大鼠杏仁核电刺激癫痫模型海马JNK的磷酸化改变

目的 研究大鼠杏仁核电点燃癫痫模型海马中JNK的磷酸化改变,探讨JNK磷酸化与癫痫发生发展的关系.方法 建立大鼠杏仁核电点燃癫痫模型.设立空白对照组、手术对照组、点燃组,癫痫点燃成功后取脑,分别采用Western blot和免疫荧光方法 检测海马中JNK的表达变化,采用TUNEL染色和GFAP免疫组化染色观察海马形态学改变.结果 36只大鼠在12-20 d成功点燃.Western blot显示点燃组磷酸化JNK水平较手术对照组和空白对照组高(P<0.05).形态学检测显示点燃组海马区神经元缺失及神经胶质细胞增生(P<0.05).结论 电刺激诱发大鼠癫痫发作后,海马组织JNK磷酸化水平升高,该信号通路的激活可能参与颞叶内侧癫痫海马硬化的发生过程.     

托吡酯对颞叶癫痫大鼠海马神经细胞粘附分子表达的影响

目的观察托吡酯对红藻氨酸(KA)诱导颞叶癫痫大鼠海马突触重建标记物神经细胞粘附分子(NCAM)表达的影响,进一步探讨托吡酯的抗痫作用机制。方法采用免疫组织化学染色观察KA诱导癫痫大鼠及托吡酯给药大鼠海马神经细胞粘附分子表达水平,并对两组NCAM表达进行比较。结果KA组NCAM表达水平各时间点平均NCAM阳性密度OD率均明显高于N S组和KA TPM组(P<0.01)。结论本研究提示托吡酯可能通过抑制突触重建的形成,减少痫性放电,从而控制癫痫发作。     

PTPRT在难治性癫痫患者及匹罗卡品致痫大鼠脑组织中的表达

目的 研究难治性癫痫患者及皮罗卡品致痫大鼠脑组织中PTPRT的表达,以探讨难治性癫痫可能的发病机制.方法 用免疫组织化学、免疫荧光、Western blot法检测PTPRT在难治性癫痫患者及癫痫发作后6h及1、7、14、30、60 d的匹罗卡品致痫大鼠脑组织中的表达,并分别与无癫痫发作的人以及大鼠的脑组织比较.结果 在人颞叶皮质中,PTPRT主要在对照组和病例组的神经元有表达,PTPRT在难治性癫痫患者(0.277 ±0.048)脑组织中比对照组(0.171±0.025)显著升高(t=9.586,P＜0.05).在大鼠颞叶脑组织中,对照组和实验组的PTPRT主要在神经元中表达.PTPRT在实验组颞叶中的表达与对照组相比,在癫痫发作后24 h内不断升高,7d和14 d后表达水平则下降,30 d和60 d后表达又升高(A比值:对照组0.443±0.039,6 h 0.840±0.032,24 h 1.113 ±0.064,7d 0.564±0.039,14 d 0.570±0.029,30 d 0.899±0.034,60 d 1.011±0.074,F=256.427,P＜0.05).结论 通过对PTPRT在癫痫动物模型和癫痫患者颞叶脑组织表达规律的研究,结合PTPRT的功能我们推测PTPRT可能通过突触重构以及苔藓纤维出芽参与了神经网络的重构,从而导致了难治性癫痫的发生.     

匹罗卡品致痫诱发大鼠齿状回颗粒细胞GAP-43 mRNA表达

目的 研究边缘系统癫痫发作后海马颗粒细胞生长相关蛋白（GAP-43）基因表达变化。方法 建立匹罗卡品急、慢性癫痫模型,用原位杂交方法定量检测不同时间点海马颗粒细胞GAP-43mRNA表达。结果 对照组颗粒细胞几乎不表达GAP-43mRNA,匹罗卡品致病后6～12h颗粒细胞表达GAP-43mRNA增高,15～30d呈现第2次高峰。结论 成年大脑海马颗粒细胞在致痫后发生可塑性变化,GAP-43mRNA表达是癫痫大鼠大脑结构性重组（颗粒细胞苔藓纤维出芽）的重要分子机制。     

