硫代反义寡核苷酸体外对HDV的抑制作用

观察硫代反义寡核苷酸（Ｓ－ＡＳＯＤＮ）体外对ＨＤＶ的抑制作用。方法在ＨＤＶ／ＨＢＶ感染人胎肝细胞中加入不同浓度的针对ＨＤＶ ＳｔｅｍⅠ区６８４－６９８位核苷酸的１５聚Ｓ－ＡＳＯＤＮ,分别采用ＥＬＩＳＡ和斑点杂交法检测上清液中ＨＤＡｇ和细胞中ＨＤＶ ＲＮＡ。结果ＨＢｓＡｇ、ＨＤＡｇ在感染后第２天至第１６天均可测出,以第４天至第１２天达高峰,加入Ｓ－ＡＳＯＮＤ（２、４、６μＭＯＬ／ｌ）ＲＧ ２ＧＤ ,     

中草药叶下珠不同品种和制剂体外抗乙型肝炎病毒的…

以２．２．１５细胞为模型，对不同品种，剂型和添加成份的叶下珠提取物进行了体外抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）活性的研究。结果显示，七种受试药物体外均有不同程度的抗ＨＢＶ活性。其中以沱茶珍珠草、胶囊１号作用最明显，在浓度为５００ｍｇ／Ｌ时对ＨＢｓＡｇ的抑制率可达１００％，而未显示出明显的细胞毒性，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交显示，胶囊１号对细胞内外ＨＢＶＤＮＡ的抑制呈剂量依赖型。还观察到，药物对病毒颗粒产一的抑     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以亲和层析技术纯化的肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）结构蛋白（５５０００，６７０００）为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ），然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞（Ｋ６Ｈ６／Ｂ５）融合，经ＥＬＩＳＡ间接法筛选出２株（２Ｄ５，１Ｂ７）分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体（Ｈ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。对２Ｄ５株初步鉴定表明，其抗体类型为ＩｇＧ１；培养上清中抗体浓度为２０～３０μｇ／ｍｌ；特异性免疫荧光反应证明２Ｄ５株Ｈ－ＭｃＡｂ是ＨＦＲＳＶ特异性；中和效价为１∶１６０；体外连续传代６个月仍稳定分泌抗体。     

肝硬变内HBV DNA及其五种抗原的表达及意义

取２２５例人肝硬变活检组织石蜡切片，检测了ＨＢＶＤＮＡ及其５种抗原。分别用免疫组化ＡＢＣ法检测ＨＢｘＡｇ、ｐｒｅ－Ｓ＿１和ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原；用ＰＡＰ法检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ；用原位杂交方法检测ＨＢＶＤＮＡ；用免疫组化、原位杂交双标记方法检测ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ、ＨＢｘＡｇ或ＨＢｃＡｇ。结果显示，阳性检出率ＨＢｓＡｇ为７０．０％（１２８／１８３例），ｐｒｅ－Ｓ＿１抗原为６４．４％（８５／１３２例）、ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原为６１．４％（８１／１３２例），ＨＢｘＡｇ为７５．３％（１１３／１５０例），ＨＢｃＡｇ为２２．４％（３９／１７４例），ＨＢＶＤＮＡ为６２．４％（５８／９３例）。双标阳性检出率ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ为３７．３％（１９／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｘ－Ａｇ为８６．３％（４４／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｃＡｇ为３９．２％（２０／５１例）。ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢＶ５种抗原阳性病例中８０％以上均伴有肝细胞不典型增生。这一结果表明，在我国肝硬变的发生发展与ＨＢＶ慢性感染有密切的关系。     

