性为主(CD45RO+CD62L+CCR7-),且比例与Th2细胞呈正相关,相关系数R=0.63。结论正常人外周血中存在的IL-9分泌细胞以效应记忆性Th9细胞为主,且其比例与Th2细胞呈正相关。     

Th17/Treg及其相关细胞因子在结肠癌中的表达并与肿瘤分期的相关性

研究结肠癌患者肿瘤组织中Th17细胞、Treg细胞及患者外周血中相关细胞因子的表达水平,探讨其表达与肿瘤分期的相关性及可能机制。运用流式细胞分析(FACS)技术检测30例结肠癌肿瘤组织及癌旁正常组织中Th17细胞及Treg细胞的比例;采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测20例结肠癌患者外周血中Th17、Treg相关细胞因子IL-23和IL-10的表达水平。结果显示结肠癌肿瘤组织中Th17细胞和Treg细胞的比例明显高于癌旁正常组织(P<0.05),进展期肿瘤组织中Treg细胞的比例高于早期(P<0.05),而Th17细胞的比例较早期无明显差异(P>0.05),进展期肿瘤组织中Th17/Treg细胞的比例比早期偏低(P<0.05)。结肠癌患者外周血中IL-23、IL-10的mRNA水平升高,与健康对照组差异明显(P<0.05),且进展期与早期结肠癌IL-10mRNA的表达水平差异显著(P<0.05),而IL-23mRNA在两组间无明显差异(P>0.05)。随着结肠癌病程的进展,肿瘤组织内Th17细胞及Treg细胞的比例逐渐升高,且Treg细胞比Th17细胞升高更加明显。相关细胞因子IL-23和IL-10在患者外周血中的变化趋势和Th17、Treg细胞在肿瘤组织中的变化趋势相一致,提示Th17、Treg细胞在结肠癌的表达可能与肿瘤免疫微环境中相关的细胞因子调节有关。     

强直性脊柱炎患者外周血中Th17细胞水平研究

目的建立流式细胞术检测外周血Th17的方法,并探讨强直性脊柱炎患者外周血Th17变化的意义。方法采用四色流式细胞术检测16例AS患者(AS组)和16例健康志愿者(对照组)外周血Th17细胞比例。结果用流式细胞仪结合不同荧光素标记的CD3、CD8、CD45和IL-17A单克隆抗体可准确检测外周血中Th17细胞的数量。对照组中Th17的检测结果分别为(1.58±1.09)%;AS患者组中分别为(3.06±2.24)%,AS患者外周血中Th17细胞显著高于对照组(P=0.004)。结论患者外周血中Th17细胞数量与对照组比较显著升高,该种细胞可能参与了AS的发生和发展。     

Th17/Treg相关因子在哮喘小鼠中的表达变化及其意义

目的检测哮喘模型小鼠辅助性T17细胞(Th17)和调节性T细胞(Treg)相关细胞因子及受体的表达变化,探讨Th17/Treg在哮喘发病机制中的作用。方法 20只清洁级BALB/C雌鼠,鼠龄6周,体质量18~20 g。随机分为对照组和哮喘组,每组10只。哮喘组小鼠腹腔注射卵白蛋白(OVA)与氢氧化铝的氯化钠混悬液3次后,给予雾化的OVA激发,建立哮喘小鼠模型。对照组给予等量的0.9%氯化钠溶液。末次激发后24 h处死小鼠,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类计数;酶联免疫吸附分析(ELISA)、实时定量聚合酶链反应(Q-PCR)和Western blot法测定小鼠外周血和肺组织中的Th17/Treg细胞相关因子及受体的表达水平。结果哮喘组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性细胞比例、中性粒细胞比例、淋巴细胞比例显著高于对照组。哮喘组外周血和肺组织中白细胞介素(IL)-17和IL-18高于对照组[IL-17(124.36±2.14)pg/mL、(21.70±1.02)pg/mL vs(25.98±5.23)pg/mL、(19.95±3.21)pg/mL;IL-18(227.06±24.14)pg/mL、(413.97±32.01)pg/mL vs(120.38±10.32)pg/mL、(238.21±15.33)pg/mL],IL-10和转化生长因子β(TGF-β)低于对照组[IL-10(60.42±24.12)pg/mL、(65.14±15.11)pg/mL vs(61.07±14.36)pg/mL、(104.36±28.16)pg/mL;TGF-β(38.72±12.12)pg/mL、(58.65±24.21)pg/mL vs(30.19±10.16)pg/mL、(121.06±39.12)pg/mL];哮喘组维甲酸相关孤儿素受体γt(RORγt)水平高于对照组[(8.77±2.35)、(4.46±1.05)vs(3.03±1.02)、(3.45±1.25)],肺叉头蛋白3(FoxP3)水平低于对照组[(5.15±1.84)vs(12.35±3.21)];并且外周血和肺组织中相关细胞因子及受体的表达差异具有显著统计学意义(P0.01)。结论 Th17/Treg及其主要相关因子在哮喘的发病中具有重要作用。     

