类风湿关节炎患者滑膜组织和外周血CD4+T细胞的凋亡分析

类风湿关节炎 (RheumatoidArthritis ,RA)是一种累及全身多关节的自身免疫性炎症性疾病 ,其病理特征之一为炎性滑膜浸润大量CD4 + T细胞 ,滑膜细胞增生及血管翳形成 ,其机理仍未阐明。有学者认为RA的发病与细胞凋亡过程异常有关 ,并有多种细胞参与 ,包括滑膜细胞、成纤维细胞、淋巴细胞、软骨细胞等[1] 。本实验应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL)和流式细胞术 ,探讨细胞凋亡在RA发病机制中的作用。1　材料与方法1 1　标本　RA患者滑膜组织和外周血取自 8例RA病人 ,RA诊断根据 1987年美国风湿病学会(ACR)修订…     

CyclinB1和CyclinD3基因在类风湿关节炎滑膜组织中的表达

滑膜衬里层增厚是类风湿关节炎的重要病理学特征之一，但机制不清。本研究用核酸分子原位杂交技术检测反映细胞增殖状况的细胞周期蛋白基因ＣｙｃｌｉｎＢ１和ＣｙｃｌｉｎＤ３在１０例ＲＡ、３例骨关节炎及４例正常关节滑膜组织的ｍＲＮＡ表达水平。发现ＣｙｃｌｉｎＢ１ｔ ＣｙｃｌｉｎＤ３在ＲＡ滑膜衬里层表达明显高于对照组，提示滑膜细胞的原位增殖在ＲＡ滑膜衬里层增厚中可能起一定作用。     

CD147分子通过VEGF促进类风湿关节炎滑膜组织中的血管新生

目的观察类风湿关节炎(RA)滑膜组织中CD147表达强度与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平间的相关性,并探讨成纤维样滑膜细胞(FLS)表面CD147的水平变化对VEGF表达的影响。方法收集15例RA患者滑膜,以4例骨关节炎(OA)患者滑膜作对照,采用免疫组织化学SP染色方法检测滑膜组织中CD147和VEGF的表达;体外原代培养FLS细胞,分别加入CD147抗体,PI3K通路阻断剂,MAPK通路的ERK1/2、P38及JNK阻断剂等作用FLS细胞,ELISA检测细胞培养上清中VEGF的表达水平。结果与4例OA滑膜组织CD147和VEGF表达相比,15例RA滑膜组织中均有CD147、VEGF均高表达。其中,表达CD147的细胞主要为成纤维样滑膜细胞、单核-巨噬细胞和淋巴细胞;表达VEGF的细胞主要为成纤维样滑膜细胞、微血管周围成纤维样细胞及血管平滑肌细胞。滑膜组织中CD147和VEGF的表达强度间具有统计学意义。ELISA结果显示,在使用LY294002或抗HAb18GmAb阻断CD147表达后,VEGF的表达量显著下降(P<0.05);而MAPK阻断剂(PD98059、SP600125和SB203580)等对VEGF表达水平无统计学意义(P>0.05)。结论CD147经PI3K-Akt信号通路在RA滑膜组织中上调VEGF促进血管新生。提示CD147在RA血管新生和血管翳形成中有重要意义。     

CD123+CD11c-pDC在初发类风湿关节炎患者外周血及关节液中的表达

目的:探讨外周血及关节液中浆细胞样树突状细胞(Plasmaetoid dendritic cell,pDC)的数量在初发类风湿关节炎(RA)患者中的表达,进一步明确pDC在类风湿关节炎发病机制中的作用.方法:采集RA组患者(30人),骨关节炎(0A)组(25人),健康对照组(25人)抗凝外周血及关节液,流式细胞术检测CD123+ CD11c-pDC的表型及数量.结果:活动性RA患者外周血中CD123+ CD11c-pDC(1.69％±0.97％)与OA组(5.38％±2.31％)相比含量减少,差异具有统计学意义(P＜0.05),与健康对照组(5.63％±2.33％)相比含量减少,差异具有统计学意义(P＜0.05),后两者相比差异无统计学意义(P＞0.05).关节液中两组CD123+ CD1 1c-pDC含量差异无统计学意义(P＞0.05),pDC与DAS28评分及疾病的活动度指标RF、ESR、CRP无相关性.结论:初发RA患者体内外周血中CD123+ CD1 1c pDC含量减少与机体免疫功能紊乱有关,这对进一步阐明RA的发病机制及探索新的靶向治疗起到一定的积极作用.     

