RT-PCR结合限制性片段长度多态性分析对我国汉坦病毒进行基因分型的研究

用电脑软件分析ＨＦＲＳＶ 囊膜糖蛋白编码基因的Ｍ 节段,寻找不同型别间病毒株Ｍ 节段的限制性内切酶酶切位点的差异。结果发现,ＨＴＮ 型７６１１８ 株和ＳＥＯ 型Ｒ２２ 株Ｍ 节段１１９９～１４９７ 间的酶切位点,可用于进行限制性内切酶基因多态性分析,以确定ＨＦＲＳＶ 的型别。根据上述结果,合成一对引物,建立ＲＴ／ＰＣＲ 方法,分别用Ｒｓａｌ、Ｔａｑ １ 和ＨｉｎｄＩＩＩ３ 种内切酶对扩增片段进行酶切分型。用此方法分析了从我国不同地区、不同宿主分离的毒株１９ 株,及国际标准毒株１ 株。结果表明,９ 株可定为ＨＴＮ 型,８ 株可定为ＳＥＯ 型,３ 株无法确定其型别。此２０ 个毒株曾用血清学方法分型,仅１１ 株分型成功。分型成功率ＲＴＰＣＲ／ＲＦＬＰ法与血清学方法分别为８５％ 和５５％ ,前者比后者高３０ ％ 。     

汉坦病毒R36株的基因分型研究

采用汉坦病毒Ｍ片段特异性核苷酸分型引物，对Ｒ３６等７株汉坦病毒进行反转录和聚合酶链式反应扩增鉴定，结果Ｒ３６株仅能被Ⅰ型分型引物扩增出特异性片段，而不能被Ⅱ型引物扩增；ＰＣＲ产物的序列分析结果表明，Ｒ３６与ＨＴＮ型病毒７６－１１８株的同源性为７８．４％，与ＳＥＯ型病毒Ｒ２２株的同源性为６８．１％。文中对Ｒ３６与汉坦病毒其它毒株的核苷酸同源性进行了配对比较。该项研究为从核苷酸水平对Ｒ３６株的分型，提供了科学依据。     

江苏省肾综合征出血热病人感染类型与流行特征分析

应用血凝抑制试验对江苏省１９８９和１９９２两个流行年度收集的肾综合征出血热病人血清进行分型，１９８９年野鼠型和家鼠肾综合征出血热分别为５７．７％和４０．９％，１９９２年为６４．０％，经ｘ＾２检验，无显著差异，表明我省ＨＦＲＳ病人感染类型构成比近年呈稳定状态。     

间接ELISA法的改进并用于肾综合征出血热病人血清的初步分型

采用超声、差速离心法制备肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）抗原。通过与免疫荧光法（ＩＦＡ）和捕获ＩｇＭＥＬＩＳＡ法（ＭａｃＥＬＩＳＡ）比较，分析了病人临床四个期血清抗体阳性率，对３组不同地区的正常人群ＨＦＲＳＶ抗体阳性血清作抑制试验，以及比较ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ血清抗体几何平均滴度证实本方法是特异和灵敏的。用这一方法对野鼠型和家鼠型ＨＦＲＳ病人血清，与两型病毒作交叉ＥＬＩＳＡ试验，结果呈单向反应；采用胞膜荧光反应为主的感染细胞制备抗原，可提高其分型效果。     

汉坦病毒与自然宿主动物共进化及实验动物模型的研究进展

汉坦病毒(Ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ,ＨＶ),属于布尼亚病毒科,是有包膜分节段的负链ＲＮＡ病毒。此属病毒能引起人类两种死亡率很高的疾病—肾综合征出血热(ＨＦＲＳ)和汉坦病毒肺综合征(ＨＰＳ)。前者在欧洲流行的有ＨＦＲＳ的轻型即流行性肾病(ＮＥ),由欧洲棕背　携带传播的普马拉病毒(ＰＵＵＶ)引起,重型由黄喉姬鼠携带的汉滩型病毒(ＨＴＮＶ)及多布拉伐—贝尔格来德病毒(ＤＯＢＶ)引起。在亚洲流行的有由ＨＴＮＶ引起的重型ＨＦＲＳ及由ＳＥＯＶ引起的轻型ＨＦＲＳ,分别由黑线姬鼠和褐家鼠携带传播。ＨＰＳ主要由鹿鼠携带的ＳＮＶ血清型ＨＶ…     

从保定地区病人血清扩增出与76-118株同亚型的汉坦病毒的核苷酸及其序列分析

近年肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）在保定地区流行，从１９９５年的５４例增至１９９６年２４２例，为此我们对１９９６年保定市传染病医院收治的ＨＦＲＳ住院病人进行了列题研究，发现有两例为野鼠型（ＨＴＮ）汉坦病毒感染，其中一例经扩增克隆及核苷酸序列测定其结果与韩...     

