活化血小板对类风湿关节炎滑膜炎症和增生影响的实验研究

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜慢性炎症病变为主的自身免疫性疾病[1]。RA软骨和关节破坏的主要原因是成纤维样滑膜细胞的类肿瘤样增生、新生血管翳侵蚀、过量分泌的炎性细胞因子及基质金属蛋白酶(matrix metallo-proteinases,MMP)[2-4]。临床观察发现不少活动期甚至部分缓解期的RA患者血小板升高,血液黏稠度增加;而伴有血小板升高的RA患者往往治疗效果较差,病情易反复发作,同时出现血栓性疾病的风险也     

超活化血小板裂解液对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞影响的实验研究

目的 探讨超活化血小板裂解液(sPL)对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的影响。方法 选取哈尔滨医科大学附属第一医院2018年1月—2019年3月6例类风湿关节炎患者作为研究对象,其中男3例、女3例,年龄26～49岁、中位年龄33岁,受累关节功能分级均为Ⅱ级。收集患者静脉血标本,先进行两次离心分离获得富血小板血浆(PRP);再加入0.08 mmol/L CaCl₂, 37 ℃孵育激活血小板;然后经过冷冻、融化、离心、过滤除菌、去除纤维蛋白原,获得sPL。培养RA-FLS,分为对照组和2.5%、5%、10% sPL组,分别与含有0、2.5%、5%、10% sPL的培养液培养48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β的浓度;细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定各组细胞增殖活性;流式细胞术测定各组细胞的凋亡率;体外小管生成实验检测各组细胞血管生成能力;Transwell实验检测各组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法测定各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2 (VEGFR2)的表达情况。结果 (1)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组细胞培养基中IL-6浓度分别为(80.18±11.67)、(59.94±9.50)、(46.60±8.04)、(60.67±9.24)pg/mL,TNF-α浓度分别为(70.75±9.14)、(54.56±7.81)、(43.27±6.30)、(53.99±8.60)pg/mL,IL-1β浓度分别为(64.18±9.90)、(46.97±8.79)、(36.28±7.44)、(47.66±8.15)pg/mL,组间比较差异均有统计学意义(F=12.186、11.934、10.709,P值均＜0.01);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组炎症因子表达水平低于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(2)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS增殖率分别为87.33%±10.98%、76.17%±8.18%、60.83%±7.99%、75.83%±8.45%,细胞凋亡率分别为6.51%±1.16%、16.23%±2.75%、29.69%±3.80%、16.37%±2.29%,小管形成数分别为(41.00±7.55)、(26.67±4.16)、(11.67±3.51)、(26.00±6.56)个,迁移细胞数目分别为(443.00±54.06)、(282.33±31.66)、(154.64±23.18)、(292.00±35.03)个,侵袭细胞数目分别为(243.30±27.39)、(67.00±12.53)、(22.33±8.74)、(79.33±14.98)个,组间比较差异均有统计学意义(F=8.795、38.095、34.278、29.352、94.772, P值均<0.05);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组RA-FLS细胞增殖率、血管管腔形成数量、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均低于对照组,细胞凋亡率均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组中细胞增殖率、小管形成数、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显低于2.5% sPL组和10% sPL组,细胞凋亡率则高于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(3)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS PCNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.01);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于对照组,Bax蛋白相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于2.5% sPL组和10% sPL组,而Bax蛋白相对表达量则高于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。结论 sPL对RA-FLS的增殖、迁移、侵袭、血管生成以及炎症因子的产生具有抑制作用,对RA-FLS凋亡具有促进作用,且SPL对RA-FLS的生长抑制效果与SPL浓度有关。     

血小板生成素对体外人血小板活化的影响

目的: 研究血小板生成素(TPO)及其他造血生长因子在体外对人血小板活化的影响。方法:应用荧光标记单克隆抗体和流式细胞技术。结果:终浓度120 ng/mL的TPO在体外能直接诱导人血小板活化,活化率为8.89%~39.92%,中位数17.43%,40 ng/mL的较低浓度TPO及100 ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-3(IL-3)对血小板活化无影响。结论:TPO对血小板功能有促进作用,较高浓度的TPO可直接诱导血小板活化。     

血藤乌头汤对类风湿关节炎病情活动及血小板的影响

目的 观察鸡血藤乌头汤对类风湿关节炎活动病情及期血小板的影响.方法 治疗组与对照组均给予非甾体类抗炎药与慢作用药(DMARDs),治疗组同时给予中药鸡血藤乌头汤水煎服;通过观察观察临床症状和体征及实验室指标的变化.结果 加用鸡血藤乌头汤疗后患者病情活动明显改善,包括握力、关节疼痛、步行等肢体活动明显改善,对类风湿因子、血沉、C反应蛋白、血小板有良好的改善作用.结论 鸡血藤乌头汤可改善关节炎活动期的病情,降低患者活动期血小板计数.     