类风湿性关节炎滑膜组织中CD147表达的检测

目的：探讨类风湿性关节炎(RA)滑膜组织CD147的表达。方法：采用免疫组织化学SP染色，双重免疫荧光染色及激光扫描共聚焦显微镜分析检测RA患者受损关节软骨-血管翳汇合部(CPJ)滑膜组织中CD147的表达，并与骨关节炎(OA)滑膜组织CD147的检测相对照。结果：SP染色显示3例OA滑膜组织CD147的表达均为阴性，而11例RA滑膜组织中均检测到CD147的表达，表达CD147的细胞为单核-巨噬细胞、淋巴细胞和滑膜成纤维样细胞。双重免疫荧光染色及激光扫描共聚焦显微镜分析证实表达CD147的细胞为单核-巨噬细胞，中性粒细胞及T细胞。结论：RA滑膜细胞CD147的表达增高。CD147可能是导致RA受损关节软骨、骨基质降解的重要因素之一。     

类风湿关节炎外周血单核细胞亚群CD64表达及意义

目的：探讨CD64在类风湿关节炎（RA）患者外周血单核细胞亚群上的表达及临床意义,以阐明其在RA发生和发展中的作用。方法：应用流式细胞仪检测44例RA患者和22例正常对照者外周血单核细胞亚群的比例及其CD64的表达,比较RA组和正常对照组之间各单核细胞亚群的比例及其表面CD64表达水平,并分析各单核细胞亚群表面CD64表达与实验室检查数据的相关性。两组间比较采用t检验或者非参数检验,两变量之间相关性采用Pearson或Spearman相关分析。结果：(1)RA组中间型单核细胞比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);RA组经典型单核细胞比例和非经典型单核细胞比例低于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。(2)RA组各单核细胞亚群CD64表达(MFI)显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)RA患者外周血经典型单核细胞和中间型单核细胞CD64表达(MFI)与DAS28呈正相关(r_s=0.308,P=0.044;r_s=0.302,P=0.049)。(4)RA患者各单核细胞亚群CD64表达(MFI)与ESR,CRP呈正相关(r_s=0.410,P=0.008;r_s=0.475,P=0.003;r_s=0.448,P=0.003;r_s=0.473,P=0.004;r_s=0.348,P=0.026;r_s=0.340,P=0.042)。(5)RA患者RF阳性组、ACPA阳性组外周血经典型单核细胞、中间型单核细胞上CD64表达(MFI)明显高于对应的阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。(6)中间型单核细胞CD64高表达组血清细胞因子IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：RA患者外周血单核细胞亚群CD64表达异常,经典型单核细胞和中间型单核细胞CD64表达与炎症水平、自身抗体产生和疾病活动性有明确的相关性。以外,中间型单核细胞CD64的表达与细胞因子相关。     

类风湿关节炎外周血lncRNA 差异表达研究

目的:筛选长链非编码RNA(lncRNA)在类风湿性关节炎患者PBMCs和正常人PBMCs中差异表达,分析lncRNA在RA发病中的可能作用。方法:选取2014年湖北民族学院附属民大医院风湿免疫科就诊的12例RA患者和11例正常对照组。利用Agilent human lncRNA芯片检测3例RA患者PBMCs和3例正常人PBMCs中lncRNA和mRNA表达,GO及Pathway分析差异表达的lncRNA功能分布,构建lncRNA-mRNA的共表达网络,并在此基础上通过Cis-和Trans-预测可能与RA相关lncRNA。结果:RA患者中差异表达的lncRNA共有1 615条,差异表达的mRNA共有878条,GO分析发现差异表达的mRNA主要参与金属离子结合、蛋白激酶结合、转录调节及核苷酸结合等。Pathway分析发现差异表达的mRNA主要参与TNF信号通路、B细胞受体信号通路、前列腺癌、系统性红斑狼疮、子宫内膜癌等。经Cis-和Trans-预测发现,REL、SMAD3和ETS1可能与RA的发生密切相关,因此考虑与之相关的lncRNA:NONHSAG027875、FR378506和NONHSAT031501也可能参与了RA的发生。结论:RA患者外周血中差异表达的lncRNA可能与RA的发生和发展密切相关,未来可能成为RA潜在治疗靶点。     

