肝细胞刺激物质对感染鸭乙型肝炎病毒的雏鸭体内抗病毒作用的实验研究

以感染鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）的北京雏鸭为体内实验动物模型，观察了肝细胞刺激物质（ＨＳＳ）对鸭乙型肝炎病毒的抗病毒作用。１日龄北京鸭实验感染ＤＨＢＶ，７天后血清ＤＨＢＶＤＮＡ阳性，给予药物治疗１０天，用斑点杂交方法检测用药前后血清ＤＨＢＶＤＮＡ，分析药物对血清ＤＨＢＶＤＮＡ是否有抑制作用，结果显示：ＨＳＳ大、小两个剂量组（分别为５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ和２００ｍｇ／ｋｇ／ｄ）均对ＤＨＢＶＤＮＡ有抑制作用，大剂量组出现ＤＨＢＶＤＮＡ抑制作用时间早于小剂量组，用药５天、１０天及停药３天血清ＤＨＢＶＤＮＡ中位抑制率显著高于生理盐水对照组（Ｐ＜０．０５）；两个剂量组均无停药反跳；生理盐水组用药前后ＤＨＢＶＤＮＡ的Ａ值比较差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。停药后３天肝组织病理光镜及电镜均显示ＨＳＳ组病变较生理盐水组轻。结论：肝细胞刺激物质有一定的保肝和抑制ＤＨＢＶＤＮＡ复制的作用     

磷甲酸钠在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒的抑制作用

以鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）静脉感染雏鸭为模型,分组腹腔注射磷甲酸钠（ＰＦＡ）２５０ｍｇ、１２５ｍｇ、６２．５ｍｇ／ｋｇ及生理盐水,观察治疗后鸭血清中ＤＨＢＶＤＮＡ及ＤＨＢｓＡｇ的动态变化,并检测肝、肾、脾及胰中ＤＨＢＶＤＮＡ的分布;提取肝脏中超螺旋ＤＮＡ（ＳＣＤＮＡ）,检测ＰＦＡ对ＤＨＢＶＤＮＡ复制的影响。结果表明：ＰＦＡ治疗第７天到第２１天,１２５ｍｇ和２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组对ＤＨＢｓＡｇ有显著的抑制作用;１２５ｍｇ和２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组治疗第１４、２１天对血清中ＤＨＢＶＤＮＡ有显著的抑制作用;１２５ｍｇ和２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组治疗第２１天肝及肾中ＤＨＢＶＤＮＡ明显下降;２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组治疗２１天对ＤＨＢＶ感染鸭肝细胞内ＤＨＢＶＲＣＤＮＡ、ＬＤＮＡ及ＳＣＤＮＡ的合成有明显抑制作用。可见,最大剂量２５０ｍｇ／ｋｇＰＦＡ每天２次,治疗２１天,对ＤＨＢＶ感染鸭血清中ＤＨＢｓＡｇ、血清及肝、肾中ＤＨＢＶＤＮＡ都有抑制作用,对脾、胰中ＤＨＢＶＤＮＡ抑制不明显。提示该药能抑制ＤＨＢＶ感染,但未能清除病毒,故停药后可出现反跳现象。     

肝细胞刺激物质对感染鸭乙型肝炎病毒的争论鸭体…

以感染鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）的北京雏鸭为体内实验动物模型，观察了肝细胞刺激物质（ＨＳＳ）对鸭乙型肝炎病毒的抗病毒作用，１日龄北京鸭实验感染ＤＨＢＶ，７天后血清ＤＨＢＶＤＮＡ阳性，给予药物治疗１０天，用斑点杂交方法检测用药前后血清ＤＨＢＶＤＮＡ，分析药物对血清ＤＨＢＶＤＮＡ有抑制作用，大剂量量组出现ＤＨＢＶＤＮＡ抑制作用时间早小剂量组，用药５天，１０天及停药３天血清ＤＨＢＶＤＮＡ中位抑制率显著高     