肾综合征出血热病毒结构蛋白的纯化及免疫学特性分析

应用从肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者血清中提取的ＩｇＧ与活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，制备亲和层析柱，用此亲和层析柱从ＨＦＲＳＶ感染的小白鼠乳鼠鼠脑中提取出２种分子量为６７０００和５５０００的病毒结构蛋白。经ＥＬＩＳＡ证明，此病毒结构蛋白能与ＨＦＲＳ患者血清ＩｇＧ及抗ＨＦＲＳ病毒的ＭｃＡｂ反应，效价为１６０。与６株抗ＨＦＲＳＶＭｃＡｈ试验表明，此病毒结构蛋白能与Ｈ７株反应。血凝试验证明，此病毒蛋白不能凝集鹅红细胞、鸽血球和人＂Ｏ＂型血红细胞。将纯化的病毒结构蛋白免疫家兔，证明其有较强的免疫原性，可刺激家兔产生特异性抗体；微量中和试验及乳鼠中和试验证明，中和效价为２５６，说明纯化的病毒结构蛋白具有中和抗原位点；免疫血清对感染乳鼠有一定保护作用。     

用抗体捕捉ELISA法检测肾综合征出血热患者唾液中特异性IgM抗体

用抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法检测肾综合征出血热患者唾液中特异性ＩｇＭ抗体孙晓芬，崔桂兰（成都军区后勤部军事医学研究所，成都６１００６１）诊断肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）感染通常依靠测定血清中特异性ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体。本实验采用ＩｇＭ抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法...     

HFRSV核蛋白pEF—BOS真核表达载体的构建及表达

本文构建了编码肾综合征出血热病毒核蛋白基因的真核表达载体ｐＥＦ－ＢＯＳ／ＨＴＶ－ＮＰ，经限制性酶切及部分序列分析验证其插入正确。采用ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法瞬时转染ＮＩＨ３Ｔ３２４ｈ后，经间接免疫荧光染色证实，ＮＰ基因可在细胞浆内高水平表达，此结果为进一步研究ＨＦＲＳＶ ＮＰ诱导特异性ＣＴＬ的产生打下了基础。     

RT—PCR结合限制性片段长度多态性分析对我国汉坦 …

用电脑软件分析ＨＦＲＳＶ囊膜糖蛋白编码基因的Ｍ节段,寻找不同型别间病毒Ｍ节段的限制性内切酶酶切位点的差异。结果发现,ＨＴＮ型７６－１１８株和ＳＥＯ型Ｒ２２株Ｍ节段１１９９－１４９７间的酶切位点,可用于进行限制性内切酶基因多态性分析,以确定ＨＦＲＳＶ的型别。     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体亲和力及抗原…

应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白上６种不同抗原决定簇，并且表明ＮＰ上可能存在ＨＦＲＳＶ组、亚组、型或亚型抗原决定簇。ＭｃＡｂ亲和常数测定的高低排序结果为ＫＦ１２＞ＤＥ１１＞Ｘ１０＞ＣＨ１０＞ＩＧ４。     

两株B群流脑菌LOS抗原性的研究

在对我国自７０年代以来从病人和带菌者中分离的９１株Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）进行脂寡糖（ＬＯＳ）免疫型分型、外膜蛋白分型／亚型、多位点酶电泳分型等的基础上，挑选了两株具有代表性的菌株３４０７（Ｂ：１５：Ｐ１．２：Ｌ３，７，９：ＲＦＬＰｂ－２０：克隆群Ｉ）和５４２８５２（Ｂ：ＮＴ：Ｐ１．２：Ｌ３，７，９：ＲＦＬＰｂ－２０：克隆群Ｉ）。提取并纯化了它们的ＬＯＳ，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析发现：两株菌的Ｌ     

检测肾综合征出血热病毒抗体的自身血凝试验的建立

目的 建立一种快速检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）虱血液中病毒抗体的自身血凝试验方法。方法 采用木瓜酶消化法制备红细胞糖蛋白单克隆抗体（ｍｃＡｂ）的Ｆ（ａｂ）２片段，用硫酸鱼精蛋白提取ＨＦＲＳ病毒抗原，并用戊二醛法将两种蛋白偶联关双价试剂，以ＨＦＲＳ虱阳性血清与人“Ｏ”型血红细胞模拟全血标本。进行红细胞凝集试验。结果 抗红细胞ｍｃＡｂＦ（ａｂ）２片段与ＨＦＲＳ病毒抗原蛋白发生有效偶联，可使ＨＦＲＳ     

肾综合征出血热虱血清超氧化物歧化酶,丙二醛含量和T淋巴 …

目的;探讨肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）发病机理中,自由基（ＯＦＲ）对Ｔ淋巴细胞亚群的影响。方法;对５４例ＨＦＲＳ患者进行血清ＳＯＤ,ＭＤＡ,Ｔ细胞亚群进行动态观察。结果：显示ＳＯＤ含量在发热期明显低于正常对照组,ＭＤＡ含量在热期明显高于正常对照组,ＣＤ４＾＋细胞在发热期明显降低,ＣＤ８＾＋细胞在发热期明显升高,其变化在少尿期最重,并且发现ＭＤＡ和Ｔ细胞亚群变化有一定的相关性,＃郑?     

