miRNA-451在膀胱癌细胞中的表达及对其生物学功能的影响

目的:检测微小RNA(microRNA,miRNA)在膀胱癌细胞中的表达及探讨其对膀胱癌细胞迁移、侵袭、黏附及增殖能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qPCR)检测miR-451在不同转移潜能膀胱癌细胞株T24、5637、J82中的表达;使用Lipo-2000脂质体将miR-451拟似物(miR-451 mimics)转染入5637细胞,qPCR验证其转染效率,采用划痕愈伤实验、Transwell实验、细胞黏附及MTT增殖实验分别检测细胞二维迁移、侵袭、黏附及增殖能力的变化。结果:miR-451在T24、5637及J82中的相对表达量分别为0.06±0.001、0.13±0.024、1(将J82细胞中其表达量标准化为1),差异显著,具有统计学意义(P0.01);miR-451过表达后,5637细胞的迁移、侵袭、黏附能力及增殖率显著降低,具有统计学意义(P0.05)。结论:miR-451在不同膀胱癌细胞中差异表达,其表达异常可影响癌细胞生物学功能,这为膀胱癌靶向分子治疗提供了新的切入点。     

RNA干扰抑制JMJD3基因表达对肝癌细胞生长,增殖和侵袭的影响

目的研究小干扰RNA(siRNA)抑制含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)基因对肝癌细胞QGY-7703和HepG2的生长、增殖和侵袭能力的影响。方法利用RNA干扰技术沉默JMJD3(siR-JMJD3),以非特异性序列(pSilencer 2.1)转染肝癌细胞QGY-7703细胞和HepG2细胞作为阴性对照,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法、集落形成、Transwell侵袭实验来检测肝癌细胞生长、增殖和侵袭能力的变化。结果 Western Blot检测结果显示,转染siR-JMJD3质粒的试验组成功抑制肝癌细胞中JMJD3的蛋白表达水平。MTT结果显示转入siR-JMJD3后,QGY-7703和HepG2细胞的生长活性与对照组相比分别降低了约25%和17%。集落形成结果显示2种细胞系的集落形成数分别降低了约31%和25%。Transwell侵袭实验结果显示穿膜细胞数分别下降了约44%和47%。结论应用siRNA技术能有效抑制JMJD3基因的表达,同时有效抑制肝癌细胞QGY-7703和HepG2体外生长、增殖和侵袭,为肝癌的生物学治疗提供了新思路。     

MTA1基因沉默对宫颈癌细胞增殖及转移能力的影响

【】 目的 探讨MTA1基因沉默对宫颈癌细胞转移增殖的影响。方法 用慢病毒转染法稳定转染Siha细胞,转染同时进行实验分组。用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定宫颈癌Siha、Hela细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达。Transwell体外侵袭实验检测转染后Siha细胞的迁移能力,MTT检测法和克隆形成实验法检测转染后Siha细胞的细胞增殖能力,FACS细胞凋亡法检测转染后Siha细胞的细胞凋亡率,PI-FACS细胞周期法检测转染后Siha细胞的各个生长周期的细胞数。结果 (1)Transwell体外侵袭实验：相比NC组,KD组Transwell转移率经T-Test分析P=2.61E-08<0.05。(2)MTT检测结果表明：相比NC组,KD组细胞增殖减缓。(3)克隆形成实验结果显示：相比NC组,KD组克隆数经T-Test分析P值=0.0006<0.05。(4)FACS细胞凋亡：相比两个对照组,KD组凋亡率经T-Test分析P<0.05。结论 MTA1基因促进宫颈癌细胞的转移和增殖,沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞增殖及迁移能力下降,加速宫颈癌细胞的凋亡,为抑制肿瘤转移奠定实验基础,最后为宫颈癌的新型药物性靶向治疗提供有力的实验依据。     

