联合检测tPA、PAI-1、uPA及uPAR对急性脑梗死诊治及预判的价值

目的对急性脑梗死病人进行血浆tPA、PAI-1、uPA及uPAR水平的联合检测,探讨其治疗观察及预后判定的临床价值。方法急性脑梗死病人(36例)及对照组在治疗前和治疗后分别进行血浆tPA、PAI-1、uPA及uPAR的联合检测(ELISA法)。结果 36例脑梗死病人治疗前与对照组相比tPA、PAI-1、uPA和uPAR水平均有明显增高(均P<0.01);治疗后与治疗前比较tPA又有明显升高(P<0.05),而PAI-1,uPA and uPAR则在治疗后明显降低(P<0.05,P<0.01),PAI-1及uPAR降至接近对照组水平(P>0.05)。结论血浆tPA、PAI-1、uPA和uPAR水平的变化与脑梗死病人的治疗状况密切相关,联合检测有利于对急性脑梗死的治疗观察和预后判定。     

骨关节炎滑膜中尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体蛋白的表达

OBJECTIVE: To study the expression of urokinase-type plasminogen activator (uPA) and its receptor (uPAR) in the synovial tissures, and the significance of uPA and uPAR in degradation of extracellular matrices in osteoarthritis (OA), then analyse the possible relationship between uPA and uPAR. METHODS: Immunohistochemical analysis technique was used to detect uPA and uPAR protein expression and distribution in synovial tissues in 26 OA patients and 10 mormal individuals. RESULTS: Positive staining of uPA and uPAR protein were detected in 19 cases in the 26 OA samples (73%), while only 2 positive cases were seen in the 10 mormal tissues (20%). The expression rate of uPA protein was markedly higher in OA than in the normal (P < 0.01). The expression of uPAR was seen in 14 cases in all 26 OA samples (54.6%), while there was only one case in 10 normal samples (10%), the positive rate was significantly higher in OA than in normal samples (P < 0.05). Positive expression of uPA and uPAR proteins were found in synovial lining cells, mononuclear cells, macrophage-like cells and endothelial cells. Using the correction analysis, we found a positive correlation between uPA and uPAR reactivity in the synovial tissues in OA (r = 0.920, P < 0.01). CONCLUSIONS: The high expression of uPA and uPAR protein in OA synovial tissues indicate that the uPA system may play an important role in the process of synovitis and degradation of OA cartilage extracellular matrices. In the pathologic process of OA, uPA and uPAR coordinate each other, lead to the genesis and development of OA cartilage degradation.     

骨关节炎滑膜中尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体蛋白的表达

目的 :检测尿激酶型纤溶酶原激活物 (uPA)及其受体蛋白 (uPAR)在骨关节炎 (OA)滑膜中的表达 ,探讨uPA系统在OA发病中的病理作用。方法 :采用免疫组织化学方法检测 2 6例OA和 10例正常滑膜组织中uPA和uPAR蛋白的表达水平。结果 :2 6例OA滑膜组织中uPA阳性表达 19例 (73% ) ,uPAR阳性表达 14例 (5 4 6 % )。 10例正常滑膜组织中 ,uPA阳性表达 2例 (2 0 % ) ,uPAR阳性表达 1例 (10 % )。uPA和uPAR在OA滑膜中主要分布于滑膜衬里层细胞、衬里下层单核细胞、巨噬样细胞及血管内皮细胞。OA滑膜组织中uPA和uPAR蛋白的表达水平呈直线相关 (r =0 .92 0 ,P <0 .0 1)。结论 :OA滑膜组织中高水平的uPA和uPAR蛋白表达 ,提示在OA滑膜炎症和软骨降解等病理过程中 ,uPA系统起着重要作用 ,uPA起协同作用     