腺苷A1受体对杏仁核点燃癫痫大鼠海马神经元损伤作用机制

目的 探讨腺苷A1受体活性对点燃癫痫大鼠海马神经元损伤的作用.方法 选择84只SPF级雄性Wistar大鼠,根据随机数字表法将动物分为正常组、致痫组、致痫+腺苷A1 R拮抗剂(8-环戊-1,3-二丙基黄嘌呤,DPCPX)组、致痫+腺苷A1 R激动剂(2-氯化腺苷,2-CADO)组,每组21只.致痫组、致痫+DPCPX组、致痫+2-CADO组采用电刺激点燃癫痫模型.正常组未进行手术和电刺激致痫等处理;致痫组癫痫模型建立成功前后未注射任何药物;致痫+DPCPX组大鼠癫痫模型建立成功前1 h和成功后1 h尾部静脉注射0.3 mg/kg DPCPX;致痫+2-CADO组大鼠癫痫模型成功前1 h和成功后1 h尾部静脉注射0.6 mg/kg 2-CADO.采用苏木精-伊红染色法和TUNEL神经元凋亡测定法观察各组在癫痫模型建立成功后1 d、15 d、30 d时的海马CA3区组织学病理变化及神经元凋亡指数(AI)变化情况.结果 致痫组、致痫+DPCPX组、致痫+2-CADO组动物在点燃癫痫后1 d、15 d、30 d均出现不同程度的神经元细胞排列松散无规则,轮廓模糊,边缘欠清晰,胞核萎缩,胞浆空泡等神经元结构损害;相同时间点,致痫+DPCPX组的神经元结构损害程度较致痫组加重,致痫+2-CADO组较致痫组减轻.正常组在不同时间点的AI变化不明显(P>0.05),致痫组、致痫+DPCPX组、致痫+2-CADO组的AI随着癫痫发作时间的延长,AI逐渐增加(P<0.05);在相同时间点,致痫组、致痫+DPCPX组、致痫+2-CADO组的AI均明显高于正常组(P<0.05),致痫+DPCPX组的AI均明显高于致痫组(P<0.05);致痫+2-CADO组的AI明显低于致痫组和致痫+DPCPX组(P<0.05).结论 癫痫发作会引起神经元损伤和凋亡,其可能与腺苷A1 R活性降低,兴奋性氨基酸谷氨酸浓度增加有关,谷氨酸兴奋性增加可诱导神经元凋亡,这可能是癫痫发作后神经元损伤的机制之一.     

TLR9、MyD88在颞叶癫痫大鼠海马组织中表达的动态变化

目的观察氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠各期海马中Toll-样受体9(TLR9)、髓样分化因子(MyD88)表达的变化,探讨其是否与颞叶癫痫发生有关。方法 SD雄性大鼠120只,随机分为对照组(30只)和模型组(90只),腹腔注射氯化锂。18 h~20 h后模型组腹腔注射匹罗卡品诱导癫痫持续状态(SE);对照组予等量生理盐水取代匹罗卡品腹腔注射。对照组和造模成功的模型组依据腹腔注射后时间随机分为10个亚组:急性模型组(SE后3 h、6 h、9 h、12 h、1 d、3 d、7 d);潜伏模型组(SE后14 d、28 d);慢自发发作组(SE后56 d)。每亚组动物模型组9只,对照组3只。免疫组化、蛋白印迹、RT-PCR技术测定各亚组癫痫大鼠海马内TLR9、MyD88的表达。结果TLR9、MyD88在模型组海马内表达明显增多,与对照组相比,差异有显著性(P0.05)。模型亚组内,TLR9、MyD88在急性期和慢性期表达明显增高,而潜伏期无明显表达变化。其中急性期内的增高多集中在癫痫发作后6 h;3组比较差异有显著性(P0.05)。结论大鼠海马内TLR9、MyD88表达增多可能与颞叶癫痫发病有关,探讨其机制可能为颞叶癫痫的治疗提供新的靶点。     

颞叶癫痫脑电图分析及病灶超微结构观察

目的 研究影像学检查无异常的颞叶癫痫患者,电生理异常与皮层棘波灶及海马超微病变的关系.方法 选择经CT或MRI检查未见异常的颞叶癫痫患者7例,术前做脑电图或24h视频脑电监测,术中在脑电监测下取颞叶大脑皮质棘波灶和海马组织,做电镜观察.结果 7例患者电生理检查均可见典型痫样放电.颞叶皮质痫灶和海马可见不同程度的神经元固缩,胶质细胞变性,胶质增生,突触数量及突触结构改变,血脑屏障破坏等改变.结论 影像学无异常的颞叶癫痫患者颞叶皮层痫灶和海马超微结构病理变化明显,特别是突触的变化,是导致癫痫患者脑电生理机能异常及癫痫反复自发性发作的形态学基础.     

锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态大鼠海马CA1，CA3和PG区P糖蛋白的动态表达

【背景】药物抗性癫痫的病理生理机制目前还不清楚。现有的证据提示P糖蛋白可能参与了药物抗性癫痫的形成。【目的】观察锂-匹罗卡品诱导的大鼠慢性颞叶内侧癫痫模型中海马不同分区P糖蛋白是否出现过度表达,并进而探讨其表达与癫痫发作频度是否相关。【方法】选择6-8周雌性SD大鼠,予锂-匹罗卡品诱导大鼠形成颞叶内侧癫痫慢性模型,对大鼠进行行为学观察及视频脑电记录;Western-Blot、实时定量RT-PCR及免疫组化方法分别检测P糖蛋白在处理组、假处理组、空白对照组中不同时间点（1d及60d）海马不同分区（CA1、CA3及DG）的表达情况。【结果】87.5％（35/40）的大鼠在锂-匹罗卡品诱导的急性期出现惊厥持续状态,伴有与临床癫痫全身发作类似的脑电变化;慢性期出现自主发作,发作间期脑电记录可见到痫性放电;与对照组相比,模型鼠急性期及慢性期在海马CA1、CA3及DG区均出现P糖蛋白的过度表达,增加约70％以上(p<0.05);应用免疫组化染色发现P糖蛋白阳性显色定位于锥体细胞层神经元上。【结论】在慢性颞叶内侧癫痫模型中急性期及慢性期海马锥体细胞层神经元均出现P糖蛋白的过度表达,并证实P糖蛋白的过度表达可能与痫性发作密切相关,但非发现其表达程度与发作频度相关。     

应用脑深部电极准确定位颞叶癫痫致痫灶

目的 探讨脑深部电极准确定位颞叶癫痫致痫灶的临床价值。方法 28例疑似颞叶癫痫病人,均实施脑深部电极植入术,均以颞叶内侧为靶点,对重点怀疑致痫灶侧,分别经额叶、颞叶外侧及顶枕叶最多植入3枚电极,对侧依情况植入1～2枚,疑似双颞叶癫痫者最多植入6枚。结果 27例病人明确了致痫灶的具体部位并实施相应手术治疗,其中颞叶内侧型癫痫19例,颞叶外侧型癫痫5例,颞叶外器质性病变导致癫痫发作3例。CT/MRI显示器质性病变9例,其中1例为非致痫性病变。术后癫痫发作总消失率为62.96%(17/27),其中立体定向海马杏仁复合体毁损术5例,海马横切术3例,前颞叶切除术5例,单纯器质性病变切除术4例。结论 准确应用脑深部电极,可达到颞叶癫痫致痫灶的准确定位效果并减少手术创伤,保护脑组织功能,对于颞叶外器质性病变导致的癫痫发作也有定位价值。     

氯硝西泮预处理对癫痫大鼠海马区γ-氨基丁酸A受体γ2亚单位表达的影响

目的 探讨氯硝西泮预处理对癫痫大鼠海马区γ-氨基丁酸A受体γ2亚单位(GABAARγ2)表达的影响.方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、癫痫组和氯硝西泮预处理组;癫痫组再分为6h、12 h、1 d、3d、7d、15 d和30 d7个亚组;药物预处理组再分为假预处理组、预处理6h、12h和ld亚组.药物预处理组给予氯硝西泮6 mg/(kg·d)分2次灌胃,连续5d;然后癫痫组和预处理组通过向大鼠海马C3区注射海人酸建立颞叶癫痫模型;采用免疫组化法在相应时点检测各组大鼠海马区GABAARγ2的表达.结果 与假手术组比较,癫痫组CA1区癫痫发作ld后、CA3区癫痫发作后各时间点GABAARγ2表达明显下降(P＜0.05 ～0.01).与癫痫组相应亚组比较,预处理6h、12 h亚组海马CA3区及预处理ld亚组海马CA1区及CA3区GABAARγ2的表达明显增高(P＜0.05～0.01).结论 氯硝西泮预处理可上调癫痫大鼠海马区GABAARγ2的表达.     

托吡酯对纠正癫痫神经递质异常的可行性研究

目的研究托吡酯对纠正癫痫神经递质异常的可行性,为今后治疗癫痫寻找新的指导方向。方法将大鼠随机分为空白对照组(注射生理盐水)、戊四氮组(戊四氮诱导)与观察组(戊四氮诱导+托吡酯治疗),每组20只。记录大鼠惊厥的情况。采用免疫组织化学法对大鼠的神经递质〔γ-氨基丁酸(GABA)与谷氨酸(Glu)〕变化进行记录,同时检测大鼠大脑皮质与海马区的神经递质(GABA和Glu)含量。结果采用戊四氮对大鼠进行痫性诱导后,戊四氮组大鼠出现明显的痫性症状,相比空白对照组和观察组差异具有统计学意义(P0.01)。观察组大鼠在神经递质变化、大脑皮质和海马区(GABA和Glu)含量调节上与戊四氮组相比较,差异具有统计学意义(P0.01);与空白对照组相比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论托吡酯对癫痫出现的神经递质异常具有明显的纠正作用,其通过改善大脑GABA与Glu的调节平衡,减少反复同步放电对大脑造成的损伤。     