共抑制分子PD-1在类风湿关节炎模型免疫系统及滑膜组织的表达

目的:探讨共抑制分子PD-1在牛二型胶原(CII)诱导的类风湿关节炎模型(CIA)小鼠免疫器官、关节及RA患者滑膜组织内的表达.方法:使用牛二型胶原免疫DBA-1/j小鼠,建立小鼠类风湿关节炎模型;免疫组化检测类风湿关节炎标本PD-1的表达变化;流式细胞分析术(FACs)检测对PD-1阳性细胞进行定位.结果:免疫组化的结果证实,小鼠的骨髓、胸腺、脾脏及淋巴结有中有大量的PD-1阳性细胞,FACs分析结果表明这些PD-1+ 细胞主要为CD3+T细胞,B220+B细胞,CD68+巨噬细胞及CD11c+树突状细胞,统计分析表明CIA小鼠体内PD-1表达及分布相对于对照组小鼠没有显著提高.此外,RA患者及CIA小鼠的滑膜组织内仅发现少量PD-1阳性的细胞. 结论:PD-1阳性细胞可能不参与类风湿性关节炎的发生发展过程.     

PTEN在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义

目的:探讨第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)在人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达水平及意义。方法:利用组织块法获得并体外培养人RA-FLS、骨关节炎(OA)-FLS及关节创伤-FLS;采用实时荧光定量PCR法检测各组FLS中PTENmRNA表达水平的差异;采用Westernblotting法检测各组FLS的PTEN蛋白表达水平以及AktThr308位点磷酸化水平的差异。结果:(1)RA-FLS中的PTENmRNA表达水平显著低于OA-FLS及关节创伤-FLS(P<0.01),而OA-FLS与关节创伤-FLS之间的PTENmRNA表达水平无统计学差异。(2)RA-FLS的PTEN蛋白表达水平显著低于OA-FLS及关节创伤-FLS(P<0.05),而OA-FLS与关节创伤-FLS之间的PTEN蛋白表达水平无统计学差异。(3)RA-FLS中的Akt蛋白Thr308位点磷酸化水平显著高于OA-FLS及关节创伤-FLS(P<0.01),且OA-FLS中该位点的磷酸化水平显著低于关节创伤-FLS(P<0.01)。(4)RA-FLS中的PTEN蛋白水平与AktThr308位点磷酸化水平呈显著负相关(P<0.01)。结论:RA-FLS中PTEN基因呈低水平表达,可能与AktThr308位点磷酸化水平异常增高相关。     

建立类风湿关节炎滑膜细胞株

建立类风湿关节炎滑膜细胞株（北京师范大学生物系１００８７５，＊中国医学科学院北京协和医院王永潮＊蒋知新陈志强张焕相＊蒋明）滑膜组织增生，尤其是滑膜衬里层细胞增生是类风湿性关节炎的重要病理改变之一。因此，研究类风湿关节炎的发病机制及其病理改变常需要应用...     

GSDMD-N和p-MLKL蛋白在类风湿关节炎滑膜组织中上调

目的 探索类风湿关节炎(RA)患者膝关节滑膜组织中细胞焦亡标志性蛋白GSDMD-N和程序性坏死标志性蛋白p-MLKL的表达水平和意义.方法 记录入组患者临床资料,包括性别、年龄、红细胞沉降率(ESR)和超敏C反应蛋白(hsCRP).对RA和骨关节炎(OA)滑膜HE染色,用Krenn评分评估病理滑膜炎程度.提取RA和OA...     

共刺激分子HVEM在类风湿关节炎滑膜组织内的表达及分布研究

目的探讨TNF家族共刺激分子HVEM(herpesvirus entry mediator)在类风湿关节炎(RA)患者滑膜组织内的表达及分布。方法使用免疫组化法检测RA患者滑膜组织HVEM的表达;并使用免疫荧光法检测HVEM的细胞定位及分布。结果免疫组化结果证实,RA患者滑膜组织中有大量的HVEM阳性细胞,形态观察提示这些阳性的细胞主要是毛细血管、滑膜细胞、局部淋巴结T细胞及巨噬细胞;免疫荧光分析进一步表明这些HVEM+细胞主要为CD3+T细胞,CD68+巨噬细胞,少数CD31+内皮细胞也表达HVEM,但其不表达于CK-18+上皮细胞。对比其他B7家族共刺激分子在滑膜组织中的分布,免疫荧光发现HVEM共表达于B7-H3+血管,但不表达于B7-H1+、B7-DC+、B7-H4+及Z39Ig+细胞。结论关节炎滑膜组织内有大量HVEM阳性细胞,提示HVEM有可能参与并调节了关节炎的病理进程。     