纤溶系统对膜性肾病大鼠足细胞损伤的影响

目的：观察大鼠膜性肾病（MN）模型的全血uPA、tPA及PAI-1的表达情况,及其对足细胞损伤凋亡的影响及肾脏病理改变的影响,探讨早期预防纤溶紊乱对防止MN进展有重要意义。方法：按改良border法制作MN大鼠模型,正式免疫第1、2、3、4周末检测全血uPA、tPA及PAI-1的表达水平;取大鼠肾组织进行光镜、电镜观察肾组织病理学改变;采用免疫组化方法检测肾足细胞Nephrin、WTl蛋白表达含量,并进行相关性分析。结果：与正常组大鼠相比,模型组大鼠的全血uPA、tPA水平明显减少,而PAI-1水平明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;电镜显示肾小球足细胞广泛足突融合至消失;GBM基质出现“钉样突起”,肾间质纤维化程度较重。肾小球足细胞分布区WT-1和Nephrin蛋白表达下调,其中Nephrin蛋白表达量变化有统计学意义（P<0.01）。相关性分析显示,大鼠全血tPA和uPA水平与肾组织Nephrin蛋白的表达变化呈正相关,全血PAI-1水平与肾组织Nephrin蛋白的表达变化呈现负相关。结论：在MN发展中,纤溶系统对足细胞损伤凋亡具有重要意义,早期评估预测MN足细胞损伤情况或可为防治早期MN步入终末期肾脏病找到又一治疗靶点,亦可为临床研究治疗MN的药物提供新的思路。     

尿激酶型纤溶系统在乳腺癌细胞侵袭中的作用

目的研究尿激酶型纤溶系统组分uPA、uPAR、tPA及PAI-1在人乳腺癌细胞侵袭中的作用。方法以3株具有不同侵袭转移能力的乳腺癌细胞株作为研究对象,应用RT?PCR方法比较纤溶组分在此3株细胞中的表达,牛奶板法检测细胞培养上清中的纤溶活性,用Boyden小室模型测定细胞侵袭能力。结果发现MDA-MB-231细胞表达较高水平的uPA、uPAR、PAI-1和中等水平的tPA,无血清培养上清中总纤溶活性和uPA纤溶活性最高;MDA-MB-435细胞表达较低水平的uPA和较高水平的tPA,但未测出uPAR和PAI-1的表达,无血清培养上清中总纤溶活性较高,主要是tPA活性;MCF-7细胞表达较低水平的uPAR和较高水平的PAI-1,但未测出uPA和tPA的表达,无血清培养上清中几乎没有纤溶活性。与纤溶活性相一致的是,Boyden小室模型实验结果发现MDA-MB-231在3株细胞中体外侵袭能力最强,MDA-MB-435次之,MCF-7则几乎无体外侵袭能力。经抗uPA和抗uPAR抗体预处理MDA-MB-231细胞,分别使侵袭能力下降83.1%和43.9%(P<0.05)。结论uPA和uPAR的活性与乳腺癌细胞的侵袭转移能力密切相关     