MTA1基因沉默对宫颈癌细胞增殖及转移能力的影响

目的:探讨MTA1基因沉默对宫颈癌细胞转移增殖的影响。方法:用慢病毒转染法稳定转染Siha细胞,转染同时进行实验分组。用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定宫颈癌Siha、Hela细胞中MTA1 m RNA和蛋白的表达。Transwell体外侵袭实验检测转染后Siha细胞的迁移能力,MTT检测法和克隆形成实验法检测转染后Siha细胞的细胞增殖能力,FACS细胞凋亡法检测转染后Siha细胞的细胞凋亡率,PI-FACS细胞周期法检测转染后Siha细胞的各个生长周期的细胞数。结果:(1)Transwell体外侵袭实验:相比NC组,KD组Transwell转移率经T-Test分析P=2.61E-080.05。(2)MTT检测结果表明:相比NC组,KD组细胞增殖减缓。(3)克隆形成实验结果显示:相比NC组,KD组克隆数经T-Test分析P值=0.000 60.05。(4)FACS细胞凋亡:相比两个对照组,KD组凋亡率经T-Test分析P0.05。结论:MTA1基因促进宫颈癌细胞的转移和增殖,沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞增殖及迁移能力下降,加速宫颈癌细胞的凋亡,为抑制肿瘤转移奠定实验基础,最后为宫颈癌的新型药物性靶向治疗提供有力的实验依据。     

Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的可能机制.方法 运用脂质体介导的转染方法将miR-145阻遏物(miR-145 inhibitors)转染人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以inhibitor negative control(inhibitor NC)作为阴性对照,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-145的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析.结果 (1)miR-145 inhibitors组细胞增殖活性明显高于inhibitor NC组(P<0.05);(2)划痕后miR-145 inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验均显示转染miR-145 inhibitors后,MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01,P<0.05);(4)生物信息学方法预测miR-145的靶基因中,部分发挥了促进细胞增殖、侵袭及迁移的生物学功能.结论 (1)miR-145对人三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用;(2)miR-145可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用.     

氟伐他汀诱导人膀胱癌细胞凋亡抑制细胞增殖与迁移的研究

目的研究羟甲戊二酸单酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂——氟伐他汀在体外对人膀胱癌T24细胞凋亡、增殖和迁移及侵袭能力的影响,并探讨相关分子机制。方法 MTT法检测氟伐他汀对T24细胞增殖的影响;流式细胞术（PI和Annexin V双染法）检测细胞凋亡率的变化;划痕愈合和Transwell试验检测氟伐他汀对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测Bax、Cleaved-caspase-3等蛋白的表达情况。结果氟伐他汀在体外能显著抑制T24细胞的增殖,成明显浓度和时间依赖性;可以显著诱导肿瘤细胞凋亡;能显著抑制T24细胞的迁移和侵袭能力。结论氟伐他汀能显著诱导T24细胞发生凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

DACT1在结肠癌中的表达及其作用

目的 探讨DACT1在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭的影响.方法 Western blot检测DACT1在结肠癌组织中的表达;CCK-8进行细胞增殖实验;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;用Transwell小室法检测细胞转染前后侵袭力改变.结果 21例结肠癌组织中有14例DACT1表达增高,DACT1高表达的SW480增殖能力明显增强(P<0.05),细胞划痕后24 h,DACT1高表达的细胞划痕宽度恢复70%,而对照组划痕宽度恢复20%(P<0.05).实验组SW480细胞侵袭数量明显高于对照组(P<0.05).结论 DACT1在结肠癌中高表达并促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

Ras同源类似物小干扰RNA对乳腺癌细胞恶性表型的影响

目的观察下调Ras同源类似物E(RhoE)表达对人乳腺癌细胞231生物学行为的影响。方法蛋白质印迹技术检测小干扰RNA(siRNA)转染前后RhoE在乳腺癌细胞231中的表达;RhoE siRNA的细胞转染用lipofectamine 2000脂质体法;Cell Counting Kit-8检测转染细胞及对照细胞的增殖变化;损伤刮擦试验和体外侵袭实验(Transwell小室)分别检测转染细胞及对照细胞的迁移与侵袭能力。结果 RhoE在乳腺癌细胞231中的表达较高;成功转染RhoE siRNA的乳腺癌细胞,蛋白质印迹显示RhoE的表达被明显的抑制;RhoE的表达被抑制后对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有着明显的促进作用。结论下调RhoE表达能够明显促进乳腺癌细胞的增殖﹑迁移和侵袭,RhoE可能在乳腺癌的发生发展中起着重要作用。     