小电导钙激活型钾通道SK3在大鼠偏头痛模型中脑干的表达变化

目的初步探讨小电导钙激活型钾通道SK3与大鼠偏头痛的关系,为研究偏头痛的发病机制,寻找新治疗靶点提供实验依据。方法 40只成年雌性SD大鼠随机分为对照组8只,模型组16只,干预组16只,后两组再随机分为发作期组和间歇期组,每组8只。按Tassorelli Cristina法复制偏头痛大鼠模型。对照组用生理盐水造模。干预组每天灌服氟桂利嗪2 ml(0.5 mg/kg),对照组每天灌服生理盐水2 ml。发作期组于第5次造模后3 h、间歇期组于第5次造模后4 d断头处死取脑干组织。RT-PCR法及Western法分别检测各组脑干SK3 mRNA及其蛋白的表达。结果模型组、干预组脑干SK3 mRNA及其蛋白的表达水平均较对照组下降(P0.05),且各发作期组均较相应间歇期组更低(P0.05);而模型发作期组与干预发作期组、模型间歇期组与干预间歇期组比较SK3 mRNA及其蛋白的表达水平无明显差异(P0.05)。结论脑干SK3表达的降低可能与偏头痛的发生发展有关;氟桂利嗪防治偏头痛可能不是通过影响脑干SK3的表达量实现的。     

高容量血液滤过对重型颅脑损伤患者颅内压的影响

目的观察重型颅脑损伤患者应用高容量血液滤过(HVHF)对其颅内压(ICP)及预后的影响。方法选取90例GCS评分3~8分的颅脑损伤患者按照治疗方法不同分为治疗组60例与对照组30例,对照组给予常规治疗措施,治疗组在此基础上给予HVHF,连续治疗2周后评价患者ICP变化及预后。结果治疗组3 d、7 d及14 d时颅内压均明显低于对照组(P0.05),3 d、7 d及14 d时血清IL-6、TNF-α值均明显低于同期对照组(P0.05),术后并发症及死亡率均明显低于对照组(P0.05),具有统计学意义。结论重型颅脑损伤患者术后应用HVHF治疗可显著降低颅内压增高曲线,改善患者预后。     

血管性认知功能障碍与雄激素受体基因启动子区甲基化状态、同型半胱氨酸水平的相关性研究

目的检测血管性认知功能障碍(VCI)患者的雄激素受体(AR)基因启动子区Cp G岛甲基化状态和同型半胱氨酸(HCY)水平,从分子水平探讨VCI与AR基因启动子高甲基化、HCY的关系。方法采用病例对照研究方法,选取脑卒中慢性期的VCI患者46例组成病例组,随机选取年龄相同的健康人92例组成对照组。MSP法和RT-PCR法检测研究对象AR启动子区Cp G岛的甲基化状态及mRNA表达水平,采用酶转换免疫法检测HCY水平。结果 VCI患者中甲基化率为71.74%,对照组患者中甲基化率为19.57%,病例组与对照组甲基化率相比较,差异有统计学意义(P0.05)。VCI组患者较对照组患者AR基因mRNA表达缺失5.24倍,两组患者AR基因mRNA表达缺失率比较,差异有统计学意义(P0.05)。病例组HCY水平为14.73±5.31,对照组为7.12±4.19,病例组显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。AR基因启动子区甲基化程度与HCY相关系数为r=0.534,差异具有统计学意义(P0.05);随HCY水平升高,病例组甲基化程度亦递次升高。结论 AR基因启动子区高甲基化与VCI发病相关;高HCY水平与AR基因启动子区高甲基化相关。     

丁苯酞软胶囊治疗基底动脉尖综合征的疗效观察

目的 观察丁苯酞软胶囊治疗轻、中度基底动脉尖综合征的临床疗效.方法 将60例轻、中度基底尖动脉综合征患者随机分为治疗组和对照组,每组各30例.对照组予以常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用丁基苯酞软胶囊口服,疗程为14d.采用NIHSS评分与BI评分评价治疗前,治疗后第7天和第14天两组的神经功能与日常生活能力.结果 治疗后两组的NIHSS评分显著降低,BI评分显著增高(P＜0.05).治疗组在治疗后第7天和第14天的NIHSS评分明显低于治疗前及对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05);在治疗后第7天和第14天的BI评分则明显高于治疗前及对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 丁苯酞软胶囊治疗轻度中度基底动脉尖综合征具有较好的临床疗效.     