复元胶囊对兔骨关节炎关节软骨uPA、uPAR、PAI及NF-κB表达的影响

目的观察复元胶囊(Fuyuan capsule,Fyc)对实验性兔膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨中尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)、uPA受体(uPA receptor,uPAR)、血浆酶原激活酶抑制因子(plas-minogen activator inhibitor,PAI)的影响,探讨其对实验性兔膝OA的作用机制。方法采用膝关节石膏制动法结合d-半乳糖皮下注射6周建立兔衰老骨关节炎模型。48只新西兰兔根据体质量按随机区组法分为健康组、模型组、盐酸氨基葡萄糖胶囊90 mg/(kg.d)组,复元胶囊低、中、高剂量组[1 350、2 700、5 400 mg/(kg.d)],每组8只,造模当日开始灌胃,1次/d,连续10周。HE染色关节软骨Mankin’s评分,免疫组织化学法检测各组软骨组织中uPA、uPAR、PAI的表达,Western blot检测各组软骨组织中uPA、NF-κB的表达。结果复元胶囊高剂量组和盐酸氨基葡萄糖胶囊组的兔OA关节软骨Mankin’s评分较模型组明显降低(P<0.01);免疫组化检测结果显示,复元胶囊高剂量组和盐酸氨基葡萄糖胶囊组uPA及uPAR表达明显降低,而PAI表达明显升高(P<0.01);Western blot检测结果显示,盐酸氨基葡萄糖胶囊组和复元胶囊高剂量组uPA及NF-κB均较模型组显著降低(P<0.01)。复元胶囊高剂量组对uPA的抑制作用与盐酸氨基酸葡萄糖胶囊组比较差异无统计学意义(P>0.05),但对NF-κB的抑制作用强于盐酸氨基酸葡萄糖胶囊组(P<0.05)。结论复元胶囊能显著降低兔关节软骨中uPA、uPAR、NF-κB的表达,明显升高PAI的表达,提示复元胶囊可能通过调控uPA系统和NF-κB信号通路对骨关节炎发挥防治作用。     

EXPRESSION AND ROLE OF PLASMINOGEN SYSTEM IN PROCESS OF RESTENOSIS

Objective To study the expression and role of plasminogen system in the process of restenosis. Methods We established a double-injury model of atherosclerotic restenosis in rabbit iliac artery mimicking human arterial restenosis. The time course of tissue plaminogen activator （ tPA ）, urokinase plasminogen activator （ uPA ）, urokinase plasminogen activator receptor （uPAR） and plasminogen activator inhibitor-1 （ PAI-1 ） was investigated by immunohistochemistry. The mRNA expression of uPA and uPAR were detected after vascular procedures by in situ hybridization. Results In uninjured arteries, the weak expression of tPA and PAI-1 was detected in intimal and endothelial cells. The expression of tPA, uPA, uPAR and PAI-1 was significantly induced after double-injury, but after double-injury 14d, the expression of tPA restore to preinjury levels. The expression of uPA and uPAR in intimal was higher than that of media and maintain high levels in intimal within 42d and 56d. Conclusion Whereas t-PA is primarily involved in clot dissolution and play a limited role in the process of restenosis, in plasminogen system, uPA and uPAR play a prominent role in the process of restenosis.     

虎杖清肝汤治疗慢性乙型肝炎及对肝纤维化形成的影响

目的：观察虎杖清肝汤治疗慢性乙型肝炎的临床疗效及对纤溶酶原激活系统等肝纤维化相关指标的影响。方法：选择慢性乙型肝炎经中医辨证为肝胆湿热兼血瘀证患者92例,治疗组55例予虎杖清肝汤治疗,对照组37例予乙肝清热解毒冲剂,疗程均为3个月。观察中医证候积分、肝功能及肝纤维化相关指标的变化。结果：治疗后两组患者证候积分显著降低、肝功能改善,治疗组肝纤维化指标明显下降,纤溶酶原激活物（uPA）及其抑制物（PAI-1）含量降低,tPA活性下降,PAI活性增强。结论：虎杖清肝汤对慢性乙型肝炎有较好的临床疗效和抗肝纤维化作用。     

小鼠生殖周期中纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达

目的 研究小鼠生后不同发育阶段生殖腺上皮中纤溶酶原激活系统的表达情况。方法 出生后第9天至60天小鼠72只,雌雄各半,按出生后第9、15、20、25、32、40、45、50、60天分为9组,每组8只小鼠,雌雄各半,取小鼠卵巢和睾丸,应用免疫组织化学方法,对卵巢和睾丸石蜡切片上纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达进行了检测和半定量分析。结果 出生后第9－30天的小鼠卵巢和睾丸中没有检测出纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达,而在第30－60天的小鼠卵巢中检测出uPA、uPAR表达,在第30－60天的小鼠睾丸中检测出tPA的表达,并且表达量较强。结论 小鼠生殖周期中纤溶酶原激活因子及抑制因子的表达与大鼠生殖腺中的规律有一定差异。     