类风湿关节炎患者外周血及滑膜液X型胶原反应性

目的：探讨类风湿关节炎（ＲＡ）患者体内是否存在抗Ｘ型胶原Ｂ细胞反应。方法：以ＥＬ－４ ＯＵ^rＢＵ^r／ｒＩＬ－２／ＰＭＡ作为刺激系统,通过酶联斑点技术检测抗Ｘ型胶原免疫球蛋白分泌Ｂ细胞（ａｎｔｉ－ＨＣＸ ＩＳＣ）频率。结果：２８例ＲＡ患者滑漠中１１例出现ａｎｔｉ－ＨＣＸ ＩＳＣ,而对照组骨性关节炎（ＯＡ）患者滑膜液中则未检测到ａｎｔｉ－ＨＣＸ ＩＳＣ。ＲＡ患者外周血主滑漠液ＣＤ１９^ 及ＣＤ２０^ 细胞     

类风湿关节炎滑膜组织及关节液中DcR3表达的研究

目的:观察研究人诱骗受体3(DcR3)在类风湿关节炎(RA)关节液及滑膜组织中的表达及其与滑膜炎性病变程度的相关性.方法:用免疫组织化学的方法对12例RA患者、6例骨关节炎(OA)患者及4例无关节病变的骨折患者滑膜组织中DcR3的表达进行描述分析,并对DcR3表达情况与RA患者滑膜炎性病变程度相关性进行分析.同时用ELISA的方法检测了26例RA及19例OA患者关节液中DcR3的表达.结果:DcR3在RA滑膜组织主要分布于血管翳周围炎性细胞及部分滑膜细胞中,DcR3阳性细胞数约为72％.OA滑膜组织细胞中DcR3也呈现少量的阳性表达,但与RA比较阳性程度较弱,阳性细胞数量较少:对DcR3表达与RA滑膜炎性程度的相关性分析发现,DcR3与RA滑膜炎性程度呈正相关(r=0.832,P＜0.01),同时发现RA患者关节液中表达也明显高于OA患者.结论:DcR3在RA滑膜组织炎性细胞及滑膜细胞上的异常表达可能是其参与RA滑膜炎及滑膜组织侵袭等病理过程,从而导致滑膜损伤的一个重要机制.     

sCD38在类风湿关节炎和系统性红斑狼疮患者外周血中的变化及意义

目的:探讨类风湿关节炎(RA)和系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血血清中sCD38水平的变化及其在该类疾病发病中的作用。方法:采用ELISA法检测48例RA患者,19例SLE患者和20例正常对照者外周血血清中sCD38水平。结果:RA患者外周血sCD38水平为(163.05±13.97)mg/L,明显高于正常对照组水平(80.59±5.58)mg/L,统计学分析有差异(P0.05)。特别是RA有X线改变组(至少骨质疏松)血清中sCD38水平平均高于单纯关节肿痛组(P0.05)。而且RA患者外周血sCD38水平与其活动指标RF、CRP呈明显的正相关(r=0.582,P0.05;r=0.485,P0.05)。SLE患者外周血sCD38水平平均为(295.22±16.01)mg/L,明显高于RA患者组及正常对照组(P均0.05),且与SLE活动指标ds-DNA成明显正相关(r=0.692,P0.05)。结论:sCD38在RA和SLE患者外周血中明显增高,在风湿性疾病的发病过程中具有重要作用。     

IL-17在类风湿关节炎患者外周血表达的临床意义

目的：探讨IL-17在类风湿关节炎（ RA）发病中的作用及意义。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（ RT-PCR）法检测66例RA患者（活动期34例、缓解期32例）和44例健康对照组外周血单个核细胞（ PBMC）中IL-17 mRNA 的表达水平,采用酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测各组血清中IL-17的浓度,用免疫比浊法检测各组血清RF的浓度,分析血清IL-17与RF的相关性。结果：RA患者PBMC中IL-17 mRNA的表达显著高于健康对照组（ P＜0.05）,但活动期与缓解期无明显差异（ P＞0.05）;RA活动期患者血清IL-17水平显著高于RA缓解期患者和健康对照组（ P＜0.05）;且RA患者血清IL-17水平与RF呈正相关。结论：IL-17和RF在RA的发病和病理过程中起重要作用,IL-17可能与RA活动性有关。     

