胃癌细胞血管生成拟态的形态学及机制研究

目的:血管生成拟态(Vasculogenic mimicry,VM)是近年来发现的一种全新的肿瘤微循环模式.本研究通过体外三维培养的方式对胃癌细胞血管生成拟态进行形态学的研究,并探讨其可能的分子机制.方法:体外三维培养SGC-7901细胞,观察其是否可以形成血管生成拟态.免疫细胞化法检测参与血管生成拟态形成的胃癌细胞中MMP-2与MT1-MMP的表达水平.观察PI3K信号通路抑制剂对MMP-2和MT1-MMP的表达水平及对胃癌细胞血管生成拟态的影响.结果:胃癌细胞SGC-7901在体外三维培养条件下能够形成血管生成拟态.参与血管生成拟态的癌细胞中MMP-2与MT1-MMP高表达.PI3K信号通路抑制剂能够抑制MMP-2与MT1-MMP的表达,导致SGC-7901细胞血管生成拟态的能力明显降低.结论:体外三维培养时胃癌细胞SGC-7901具有形成血管生成拟态的能力.PI3K信号通路的抑制剂可以抑制胃癌血管生成拟态的形成,其机制之一可能是通过抑制MMP-2与MT1-MMP的表达.     

从胆囊癌的一种新血供方式--血管生成拟态看胆囊癌诊疗观点改变

从胆囊癌的一种新的血液供应方式——血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）论述胆囊癌诊疗观点的改变。1994.1—2000.12同济医院确诊的74例原发性胆囊癌标本及其临床病理学和人口统计学资料;H＆E染色＋CD31/PAS双重染色（Envision法）,胆囊癌VM（＋）/（-）临床参数单/多因素、Cox模型风险和Kaplan-Meier生存分析＋log-rank检验。细胞、动物实验：胆囊癌GBC-SD、SGC-996细胞二/三维培养,侵袭力、迁移力、VM形成测定和倒置光显微镜、透射/扫描电镜VM形态学观察以及动态磁共振荷瘤鼠胆囊癌移植瘤血流动力学检测。信号通道研究：胆囊癌细胞三维培养和裸鼠移植瘤VM组织切片的免疫组化、免疫荧光、Western blotting、QRT-PCR检测,以探讨相关信号通道。13.5%（10/74）胆囊癌存VM,其中4.3%（13/306）管腔内含红细胞,即胆囊癌VM是高倍光学显微镜下由胆囊癌细胞围成管腔、内衬癌细胞而非血管内皮细胞、有圈PAS阳性界膜分隔、腔内含红细胞的管道结构;VM（＋）胆囊癌腺癌居多,有较高的血行转移机会;VM是影响胆囊癌患者预后的独立危险因素,有VM存在胆囊癌患者生存期短,预后差。体外胆囊癌GBC-SD细胞三维培养、荷瘤鼠胆囊癌石蜡切片经H＆E染色和CD31/PAS双重染色,光/电镜观察,85.7%存在VM,其VM结构与临床结果一致;MRI增强扫描提示,荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤中心或瘤体周围存在VM血供而不致出现肿瘤坏死而呈现MRI强化信号。发现胆囊癌存在VM-相关PI3-K/MMPs/Ln-5γ2和EphA2/FAK/Paxillin信号通路。高侵袭胆囊癌存在VM这一特殊生物学特性。因高侵袭胆囊癌VM不能被常规病理学检测,故建议对临床恶性程度高、易血行转移、预后差胆囊癌,常规开展胆囊癌标本CD31/PAS双重染色检查。对胆囊癌根治术后复发、辅助化疗＋抗血管生成靶向疗效差者,应考虑存在VM,采取?     