反义miR-224对人胰腺癌细胞系Aspc-1和Bxpc-3侵袭、迁移的影响及机制研究

目的分析miR-224对胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响并探讨其分子机制。方法用miR-224反义寡核苷酸(ASO)降低胰腺癌细胞中miR-224的表达,通过Transwell实验和划痕实验观察miR-224 ASO对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,用western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9表达水平的变化。结果与空白对照组和转染无义ASO组相比,miR-224 ASO组miR-224的表达降低(P均0.05);Transwell实验和划痕实验结果显示miR-224 ASO组胰腺癌细胞的侵袭、迁移能力下降(P均0.05),MMP-2和MMP-9表达水平下降(P均0.05)。结论降低miR-224的表达可有效抑制胰腺癌细胞的侵袭和迁移;miR-224有可能成为胰腺癌侵袭转移调控的新靶点。     

洛铂抑制膀胱癌细胞增殖及诱导凋亡机制的研究

目的研究洛铂对人膀胱癌细胞的抑制作用,并揭示其可能的作用机制。方法体外常规培养人膀胱癌细胞株5637。利用MTT细胞增殖法检测洛铂的细胞毒性;采用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒在流式细胞仪上检测癌细胞的凋亡程度;通过伤口愈合实验观察细胞的迁移;通过Transwell小室测定评估洛铂对5637细胞侵袭和迁移能力的影响;利用蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡基因的表达。结果洛铂抑制人膀胱癌细胞并诱导其凋亡,下调膀胱癌5637细胞Survivin和Bcl-2的表达水平,上调其Bax和Caspase-3的表达水平。结论洛铂的细胞毒性诱导人膀胱癌细胞凋亡,有利于洛铂对膀胱癌治疗的深入研究。     

miR-125b靶向STAT3调控舌鳞状细胞癌增殖、迁移、侵袭机制的研究

目的 对miR-125b靶向STAT3调控舌鳞状细胞癌增殖、迁移、侵袭的机制进行研究.方法 采用实时荧光PCR法检测miR-125b在舌鳞状细胞癌癌组织及癌旁组织中的表达,采用MTT法检测细胞的增殖能力;采用Transwell法检测miR-125b对舌鳞状细胞癌细胞的侵袭作用;采用划痕实验检测舌鳞状细胞癌细胞的迁移能力...     

白藜芦醇通过抑制Wnt通路对人卵巢癌细胞增殖、迁移影响的机制研究

目的探讨白藜芦醇对人上皮性卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测对照组(二甲基亚砜)、20μg/ml、40μg/ml的白藜芦醇和阳性对照组(40μg/ml顺铂)作用于SKOV3细胞48 h后对细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测白藜芦醇对SKOV3细胞法迁移能力的影响; Transwell实验检测白藜芦醇对SKOV3细胞侵袭能力的影响; Western blot和q-RT-PCR分别检测白藜芦醇对SKOV3细胞内Wnt3a、β-catenin蛋白质以及mRNA表达的影响。结果白藜芦醇可显著抑制SKOV3细胞的增殖抑制率,且在一定范围内呈浓度依赖性(P 0. 05);此外,白藜芦醇可显著抑制SKOV3细胞的迁移距离(P 0. 05),抑制SKOV3细胞侵袭数(P 0. 05); Western blot和q-RT-PCR实验结果显示白藜芦醇可抑制SKOV3细胞内Wnt3a、β-catenin蛋白质以及mRNA表达水平。结论白藜芦醇可抑制人上皮性卵巢癌细胞SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,这一作用可能与抑制Wnt3a/β-catenin信号转导通路有关。     