慢性乙型肝炎患者核苷(酸)类似物治疗前后外周血中Treg和Th17细胞及其相关细胞因子水平的变化

目的 观察慢性乙型肝炎(CHB)患者应用核苷(酸)类似物(NA)抗病毒治疗前后外周血中Treg、Th17细胞及其相关细胞因子水平的变化.方法 采用流式细胞术,检测44例NA治疗12周的CHB患者外周血Treg(CD4+ CD25high CD127low)和Th17(CD3+ CD8-IL-17+)细胞频率.ELISA检测血清IL-10、TGF-β1、IL-17及IL-23水平.各组间采用Mann-Whitney U检验,治疗前后采用Wilcoxon配对T检验.结果 完全应答的14例患者的Treg细胞频率、IL-10、TGF-β1和IL-23水平及Treg/Th17比率较治疗前明显下降(Z=-2.691,-2.417,-2.237,-2.291,-2.291,P均＜0.05),Th17细胞频率及IL-17水平略有增加.部分应答的11例患者的Treg细胞频率、IL-10、TGF-β1和IL-23水平较治疗前明显下降(Z=-1.988,-2.934,-2.756,-2.803,P均＜0.05),Th17细胞频率及IL-17水平略有增加,Treg/Th 17比率略有下降.无应答的15例患者的Treg和Th17细胞频率、IL-10、TGF-β1、IL-23、IL-17水平及Treg/Th17比率较治疗无明显变化.HBV DNA下降≥2 log拷贝/ml及ALT恢复正常时,Treg细胞频率与细胞因子IL-10、TGF-β1和IL-23水平较治疗前明显下降(P均＜0.05).Treg细胞频率与HBV DNA及ALT水平三者之间具有一定的相关性.结论 NA抗病毒治疗前后,CHB患者Treg和Th17细胞频率及IL-10、TGF-β1、IL-23、IL-17水平均发生变化;治疗后获得满意应答的CHB患者Treg细胞频率、IL-10、TGF-β1、IL-23水平及Treg/Th17比率明显下降,Th17细胞及IL-17水平继续上升;且以上变化与病毒学应答及生化学应答有关.     

口腔鳞癌患者外周血髓源性抑制细胞和Th17细胞数量及IL-17水平增加北大核心CSCD

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者外周血髓源性抑制细胞(MDSC)、白细胞介素17(IL-17)水平、Th17细胞数量及其相关性。方法募集34例OSCC患者(Ⅰ、Ⅱ期OSCC患者18例、Ⅲ、Ⅳ期OSCC患者16例)和健康自愿者16例。分别采集其空腹静脉血,流式细胞术检测外周血MDSC、Th17细胞比例,ELISA检测血清IL-17水平。结果与健康志愿者相比,OSCC患者外周血MDSC、Th17细胞比例增加,IL-17水平升高。中晚期(Ⅲ、Ⅳ期)OSCC患者MDSC、Th17细胞数量、IL-17水平均较早期(Ⅰ、Ⅱ期)OSCC患者增加。MDSC数量与IL-17水平存在相关性,而MDSC数量与Th17细胞数量无相关性。结论OSCC患者外周血MDSC、Th17细胞增加,IL-17水平升高,MDSC与IL-17可能存在相互调节作用,IL-17的主要来源并非Th17细胞,而可能来自其他固有免疫细胞。     

慢性乙肝患者树突状细胞对Th1/Th2分化的影响

探讨慢性乙肝患者树突状细胞(dendritic cells,DC)对CD4+Th细胞亚群分化的影响。分离慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMC),以rhIL-4(50 ng/ml)、rhGM-CSF(10 ng/ml)和rhTNF-α(100 u/ml)诱导培养DC。以流式细胞仪检测DC表面CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子表达情况。MTT法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞亚群,PMA+Ionomycin刺激后胞内荧光染色,流式细胞仪检测辅助性T细胞(helper T cell,Th)内特征性细胞因子IFN-γ/IL-4以判断Th1/Th2分化。ELISA法检测DC或Th细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量。结果:慢性乙肝患者的DC表达CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子水平明显低于正常人(P<0.01);培养至第7天,慢性乙肝患者DC分泌的IL-12水平低于正常人(P<0.01),而分泌的IL-6水平增高(P<0.05)。与正常人相比,慢性乙肝患者外周血中Th1细胞占CD4+T细胞的百分比较低(P<0.01),其Th细胞培养上清中IFN-γ的量也较低(P<0.01)。患者DC与同种异体的健康人Th细胞共培养,刺激Th1型细胞因子IFN-γ产生的能力低于正常人(P<0.01)。慢性乙肝患者体内DC功能的异常可能导致了外周血Th1细胞分化不足。     

口腔鳞癌患者外周血髓源性抑制细胞和Th17细胞数量及IL-17水平增加

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者外周血髓源性抑制细胞(MDSC)、白细胞介素17(IL-17)水平、Th17细胞数量及其相关性。方法募集34例OSCC患者(Ⅰ、Ⅱ期OSCC患者18例、Ⅲ、Ⅳ期OSCC患者16例)和健康自愿者16例。分别采集其空腹静脉血,流式细胞术检测外周血MDSC、Th17细胞比例,ELISA检测血清IL-17水平。结果与健康志愿者相比,OSCC患者外周血MDSC、Th17细胞比例增加,IL-17水平升高。中晚期(Ⅲ、Ⅳ期)OSCC患者MDSC、Th17细胞数量、IL-17水平均较早期(Ⅰ、Ⅱ期)OSCC患者增加。MDSC数量与IL-17水平存在相关性,而MDSC数量与Th17细胞数量无相关性。结论OSCC患者外周血MDSC、Th17细胞增加,IL-17水平升高,MDSC与IL-17可能存在相互调节作用,IL-17的主要来源并非Th17细胞,而可能来自其他固有免疫细胞。