趋化因子CCL5/RANTES在类风湿关节炎患者滑液及滑膜中的表达

类风湿关节炎 (ＲＡ)是一种常见的慢性关节炎 ,其主要病理改变之一为大量炎性细胞在滑膜的浸润和在滑液的渗出。近期的研究显示 ,ＲＡ的这一病理改变与趋化因子 (ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ)在病变关节产生增多有关。有报道表明ＣＣ亚族趋化因子受体 5 (ＣＣＲ5 )在ＲＡ关节浸润的炎性细胞中表达增高 ,提示ＲＡ病变关节内ＣＣＲ5的配体可能产生增多。为探讨这种可能性 ,我们对ＣＣＲ5配体ＣＣＬ5(ＲＡＮＴＥＳ)在ＲＡ关节组织中的表达进行了研究符合美国风湿病学会 1987年的ＲＡ诊断标准的ＲＡ患者 2 8例 ,男 5例 ,女 2 3例 ,平均年龄 38岁 ,平均病…     

B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)在类风湿关节炎滑膜组织的表达

目的:探讨CD28家族共抑制分子B和T淋巴细胞衰减因子在类风湿关节炎(RA)患者滑膜组织内的表达。方法:免疫组化法检测RA患者滑膜组织BTLA的表达;并使用免疫荧光法检测BTLA的细胞定位及分布。结果:免疫组化结果证实,RA患者滑膜组织中有大量的BTLA阳性细胞,形态观察提示这些阳性的细胞主要是淋巴结处的淋巴细胞及巨噬细胞;免疫荧光分析进一步表明这些BTLA+细胞主要为CD3+T细胞及CD68+巨噬细胞,少数CD31+内皮细胞也表达BTLA。此外,对比其他B7家族共刺激分子在滑膜组织中的分布,免疫荧光发现BTLA共表达于B7-H1+,B7-H4+及HVEM+细胞,但不表达于B7-DC+及B7-H3+细胞。结论:关节炎滑膜组织内有大量BTLA阳性细胞,提示BTLA有可能参与并调节了关节炎的病理进程。     

B7-H3在类风湿关节炎患者滑膜组织内的表达及分布研究

探讨B7家族共刺激分子B7-H3在类风湿关节炎(RA)患者滑膜组织内的表达及分布。方法:使用免疫组化法检测RA患者滑膜组织B7-H3的表达,并使用免疫荧光法检测B7-H3在细胞中的定位及分布。结果:免疫组化结果证实,RA患者滑膜组织中有大量的B7-H3阳性细胞,形态观察提示这些阳性的细胞主要为毛细血管细胞、滑膜细胞、局部淋巴结处的T细胞及巨噬细胞;免疫荧光分析进一步表明这些B7-H3+细胞主要为CD68+巨噬细胞,CD31+内皮细胞及CK-18+上皮细胞。此外,对比其他B7家族共刺激分子在滑膜组织中的分布,免疫荧光发现B7-H3共表达于B7-DC+及HVEM+血管,但不表达于B7-H1+及B7-H4+细胞。类风湿关节炎滑膜组织内有大量B7-H3阳性细胞,提示B7-H3有可能参与并调节关节炎的病理进程。     

有丝分裂原激活蛋白激酶p38在佐剂关节炎大鼠滑膜及肺组织的表达

目的研究有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)-p38在佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜及肺组织中表达,探讨类风湿关节炎(RA)的发病机制。方法给大鼠右后足跖部皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)复制RA的动物模型-AA。用原位杂交法检测p38mRNA在AA大鼠滑膜及肺组织中的表达。结果AA大鼠滑膜和肺组织p38mRNA阳性细胞的平均灰度值(0~255,深~浅)明显低于正常大鼠(P<0.01)。AA大鼠滑膜的巨噬细胞,成纤维细胞和淋巴细胞的胞浆内均有p38mRNA的表达。肺组织中p38mRNA主要表达于巨噬细胞,单核细胞及浸润的淋巴细胞中。结论AA大鼠p38mRNA过表达与AA的滑膜及肺部病变有关,可能在RA的发病中有重要作用。