胃癌细胞中STAT1的表观遗传学调控机制的研究

目的研究抑制信号传导和转录激活因子1(STAT1)基因表达对胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭、迁移等表观遗传学特性的影响。方法将胃癌细胞分为三组:空白对照组不做任何处理,空载体对照组、STAT1 SiRNA处理组分别转染SiRNA和特异性干扰STAT1基因表达的STAT1 SiRNA。蛋白质印迹法(Western Blot)检测STAT1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性;Transwell法检测MKN-45细胞侵袭、迁移能力。结果抑制STAT1表达后,MKN-45细胞的增殖活性、侵袭以及迁移能力显著降低(P0.05),且STAT1 SiRNA处理组细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9表达量较空白对照组明显降低(P0.05);空载体对照组与空白对照组细胞的增殖活性、侵袭以及迁移能力、VEGF、MMP-9、MMP-2表达量比较差异均无显著性(P0.05)。结论 STAT1可能通过调控肿瘤细胞的转移能力以及血管生成等抑制胃癌细胞增殖及侵袭、迁移能力。     

营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响

目的探讨营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响。方法复苏培养人脑胶质瘤U251细胞,建立转染小干扰RNA(siRNA)的NAF1组(si-NAF1组)、阴性对照组(si-NC组)、未转染siRNA对照组(control组),采用CCK-8实验检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力、细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力、Transwell法观察各组细胞侵袭能力变化。结果与control组比较,NAF1-siRNA干预U251细胞后,si-NAF1组NAF1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05),其增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞增殖能力下降,克隆形成能力明显减弱,迁移能力明显降低,穿过Transwell膜的细胞数量明显减少(P均<0.05)。si-NC组与control组各项结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染siRNA后NAF1表达下降,进而下调PCNA水平,抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖能力;同时MMP-9蛋白表达水平下降,抑制U251细胞的迁移和侵袭能力。     

siRNA干扰技术沉默p66SHC对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨干扰p66shc基因表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、迁移的影响。方法实验分为对照组(不做任何处理)、NC-siRNA组和p66SHC-siRNA组,NC-siRNA组、p66SHC-siRNA组通过Lipofectamine 2000将特异性siRNA转染入结直肠癌HCT116细胞中。荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中p66SHC的表达量;四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell法观察细胞迁移、侵袭的变化;Western Blot检测细胞EMT相关蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)的水平。结果采用siRNA干扰HCT116细胞中p66SHC蛋白的表达后,细胞的增殖能力显著下降(P0.05),明显抑制细胞侵袭、迁移能力(P0.05),E-cadherin蛋白的水平明显上调(P0.05),Vimentin、N-cadherin蛋白的表达水平显著下调(P0.05)。结论干扰p66SHC基因的表达能阻碍EMT的发生,从而降低结直肠癌细胞的增殖、侵袭以及迁移能力。     

膜蛋白NMHC ⅡA的表达对膀胱癌细胞侵袭和转移的影响

目的近年来,非肌肉肌浆球蛋白重链ⅡA(NMHCⅡA)在肿瘤细胞中的作用备受关注。笔者团队前期研究发现高表达的NMHCⅡA可以作为预示膀胱癌患者不良预后的分子标志物,但其在膀胱癌发生发展过程中的作用尚不清楚。方法采用实时荧光定量PCR和western blot分析膀胱癌细胞株中NMHCⅡA的表达情况,采用划痕实验检测细胞的迁移能力及Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果沉默内源性NMHCⅡA表达后能降低膀胱癌细胞侵袭及转移能力。结论 NMHCⅡA可促进膀胱癌细胞侵袭及转移能力。     