miR-182在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的:检测miR-182在胆囊癌中的表达,探讨其影响胆囊癌细胞增殖、侵袭的可能机制。方法:实时荧光定量PCR检测miR-182、p38在10例胆囊癌组织、癌旁组织中的表达情况;应用miR-182mimics转染胆囊癌细胞GBC-SD,应用p38 MAPK信号通路特异性阻滞剂SB203580处理转染miR-182mimics的GBC-SD细胞,通过MTT实验、细胞周期检测、Transwell小室检测miR-182对GBC-SD细胞增殖、侵袭能力的影响。结果:胆囊癌组织中miR-182、p38的表达高于癌旁组织;miR-182mimics转染GBC-SD细胞后,p38的表达水平随之升高(P<0.05),细胞增殖能力增强,细胞迁移数增多(75±8),S期细胞比例增多[(68.81±7.57)%];应用SB203580处理转染miR-182的GBC-SD细胞,细胞增殖能力降低,细胞迁移数减少(23±5),S期细胞比例减少[(34.49±7.05)%]。结论:miR-182在胆囊癌组织中高表达,通过上调p38 MAPK信号通路增强胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力,参与了胆囊癌的发生发展过程。     

人重组TRAIL对胆囊癌细胞生长的影响

目的探讨人重组肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(recombinant human tumor necrosis factor relat-ed apoptosis inducing ligand,rhTRAIL)对胆囊癌细胞株SGC-996的作用。方法用Western-blot法检测胆囊癌细胞株中TRAIL死亡受体DR4、DR5和Fas相关死亡结构域(fas-associated death domain,FADD)的表达状况,生长曲线、相差显微镜和流式细胞仪观测rhTRAIL作用于胆囊癌细胞株后的细胞生长状况。结果胆囊癌细胞株SGC-996中,有死亡受体DR4、DR5和Fas相关死亡结构域(FADD)的表达,rhTRAIL作用胆囊癌细胞后,细胞生长受到抑制,作用前后细胞Casepase-3/7活性明显升高,流式细胞仪检测表明rhTRAIL治疗组和对照组细胞的凋亡差异明显(P<0.05)。结论rhTRAIL在体外对胆囊癌细胞株SGC-996有明显抑制作用,可能成为治疗胆囊癌的新途径。     

siRNA沉默CD44表达对人胆囊癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨siRNA沉默CD44表达对人胆囊癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法利用RNA干扰技术在人胆囊癌细胞株EH-GB1和GBC-SD中敲低CD44的表达;通过CCK8实验检测si-NC和si-CD44对人胆囊癌细胞株EH-GB1和GBC-SD增殖能力的影响;通过Transwell迁移实验检测其对迁移能力的影响;通过Transwell侵袭实验检测其对侵袭能力的影响。结果转染si-CD44对胆囊癌细胞GBC-SD和EH-GB1的增殖能力无明显影响（P＞0.05）,但能明显抑制胆囊癌细胞的迁移能力[si-NC组穿膜细胞数在人胆囊癌细胞株EH-GB1、GBC-SD分别为（193.7±3.９）、（193.7±7.８）个,明显大于si-CD44组的（88.7±5.8）、（110.3±5.５）个（t=15.12、10.42,均P＜0.05）]和侵袭能力[（si-NC组穿膜细胞数在人胆囊癌细胞株EH-GB1、GBC-SD分别为（175.3±7.5）、（188.0±9.0）个,明显大于si-CD44组的（85.3±3.7）、（73.0±3.6）个（t=10.74、11.84,均P＜0.05）]。结论CD44能够促进胆囊癌细胞的侵袭、迁移能力,可能作为胆囊癌治疗的生物靶点。     