中草药叶下珠不同品种和制剂体外抗乙型肝炎病毒的实验研究

以２．２．１５细胞为模型，对不同品种、剂型和添加成份的叶下珠提取物进行了体外抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）活性的研究。结果显示，七种受试药物体外均有不同程度的抗ＨＢＶ活性。其中以沱茶珍珠草、胶囊１号作用最明显，在浓度为５００ｍｇ／Ｌ时对ＨＢｓＡｇ的抑制率可达１００％，而未显示出明显的细胞毒性。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交显示，胶囊１号对细胞内外ＨＢＶＤＮＡ的抑制呈剂量依赖型。还观察到，药物对病毒颗粒产生的抑制不仅在转录前水平，可能对ｍＲＮＡ的翻译水平也有影响。     

用ELISA微板法检测乙型肝炎病毒核心抗原

以双抗体包被的抗体夹心法，用微板ＥＬＩＳＡ检测血清乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢＣＡｇ），确定双包被工作浓度ＭＣ－抗－ＨＢｃ（效价１０００）为０．０４μｌ／孔，ＭＣ－抗－ＨＢｓ（１ｍｇ／ｍｌ）为３～４μｌ／孔；最佳裂解剂及其工作浓度为７％ＮＰ－４０巯基乙醇溶液。分别用不同的酶标记抗体检测，均证明双包被具有特异性。加入抗－ＨＢｃ进行阻断试验，其阻断率为７９．３％。对８４４例ＨＢｓＡｇ阴性的血清及１１４例ＨＢＶ－ＤＮＡ探针阴性血清用本法进行ＨＢｃＡｇ检测，均为阴性。在临床应用上，本法的阳性率明显高于试管法的，与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针的阳性符合率为９１．４％，并且特异性与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针的一致。     

慢性肝炎和肝癌病人血清中乙型肝炎病毒DNA的检测

为了了解慢性肝炎和肝癌病人患者体内乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）复制与ＨＢＶ血清标志之间的关系，用酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）、聚合酶链反应（ＰＣＲ）及斑点杂交方法对６１例慢性肝炎和４７例肝癌患者的ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、相关ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）、表面抗体（抗－ＨＢｓ）、核心抗体（抗－ＨＢｃ）、相关ｅ抗体（抗－ＨＢｅ）进行了检测。结果表明：ＨＢＶＤＮＡ在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、／抗－ＨＢｃ阳性的慢性肝炎和肝癌患者血清中的检出率分别为９０．５０％和５０．００％；在ＨＢｓＡｇ／抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ阳性者的检出率分别为４５．４０％和７．１４％；在ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｅＡｇ阴性／抗－ＨＢｅ阴性者中的检出率分别为６０．００％和４０．００％；ＨＢｓＡｇ阴性、／抗－ＨＢｃ阳性或／抗－ＨＢｅ阳性或／抗－ＨＢｓ阳性者中的检出率分别为２０．００％和２２．２２％；在血清学指标全阴性时，慢性肝炎和肝癌患者血清中ＨＢＶＤＮＡ的检出率均为０。实验提示：无论是肝炎或肝癌，在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ同时阳性时，ＨＢＶ复制最为活跃；在单独ＨＢｓＡｇ阳性时，ＨＢＶ有一定程度的复制；ＨＢＶ复制在肝癌细胞中受到一定程度的抑制。     

抗HBV最佳反义寡核苷酸片段的体外筛选

目的 寻找抗ＨＢＶ最佳反义寡核苷酸区段。方法 合成４种互补于ＨＢＶ不同区段的反义硫代寡核酸（ａｓＯＮ）,加入ＨＢＶ基因转染的肝癌细胞模型ＨｅｐＧ２２．２．１５,以ＥＬＳＡ法测定ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ含量。结果 互补于ｐｒｅ－Ｓ２翻译起始区的ａｓＯＮ（序列Ⅰ）抗ＨＢＶ基因表达作用最强（Ｐ〈０．０２）,对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ的最高表达抑制率分别为６６％和９１％,针对增强Ⅱ（ＥＮⅡ）的序列Ⅲ也有较强的     

