红细胞生成素对大鼠心肌梗死后间质重塑及MMPs、TIMP-4表达的影响

目的 探讨重组人红细胞生成素(rhEPO)对心肌梗死大鼠心肌细胞间质重构和基质金属蛋白酶(MMPS)及其抑制物(TIMP-4)表达的影响.方法 80只SD大鼠随机分为心梗组(MI)、心梗药物组(MIE)、假手术组(SH)、假手术药物组(SHE).术后1周及6周分别测量各组大鼠血细胞比容,毛细血管密度,心肌梗死面积,Ⅰ、Ⅲ型胶原容积分数及其比值,免疫组化测定MMP-2、MMP-9及TIMP-4蛋白在大鼠左室心肌中的表达,并行超声心动图测定左室功能.结果 术后1周时免疫组化示MI、MIE组MMP-2、MMP-9表达较SH、SHE组增高(P<0.05),MMP-2、MMP-9表达较MI组降低(P<0.05),MI组TIMP-4表达较SH、SHE降低(P<0.05),MIE组TIMP-4表达较MI组增高(P<0.05),MI组和MIE组梗死交界区Ⅰ、Ⅲ型胶原容积分数无明显差异(P>0.05).6周后大鼠超声心动图示MI和MIE组左室舒张末期内径(LVDd)、左室收缩末期内径(LVDs)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)均高于SH和SHE组,而左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短平(LVFS)均低于SH组和SHE组(P<0.05),MI组LVDd、LVDs、LVEDV、LVESV高于MIE组,而LVEF、LVFS低于MIE组(P<0.05).术后6周MIE组梗死交界区毛细血管数目较MI组明显增多(P<0.05),而心肌梗死而积较MI组明显减少(P<0.05);MIE组心肌梗死交界区Ⅰ、Ⅲ型胶原容积分数及其比值较MI组明显降低(P<0.05),以Ⅰ型胶原升高为主.结论 心肌梗死后大鼠左室心功能降低,心肌内MMP-2、MMP-9蛋白表达升高,TIMP-4蛋白表达降低,心肌间质Ⅰ、Ⅲ型胶原含量增加,共同参与了心室重塑.rhEPO早期干预可改善心肌重塑,其可能机制是通过升高TIMP-4来抑制MMP-2、MMP-9蛋白表达,降低胶原含量,从而减少间质纤维化.     

PⅠCP、PⅢNP水平对心脏舒张功能障碍及胶原重构的评估作用

目的 探讨心脏舒张功能障碍中血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(P Ⅰ CP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)水平的变化及其与心脏舒张功能障碍、胶原重构的关系.方法 60只兔随机均分为对照组、心肌梗死(MI)组、左室肥厚(LVH)组(n=20).第2、4、8、12周ELISA检测PⅠCP、PⅢNP水平及多普勒血流和组织超声检测各组E/e'比值;第12周苦味酸天狼猩红染色偏振光法测定各组标本胶原容积分数(CVF)和Ⅰ/Ⅲ型胶原比值.结果 与对照组比较,MI组和LVH组PⅠ CP、PⅢNP水平明显升高(p＜0.05),MI组与LVH组比较PⅠCP、PⅢNP水平亦明显升高(P＜0.05),并随时间增加;与对照组比较,MI组和LVH组E/e'比值明显升高(P＜0.05),并随时间增加;与对照组比较,MI组和LVH组CVF明显升高(P＜0.05).PⅠCP、PⅢNP水平与E/e'比值呈正相关(P＜0.05).P Ⅰ CP/PⅢNP比值与Ⅰ/Ⅲ胶原比值呈正相关(P＜0.05).结论 PⅠCP、PⅢNP水平可以评估不同病理状态下心脏舒张功能的改变及心肌胶原重构情况.     

心肌梗死模型大鼠梗死区周围心肌C3G蛋白的表达变化及其意义

目的观察心肌梗死模型大鼠梗死区周围心肌C3G蛋白表达的改变及其意义。方法健康雄性SD大鼠随机分为心肌梗死组和假手术组,按照Litwin方法建立实验性大鼠心肌梗死及假手术模型。于术后24h和12周处死两组大鼠,收集心肌标本。取心尖部心肌(心肌梗死组取含梗死区的心肌组织),采用苦味酸天狼星及免疫组化方法检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原容积(CVFⅠ、Ⅲ)及C3G蛋白表达情况;取心底部心肌(心肌梗死组取非梗死区的心肌组织),采用Western blotting检测C3G蛋白的相对表达量。结果苦味酸天狼星染色结果显示,心肌梗死后12周组心肌细胞中CVFⅠ、Ⅲ分别为14.01±2.73、4.80±0.64,明显高于假手术后24h组(3.15±0.70、1.42±0.48),心肌梗死后24h组(3.68±0.95、1.53±0.61)以及假手术后12周组(3.27±0.65、1.47±0.52),差异有统计学意义(P<0.05),而后3组间差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化检测显示,心肌梗死后12周组心肌中C3G蛋白表达较其他3组均显著增加(P<0.05),而后3组间比较无明显差异(P>0.05)。Western blotting检测显示,与假手术后12周组(0.22±0.04)、假手术后24h组(0.22±0.04)、心肌梗死后24h组(0.29±0.02)比较,心肌梗死后12周组梗死区周围心肌C3G蛋白表达(0.56±0.06)显著增加(P<0.05)。结论心肌中存在C3G蛋白表达。发生心肌梗死后,梗死区周围心肌C3G蛋白表达水平显著增加,提示C3G蛋白参与了梗死后的心肌重塑。     