核酶对鸭乙型肝炎病毒感染体内抗病毒作用效果的观察

目的观察核酶在体内抗病毒作用效果。方法选择鸭乙型肝炎（ＤＨＢＶＬＪ－７６）及其鸭动物模型作为检测系统，将针对ＤＨＢＶＰｒｅ－Ｓ７３６位点的核酶（ＲｚＤＳ）插入ｐＪ１２０质粒构建成ｐＪ－ＲｚＤＳ。与痘苗病毒天坛７６１株（ＶＶ）同源重组后获得含ＲｚＤＳ的重组痘苗病毒（Ｖ－ＲｚＤＳ）。用ＤＨＢＶ感染１日龄北京鸭，分别在感染的同时、感染后２４小时和７２小时注射Ｖ－ＲｚＤＳ和ＶＶ，１０天后检测血清中ＤＨＢＶＤＮＡ和ＤＨＢｓＡｇ的含量。结果北京鸭在感染ＤＨＢＶ的同时注射Ｖ－ＲｚＤＳ，其ＤＨＢＶＤＮＡ和ＤＨＢｓＡｇ的含量均低于ＶＶ对照组，两组之间有显著性差异。结论提示ＲｚＤＳ对ＤＨＢＶ基因组复制和表达均有抑制作用，其抑制率分别为４５％和６３％。     

反义寡脱氧核苷酸在鸭体内抑制鸭乙型肝炎病毒复制与表达的研究

目的研究反义核酸的抗病毒作用。方法设计合成了针对鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）前Ｓ（ＰｒｅＳ）基因区第９５１９６８位核苷酸的硫代反义寡脱氧核苷酸（ＡＳＯＤＮ），以２０μｇ／ｇ体重／日剂量对３只腹腔感染ＤＨＢＶ５２毒株后，血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ阳性鸭连续静脉注射１０天，同时以等体积生理盐水注射另３只感染鸭作为对照。结果对照鸭注射生理盐水后，血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ阳性未见明显改变，肝组织ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交在３０与２３ｋｂ左右杂交信号明显。注射ＡＳＯＤＮ鸭在１０天后，２／３鸭血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ量显著降低，３／３鸭肝组织中３０ｋｂ左右的杂交信号显著减弱，２３ｋｂ左右未见杂交信号。结论说明该段ＡＳＯＤＮ在鸭体内能部分抑制ＤＨＢＶ的复制与抗原表达。     

土拨鼠肝炎病毒野毒及前C人工变异株的体外表达

１８９６和１８９８的Ｇ→Ａ变异是乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ变异的热点，１８９６变异导致ＨＢｅＡｇ翻译中断。这种变异被认为改变了ＨＢＶ的生物学特性，因而与慢性肝炎和重症肝炎相关。我们以人工变异的方法分别使野毒株土拨鼠肝炎病毒ＷＨＶ－８相当于ＨＢＶ１８９６及１８９６和１８９８位点产生Ｇ→Ａ变异，并构建了首尾相连的双体质粒。分别用这些质粒转染ＨｅｐＧ２细胞，结果其ＤＮＡ复制水平和转录水平未见明显差异。说明这种前Ｃ热点变异不影响ＷＨＶ复制。     

反义寡脱氧核苷酸在鸭体内抑制鸭乙型肝炎病毒复制与 …

目的 研究反义核酸的抗病毒作用。方法 设计合成了针对鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）前Ｓ（ＰｒｅＳ）基因区第９５１－９６８位核苷酸的硫代反义寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＯＤＮ），以２０μｇ／ｇ体重／日剂量对３只腹腔感染ＤＨＢＶ５．２毒株后，血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶ ＤＮＡ阳性鸭连续静脉注射１０天，同时以等体积生理盐水注射另３只感染鸭作为对照。结果 对照鸭注射生理盐水后，血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶ ＤＮＡ阳性未     

转染克隆HBVDNA的2.2.15细胞适应常规培养条件的研究

转染克隆ＨＢＶＤＮＡ的２．２．１５细胞适应常规培养条件的研究刘洪，谢建芬，张玲霞，任继明，陶陵，李泉根（中国人民解放军３０２医院病毒研究室，北京１０００３９）为了筛选抗－ＨＢＶ的有效药物，本实验室引进了具有分泌ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及合成完整Ｄａｎｅ...     

