磷甲酸钠在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒的抑制作用

以鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）静脉感染雏鸭为模型,分组腹腔注射磷甲酸钠（ＰＦＡ）２５０ｍｇ、１２５ｍｇ、６２．５ｍｇ／ｋｇ及生理盐水,观察治疗后鸭血清中ＤＨＢＶＤＮＡ及ＤＨＢｓＡｇ的动态变化,并检测肝、肾、脾及胰中ＤＨＢＶＤＮＡ的分布;提取肝脏中超螺旋ＤＮＡ（ＳＣＤＮＡ）,检测ＰＦＡ对ＤＨＢＶＤＮＡ复制的影响。结果表明：ＰＦＡ治疗第７天到第２１天,１２５ｍｇ和２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组对ＤＨＢｓＡｇ有显著的抑制作用;１２５ｍｇ和２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组治疗第１４、２１天对血清中ＤＨＢＶＤＮＡ有显著的抑制作用;１２５ｍｇ和２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组治疗第２１天肝及肾中ＤＨＢＶＤＮＡ明显下降;２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组治疗２１天对ＤＨＢＶ感染鸭肝细胞内ＤＨＢＶＲＣＤＮＡ、ＬＤＮＡ及ＳＣＤＮＡ的合成有明显抑制作用。可见,最大剂量２５０ｍｇ／ｋｇＰＦＡ每天２次,治疗２１天,对ＤＨＢＶ感染鸭血清中ＤＨＢｓＡｇ、血清及肝、肾中ＤＨＢＶＤＮＡ都有抑制作用,对脾、胰中ＤＨＢＶＤＮＡ抑制不明显。提示该药能抑制ＤＨＢＶ感染,但未能清除病毒,故停药后可出现反跳现象。     

肝细胞刺激物质对感染鸭乙型肝炎病毒的雏鸭体内抗病毒作用的实验研究

以感染鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）的北京雏鸭为体内实验动物模型，观察了肝细胞刺激物质（ＨＳＳ）对鸭乙型肝炎病毒的抗病毒作用。１日龄北京鸭实验感染ＤＨＢＶ，７天后血清ＤＨＢＶＤＮＡ阳性，给予药物治疗１０天，用斑点杂交方法检测用药前后血清ＤＨＢＶＤＮＡ，分析药物对血清ＤＨＢＶＤＮＡ是否有抑制作用，结果显示：ＨＳＳ大、小两个剂量组（分别为５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ和２００ｍｇ／ｋｇ／ｄ）均对ＤＨＢＶＤＮＡ有抑制作用，大剂量组出现ＤＨＢＶＤＮＡ抑制作用时间早于小剂量组，用药５天、１０天及停药３天血清ＤＨＢＶＤＮＡ中位抑制率显著高于生理盐水对照组（Ｐ＜０．０５）；两个剂量组均无停药反跳；生理盐水组用药前后ＤＨＢＶＤＮＡ的Ａ值比较差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。停药后３天肝组织病理光镜及电镜均显示ＨＳＳ组病变较生理盐水组轻。结论：肝细胞刺激物质有一定的保肝和抑制ＤＨＢＶＤＮＡ复制的作用     

硫代反义寡核苷酸在鸭体内外对鸭乙型肝炎病毒DNA复制的影响

目的：研究在转录起始区域设计硫代反义寡核苷酸抑制鸭乙型肝炎病毒DNA（DHBV DNA）复制的可行性。方法：设计合成分别基于DHBV PreS1、PreS2、S抗原启动基因的硫代反义寡核苷酸，应用Southern blot实验和cpm计数测定其对原代鸭肝细胞中及雏鸭中感染DHBV的DHBV DNA的作用。结果：在1.5μmol/L浓度下，体外抑制率分别是61．5％，69．3％和62．4％。选取PreS1抗原基因起始区段的硫代反义寡核苷酸进行整体动物实验。每只动物每天按10μg/g体重静脉注射一次，共给药6d。对动物肝脏进行取样分析表明，在此剂量下，对DHBV DNA的抑制率可达87.9%。结论：本实验所设计的针对转录起始区的硫代反义寡核苷酸在体内外对DHBV DNA复制均有明显抑制作用，说明了在这一区域设计硫代反义寡核苷酸的可行性。     