肾综合征出血热双价纯化疫苗的研制

目的: 研制肾综合征出血热双价纯化疫苗。方法:肾综合征出血热病毒I型LR1 株和II型R22株分别在Vero细胞上接种培养。I、II型病毒培养液依次经β 丙内酯灭活、超滤浓缩、蔗糖区带离心纯化及层析脱糖等处理。将检定合格的I、II型单价病毒原液等量混合后, 用AI(OH)3 佐剂吸附,制备 3批双价纯化疫苗。结果: 该 3批疫苗已经自检和中国药品生物制品检定所复检合格, 并已进行临床试验。结论: 采用Vero细胞培养制备肾综合征出血热双价纯化疫苗方法可行。     

超广谱β-内酰胺酶基因分型的初步研究

按质粒所携带编码基因同源性的不同 ,将超广谱 β 内酰胺酶 (Ｅｘｔｅｎｄｅｄｓｐｅｃ ｔｒｕｍ β ｌａｃｔａｍａｓｅｓ,ＥＳＢＬｓ)分为 4类 ,即ＴＥＭ型、ＳＨＶ型、ＴＥＭ ＳＨＶ混合型和非ＴＥＭ 非ＳＨＶ型 (包括ＰＥＲ、ＴＯＨＯ、ＣＴＸ Ｍ、ＯＸＡ型等 )。本文报告绍兴地区产ＥＳＢＬｓ细菌基因分型的初步结果。临床标本分离、并经纸片扩散法确证为产ＥＳＢＬｓ的细菌 42株 (其中大肠埃希菌 2 6株 ,肺炎克雷伯菌 16株 )。用ＰＣＲ进行酶基因分型。ＰＣＲ扩增引物 ,根据ＴＥＭ 1和ＳＨＶ 1编码基因序列设计 ,ＴＥＭ引物序列分别为…     

有源汉坦病毒疫苗候选株的分离鉴定及其某些特性 …

目的 对人源汉坦病毒疫苗候选株作分离鉴定及特性的研究。方法 用Ｖ ｅｒｏ细胞分离病毒,用免疫荧光法作病毒效价测定。用ＲＴ－ＰＣＲ及部分核苷酸序列分析等检定。结果 用Ｖｅｒｏ细胞从安徽省凤台县肾综合征出血热病人血清中分离一株汉坦病毒（ＨＶ）,其抗原特性及ＰＣＲ分型结果证明为汉滩病毒（Ⅰ型病毒）;其免疫血清对来源于不同地区的ＨＶ均有中和活性。Ｍ片段部分序列分析结果表明,该毒株与７６－１１８等毒株苷酸序     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体亲和力及抗原结合位点测定

应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）大鼠单克隆抗体（ＭｃＡｂ）进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白（ＮＰ）上６种不同抗原决定簇，并且表明ＮＰ上可能存在ＨＦＲＳＶ组、亚组、型或亚型抗原决定簇。ＭｃＡｂ亲和常数测定的高低排序结果为ＫＦ１２＞ＤＥ１１＞Ｘ１０＞ＣＨ１０＞ＩＧ４。     

肾综合征出血热病毒分型单克隆抗体的建立与初步应用

用肾综合征出血热病毒(HFRSV)83011株与84-FLi株免疫BALB/c小鼠,建立杂交瘤,筛选出野鼠型McAb4F5株。用HFRSV家鼠分离株R22与Seoul株免疫鼠,筛选出家鼠型分型McAb 3D5株。用分型McAb,对采自陕西、湖北,辽宁3省的24个病毒株,进行血清学分型,所得结果与毒株来源宿主完全相符,并证明来源于病人或     

人异体移植肾之闭塞性动脉病的病理学研究

目的对移植肾之闭塞性动脉病（ｏｂｌｉｔｅｒａｔｉｖｅａｒｔｅｒｉｏｐａｔｈｙ,ＯＢＡ）进行组织学观察;分析病变中细胞成分;探讨其发病机理。方法对７４例急性血管型和慢性型排斥反应的移植肾进行光镜,电镜和免疫组化ＬＳＡＢ法观察。结果ＯＢＡ病变主要累及所有７４例移植肾内叶间动脉,弓形动脉和小叶间动脉内膜。２９例（３９．２％）在肾移植术后３个月内就能形成ＯＢＡ。早期病变１９例（２５．７％）,表现为动脉内膜炎;晚期病变５５例（７４．３％）,以动脉内膜梭形平滑肌细胞增生,管壁纤维化为主。ＯＢＡ病变中的细胞成分,一方面来自宿主;另一方面来自移植肾动脉壁本身,包括Ｔ淋巴细胞、单核（巨噬）细胞、内皮细胞和不同表型———“收缩型”及“合成型”平滑肌细胞,后者分泌Ⅰ,Ⅲ型胶原。结论ＯＢＡ是发生于移植后肾内动脉壁的增殖性病变,是移植物血管壁本身的细胞成分与宿主免疫细胞间一系列相互作用的结果,是一种免疫反应。