血小板生成素及血小板生成素Ⅱ对人血小板活化的影响

目的:检测血小板生成素(TPO)及TPOⅡ在体外对人血小板活化的影响。方法:取正常健康成人富血小板血浆,分别与血小板生成素(rhTPO)、TPOⅡ及磷酸盐溶液孵化,通过荧光单克隆抗体标记血小板表面CD62P及CD41分子,用流式细胞术测定CD62P/CD41比率,观察各组血小板活化率。结果:rhTPO、TPOⅡ组血小板活化率与PBS组无明显差异,P＞0.05。结论:血小板生成素不会导致血小板异常活化,可应用于血小板生成减少的各种情况。     

γ射线照射对血小板活化的影响

目的:探讨γ射线照射对单采血小板保存过程中血小板活化的影响.方法:用细胞分离机单采血小板20人份,以27Gyy射线照射,标准条件下保存5天,间隔取样分别用RIA,ELISA方法检测血小板表面P-选择素(P-Selectin)、血浆中可溶性P-选择素(sP-Selectin)及β-血小板球蛋白(β-TG)含量.结果:在保存3d,5d后,照射组及对照组中血小板表面P-Selectin含量、血浆中sP-Selectin及β-TG含量与保存前比较差异显著(P＜0.05),但是两组间比较无统计学差异(P＞0.05),结论:γ射线照射不会促进血小板的活化.     

不同剂量紫外线照射对血小板活化的影响

探讨经不同剂量Ｂ波段紫外线（ＵＶＢ）照射后对浓缩血小板在保存过程中血小板活化的影响。用ＰＲＰ法制备浓缩血小板,采用１ Ｊ／ｃｍ ２、１．５ Ｊ／ｃｍ ２、２ Ｊ／ｃｍ ２ＵＶＢ进行照射,常规保存５ 天,间隔取样分别用ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ 方法检测血小板表面及血浆中Ｐ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ 的含量。结果表明：１ Ｊ／ｃｍ ２、１．５ Ｊ／ｃｍ ２ＵＶＢ照射组与对照组一样,于保存３ 天后,血小板表面Ｐ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ 分子数及血浆中Ｐ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ 浓度明显升高（Ｐ＜ ０．０５）,在保存５ 天后含量进一步升高,差异更为明显（Ｐ＜ ０．００１）。２ Ｊ／ｃｍ ２ＵＶＢ照射组于保存１ 天后血小板表面Ｐ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ 分子数及血浆中Ｐ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ 浓度即明为升高（Ｐ＜ ０．０５）,在保存３ 天后,差异更为显著（Ｐ＜ ０．００１）。上述结果提示：以小于２ Ｊ／ｃｍ ２ ＵＶＢ照射在５ 天的保存期内不会引起明显的血小板活化,而大于２ Ｊ／ｃｍ ２ ＵＶＢ照射会促进血小板的活化,不利于血小板的保存     

SDF-1对类风湿关节炎的影响作用研究

在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)进展中,血管新生是病理发展的一个重要标志,而基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor 1, SDF-1)及其相关信号通路被认为是抑制RA血管新生的潜在靶点。SDF-1亦参与了RA中滑膜炎症、骨及软骨损伤等病理过程,在RA病程中发挥着重要作用。现将近年来关于SDF-1对RA影响作用的相关研究作一综述。     

雷公藤及其提取物对类风湿关节炎免疫调节机制的研究进展

类风湿关节炎是一种以侵蚀性关节炎为主要表现的慢性全身性的自身免疫性疾病。目前病因尚不明确。我国传统中药雷公藤对类风湿关节炎有较好的疗效,一直是研究热点。本文综述近年来国内外以雷公藤及其提取物治疗类风湿关节炎的机制,并阐述研究现状。     

Pam3CSK4对血小板活化及其TLR2表达的影响

Objective To investgate role of TLR2 in the activation, the innate immune and inflammation of human platelets. Methods Human washed platelets were separated from healthy people(n=5) and were stimulated with different concentrations(1μg/ml, 5μg/ml, 10μg/ml) of TLR2 agonistPam3CSK4(a synthetic bacterial lipoproteins). Then the platelet aggregation rate, the expression of CD62p and TLR2 on the platelet surface were measured. Results The platelet aggregation rate were (28.32±5.67)%, (52.56±8.54)% and (76.24±11.23)%, respectively, at concentration of 1μg/ml, 5μg/mland 10μg/ml of Pam3CSK4, more than (12.83±2.43)% at 0μg/ml of it. In addition, the expression of CD62p were (18.45±2.66)%, (22.45±2.04)%, (29.53±4.08)%, respectively at above concentration of Pam3 CSK4, more than (11.20±1.67)% of CD62p at control group(P<0.01). The expression of TLR2 was not significantly increased at a lower concentration of Pam3CSK4(1μg/ml) with (16.85±6.10)% compared with(10.81±3.99)% at the control group. However, it were (21.15±9.90)% and (22.52±9.26)%, respectively, at a higher concentration(5μg/ml, 10μg/ml)more than(10.81±3.99)% at the control group(P<0.05). Conclusion Pam3CSK4 induce aggregation, activation and the up-regulation of TLR2 of platelet by stimulating TLR2 receptor of it. Thereafter, TLR2 play an important role in the innate immune of platelet.     