急性鸭乙型肝炎病毒感染病毒清除机理研究

目的 :进一步阐明嗜肝病毒自然感染过程中病毒清除机理。方法 :7只 2～ 3月龄成年重庆麻鸭静脉接种 10～ 2 0mlDHBV阳性血清 (5× 10 8～ 1× 10 9genome) ,接种后每周采血检测外周血中DHBVDNA、DHBsAg和特异抗体的产生 ;感染后第10、35天分离外周血单个核细胞用于抗原特异细胞增殖实验 ;第 5、30、6 0天取肝组织标本进行DHBVDNASouthern杂交、DHB sAg免疫组化及肝组织病理检测。结果 :DHBV感染成年鸭在 1～ 2w潜伏期后出现急性、一过性感染 ,感染高峰期肝内存在多拷贝的DHBV所有复制中间体形式 ,包括cccDNA。进一步分析显示病毒血症的消失是在快速抗原特异细胞增殖反应和高滴度特异抗体产生之后 ;与此同时 ,整个急性感染期间 ,肝细胞并无明显的损害。结论 :非细胞直接损伤机制在嗜肝病毒清除过程中发挥了重要作用。     

鸭乙型肝炎病毒感染的研究

Cherry valley ducks were infected by intravenous injection of DHBV positive serum in order to study the intrahepatic distribution of DHBsAg and the relation of the degree of hepatic lesions to viremia and humoral immunologic deficiency after surgical removal of Bursa of Fabricius. The anti-DHBsAg serum prepared in our laboratory showed high specificity. There was no cross reaction with HBsAg and DHBsAg was found to be located in the cytoplasm of hepatocytes as well as bile duct epithelial cells which usually showed stronger staining quality. The histopathology of liver revealed normal/mild hepatitis in the control group, moderate/severe hepatitis in the infected group. In comparison, hepatitis in the infected group was more severe in the older ducks than the ducklings, in those viremia-positive ones than in the negative ones, and in the bursectomized than in the non-bursectomized ducks. Evidently, the hepatic lesions were mostly due to DHBV infection in this series, although some other environmental factors could not be ruled out entirely. The present investigation shows that Cherry valley ducks are one of the best spices for experimental DHBV infection, and bursectomized ducks with humoral immunodeficiency might provide a reliable and useful model for the study of pathogenesis of hepatitis B virus infection.     

用聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

我们采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)技术检测乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(ＨＢＶ)ＤＮＡ,并用酶标法检测ＨＢＶＭ,从乙型肝炎临床分型和实验室ＨＢＶＭ分组两个角度时行回顾性比较与分析。1　材料和方法1.1　病例选择　168例乙型肝炎病例均来自嘉兴市第二医院和协作单位住院病人,全部检测过ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢＶＭ,男106例,女62例;年龄4～71岁,平均35.4岁。其中急性乙型肝炎26例,慢性乙型肝炎72例,重型肝炎9例,淤胆型肝炎24例,肝炎后肝硬化37例。诊断标准依据1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准。1.2　试剂和…     

不同慢性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA定量检？…

目的 探讨乙型肝炎病毒ＤＮＡ含量的临床意义。了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）免疫标志不同状态的慢性肝病患者血清ＨＢＶＤＮＡ浓度及共临床意义。方法 应用建立的竞争性聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法定量检测慢性肝炎（ＣＨ）５１例、肝硬化（ＬＣ）３６例、原发性肝癌（ＰＨＣ）３８例的血清ＨＢＶ ＤＮＡ浓度。结果 ＨＢＶＤＮＡ阳性的ＣＨ患者血清ＨＢＶ ＤＮＡ浓度为４．３６ｌｏｇ１０ＨＢＶＤＮＡ拷贝／５０μｌ，ＬＣ为４．     