miR-3662在胆囊癌组织中的表达及对胆囊癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-3662在胆囊癌组织中的表达及对胆囊癌细胞增殖的影响。方法选取30对人胆囊癌组织及其癌旁组织标本;将GBC-SD和SGC-996细胞分为miR-3662组和miR-NC组,其中miR-3662组细胞转染miR-3662,miR-NC细胞转染miR-NC;将8只裸鼠随机分为实验组和阴性对照组,每组4只,其中实验组裸鼠接种miR-3662组细胞,阴性对照组裸鼠接种miR-NC组细胞。采用qRT-PCR法检测miR-3662在30对人胆囊癌组织及癌旁组织中的相对表达量;采用CCK-8法检测转染细胞的吸光度（A）值、平板克隆形成实验观察细胞集落形成数、制取裸鼠皮下移植瘤检测瘤体质量。结果miR-3662在人胆囊癌组织中的相对表达量明显低于癌旁组织（P＜0.05）;miR-3662组GBC-SD和SGC-996的miR-3662的相对表达量较miR-NC组均明显上调（均P＜0.05）;加入CCK-8后第5天时,与miR-NC组相比,miR-3662组细胞A450值明显为小（P＜0.05）;miR-3662组GBC-SD和SGC-996的集落形成数较miR-NC组均明显减少（均P＜0.05）;实验组的裸鼠皮下移植瘤体质量较阴性对照组明显减少（P＜0.05）。结论miR-3662在人胆囊癌组织中低表达,能够抑制人胆囊癌细胞的增殖能力,可能作为胆囊癌治疗的新靶点。     

LncRNA DILC在胆囊癌中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）DILC在胆囊癌中的表达及意义。方法用实时荧光定量PCR法检测80例胆囊癌组织标本（胆囊癌组）和30例慢性胆囊炎组织标本（对照组）中胆囊癌细胞GBC-SD和人胆囊上皮细胞HGBEC中DILC基因表达水平。以DILC表达量的中位数为截断值,将胆囊癌患者分为高表达组和低表达组,并比较这2组临床病理特征。建立Cox比例风险模型分析影响生存预后的因素。通过转染DILC siRNA下调GBC-SD细胞中DILC的表达,用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果胆囊癌组DILC相对表达量明显高于对照组（P<0.05）。GBC-SD细胞DILC相对表达量明显高于HGBEC细胞（P<0.05）。高表达组T分期为T3—T4期、TNM分期为Ⅲ—Ⅳ期的占比明显高于低表达组（P<0.05）。T分期（T3—T4）、淋巴结转移、TNM分期（Ⅲ—Ⅳ）、DILC高表达是胆囊癌患者不良预后（生存时间）的独立危险因素（P<0.05）。转染DILC siRNA后,GBC-SD细胞侵袭和迁移能力明显下降（P<0.001）。结论 DILC在胆囊癌组织中高表达,并且与肿瘤分期和生存预后有关。DILC可以促进胆囊癌细胞侵袭和迁移。     

膜型基质金属蛋白酶-1表达对肝细胞癌血管生成拟态形成的影响

目的 研究膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP）表达对肝细胞癌血管生成拟态（VM）形成的影响及机制。方法 构建靶向MT1-MMP的RNA干扰质粒载体,转染肝癌细胞系Bel7402,实时定量PCR及Western blot检测干扰效果;在体外三维细胞培养体系中观察其对VM管状结构形成的影响;Transell侵袭小室实验检测细胞侵袭能力。结果 靶向抑制MT1-MMP的表达下调肿瘤细胞侵袭能力,影响肝癌细胞在三维细胞培养体系中VM管状结构的形成。结论 MT1-MMP表达影响肝细胞癌VM的形成,可能成为肝细胞癌抗血管生成治疗的新靶点。     

靶向c-myc基因小RNA干扰对胆囊癌细胞侵袭运动的影响

目的 研究c-myc基因在胆囊癌侵袭和转移中的作用及其机制。方法 采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测亲代和高转移胆囊癌细胞系中c-myc基因表达,设计靶向c-myc的干扰性小RNA(siRNA)转染高转移的胆囊癌细胞,体外Transwell实验研究c-myc siRNA对胆囊癌高转移细胞迁移和侵袭能力的影响。通过蛋白质印迹法检测转染c-myc siRNA后c-myc下游部分信号通路的变化。结果 高转移细胞中c-myc基因表达高于亲代细胞,转染c-myc siRNA后,c-myc的表达在转录和翻译水平均降低。同时GBC-SD/M3细胞的转移和侵袭能力受到抑制。对c-myc下游信号通路的检测发现LIN28的表达下调。结论 c-myc在高转移的胆囊癌细胞中表达上调;通过siRNA下调其表达后可以抑制胆囊癌细胞的转移和侵袭,这种抑制作用可能与LIN28的下调有关。     