SIRT1在骨性关节炎滑膜中表达的相关研究

目的：探讨沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)在骨性关节炎(OA)正常滑膜组织及细胞中表达的差异性。方法膝关节滑膜细胞培养传代,甲苯胺蓝染色观察细胞形态,Western blot 法检测滑膜组织及细胞中 SIRT1的表达情况;免疫组织化学法对滑膜细胞检测 SIRT1表达情况及表达部位。结果甲苯胺蓝实验显示 OA 及正常滑膜细胞无明显形态学差异;免疫细胞化学法显示 SIRT1在滑膜细胞胞质中广泛表达,染色强度 OA 组较正常组明显降低(t =20．208, P <0．01);Western blot 法显示在滑膜细胞中 OA 组 SIRT1表达明显低于正常对照组((t =8．619,P <0．01);在滑膜组织中 OA 组 SIRT1的表达亦明显低于正常对照组(t =7．664,P<0．01)。结论 SIRT1与 OA 导致滑膜炎的发生发展密切相关,为 SIRT1可以作为 OA 治疗的靶点提供一个新的理论依据。     

纤溶酶原激活、抑制系统与肿瘤发生、发展的关系

纤溶酶原激活因子(PA)包括尿激酶型(uPA)及组织型(tPA),在诱发细胞外基质蛋白水解中起重要作用。活性可被其特异抑制因子(PAI)压抑。细胞膜上受体uPA—R对uPA活性具有定位活化作用。纤溶激活与抑制系统介入多种生理功能,与肿瘤的发生、发展有密切关系。     

食管鳞状细胞癌组织中uPA和PAI-1表达与浸润转移及预后的关系研究

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）和纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）基因表达及其对预后的影响。方法应用免疫组织化学方法检测uPA、PAI-1基因在80例食管鳞癌患者及20例食管癌旁正常组织中的表达,并应用Cox回归模型和Kaplan-Meier生存曲线检测分析其与患者预后的关系。结果在食管癌组织中uPA、PAI-1蛋白表达显著高于食管正常黏膜组织（P〈0．05）。uPA、PAI-1的表达与食管癌浸润深度、淋巴结转移有关（P〈0．05）,但与年龄、民族无关。uPA和PAI-1的表达呈正相关（r=7．092,P〈0．05）。单因素Kaplan-Meier生存分析表明,10年总生存率为20％。食管癌uPA、PAI-1阳性表达组较阴性表达组有生存优势,但差异无统计学意义。Cox模型多因素分析表明,uPA、PAI-1不是影响生存期的独立因素,而肿瘤浸润深度和转移是影响生存期的独立因素。结论uPA、PAI-1蛋白表达与食管癌的发生发展有-定的关系,并可能成为判断预后的指标之一。     

三七对胰岛素抵抗大鼠血栓形成相关因子的影响

目的研究三七对胰岛素抵抗(IR)大鼠血栓形成相关因子的影响,探讨三七抗胰IR的作用机制。方法 32只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、三七高剂量组、三七低剂量组,以高脂饮食4周诱发大鼠IR模型,在造模同时,应用中药三七进行干预,生化法测定空腹血糖(FBG),放免法检测空腹胰岛素(FINS)、TXB2、6-Keto-PGF1α水平,发色底物法测定血浆t-PA、PAI;并计算胰岛素敏感性指标(ISI)。结果 IR模型组大鼠的血清FINS较正常组明显增高(P<0.05),而胰岛素敏感性指数ISI明显低于正常组(P<0.05),血浆TXB2、PAI-1水平及TXB2/6-K-PGF1α、PAI-1/tPA比值较正常组明显增高(P<0.01、P<0.05);应用三七干预后,大鼠FINS水平较模型组明显降低(P<0.05),ISI较模型组明显提高(P<0.05),同时血浆TXB2、PAI-1水平及TXB2/6-K-PGF1α、PAI-1/tPA比值较模型组明显降低(P<0.05)。结论三七明显改善大鼠胰岛素抵抗的作用机制可能与其抑制血栓形成相关因子的表达有关。     