微量血清乙型肝炎病毒DAN定量检测方法

将标准乙型肝炎病毒ＤＮＡ稀释系列进行斑点杂交，并放射自显影，扫描测定斑点密度，对斑点的ＨＢＶ－ＤＮＡ含量和其扫描密度进行曲线拟合，Ｌｏｇｉｓｔｉｃ曲线拟合效果极佳，可用于血清ＨＢＶ－ＤＮＡ的定量检测。     

乙型肝炎患者HBV M和HBV DNA的相关性研究

目的 探讨乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）血清学标志（ＨＢＶ Ｍ）与ＨＢＶ ＤＮＡ检测结果的相关性与临床意义。方法 对４１４例乙型肝炎的ＨＢＶ Ｍ和ＨＢＶ ＤＮＡ检测结果进行比较。ＨＢＶ Ｍ用ＥＬＩＳＡ定量分析法检测,ＨＢＶ ＤＮＡ用斑点杂交法检测。结果 急性、慢性乙型肝炎患者中ＨＢＶ ＤＮＡ的阳性率与乙型肝炎肝硬化患者的ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率比较,差异有显著性;ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ阳性和ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｃ阳性组的ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率比较,差异无显著性;ＨＢｓＡｇ和／或ＨＢｅＡｇ的滴度与ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率呈正相关关系。结论 ＨＢＶ ＤＮＡ是评价ＨＢＶ活动最理想的标志;抗－ＨＢｅ的出现不能作为ＨＢＶ复制停止的指标;ＨＢｓＡｇ的滴度和ＨＢｅＡｇ的滴度变化可作为临床评价病毒复制程度和     

不同的样本处理方法对乙型肝炎病毒DNA检测的影响

目的探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）常规检测中血清样本的最佳处理方法。方法分别用不同缓冲液（ＰＢＳ与ＴＥ）对血清进行１：１或１：１０稀释，不同浓度去污剂（ＴｒｉｔｏｎＸ－１００与ＮＰ４０）及巯基乙醇处理血清样本，以及用硫氰酸胍－酚－氯仿抽提、蛋白酶Ｋ消化、碱裂解、辛酸钠裂解等方法处理血清样本，比较这些方法对ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶＤＮＡ敏感度的影响，并进行了辛酸钠最适浓度实验。结果在所比较的１８种方法中发现硫氰酸胍－酚－氯抽提法、碱裂解法及辛酸钠法有较高的检测敏感度，而辛酸钠法有更好的重复性，方法最为简便。结论终浓度３０～５０ｍｍｏｌ／Ｌ辛酸钠最适用于ＰＣＲ法常规检测ＨＢＶＤＮＡ的血清处理     

转染克隆HBVDNA的2.2.15细胞适应常规培养条件的研究

转染克隆ＨＢＶＤＮＡ的２．２．１５细胞适应常规培养条件的研究刘洪，谢建芬，张玲霞，任继明，陶陵，李泉根（中国人民解放军３０２医院病毒研究室，北京１０００３９）为了筛选抗－ＨＢＶ的有效药物，本实验室引进了具有分泌ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及合成完整Ｄａｎｅ...     

中草药抗乙型肝炎病毒活性及其作用机理体外实验研究

用２．２．１５细胞株体外抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）药物实验模型，对４种中草药制剂体外抗ＨＢＶ活性及其机理进行了评价，结果表明；４种中草药对细胞的５０％毒性浓度（ＣＤ５０）分别为乾坤宁〉６４０ｍｇ／Ｌ，双黄连针剂〉６４０ｍｇ／Ｌ，复方仙茅浸膏水提取液１６０ｇ／Ｌ（生药计算），复方黄芪浸膏水提取液３２０ｇ／Ｌ（生药计算）。对病毒复制指标ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ和细胞内ＨＢＶＤＮＡ的５０％抑制浓度（ＩＤ５０     

聚合酶链反应定量检测乙型肝炎病毒DNA及其临床意义分析

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染时,外周血中ＨＢＶＤＮＡ是病毒复制最直接和可靠的标志。自１９８５年以来,国外应用核酸分子杂交法、定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测ＨＢＶＤＮＡ含量［１］,国内也有一些报道［２］。北京佑安医院自１９９６年１月至１９９７年８月采用...     