高压喷射载VEGF165、bFGF凝胶促缺血心肌血管新生的实验研究

目的探讨高压喷射心肌内给药的可行性以及载VEGF165、bFGF温敏型壳聚糖水凝胶对缺血心肌的促血管新生和心肌保护作用。方法健康杂种犬32只,随机均分为单纯心肌梗死(SMI)组,高压喷射生理盐水(NS)组,高压喷射温敏型壳聚糖水凝胶(Chitosan)组,高压喷射载VEGF165、bFGF温敏型壳聚糖水凝胶(Chitosan+VEGF165+bFGF)组。结扎左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型后,SMI组直接关胸,NS组、Chitosan组和Chitosan+VEGF165+bFGF组在结扎线以下左室前壁行高压喷射心肌内给药8～10次,1次/cm2。术后6周取材行组织学、免疫组化检查并计算心肌梗死面积,处死动物前行血流动力学检测。结果术后6周心肌内仅有少量壳聚糖水凝胶样物质残留,其周围无明显的炎性细胞浸润;与SMI组比较,Chitosan组和Chitosan+VEGF165+bF-GF组梗死区新生血管数量增加(P<0.05),梗死面积缩小(P<0.05),左室舒张末压和左室内压最大下降速率明显改善(P<0.05)。结论高压喷射心肌内给药安全、可行;载VEGF165、bFGF温敏型壳聚糖水凝胶心肌内注射能促进...     

纤维蛋白胶对干细胞心肌梗死修复移植影响的研究

目的:应用可注射性纤维蛋白胶(fibrin glue,FG)液态支架材料联合人胎盘间充质干细胞 ( placent mesenchymal stem cells,PMSCs) 进行心肌内注射,观察其对细胞滞留、存活的影响,探讨其作为可注射性心肌组织工程支架的可行性.方法: (1)分离、培养、扩增人PMSCs备用;(2)建立大鼠急性心肌梗死模型并注射FG,观察其在心肌梗死区域存留及降解情况;(3)大鼠急性心肌梗死模型随机分为4组,对照组(PBS组)、FG组、PMSCs PBS组、PMSCs FG组, 对移植24 h后细胞滞留、4周后细胞的存活及局部新生血管的密度进行测量.结果:(1)FG组织相容性好,心肌内降解时间1周左右.(2)PMSCs FG组细胞24 h滞留率显著增高,4周存活细胞数量显著增高、心肌梗死区域新生血管密度显著提高(P<0.01).结论: 可注射性纤维蛋白胶可以提高移植细胞在心肌梗死部位的滞留及存活,发挥微环境调控作用并刺激心肌梗死部位微血管生成,是良好的可注射性心肌组织工程支架材料.     

基因重组人血管生长素衍生物Asp116His对缺血心肌再血管化的影响

在建立家兔心肌梗死模型的基础上,以基因重组人血管生长素衍生物Ａｓｐ１１６Ｈｉｓ于血心肌边缘部作心肌多点注射。术后８－１０天取注射点心肌切片作ＨＥ染色、ＶＢ染色及Ⅷ因子标记的免疫组化染色观察,术后１８－２０天,做非选择性冠脉造影。病理学检查,可见心肌间质内大量小血管结构,毛细血管明显增多,冠脉造影,示有侧支血管形成。本研究首次证实血管生长素衍生物Ａｓｐ１１６Ｈｉｓ在心肌作用局部可引起明显新生血管形成     