Pam3CSK4对血小板活化及其TLR2表达的影响

Objective To investgate role of TLR2 in the activation, the innate immune and inflammation of human platelets. Methods Human washed platelets were separated from healthy people(n=5) and were stimulated with different concentrations(1μg/ml, 5μg/ml, 10μg/ml) of TLR2 agonistPam3CSK4(a synthetic bacterial lipoproteins). Then the platelet aggregation rate, the expression of CD62p and TLR2 on the platelet surface were measured. Results The platelet aggregation rate were (28.32±5.67)%, (52.56±8.54)% and (76.24±11.23)%, respectively, at concentration of 1μg/ml, 5μg/mland 10μg/ml of Pam3CSK4, more than (12.83±2.43)% at 0μg/ml of it. In addition, the expression of CD62p were (18.45±2.66)%, (22.45±2.04)%, (29.53±4.08)%, respectively at above concentration of Pam3 CSK4, more than (11.20±1.67)% of CD62p at control group(P<0.01). The expression of TLR2 was not significantly increased at a lower concentration of Pam3CSK4(1μg/ml) with (16.85±6.10)% compared with(10.81±3.99)% at the control group. However, it were (21.15±9.90)% and (22.52±9.26)%, respectively, at a higher concentration(5μg/ml, 10μg/ml)more than(10.81±3.99)% at the control group(P<0.05). Conclusion Pam3CSK4 induce aggregation, activation and the up-regulation of TLR2 of platelet by stimulating TLR2 receptor of it. Thereafter, TLR2 play an important role in the innate immune of platelet.     

Pam3CSK4对血小板活化及其TLR2表达的影响

目的 探讨Toll样受体2(TLR2)在血小板激活及免疫方面的作用.方法 取健康人(n=5)全血6 ml,以密度梯度离心法制备洗涤血小板.用1、5、10μg/ml的TLR2激动剂Pam3CSK4(一种合成的细菌脂蛋白)刺激人洗涤血小板,然后测定血小板聚集率,血小板表面蛋白CD62p和TLR2表达的变化.结果 Pam3CSK4以浓度0、1、5和10μg/ml激活血小板:聚集率增加分别为(12.83±2.43)%、(28.32±5.67)%、(52.56±8.54)%、(76.24±11.23)%,P<0.01;血小板表面CD62p表达量增加分别为(11.20±1.67)%、(18.45±2.66)%、(22.45±2.04)%、(29.53±4.08)%,P<0.01.Pam3CSK4在1μg/ml时TLR2表达为(16.85±6.10)%,与对照组(10.81±3.99)%相比差异无统计学意义(P>0.05),在5 μg/ml、10μg/ml时TLR2表达量分别为(21.15±9.90)%和(22.52±9.26)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 细菌脂蛋白Pam3CSK4通过激活TLR2引起血小板聚集、活化,是血小板参与抑制革兰阳性细菌感染的免疫应答机制之一.     

TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MAPKs通路的活化

研究ＩＮＦ－α在类风湿关节炎（Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）成纤维样滑膜细胞（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅ，ＦＬＳ）信号转中ＭＡＰＫｓ激活情况。方法：原代培养类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞：应用Ｗｅｓｔｅｎｂｌｏｔ检测ＴＮＦ－α短时间内引起ＲＡＦＬＳ蛋白质酷氨酸磷酸化状态变化，及其对ＭＡＰＫｓ家族成员活化的浓度效应和时间相特点。结果：ＩＮＦ－α可以瞬时引起     

辛伐他汀对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞分泌趋化因子的影响及其机制

目的: 研究降脂药辛伐他汀(SMV)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌趋化因子的影响及其机制研究。方法: FLS分离自活动性RA患者滑膜组织;小分子GTP酶RhoA活性检测采用pull-down 方法;趋化因子水平采用ELISA检测;细胞活性检测采用MTT法。结果: 辛伐他汀(1 μmol/L)显著抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的白细胞介素-8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白(MCP-1)分泌,对RhoA活化也有显著的抑制作用;辛伐他汀的上述抑制作用可被甲羟戊酸(MEVA)和焦磷酸香叶基香叶酯(GGPP)逆转。RhoA抑制剂C3转移酶对TNF-α诱导的IL-8、MCP-1等趋化因子分泌亦有显著的抑制作用。结论: 辛伐他汀通过调节RhoA活性对TNF-α诱导的趋化因子分泌发挥抑制作用,提示抑制趋化因子分泌可能是辛伐他汀有效治疗RA的机制之一。     