核酶对鸭乙型肝炎病毒感染体内抗病毒作用效果的观察

目的观察核酶在体内抗病毒作用效果。方法选择鸭乙型肝炎（ＤＨＢＶＬＪ－７６）及其鸭动物模型作为检测系统，将针对ＤＨＢＶＰｒｅ－Ｓ７３６位点的核酶（ＲｚＤＳ）插入ｐＪ１２０质粒构建成ｐＪ－ＲｚＤＳ。与痘苗病毒天坛７６１株（ＶＶ）同源重组后获得含ＲｚＤＳ的重组痘苗病毒（Ｖ－ＲｚＤＳ）。用ＤＨＢＶ感染１日龄北京鸭，分别在感染的同时、感染后２４小时和７２小时注射Ｖ－ＲｚＤＳ和ＶＶ，１０天后检测血清中ＤＨＢＶＤＮＡ和ＤＨＢｓＡｇ的含量。结果北京鸭在感染ＤＨＢＶ的同时注射Ｖ－ＲｚＤＳ，其ＤＨＢＶＤＮＡ和ＤＨＢｓＡｇ的含量均低于ＶＶ对照组，两组之间有显著性差异。结论提示ＲｚＤＳ对ＤＨＢＶ基因组复制和表达均有抑制作用，其抑制率分别为４５％和６３％。     

鸭乙型肝炎病毒cccDNA Taq Man荧光定量PCR的建立

目的建立鸭乙型肝炎病毒（DHBV）cccDNA TaqMan荧光定量PCR方法。方法用pUCm-T载体和PCR纯化产物连接，转染TOP10菌，筛选阳性菌落，提取质粒，制作外标准品；在DHBV基因组负链两侧设计一对引物，并在引物间设计和荧光标记一段TaqMan探针，严格优化反应物的组成和扩增条件，建立了DHBVcccDNA TaqMan荧光定量PCR方法。结果最低可检出104拷贝／ml；批内误差为0．2％～3．14％，批间误差为2．22％～4．43％；在10^5—10^12拷贝／ml之间与Ct值具有很好的线性[Ct=-2．8361ln（x）＋41．45，r=-0．9985]。结论该法是一种灵敏度高、特异性强、较为简便的DHBV cccDNA定量检测技术。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的 建立检测HBV病毒DNA的荧光定量PCR法（FQ-PCR）,并与运用常规凝胶电泳技术观察特异扩增带检测的结果加以比较。方法 合成扩增HBV DNA314bp特异保守序列的1对引物及1条带2个荧光基团的寡核苷酸探针。用PE-5700型定量PCR仪完成PCR反应及产物的荧光定量检测。同是PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,EB染色,UVP（凝胶成像仪）检出有314bp带者为阳性或弱阳性。结果 建立了检测HBVDNA的荧光定量PCR技术,用已知HBV阳性模板不同拷贝数的标准溶液测得标准曲线Ct,原始拷贝数在10^5/ml以上者为阳性,用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性,阳性率29.2%;用定性PCR观察到193例有阳性特异带,阳性检出率为27.65%。没有发现用定性PCR检测为阳性而用FQ-PCR检测为阴性者。结论 FQ-PCR检测HBVDNA较普通定性PCR技术具有操作简便,灵敏度更高、减少发生污染可导致假阳性结果的可能性及自动化程度高等优点,值得在临床检验中推广应用。