氯沙坦对高糖诱导大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物及其抑制物表达的影响

目的 研究高糖对正常大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物(tPA和uPA)及其抑制物-1(PAI-1)表达的影响,并探讨血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂氯沙坦对其改善作用.方法 培养大鼠肾近端小管上皮细胞,并分组为正常对照组、甘露醇组(5 mmol/L D-葡萄糖 25 mmol/L 甘露醇)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、氯沙坦组(10-3 mmol/L氯沙坦)、高糖 氯沙坦组(30 mmol/L D-葡萄糖 10-3 mmol/L氯沙坦).RT-PCR法检测各组细胞tPA、uPA及PAI-1 mRNA表达. 结果与正常对照组比较,高糖组肾小管上皮细胞tPA和uPA mRNA表达下降(P＜0.01), PAI-1 mRNA表达增加(P＜0.01);氯沙坦可部分逆转高糖的作用,高糖加氯沙坦组tPA、uPA表达分别是高糖组的2.06倍、1.69倍(P＜0.01),PAI-1表达为高糖组的44% (P＜0.01). 结论高糖可使肾近端小管上皮细胞PA/PAI-1 mRNA异常表达, 氯沙坦可以在肾小管中通过维持PA/ PAI-1的平衡,对糖尿病肾病防治起一定的作用.     

肝硬化患者血浆纤溶酶原活化系统变化及其意义

目的探讨肝硬化患者血浆尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)变化及其意义。方法检查确诊的72例乙肝后肝硬化患者,依据Child-Pugh分级分为3级,其中A级23例,B级29例,C级20例。健康志愿献血者6例做为正常对照组。酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆uPA、uPAR、PAI-1的变化。同时检测血浆TGF-β1、透明质酸、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)变化以及血浆白蛋白、胆红素、凝血酶原活动度改变。结果随着肝硬化的进展,血浆uPA、uPAR、PAI-1逐渐增加,血浆TGFβ1、血透明质酸、Ⅲ型前胶原也明显增加。Child C组患者血浆uPA、uPAR、PAI-1水平明显高于ChildA、ChildB组。Child A组PAI-1/uPA值下降,而Child B组、Child C组PAI-1/uPA又复升高。Child C组血浆uPA、uPAR、PAI-1水平与正常组、Child A组相比,差异显著。在Child A组,血浆uPA与PCⅢ呈负相关,与TGFβ1正相关;在Child C组血浆TGFβ1与血Ⅲ型胶原呈正相关,与HA呈正相关。结论血浆uPA、uPAR、PAI-1变化与肝硬化发生发展密切相关。肝硬化晚期,虽然血浆uPA、PAI-1增加,但总的效应表现为uPA相对不足,肝基质纤维降解受抑。适当增加uPA活性,抑制TGFβ1的早期激活,抑制肝硬化晚期PAI-1过度表达,可能有助于抑制HSC的激活、增加肝细胞外基质降解,从而有助于延缓肝硬化的发生发展。     

卵巢癌组织中尿激酶型纤溶酶原激活物、受体及其抑制物-1的表达以及与化疗耐药的关系

目的探讨卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中纤溶酶原激活系统--尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、受体(uPAR)及其抑制物-1(PAI-1)的表达与卵巢癌化疗耐药的关系及其临床意义.方法:卵巢癌患者77例,根据临床治疗和随访结果分为化疗耐药组(26例)与非耐药(51例)组,采用免疫组化法测定两组癌组织中uPA、PAI-1和uPAR的表达,并探讨其与化疗耐药的关系;采用多因素Logistic回归分析法探讨卵巢癌患者的年龄、手术病理分期、病理类型及分级、残留灶直径、化疗方案和三者表达与卵巢癌化疗耐药的关系;同时对预后进行多因素的COX生存分析.结果:uPA、PAI-1的阳性表达率,耐药组分别为96%(25/26)和92%(24/26),均明显高于非耐药组的80%(41/51)和82%(42/51,P值均＜0.01);uPAR的阳性表达率,耐药组为31%(8/26),非耐药组为35%(18/51),两组差异无显著性(P=0.668).多因素分析显示uPA、PAI-1表达与卵巢癌的手术病理分期均为与耐药(P值均＜0.05)及预后(P值分别为0.045、0.031、0.001)相关的独立危险因素.结论:卵巢癌组织中uPA、PAI-1的高表达是卵巢癌化疗耐药及预后的危险因素.     