Na+,K+-ATP1b1对肝癌细胞生长侵袭能力影响的研究

目的:探讨Na ,K -ATP1b1(ATP1b1)对肝癌细胞生长及侵袭能力的影响。方法:将ATP1b1表达质粒ATP1b1-CMV-FLAG转染肝癌细胞SMMC-7721,以空质粒转染作对照,通过RT-PCR测定ATP1b1的mR-NA表达,在光镜下观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞生长增殖,Transwell细胞侵袭实验分析肝癌细胞的侵袭能力。结果:ATP1b1-CMV-FLAG转染后,SMMC-7721的ATP1b1mRNA表达水平明显增高(P<0.05),转染ATP1b1-CMV-FLAG组、pFLAG-CMV-1组和脂质体组的ATP1b1mRNA表达水平分别为1.159、0.182和0.093;转染ATP1b1-CMV-FLAG的SMMC-7721细胞呈变性改变,其生长受到抑制,转染相同DNA浓度的ATP1b1-CMV-FLAG组与pFLAG-CMV-1组对细胞生长的抑制效应有显著性差异(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验显示转染ATP1b1-CMV-FLAG组的SMMC-7721细胞的体外侵袭力明显受抑制(P<0.01)。结论:实验结果说明了促进ATP1b1表达能抑制肝癌细胞的生长及侵袭行为。     

下调Met表达对骨髓瘤RPMI 8226细胞生物学行为的影响

目的:探讨下调c-Met表达对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将RPMI 8226细胞根据转染,分为对照组(RPMI8226细胞不做转染)、RPMI 8226/shRNA-control组和RPMI 8226/shRNA-Met组。采用Western blot检测c-Met蛋白表达水平以验证转染情况;采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡;与ECM(FN和Matrigel)和ECV304细胞的粘附检测其粘附能力;Transwell法检测细胞侵袭能力。结果:shRNA-Met可成功转染于RPMI 8226细胞,并有效抑制c-Met的表达,下调c-Met表达能有效抑制RPMI8226细胞增殖。与对照组相比较,shRNA-Met组在G_0/G_1期细胞比例和凋亡率(sub-G_1)明显增加,而粘附率和迁移细胞的数量均明显下降;而与对照组相比,shRNA-control组各项指标均未见统计学差异(P0.05)。结论:下调Met表达可影响骨髓瘤RPMI 8226细胞的增殖、粘附、侵袭和凋亡等生物学行为。     

RNAi沉默ROCK-1基因抑制人视网膜母细胞瘤细胞株Y79的增殖、侵袭和转移

目的探讨利用RNA干扰技术(RNAi)沉默人视网膜母细胞瘤Y79细胞株ROCK-1基因对细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法实验设空白对照组、阴性脂质体组、实验组。转染后48 h,采用半定量RT-PCR检测ROCK-1、MMP9和CXCR4 mRNA的相对表达变化,采用Western blot检测ROCK-1、MMP9和CXCR4蛋白的表达变化。采用MTT法在转染后24 h、48 h、72 h分别检测细胞的生长情况。采用Transwell小室检测转染后细胞的侵袭和迁移能力。结果与空白对照组和阴性对照组相比,转染组细胞ROCK-1、MMP9和CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显下调;细胞生长活力显著下降、凋亡比率显著增加;基因沉默显著抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力,差异均具有统计学意义。结论应用ROCK-1-siRNA转染人视网膜母细胞瘤Y79细胞株,可有效抑制细胞的增殖、侵袭和迁移。小干扰RNA治疗有望成为人视网膜母细胞瘤靶向治疗的新手段。     

miR-21对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响

目的探讨miR-21对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响。方法采用不同浓度的miR-21慢病毒转染乳腺癌MCF-7细胞,通过MTT实验检测乳腺癌MCF-7细胞增殖情况,采用免疫印迹与双荧光素酶实验检测miR-21与PDCD4蛋白的调控关系,使用划痕愈合实验及Transwell侵袭实验检测miR-21对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响。结果对照组与使用浓度为0、20、40 nmol/L的miR-21-inhibitor慢病毒转染后的乳腺癌MCF-7细胞增殖速度分别为(81.24±4.65)×10`4、(72.15±6.19)×10~4、(70.25±5.59)×10~4、(52.92±7.08)×10~4,差异均统计学意义(P0.05)。抑制miR-21表达后,PDCD4蛋白的表达水平相应下调,且转染miR-21-inhibitor后,野生型PDCD4-3'非翻译区的表达活性受到一定程度抑制。抑制miR-21表达后,乳腺癌MCF-7细胞的侵袭、迁移能力均受到抑制,miR-21-inhibitor组与对照组细胞侵袭数量及细胞迁移率比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-21通过调控PDCD4蛋白的表达以影响乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭行为。