乙型肝炎病毒在丁型肝炎病毒包装中的作用机理研究

用含ＨＢＶ全基因和ＨＢＶ大、中、小分子表面蛋白基因的真核细胞表达质粒（ＣＭＶ－ＨＢＶ、ＣＭＶ－ＬＳ、ＣＭＶ－ＭＳ、ＣＭＶ－Ｓ）分别与含ＨＤＶ ｃＤＮＡ三聚体的重组质粒共转染ＣＨＯ细胞。转染后３天在上述４种转染细胞内及培养上清中均检出了ＨＤＶ ＲＮＡ和ＨＤＡｇ表明上述４种转染细胞的培养上清中均有ＨＤＶ病毒颗粒的包装和分泌。提示：ＨＤＶ病毒的包装可能仅需ＨＢＶ Ｓ 基因及其小分子表面蛋白的辅助。     

检测丁型肝炎病毒RNA打点杂交法的建立及其应用

经缺口平移法以ａ－３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记１．０ｋｂ的丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）ｃＤＮＡ片段为探针，采用蛋白酶Ｋ直接从血清中提取ＨＤＶＲＮＡ，建立了检测血清中ＨＤＶＲＮＡ的打点杂交法，其灵敏性可达１ｐｇ水平，与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ无交叉杂交反应；并应用于检测我国５９４９份ＨＢｓＡｇ阳性血清中的ＨＤＶＲＮＡ，共检出１７６份ＨＤＶＲＮＡ阳性，检出率为２．９５％。     

原位杂交法检测肝组织中丁型和乙型肝炎病毒核酸

利用国外引进的重组质粒获得纯化基因片段，分别以随机引物法和ＰＣＲ法制备地高辛素标记的ＨＢＶＤＮＡ探针和ＨＤＶｃＤＮＡ探针。用原位杂交法检测了石蜡包埋的肝组织切片ＢＶＤＮＡ和ＨＤＶＲＮＡ。４９例感染肝组织分为两组：丁肝组２３例；单纯乙肝组２６例，ＨＢＶＤＮＡ的检出率丁肝组（７８．２６％）与乙肝组（７６．９２％）无统计学差异；而ＨＤＶＮＡ的检出率丁肝组（６０．８７％）明显高于乙肝组（１５．３８％）。ＨＢＶＤＮＡ可见于受染肝细胞的胞核或胞浆内，而ＨＤＶＲＮＡ绝大部分见于肝细胞胞核。两种病毒核酸阳性细胞在肝组织中的分布特点大致相同：弥漫或散在地分布于肝小叶或假小叶内，或局灶性分布于小叶周边。ＨＤＶＲＮＡ阳性的肝组织都或多或少地同时存在ＨＢＶＤＮＡ。同一例肝组织中，ＨＢＶＤＮＡ阳性细胞从数量和颗粒密度上似略高于ＨＤＶＲＮＡ。将乙肝组和丁肝组两组病人肝内ＨＢ－ｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ及血清ＨＢｅＡｇ作了比较，各指标阳性率虽有差异，但均无统计学意义。因此，未发现ＨＤＶ感染对ＨＢＶ的复制有明显抑制作用。此结果对以往用血清学或免疫组化方法对ＨＤＶ的研究有所补充和深入，亦可为研究其它类型病毒性肝炎之间的重叠感染所借鉴。     

HDV基因在转染细胞中的复制和表达

ＨＤＶＲＮＡ转染细胞系的建立并表达ＨＤＶ病毒标志，为ＨＤＶ基因复制与表达，ＨＢＶ与ＨＤＶ相互影响等的研究提供了一个很好的细胞模型，是研究ＨＤＶ的一个重要工具和手段。本文就近年来有关ＨＤＶＲＮＡ转染细胞的建立、转染细胞系中ＨＤＶ基因复制表达的特点等研究近况作一综述。     

乙型肝炎病毒S基因129Leu和145Arg变异株的抗原表达？…

目的 研究我国发现的乙型病毒Ｓ基因突变株表达ＨＢｓＡｇ及ＤＮＡ免疫的特性。方法 用自乙肝疫苗免疫无保护婴儿血清中克隆的２株变异Ｓ基因片段,置换已知核苷酸序列并可表达及复制的ＨＢＶ１．２个拷贝全基因野毒株重组质粒Ｐ３．８Ⅱ的Ｓ基因,将重组质粒转染ＨｅｐＧ２细胞,用Ａｂｂｏｔｔ试剂和２４种单抗检测染细胞培养上清中ＨＢｓＡｇ的结合力。用重组质粒ＨｅｐＧ２细胞,用Ａｂｂｏｔｔ试剂和２４种单抗检测转染细胞培     

HBV-DNA与HBV-M检测结果的对比分析

我国为乙型肝炎病毒(ＨＢＶ)感染高发区。ＨＢＶ感染后血清学检测组合的标志模式多且复杂。由于ＰＣＲ方法的引入,可以直接检测病毒核酸,所以对患者体内ＨＢＶ复制及传染性有了更深刻地认识。如果仅以血清学检测结果作为实验依据,可能会漏检,因此,将ＨＢＶＤＮＡ与血清学?..     