蛇毒纤溶酶及自体内皮祖细胞移植对急性心肌缺血/再灌注后心功能的影响

目的 观察成年白兔自体内皮祖细胞悬液及蛇毒纤溶酶对急性缺血/再灌注所引起心肌损伤的影响和心功能的变化.方法 取28只成年新西兰白兔,随机分为4组:对照(A)组(仅注射培养液)、细胞移植(B)组(注射自体内皮祖细胞)、蛇毒纤溶酶(C)组(仅注射蛇毒纤溶酶)、蛇毒纤溶酶+细胞移植(D)组(注射蛇毒纤溶酶和自体内皮祖细胞).密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,以EGM-2培养基培养7d,获得兔外周血内皮祖细胞.结扎兔的左冠状动脉建立急性心肌梗死模型,1h后再灌注.分别经主动脉根部注射自体内皮祖细胞悬液及蛇毒纤溶酶.移植术4周后,通过心脏超声对各组实验兔心功能进行检查、记录并行统计学分析.对各组梗死心肌及周围组织、梗死的心室壁进行HE染色,光镜下观察组织学变化.结果 所有实验动物缺血后,心电图表现为ST段抬高,再灌注后,ST段缓慢下降.心动超声指标比较,B、D组心功能明显好于C组,而C组心功能明显好于A组,差异有统计学意义(P<0.05).肉眼观察发现D组心室壁略增厚,其余各组变化不明显.HE染色发现,B、C、D组心肌恢复情况好于A组.结论 通过主动脉根部注射内皮祖细胞和蛇毒纤溶酶可以提高兔缺血/再灌注损伤心肌的恢复并改善心功能.     

腹主动脉缩窄大鼠模型心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原改变及其mRNA的表达

目的:通过建立腹主动脉缩窄大鼠模型,观察腹主动脉缩窄大鼠心肌中Ⅰ型、Ⅲ型胶原及其mRNA的表达.方法:30只雄性SD大鼠随机分为假手术组(14只)和模型组(16只).模型组根据Doering等的方法,用银夹造成腹主动脉部分狭窄(银夹内径0.7 mm).8 w后用免疫组化法对心肌组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原染色,并用光密度值作为其含量指标行图像分析,即时PCR扩增后分析并测定胶原mRNA水平.结果:模型组造模8 w时,Ⅰ型和Ⅲ型胶原平均光密度及其mRNA表达较假手术组显著升高(P＜0.01).胶原组化染色显示,模型组胶原明显增多、增粗、排列紊乱.结论:大鼠腹主动脉缩窄导致反应性纤维化心肌中Ⅰ型和Ⅲ型胶原及其mRNA表达升高,以心肌间质和血管周围增加为主;本模型适合高血压、心力衰竭等慢性过程致心肌纤维化的研究.     

辛伐他汀对老年大鼠心肌胶原含量及MMP-9表达水平的影响

目的 观察老年大鼠心肌胶原含量和MMP-9 mRNA表达水平的变化及辛伐他汀干预的效果.方法 20月龄的Wistar鼠45只,随机分为老年对照组、大剂量辛伐他汀组[20 mg/(kg·d)]和小剂量辛伐他汀组[2 mg/(kg·d)],每组15只;另有15只3月龄的Wistar鼠作为青年对照组.辛伐他汀组给予相应剂量的药物灌胃4个月;对照组给予相同体积的生理盐水灌胃.灌胃4个月后,留取心脏标本,采用苦味酸 - 天狼腥红染色方法,观察各组大鼠心肌胶原含量,在偏振光显微镜下观察各组大鼠心肌Ⅰ/Ⅲ型胶原比例;同时,应用RT-PCR方法检测各组大鼠心肌MMP-9 mRNA含量的变化.结果 与青年对照组相比,老年对照组大鼠的心肌胶原含量、Ⅰ/Ⅲ型胶原比例及MMP-9 mRNA表达水平均显著增高(P＜0.01),辛伐他汀可显著抑制这一变化(P＜0.01);不同剂量辛伐他汀组之间的比较显示,大剂量组的心肌胶原含量和MMP-9 mRNA表达水平低于小剂量组(P＜0.05或P＜0.01),而Ⅰ/Ⅲ型胶原比例两组之间无显著差别(P＞0.05).结论 辛伐他汀可显著降低老年大鼠心肌胶原含量和Ⅰ/Ⅲ型胶原比例,抑制MMP-9 mRNA表达水平的增高.     

人参皂苷Rg1对急性心肌梗死后VEGF和HIF-1α的作用

目的研究人参皂苷Rg1，对急性心肌梗死（AMI）后血管新生的影响及其作用机制。方法建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型，104只大鼠分为假手术组、急性心肌梗死对照组、人参皂苷Rg1低剂量治疗组（1mg／kg）和高剂量治疗组（5mg／kg），于术后3、7、10、14天测定梗死区微血管密度，RT-PCR法检测梗死区心肌组织血管内皮生长因子（VEGF）和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）mRNA，免疫组化法检测VFGF在梗死区内的表达。结果梗死区的血管生成数量稳定持续的增加，治疗组显著高于对照组（P〈0．01）；心肌梗死后VEGF、HIF-1α mRNA表达随缺血时间的延长（3、7、10天组）有增高趋势，治疗组明显升高（P〈0．01），14天时VEGF的增长出现停止或下降，而HIF-1α继续升高；假手术组VEGF表达明显低于各手术组。结论严重缺血可刺激心肌组织产生大量的VEGF、HIF-1α，其对缺血心肌起保护作用，人参皂苷Rg1可通过增加其表达而刺激心肌梗死区的血管生成和侧支循环建立。