斑点分子杂交检测HPV感染与宫颈癌的关系

采用ＤＮＡ－ＤＮＡ分子杂交技术，对经病理组织学确诊的慢性宫颈炎，宫颈癌和正常宫颈的宫颈活检组织中ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８型ＤＮＡ进行同源序列检测，结果表明ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８型ＤＮＡ的检出率在正常宫颈均为０；在慢性宫颈炎分别为１６．０９％，１２．６４％，１１．４９％，３．４５％；在宫颈癌组分别为３．９６％，１．９８％，４６．５３％，７．９２％。在宫颈癌组     

乳头瘤病毒16型E6,P53,RB,PCNA在宫颈癌中的表达状态及相关性

应用核酸原位杂交和免疫组织化学技术，检测人子宫颈癌中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ６ＯＲＦ与抑癌基因产物Ｐ５３，ＲＢ和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）。在４４例宫颈癌石蜡切片中，原位杂交检测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ阳性２７例（６１．３６％），其中免疫组化检测出Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ阳性分别为８例（２９．６３％），１４例（５２．８５％）、２０例（７４．０７％），而在１７例ＨＰＶ１６Ｅ６阴性标本中Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ阳性分别为７例（４１．１７％），９例（５２．９４％）、１２例（７０．５８％）。而在５例正常宫颈组织中未测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ，ＰＣＮＡ只在宫颈组织上皮基底层细胞中表达。统计学分析表明，ＨＰＶ１６Ｅ６与宫颈癌密切相关（Ｐ＜０．０５），ＰＣＮＡ在宫颈癌与正常宫颈组织中有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。未能发现宫颈癌组织中ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ与Ｐ５３蛋白相关性（Ｐ＞０．０５）。     

多重聚合酶链反应在人乳头瘤病毒检测和分型中的应用

采用多重聚合酶反庆技术，在一个反应中同时加入３对人乳头瘤病毒型特异性引物，１次可完成３个型别ＨＰＶＤＮＡ扩增。其结果显示，在有ＨＰＶ感染的样品中，ＨＰＶ１６占７２．７％，ＨＰＶ１８占１６．４％，其他型占１０．９％，从正常宫颈上皮细胞到宫颈癌变细胞，ＨＰＶ１６ＤＮＡ检出率随病变程度的加重而增加（８．８％－２２．２％－６０．％），反了宫颈癌与ＨＰＶ１６感染关系密切；在正常宫颈和良性病变宫颈上皮细胞中未     

我国人乳头瘤病毒58例感染与宫颈癌的关系

人乳头瘤病毒中，第５８型是很重要的高度致瘤性病毒之一。采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹技术对我国１４省区１２１６例宫颈癌及癌前病变组织进行人乳头状瘤病毒５８例检测。结果：（１）各类宫颈组织中，宫颈癌组ＨＰＶ５８型检出率最高；（２）南方地区宫颈癌组织中ＨＰＶ５８型检出率高于北方地区，表现出明显的地区差异。（３）ＨＰＶ１６型、１８型检出率相比较，在宫颈癌组织中ＨＰＶ５８型检出率低于ＨＰＶ１６型，但明显高于ＨＰ     

聚合酶链反应酶谱分型检测宫颈癌中人乳头瘤病毒 …

目的 探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）和单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）等对宫颈癌的病因学作用。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－核酸内切酶分型检测宫颈癌活检组织中ＨＰＶ－ＤＮＡ和ＨＳＶ－ＤＮＡ基因,以正常宫颈组织作对照。结果 在宫颈癌活检细胞中ＨＰＶ－１６,１８型和ＨＳＶ－２型阳性率分别为３８．９％和３４．６％,与正常妇女宫颈组织阳性率均为３．２％比较,差异均有非常显著意义（Ｐ〈０．００１）。结论 ＨＰＶ－１６     

用通用引物聚合酶链反应对宫颈刮片中人乳头瘤病毒感染的快速筛检

用通用引物聚合酶链反应（ＧＰ－ＰＣＲ）可同时对人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６、１１、１６、１８、３１、３３等型进行检测。该方法成功地用于临床宫颈刮片样品广谱ＨＰＶ感染的筛检。结果，宫颈癌组ＨＰＶ检出率（８５．５％）明显高于非癌组（１３．９％）（Ｐ＜０．０１）；对宫颈癌放疗前后ＨＰＶ阳性率比较，二者亦有明显差异（８５．５％，４３．７％，Ｐ＜０．０１）。证明ＧＰ－ＰＣＲ是一种在大规模人群中快速筛检多型ＨＰＶ感染的有效方法。     