受体导向药物L－HSA－AraAMP体内抗病毒效应的实验研究

采用受体导向药物乳糖化人血清白蛋白单磷酸阿糖腺苷（Ｌ－ＨＳＡ－ＡｒａＡＭＰ），对感染鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）的北京雏鸭作体内抗病毒效应实验研究。结果显示：与对照组（Ⅲ组）相比，单用ＡｒａＡＭＰ组（Ⅱ组）在用药期间对ＤＨＢＶＤＮＡ有明显抑制作用（Ｐ＜０．０５），但停药后有反跳现象；Ｌ－ＨＡＳ－ＡｒａＡＭＰ组（Ⅰ组）对ＤＨＢＶＤＮＡ抑制作用与Ⅱ组比较无显著差异（Ｐ＞０．０５），但Ⅰ组停药后持续有抑制病毒作用，且ＡｒａＡＭＰ的用量Ⅰ组比Ⅱ组小１６倍。     

乙肝病毒前S2抗原发光酶免疫方法的临床应用

建立乙肝病毒前Ｓ２抗原发光酶免疫方法，检测ＨＢＶ感染者血清，肝组织及其细胞器中的前Ｓ２，结果与ＨＢｅＡｇ，ＨＢｃＡｇ，ＨＢＶ ＤＮＡ等复制指标一致，某些肝内ＨＢＶ ＤＮＡ阴性者ＰＳ２阳性。这提示前Ｓ２是ＨＢＶ活跃复制的指标。前Ｓ２在肝内主要存于微粒体和核糖体中。前Ｓ２抗体阳性，与肝细胞破坏有关，急性和慢迁肝预示恢复，慢活肝，肝硬化和肝癌预示恶化。本法集发光反应的快速敏感及免疫反应的特异性于一身，敏     

慢性乙型肝炎肝内HBVDNA和HBsAg的双标记定位研究

应用原位杂交和免疫组化ＰＡＰ法双标记技术，结合病人乙型肝炎（乙肝）病毒血清学标志物检测结果，研究了３１例慢性乙肝病人肝穿刺组织中乙型肝炎病毒ＤＡＮ和ＨＢｓＡｇ的分布及意义。结果显示，肝辔内检ＨＶＤＮＡ２３例，ＨＢｓＡｇ２６例，二者同时检出者２１例。从同组病人肝组织的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ双标检测结果与其乙肝病毒血清学标志物检测结果的比较来看，肝组织内ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ同时很可能表明ＨＢＶ正     

乙型肝炎病毒复制过程的研究进展

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）复制周期是Ｓｕｍｍｅｒｓ和Ｍａｓｏｎ在１９８２年观察鸭乙肝病毒（ＨＢＶ）复制后描述的〔１〕。ＨＢＶ的复制首先是ＨＢＶＤＮＡ由不完整环状的补成完整的环状ＤＮＡ,再形成超螺旋ＤＮＡ（Ｓｕｐｅｎ－ｃｏｉｌｅｄＳｃＤＮＡ）,又称共价闭合...     

乙肝抗体阳性患者中检测HBV-DNA的意义

乙肝抗体阳性患者中检测ＨＢＶ┐ＤＮＡ的意义潘韶霞李守炳刘茂林徐静山葛汝村单独抗ＨＢｓ阳性者６８例，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ有５例阳性，阳性率７．３６％。说明血液中ＨＢｓＡｇ向抗ＨＢｓ转换后仍有部分患者存在ＨＢＶ的复制，可能与ＨＢＶ亚型的双重感染或病毒...     

中草药抗乙型肝炎病毒活性及其作用机理体外实验研究

用２．２．１５细胞株体外抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）药物实验模型，对４种中草药制剂体外抗ＨＢＶ活性及其机理进行了评价，结果表明；４种中草药对细胞的５０％毒性浓度（ＣＤ５０）分别为乾坤宁〉６４０ｍｇ／Ｌ，双黄连针剂〉６４０ｍｇ／Ｌ，复方仙茅浸膏水提取液１６０ｇ／Ｌ（生药计算），复方黄芪浸膏水提取液３２０ｇ／Ｌ（生药计算）。对病毒复制指标ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ和细胞内ＨＢＶＤＮＡ的５０％抑制浓度（ＩＤ５０