胸腺肽对胆囊癌细胞侵袭能力的抑制作用

目的研究胸腺肽（Ta1）对人胆囊癌细胞株（GBC-SD）侵袭能力的影响。方法培养GBC-SD,将其分为对照组、不同浓度的Ta1给药组（100、200、400μg/m1）。经细胞侵袭实验观察Ta1对GBC-SD细胞侵袭能力的影响;MMPs明胶酶谱分析检测细胞MMP-2、MMP-9的蛋白表达变化。结果与对照组比较,随着Ta1给药浓度的升高,各组癌细胞的侵袭能力呈浓度依赖性下降,各组间的差异有统计学意义（P〈0.05）。Ta1不同浓度组胆囊癌细胞MMP-9蛋白表达较对照组明显下降,且随着Ta1浓度的升高,MMP-9蛋白表达逐渐下降。而Ta1对MMP-2蛋白的表达无明显影响。结论 Ta1对GBC-SD侵袭能力具有抑制作用,且随Ta1浓度的升高,GBC-SD侵袭能力逐渐下降,其机制之一可能是降低了胆囊癌细胞MMP-9的蛋白质表达。     

2005年广西流动人口疟疾监测结果分析

目的了解广西流动人员疟疾流行现状,进而提出针对性防治措施。方法收集全区网络直报疫情资料和各级疾病预防控制机构疟疾监测数据进行分析。结果2005年广西流动人口发热病人平均疟原虫阳性率为0·33%。80·62%的病人为本地居民外出到疟疾流行区务工感染所致。以从事护林/砍伐比例最高,占44·19%。结论加强返乡流动人口疟疾监测是巩固广西疟疾防治的关键所在。     

2004年邹城市中小型饮食行业餐具消毒效果调查

为确保消费的饮食安全，更好地了解饮食业餐具消毒效果卫生状况，从而为进一步加强监督管理提供依据，于2004年4～7月对邹城市所属中小型饮食业进行餐具消毒效果检测，共检测876份，现将结果报告如下。     

2007～2009年铜陵市人民医院产科抗生素应用分析

目的了解产科抗生素的应用情况并评价其合理性以加强临床使用的管理。方法随机抽查铜陵市人民医院2007～2009年产科出院患者病历中的抗生素使用情况,进行回顾性的调查统计分析。结果抗生素使用率达67%,头孢类药物是主要种类,以单独用药情况最多;多数品种DUI接近1。结论该院产科抗生素使用基本合理,但尚须建立有效的监管制度,控制过度使用。     

2005年汕头市登革热定点监测结果分析

目的 通过定点监测为汕头市登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法收集监测点的登革热疫情、人群抗体水平和媒介伊蚊等监测资料，用EPI2002软件统计分析。结果2005年汕头市无登革热疫情，抗登革热病毒IgG、IgM阳性率低，伊蚊幼虫孳生密度高峰在6、8、9、10月份，低谷在4、7、11月份，孳生情况随着月平均降水量、平均气温变化而变化；孳生场所以农村、暂时性容器为主。结论汕头市有登革热流行的自然、社会环境条件，人群普遍对登革热易感，8～10月是发动爱国卫生运动，清除伊蚊孳生地，预防、控制登革热流行的适当时机。     

广东高州市2005年医疗机构消毒质量监测分析

目的评价辖区内医疗机构消毒灭菌质量，督促各医疗单位提高消毒灭菌效果，防止医源性感染的发生。方法对辖区内的医疗单位已消毒或灭菌的用品进行抽样检测，将检测结果进行统计学分析。结果这次采集使用中消毒液、无菌器械、物体表面、手术室空气和医务人员手共3556份，检测达卫生标准2955份，符合率为83、10％，不同样品检测达卫生标准百分率依次为97．37％、95．56％、86．25％、75．41％和62、49％。结论高州市医疗机构消毒灭菌质量用卫生指标评价，卫生站的符合卫生标准率低于医院，手术室空气和医务人员手的监测合格率低于使用中消毒液和无菌器械。     