不同慢性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA定量检测及其临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒ＤＮＡ含量的临床意义。了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）免疫标志不同状态的慢性肝病患者血清ＨＢＶＤＮＡ浓度及其临床意义。方法应用建立的竞争性聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法定量检测慢性肝炎（ＣＨ）５１例、肝硬化（ＬＣ）３６例、原发性肝癌（ＰＨＣ）３８例的血清ＨＢＶＤＮＡ浓度。结果ＨＢＶＤＮＡ阳性的ＣＨ患者血清ＨＢＶＤＮＡ浓度为４．３６ｌｏｇ１０ＨＢＶＤＮＡ拷贝５０μｌ（下同），ＬＣ为４．５５，ＰＨＣ为４．４３，三组间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；血清ＨＢＶ五项免疫标志均阴性或抗－ＨＢｓ阳性的慢性肝病患者中，有３７．５％患者存在低水平ＨＢＶ复制；ＨＢｅＡｇ阳性患者的ＨＢＶＤＮＡ浓度总体上明显高于抗－ＨＢｅ阳性组，但其中部分患者的ＨＢＶＤＮＡ浓度也很高。结论提示ＨＢＶ的复制状态与慢性肝病的病期无明显关系；在抗－ＨＢｅ阳性的患者中存在个体差异，故不能仅依据抗－ＨＢｅ阳转来判断ＨＢＶ复制减少或停止。     

HBcAg/HBeAg对慢性乙型肝炎患者PBMC中Th1/Th2类细胞应答的影响

目的 探讨ＨＢｃＡｇ／ＨＢｅＡｇ对慢性乙型肝炎患者ＰＢＭＣ中Ｔｈ１／Ｔｈ２类细胞应答的影响。方法 用套式ＰＣＲ法检测６４便慢性ＨＢＶ感染者ＰＢＭＣ中ＨＶＢ ＤＮＡ;分别用ＰＨＡ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢｅＡｇ体外培养;ＥＬＩＳＡ法检测ＰＢＭＣ产生Ｔｈ１类细胞因子（ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ）和Ｔｈ２类细胞因子（ＩＬ－４、ＩＬ－１０）的含量。结果 表明ＨＢＶ ＤＮＡ阳性组和阴性组相比,无论是在ＰＨＡ还是在ＨＢｃＡ     

用肾综合征出血热病毒结构蛋白体外免疫正常人外周血淋巴细胞制备单克隆抗体

用亲和层析提取的肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）结构蛋白（５０ｋＤ和６７ｋＤ）为抗原，在体外免疫正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）。ＰＢＬ经亮氨酸甲基酯处理后，在含有ｓＰＷＭ－Ｔ、ＩＬ－２及不同浓度抗原的培养基中培养６ｄ，计数存活ＰＢＬ数量。结果表明，在上述体外免疫条件下存活ＰＢＬ的数量与抗原剂量呈正相关。将此体外免疫的ＰＢＬ与人－鼠杂交瘤细胞（Ｋ６Ｈ６／Ｂ５）融合，获得了３株分泌抗ＨＦＲＳＶ人单抗的杂交瘤细胞，表明在体外免疫条件下，正常人ＰＢＬ能够对ＨＦＲＳＶ结构蛋白发生特异性免疫应答。     