宫颈癌组织中HPV16,18E6蛋白表达的观察

目的观察ＨＰＶ１６、１８早期蛋白Ｅ６在人宫颈鳞状细胞癌中的表达并评价Ｅ６单抗的应用价值。方法采用ＳＰ免疫组化染色法,检测４０例宫颈鳞状细胞癌,３０例慢性宫颈炎及３０例正常宫颈组织中ＨＰＶ１６、１８Ｅ６蛋白的表达。结果癌组中Ｅ６的阳性率为６７．５％（２７／４０）,慢性宫颈炎中为３．３％（１／３０）,正常宫颈组织中均为阴性,良、恶组ＨＰＶ１６、１８Ｅ６的阳性率差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。结论ＨＰＶ１６、１８感染与本地区宫颈癌病因学密切相关,Ｅ６单抗可作为预测ＨＰＶ１６、１８感染及宫颈癌早期诊断的标记之一。     

HPV6，11型在女性生殖器尖锐湿疣和乳头瘤样增生中的分布

从３４２名上海地区患者的外阴、阴道和宫颈的病变部，采集４８７份活检标本。５种病理诊断类型，经斑点杂交法检测，ＨＰＶ６、１１ＤＮＡ总阳性率：尖锐湿疣８５％、乳头瘤样增生１０．１０％、慢性宫颈炎７．１４％、鳞状上皮增生５％、生殖器正常粘膜２．６５％。５１例尖锐湿疣和１０例乳头瘤样增生，ＨＰＶ６、１１和６＋１１感染阳性率分别为：１５．６９％、２５．４９％、５８．８２％和２０％、３０％、５０％。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹转移杂交与斑点杂交的符合率，在尖锐湿疣中，ＨＰＶ６、１１和６＋１１分别为７５％、９２．３％、８６．７％；在乳头瘤样增生中，分别为１００％、３３．３％、６０％。ＡＢＣ法检测阳性率仅为６１．６７％和０％。本调查结果证实，上海地区女性尖锐湿疣和乳头瘤样增生与ＨＰＶ６、１１型感染密切相关，且以ＨＰＶ两种型别（ＨＰＶ６＋１１）混合感染为主。     

应用原位PCR技术检测阴茎癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的：研究人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与阴茎癌的关系。方法：应用原位ＰＣＲ技术对４６例阴茎癌组织中的ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ进行检测。结果：３３例阴茎癌中检测到了ＨＰＶＤＮＡ（７１．７％），其中２９例ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性（６３．０％），６例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性（１３．０％），２例ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ均阳性，４例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性而ＨＰＶ１６阴性；２例淋巴结转移癌，３例癌旁不典型增生组织和１例癌旁增生组织ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性。结论：阴茎癌与ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８感染有密切关系，原位ＰＣＲ技术是一项敏感性高、特异性强的技术。     

人乳头状瘤病毒不同型别与宫颈病变的相关性研究

目的探讨人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）不同型别与宫颈病变性质的关系。方法应用ＰＣＲ技术和原位杂交方法对６１例宫颈上皮内瘤（ＣｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌＮｅｏｐｌａｓｉａＣＩＮ）和１２例宫颈鳞癌（ＳＣＣ）进行ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ检测。结果ＰＣＲ检测结果显示ＨＰＶ６、１１主要分布于低度鳞状上皮内病变（６１９％）和一部分ＣＩＮⅡ中（２０％），而在ＣＩＮⅢ和ＳＣＣ中检测不到；ＨＰＶ１６、１８的检出率随ＣＩＮ级别增高而增加，在ＳＣＣ中高达８３３％。原位杂交结果显示在低度鳞状上皮内病变中，地高辛（Ｄｉｇ）标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ杂交物质在核中均呈细颗粒状，为“游离型”。上述杂交阳性信号形态亦出现于ＣＩＮⅡ的所有ＨＰＶ６Ｂ／１１及部分ＨＰＶ１６、１８型感染中，而ＣＩＮⅢ和宫颈鳞癌及部分ＣＩＮⅡ中，其杂交阳性信号均为非颗粒状的“整合型”。结论低度鳞状上皮内病变是以ＨＰＶ６、１１低危型为主的多型别病毒的繁殖性感染，ＣＩＮⅢ和宫颈鳞癌为ＨＰＶ１６、１８高危型病毒的整合型感染，而在ＣＩＮⅡ中存在着ＨＰＶ６，１１和ＨＰＶ１６，１８的繁殖性感染及ＨＰＶ１６，１８的整合型感染     