2004年海南省医疗机构消毒效果监测分析

目的 了解海南省医疗机构消毒工作质量，以防止医院感染。方法按《医院消毒技术规范》中《医院消毒与灭菌的效果监测》方法对医疗机构各科室的紫外线灯、高压蒸汽灭菌器、医护人员手、物体表面、使用中消毒液、室内空气的消毒效果进行监测。结果紫外线灯合格率为91．07％高压蒸汽灭菌器合格率为95．98％物体表面及医护人员手细菌总数合格率为84．78％，室内空气细菌总数合格率为66．4％，使用中消毒液细菌总数合格率为95．07％。结论医院消毒质量合格率与各级医护人员认真落实工作的制度化、规范化、标准化有密切关系，应加强乡镇级卫生院和个体诊所的监测工作，提高消毒质量。     

儋州市2005年餐具消毒状况分析

为了防止经餐具引起疾病的传播，引起人们对餐具传播疾病的重视，了解《食品卫生法》颁布发几年以来，餐饮餐具的消毒状况，儋州市于2005年对239家大中型宾馆酒店、中小型排档、个体饮食店进行抽查分析。     

惠州市车间空气中有毒物检测结果分析

目的 了解惠州市电子、五金、电镀等企业生产车间中有毒物污染情况，以便提出有效的预防措施。方法根据中华人民共和国国家标准中气相色谱法、原子吸收分光光度法、分光光度法对车间空气中有毒物质进行检测。结果2003～2004年共检测车间空气样品3625份，舍格3511份，总合格率为96．8％。其中锰尘舍格率最低，为82．2％；其次是三氯乙烯91．0％，氰化氢93．4％，甲苯97．1％，硫酸97．2％，铅烟98．2％，正己烷99．2％。苯99．3％，二甲苯99．6％，其他合格率为100％。结论惠州市部分电子、五金、电镀企业车间空气中有毒物的浓度较高，应改善生产车间的通风设施，做好工人的个人防护。     

2005年广东省碘缺乏病监测结果分析

目的进一步了解广东省消除碘缺乏病工作的进展情况,为落实 2010年实现消除碘缺乏病措施修订提供依据. 方法根据卫生部办公厅下发的《关于开展全国第五次碘缺乏病监测的通知》要求进行监测. 结果居民户合格碘盐食用率为75.0%,非碘盐率20.1%;8～10岁儿童甲状腺肿大率为5.3%;尿碘中位数为140μg/L,《20μg/L的比例为1.7%;8～10岁儿童智商平均为101.1. 结论广东沿海及珠江三角洲部分地区非碘盐冲销问题依然存在,碘缺乏病病情也未出现明显回升,非碘盐冲销严重地区学生的碘营养水平未达到消除碘缺乏病的标准,2010年实现全省消除碘缺乏病的目标十分艰巨.     

2009年海南省农村生活饮用水监测报告

目的了解海南省农村生活饮用水卫生状况,为提高农村水质提供科学依据。方法每个监测点一年分枯水期和丰水期各检测1次,每次采集出厂水、末梢水水样各一份。按现行《生活饮用水卫生标准》（GB/T5749-2006）进行评价。结果地面水58.90%比地下水33.20%合格率高;枯水期39.18%比丰水期25.95%合格率高,监测项目合格率最低的是总大肠菌群47.7%,菌落总数86.60%,不同处理方式水厂的监测结果 ,完全处理水厂合格率65.66%比未处理水厂合格率26.12%高。结论海南省农村饮用水微生物超标严重,农民饮用的绝大多数是未消毒处理的水,饮用水卫生安全隐患多。