磷甲酸钠在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒的抑制作用

以鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）静脉感染雏鸭为模型,分组腹腔注射磷甲酸钠（ＰＦＡ）２５０ｍｇ、１２５ｍｇ、６２．５ｍｇ／ｋｇ及生理盐水,观察治疗后鸭血清中ＤＨＢＶＤＮＡ及ＤＨＢｓＡｇ的动态变化,并检测肝、肾、脾及胰中ＤＨＢＶＤＮＡ的分布;提取肝脏中超螺旋ＤＮＡ（ＳＣＤＮＡ）,检测ＰＦＡ对ＤＨＢＶＤＮＡ复制的影响。结果表明：ＰＦＡ治疗第７天到第２１天,１２５ｍｇ和２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组对ＤＨＢｓＡｇ有显著的抑制作用;１２５ｍｇ和２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组治疗第１４、２１天对血清中ＤＨＢＶＤＮＡ有显著的抑制作用;１２５ｍｇ和２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组治疗第２１天肝及肾中ＤＨＢＶＤＮＡ明显下降;２５０ｍｇ／ｋｇ剂量组治疗２１天对ＤＨＢＶ感染鸭肝细胞内ＤＨＢＶＲＣＤＮＡ、ＬＤＮＡ及ＳＣＤＮＡ的合成有明显抑制作用。可见,最大剂量２５０ｍｇ／ｋｇＰＦＡ每天２次,治疗２１天,对ＤＨＢＶ感染鸭血清中ＤＨＢｓＡｇ、血清及肝、肾中ＤＨＢＶＤＮＡ都有抑制作用,对脾、胰中ＤＨＢＶＤＮＡ抑制不明显。提示该药能抑制ＤＨＢＶ感染,但未能清除病毒,故停药后可出现反跳现象。     

应用聚合酶链反应技术检测肝组织中的HBV－DNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对４２例肝活切组织石蜡切片中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ进行检测，并与乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的免疫组织化学及血清学检测进行比较，ＨＢＶ－ＰＣＲ阳性率为７３．８％，高于组织及血清ＨＢｓＡｇ阳性率（分别为５９．５％和５０．０％）。３例病理形态呈肝炎改变，而血清ＨＢｓＡｇ（─）的肝组织中有２例检出ＨＢＶ－ＤＮＡ，提示ＰＣＲ的高度敏感性和准确性。８３．３％的门脉性肝硬变和８７．５％的肝细胞癌组织中ＨＢＶ－ＰＣＲ呈阳性，进一步证实了上述两病与ＨＢＶ的关系密切。我们还发现肝细胞淤胆患者ＨＢＶ感染率较高，ＨＢＶ－ＤＮＡ及组织ＨＢｓＡｇ阳性比例各为６／９和４／８。     

体内、外血小板活化时血浆11-去氢-血栓烷B2的改变及其意义

目的和方法：用花生四烯酸（ＡＡ）诱导正常人（ｎ＝１２）富血小板血浆（ＰＲＰ）血小板活化。结果：ＡＡ组、消炎痛＋ＡＡ组及对照组血浆１１－去氢－血栓烷Ｂ２（ＤＨ－ＴＸＢ２）浓度分别为：（５１±２５、５．０±２．８及５４±３２）ｎｇ／Ｌ，三组之间无显著差别；但ＡＡ组ＴＸＢ２与Ｐ－选择素浓度均较对照组显著升高（Ｐ＜００１），消炎痛对两者的升高有几乎完全的抑制作用。２０例急性期脑梗塞患者血浆ＤＨ－ＴＸＢ２浓度（１０８～５５０ｎｇ／Ｌ）远高于对照组（１０～９３ｎｇ／Ｌ），无重叠，但两组之间ＴＸＢ２与Ｐ－选择素浓度均有５０％左右重叠。另６例患者服用９００ｍｇ阿司匹林后血浆ＤＨ－ＴＸＢ２下降４３％（Ｐ＜００１），但服药前后ＴＸＢ２及Ｐ选择素浓度无显著改变。结论：ＤＨ－ＴＸＢ２作为ＴＸＢ２的体内主要酶代谢产物，是反映体内血小板活化的一个较好的指标     

孕产妇和新生儿血清乙肝免疫标志物与HBV—DNA检测结果的比较…

利用ＨＢＶ－ＤＮＡ出现先于血清其它血清学指标理论依据。采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对乙肝免疫标志物至少一项改变的２００例孕产妇、新生儿血清进行ＰＣＲ扩增，结果有１０８份标本ＨＢＶ ＤＮＡ阳性、总阳性率为５４％。其中ＨＢｅＡｇ阳性率８３．３％（７０／８４），ＨＢｓＡｇ阳性率４８％（２４／５０），ＨＢｅＡｂ阳性率１０．５％（２／１９），ＨＢｓＡｂ９．８％（２／２２），可见ＰＣＲ早期诊断，判断其传染性，     