唤醒麻醉结合皮层电刺激下切除皮层语言区病变21例临床分析

目的探讨唤醒麻醉结合皮层电刺激开颅手术切除语言功能区病变的价值。方法回顾性分析21例唤醒麻醉结合皮层下电刺激开颅手术术前准备、术中过程、术后康复等临床资料,所有病变均位于或紧邻语言功能区,病人均实施唤醒麻醉,术中先用双极电刺激器确定语言功能区,在确定的语言功能区外1cm,最大范围切除病变。结果病变全切17例(80.95%),次全切4例(19.05%)。术后短期运动性失语1例(4.76%),术中癫痫1例(4.76%),术后颅内血肿1例(4.76%)。远期复发2例,均为胶质瘤次全切除病人(9.52%),余患者恢复良好。结论唤醒开颅结合皮层电刺激手术可最大范围切除语言功能区病变,保护患者言语功能。     

失眠模型大鼠脑干γ-氨基丁酸转运体-1表达的变化

目的 检测失眠模型大鼠脑干组织中γ-氨基丁酸转运体-1(GAT-1) mRNA及GAT-1蛋白的表达变化.方法 36只SD大鼠随机分为失眠模型组、生理盐水对照组和地西泮干预组.腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)制作大鼠失眠模型.采用RT-PCR法和Western blot法分别检测大鼠脑干组织中GAT-1 mRNA和GAT-1蛋白的表达变化.结果 与对照组相比,模型组和干预组GAT-1 mRNA及GAT-1蛋白的表达均降低(P＜0.01),干预组较模型组表达更低(P＜0.01).结论脑干GAT-1表达下调可能与失眠后机体的保护性机制有关;地西泮下调GAT-1可能是其发挥催眠作用的机制之一.     

血糖与急性缺血性脑卒中患者预后相关性分析

目的探讨血糖对急性缺血性脑卒中患者预后的影响。方法选择急性缺血性脑卒中患者240例,依照血糖水平将患者分为血糖正常组和高血糖组,在治疗第15、30 d及3个月对两组患者神经功能缺损和预后分别采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)和改良Rankin量表(MRS)进行评价。结果两组患者神经功能缺损比较在治疗第15天差异无统计学意义(P0.05),第30天及第3个月高血糖组的神经功能缺损明显高于血糖正常组,差异有统计学意义(P0.05)。结论高血糖是加重急性缺血性脑卒中患者神经功能缺损,影响患者预后的因素之一,调控好血糖对预后有十分重要的意义。     

普拉克索治疗帕金森病运动并发症的临床疗效观察

目的 评估普拉克索治疗帕金森病运动并发症的临床疗效及安全性.方法 收集92例晚期帕金森病患者并随机分为治疗组和对照组,每组46例.对照组给予多巴丝肼治疗,治疗组在对照组的基础上给予普拉克索,疗程均为12周.两组患者于治疗前后分时间点进行统一帕金森病评定量表修正(UPDRSⅣ-)的评分、不良反应的记录,疗程结束后评估疗效.结果 治疗后对照组和治疗组UPDRSⅣ-评分与基线比较均有下降,治疗组下降更显著,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).治疗组第12周剂末现象(93.75％vs 70.59％)、开关现象(91.67％ vs 63.64％)以及异动症(84.62％ vs48.00％)的总有效率优于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).两组不良反应发生率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 普拉克索治疗帕金森病运动并发症有效,安全性好.     

过氧化氢干预下Rab30在PC12细胞中的表达及促凋亡通路

目的探讨经过氧化氢(H_2O_2)损伤干预下Rab30在PC12细胞中的表达及可能的促凋亡通路。方法将体外常规培养的PC12细胞分为正常组和H_2O_2组。采用MTT检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western-blot检测Rab30、JNK3、GM130、Caspase-3的蛋白表达情况。结果 H_2O_2损伤干预可导致PC12细胞的存活率显著降低(P0.05),早期凋亡率和总凋亡率均显著增高(均P0.05);JNK3、Caspase-3蛋白表达水平在PC12细胞中显著增加(P0.05),而Rab30、GM130蛋白表达显著下降(P0.05)。结论 H_2O_2在PC12细胞中的促凋亡通路可能是H_2O_2激活JNK3的表达而靶向下调Rab30,致使高尔基体结构破碎,并激活Caspase-3的活性,从而诱导PC12细胞的凋亡。