用聚合酶链反应检测食管癌组织中人乳头瘤病毒DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对汕头市区６８例食管癌的石蜡包埋标本进行人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ序列检测，结果显示，ＨＰＶＤＮＡ总阳性率为６６．１８％（４５／６８），检出型别主要为ＨＰＶ６、１１、１６，检出率分别为２７．９４％、３６．７６％和２７．９４％，经统计学处理三型间无显著性差异；ＨＰＶ－１８及未定型别各占８．８２％。值得注意的是ＨＰＶ感染中多重感染占阳性病例的５３．３３％（２４／４５）。初步结果表明，汕头市食管癌高发区有较高的ＨＰＶ感染率，此与食管癌的发生，可能有密切关系。     

人乳头瘤病毒与P 53协同致膀胱移行细胞癌关系的研究

目的 研究人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６、１１、１６和１８型及Ｐ５３与膀胱移行细胞癌的关系。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了７５例膀胱移行细胞癌组织中ＨＰＶ的感染,免疫组化ＳＰ法检测Ｐ５３蛋白表达情况。结果 膀胱移行细胞癌组织中ＨＰＶ６、１１、１６和１８的阳性率分别为６．７％（５／７５）,５．３％（４／７５）,３３．３％（２５／７５）和６．７％（５／７５）。低危型ＨＰＶ（６或１１）阳性率为９．３％（７／７５）,高危型ＨＰＶ（１６或１８）阳性率为３４．７％（２６／７５）。同一膀胱癌组织中两种以上（包括两种）ＨＰＶ亚型感染８例,占１０．６％。ＨＰＶ６、１６和１８型之间感染阳性率在肿瘤有无转移组中差异显著（Ｐ〈０．０５）,ＨＰＶ１６、１８的阳性率在肿瘤病理分级中差异有极显著性（Ｐ〈０．０１）。ＨＰＶ ＤＮＡ型别     

不同引物介导的聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒DNA

应用３对人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）引物对１０７例各种宫颈标本进行了聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。结果显示，共同引物（ＧＰ）扩增，有５８．８％（３０／５１）宫颈鳞癌，１００％（１４／１４）尖锐湿疣、１３．６％（３／２２）宫颈炎和１０％（２／２０）正常宫颈出现ＨＰＶ阳性。型特异性引物ＳＰ１６／ＳＰ１８扩增，有３７．２％（１９／５１）宫颈鳞癌２５．７％（５／１４）尖锐湿疣和５％（１／２０）正常宫颈出现ＨＰＶ１６型阳性，５．８％（３／５１）宫颈鳞癌为ＨＰＶ１８型阳性。进一步用ＳＰ１６ｂ引物扩增，没有１例ＨＰＶ１６ｂ亚型被发现。说明宜颈磷癌和尖锐湿疣与ＨＰＶ感染有关，结合应用共同引物和型特异性引物可作为ＨＰＶ检测与分型方法。     

地高辛配基人乳头瘤病毒DNA探针的制备和应用

采用非同位素标记物地高辛配基（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ），通过随机引物法制成地高辛配基人乳头瘤病毒ＤＮＡ（Ｄｉｇ－ＨＰＶＤＮＡ）探针。用斑点杂交法检测宫颈组织中的ＨＰＶＤＮＡ。经试验证明，该探针检测ＨＰＶＤＮＡ的灵敏度与（３２）Ｐ－ＨＰＶＤＮＡ探针相近。经与（３２）Ｐ－ＨＰＶＤＮＡ探针同时对６５份临床标本进行比较，结果附合率达９５％以上。３５份宫颈癌组织中ＨＰＶ１６／１８型检出率为３４．２９％。Ｄｉｇ标记的探针检测ＨＰＶＤＮＡ特异性高，重复性好，背景显色低。     

应用通用引物聚合酶链反应技术检测结肠癌组织中人乳头瘤病毒DNA

应用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）通用引物介导的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例结肠癌石蜡包埋病理组织切片中ＨＰＶＤＮＡ，其中１０例呈阳性扩增（阳性率为６６．７％）。１２例正常结肠组织经上述ＰＣＲ检测均呈阴性反应。阳性扩增产物经核酸斑点杂交进行ＨＰＶ型别分析，ＨＰＶ１６型占４例（４０．０％），１８型１例（１０．０％），１６／１８型５例（５０．０％），未检出其他ＨＰＶ型别。表明ＨＰＶ可能对结肠癌的发生具有病原相关性。     