蝎毒抗癌多肽对肝肿瘤的抑制作用研究

目的：观察蝎毒抗癌多肽（ＡＰＢＭＶ）对肝肿瘤的抑制作用。方法：噻唑蓝（ＭＴＴ）法、台盼蓝拒染法、集落形成以及Ｈ２２荷瘤小鼠模型。结果：ＡＰＢＭＶ导致ＳＭＭＣ－７７２１细胞代谢ＭＴＴ的能力显著低于对照组,ＡＰＢＭＶ的ＩＣ５０为１１．３３μｇ／ｍＬ;ＡＰＢＭＶ能显著抑制该细胞的生长,剂量－效应关系明显,其ＩＣ５０分别为１５．８７μｇ／ｍｌ、１３．５０μｇ／ｍＬ和８．７０μｇ／ｍＬ;当ＡＰＢＭＶ的浓度〉     

PEA单抗相对亲和力及抗原结合位点的测定

用绿脓杆菌外毒素Ａ（ＥＰＡ）免疫后的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞，经融合后制备出４株抗ＰＥＡ的单克隆抗体。从５０％最大结合的单克隆抗体浓度分析可知，４株单克隆抗体的相对亲和力为４Ｄ１－４Ｄ３〉１Ｄ１－５Ｆ１１〉１Ｄ７－４Ｃ１０〉４Ｈ５－３Ｅ９。通过ＥＬＩＳＡ相加实验证实：４株单克隆抗体均识别相同的ＰＥＡ抗原位点。     

人工细胞抗高血压因子对人脐静脉VSMC胞浆及核内Ca^2＋水平的影响

采实验用Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ染色在激光扫描共聚焦显微镜下观察了红细胞抗高血压因子（ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ,ＡＨＦ）对人脐静脉ＶＳＭＣ胞浆（〗Ｃａ＾２＋〖）及核内（〖Ｃａ＾２＋〗ｎ）游离钙离了瓣影响。结果表明：ＡＨＦ（１０＾－４ｇ／ｍＬ）明显抑制Ｂａｙ ｋ８６４４（１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）ＫＣｌ（６０ｍｍｏｌ／Ｌ）,ＡｎｇⅡ（１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）及ＩＰ３（１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）     

不同慢性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA定量检？…

目的 探讨乙型肝炎病毒ＤＮＡ含量的临床意义。了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）免疫标志不同状态的慢性肝病患者血清ＨＢＶＤＮＡ浓度及共临床意义。方法 应用建立的竞争性聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法定量检测慢性肝炎（ＣＨ）５１例、肝硬化（ＬＣ）３６例、原发性肝癌（ＰＨＣ）３８例的血清ＨＢＶ ＤＮＡ浓度。结果 ＨＢＶＤＮＡ阳性的ＣＨ患者血清ＨＢＶ ＤＮＡ浓度为４．３６ｌｏｇ１０ＨＢＶＤＮＡ拷贝／５０μｌ，ＬＣ为４．     

广西不同人群庚型肝炎病毒感染状况的调查

目的 了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在广西柳州地区不同人群中的感染状况，并比较静脉毒瘾者与健康体检者ＨＧＶ，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）与ＨＧＶ共同感染的特点，方法 应用酶联免疫法（ＥＬＡ）检测抗－ＨＧＶ，抗－ＨＣＶ，ＨＢＶＭ（ＨＢｓＡｇ，ＨＢｓＡｂ，ＨＢｅＡｇ，ＨＢｅＡｂ，ＨＢｃＡｂ），并对抗－ＨＧＶ阳性者随机抽取２０例（１９％）进一步用逆转录套式ＰＣＲ（ＰＴ－ｎＰＣＲ）法检测