通心络对新西兰兔动脉粥样硬化血小板活化的影响

目的:探讨通心络对动脉粥样硬化新西兰兔血小板的保护作用。方法:SPF级新西兰家兔42只,雌雄各半,随机分为7组:正常组,模型组,通心络超微粉低、中、高剂量组(0.15、0.3和0.6 g·kg~(-1)·d~(-1)),阿托伐他汀组(2.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)),阿司匹林组(12.5 mg·kg~(-1)·d~(-1))。正常组给予普通饲料12周,模型组给予高脂饮食12周建立动脉粥样硬化模型,其余各组在给予高脂饲料的同时按剂量连续灌胃给药12周,饮水不限。末次给药后禁食12 h取材。取全血进行血常规检测,取血清、血浆分别进行血脂水平、血小板因子4(PF4)和可溶性CD62P(s CD62P)检测,流式细胞术检测血小板钙离子,电镜观察血小板超微结构,光镜下进行动脉粥样组织病理学观察。结果:与正常组比较,模型组新西兰兔血小板计数及血小板平均体积明显增加,血脂胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著增高,血清PF4、sCD62P及血小板钙离子浓度表达明显增加(P0.05)。与模型组相比,各用药组均不同程度地降低血小板计数和血小板平均体积,血小板表达PF4、sCD62P水平及血小板内钙离子浓度明显降低,通心络低、中、高剂量组和阿托伐他汀组降低血清TC、TG和LDL-C水平(P0.05);电镜观察见正常组血小板形态规则,细胞器分布均匀,模型组血小板形态畸形,伪足明显,α颗粒及致密颗粒减少,胞浆内空泡增多,提示血小板活化状态,用药组均不同程度改善血小板形态,增加α颗粒及致密颗粒数量,胞质损伤减轻。组织病理学观察正常组内膜光滑完整,模型组内膜显著增厚,泡沫细胞大量聚集,斑块形成,用药组通心络高剂量组内膜增厚显著降低,泡沫细胞明显减少,斑块形成不明显,其它用药组均不同程度改善内膜增厚,降低泡沫细胞含量。结论:通心络可显著抑制动脉粥样硬化过程中血小板的活化状态,对于延缓动脉粥样硬化血栓形成具有重要临床治疗价值。     

一氧化氮对家兔冠状动脉阻塞后血小板活化的影响

将３０只兔分为３组，Ｉ组行左冠状动脉前降支假扎，Ⅱ组及Ⅲ组行ＬＡＤ线线缝扎３０ｍｉｎ后再灌注４ｈ。Ⅲ组于ＬＡＤ结扎后静滴硝酸甘油，Ⅰ，Ⅱ组静滴生理盐水。３组均观察手术前后各时点血浆一氧化氮，血小板表面α颗粒膜蛋白，血栓素Ｂ２浓度。结果显示，Ⅰ组手术前后血浆ＮＯ，ＧＭＰ－１４０，ＴＸＢ２浓度无变化，Ⅱ，Ⅲ组在心肌缺血及再灌注后ＮＯ浓度降低，ＧＭＰ－１４０和ＴＸＢ２浓度升高，Ⅱ组上述变化更为显著。     

活血化瘀法对血小板活化状态影响的研究概况

正常情况下血小板以分散状态在血管内运行,处于静息状态,在血栓与止血中起着重要作用;当血管损伤、血流改变或受到化学物质刺激时血小板被活化而发生一系列改变.血小板活化在动脉粥样硬化性疾病的发病过程中起着重要作用.长期以来人们一直认为,血小板活化主要发生在动脉粥样硬化的后期阶段,斑块破裂导致血栓形成,随后引发一系列急性或慢性的临床事件.     

激光对类风湿关节炎作用的研究

本文研究了激光对类风湿关节炎的作用，利用激光的生物效应，结合中医针炙方法，用不同强度的激光，刺激相关穴位，对生物场和皮肤神经末梢直接起作用，其方法是用810nm，连续输出方式，350-400mW的激光，照射各靶穴位3分钟，再用脉冲的方式输入800mW，通断时间2－6秒点击靶穴，由此激发机体神经－内分泌－免疫系统，提高机体免疫功能，改变细胞膜通透性，增强组织的新陈代谢，消除肿胀，松驰肌肉，起到消炎止痛作用，大功率激光切割作用强，相当于针的穴位打孔，小功率激光烧灼强，相当于针的“淬”，通过强弱激光巧妙联合应用，达到良好的治疗效果。