人喉癌组织中人乳头瘤病毒DNA的检测

目的为探讨喉癌与人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染的关系和ＨＰＶ在喉癌中基因组型的分布与表达。方法应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）制备非放射性探针标记物－地高辛标记ＨＰＶ共有引物探针,对１４６例喉不同病变的新鲜组织标本（喉癌６８例,喉其它病变４８例,正常喉组织３０例）,进行ＨＰＶ６,１１,１６,１８,３１,３３,３５,４２,５８共９型ＨＰＶＤＮＡ感染的检测;阳性者用多重引物ＰＣＲ方法分型。结果喉癌ＨＰＶ感染阳性率４５．６％（３１／６８）,喉癌颈转移淋巴结组织阳性率２０．０％（３／１５）,喉癌前病变阳性率１１．８％（２／１７）,声带息肉阳性率６．３％（１／１６）,１５例癌旁及１５例癌周正常喉组织均为ＨＰＶＤＮＡ阴性。ＨＰＶＤＮＡ型别分布在喉癌中以ＨＰＶ１６、１８型为主,喉良性病变中以ＨＰＶ６、１１型为主。结论喉癌发生与ＨＰＶ感染有关。     

乳头瘤病毒16型E6,P53,RB,PCNA在宫颈癌中的表达…

应用核酸原位杂交和免疫组织化学技术，检测人子宫颈癌中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ６ＲＦ与抑癌基因产物Ｐ５３，ＲＢ和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）。在４４例宫颈癌石蜡切片中，原位杂交检测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ阳性２７例（６１．３６％），其中免疫组化检测出Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ一分别为８例（２９．６３＃），１４例（５２．８５％）、２０例（７４．０７％），而在１７例ＨＰＶ１６Ｅ６阴性 本中Ｐ５３、ＲＢ、Ｐ     

宫颈癌患者宫颈HP,HCMV,UU,CT病原体的PCR检测研究

目的：了解人乳头病毒（ＨＰＶ）、巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）、解脲支原体（ＵＵ）及沙眼衣原体（ＣＴ）与宫颈癌发性的关系。方法：采用ＰＣＲ技术对３８例宫颈癌患者宫颈洗液中的上述４种病原体进行了检测，同时对照检测了４５例宫颈炎患者。结果：宫颈癌组４种病原体综合检出率高于宫颈炎组。在４种病原体中，ＨＰＶ检出率最高，其次依次为ＵＵ、ＨＣＭＶ及ＣＴ。鳞癌患者ＨＰＶ检出率高于腺癌患者。４种病原体与癌组织侵袭程度无明     

慢性宫颈炎患者宫颈中人乳头瘤病毒基因的检测

应用聚合酶链反应技术检测正常妇女与慢性宫颈炎患者宫颈人乳头瘤病毒感染情况的结果显示，南京市慢性宫颈炎患者ＨＰＶ－ＤＮＡ总阳性率达５８．６％；ＨＰＶ６，１１，１６，１８型阳性率分别为２９．３％，３０．７％，２８．６％和３４．３％，而正常妇女中ＨＰＶ总阳性率为１９．４％，４个型别ＨＰＶ阳性率为９．７％，１６．１％，３．２％和３．２％，明显低于宫颈炎患者。如皋市慢性宫颈炎患者ＨＰＶ－ＤＮＡ总阳性率高达８     

人乳头状瘤病毒感染与食管癌的关系

人类乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）的感染是上皮性肿瘤发生的一个重要原因。特别是ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８型感染与宫颈癌的发生。但ＨＰＶ的感染与食管癌的关系仍不清楚。我们采用免疫组织化学和敏感的ＨＰＶ共同引物、ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８型特异性引物的ＰＣＲ方法及３２Ｐ标记特异性探针Ｓｏｕｒｈｅｒｎ杂交检测食管癌中的ＨＰＶ及其亚型。结果显示，１２７例食管鳞癌标本免疫组化方法检测，ＢＰＶ阳性者占６０．６（７７／１２７），ＨＰＶＥ６蛋白抗原阳性者占４３％（５４／１２７）。其阳性染色明确定位于鳞癌组织内，并与肿瘤的分化有着密切的关系。经β球蛋白引物扩增证实不含ＰＣＲ抑制标本共１０３例，其中ＨＰＶ共同引物ＰＣＲ扩增阳性者为３７例，占３５．９％，经型特异ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实其中ＨＰＶ１６阳性者２１例，占２０．４％；ＨＰＶ１８阳性者８例，占７．８％。仅一例为ＨＰＶ１６和１８均阳性。以上结果显示ＨＰＶ感染的确存在于食管癌中，并可能在食管癌发生中起一定的作用。