uPA和PAI-1基因克隆及真核表达载体的构建及鉴定

目的：克隆人卵巢上皮癌组织uPA和PAI-1基因cDNA全长,构建表达uPA和PAI-1基因的真核表达载体。方法：采用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA和PAI-1基因的cDNA全长,克隆到pGEM-TEasy Vector上,通过酶切和测序进行鉴定;酶切后与真核表达载体pcDNA3.1/myc-his（-）B连接,酶切及测序再次鉴定;采用脂质体法将重组质粒DNA转染至卵巢癌上皮细胞SKOV3细胞;采用有限稀释法和G418分别加压筛选并培养SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞及对照细胞;Western blot法检测转染前后SKOV3细胞uPA和PAI-1基因的表达。结果：成功扩增出uPA和PAI-1基因的cDNA的全长,并克隆入T载体,DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建含正确目的基因的表达载体pcDNA3.1-uPA和pcDNA3.1-PAI-1,Western blot能检测到uPA和PAI-1基因蛋白分别在SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞中的表达。结论：成功构建了uPA和PAI-1表达基因的真核表达载体,为进一步研究uPA和PAI-1基因在卵巢癌侵袭转移中的作用提供了实验基础。     

实验性肺癌尿激酶型纤溶酶原激活物和抑制物的表达及意义

目的 研究尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,uPA)和抑制物-1(PA inhibitor．PAI-1)在实验性肺癌的发生、发展及侵袭转移过程中的作用。方法 将Lewis肺癌瘤株腹腔注射C57／BL小鼠．于接种后9、17、13天各处死6只．取瘤、肺组织匀浆．低温离心取上清液．采用酶联免疫吸附(enzyme-liked immunosorbent assav．ELISA)法检测血浆和组织中uPA和PAI-1的含量．按环磷酰胺 刺五加组、环磷酰胺组、刺五加组、肿瘤对照组和正常对照组分别进行对比分析。结果 肿瘤组uPA和PAI-1含量高于正常对照组;环磷酰胺一刺五加组血浆、瘤和肺组织中uPA和pAI-1活性低于肿瘤组。结论 检测实验性肺癌uPA和PAI-1含量可能对其侵袭转移、预后等有一定的参考价值。     

凝血酶敏感激素蛋白酶4/5在骨性关节炎滑膜中的表达及意义

目的 研究凝血酶敏感激素蛋白酶4/5 ( ADAMTS4/5)在骨性关节炎( OA)滑膜组织及滑膜细胞中的表达及意义. 方法 取6例正常者滑膜组织和6 例OA患者滑膜组织,Western blot法检测标本中ADAMTS4/5 的表达,离体培养正常者滑膜细胞. 白介素-1β( IL-1β)刺激正常滑膜细胞,测定滑膜细胞中ADAMTS4/5的表达量;IL-1RA( IL-1β阻滞剂)抑制IL-1β后,测定滑膜细胞中ADAMTS4/5的表达量.结果 ADAMTS4/5 在OA患者滑膜组织中表达较正常者滑膜组织均显著增加;IL-1β刺激滑膜细胞后,ADAMTS4/5升高,IL-1RA可明显降低IL-1β诱导的滑膜细胞中ADAMTS4/5的表达. 结论 IL-1β可以按照剂量依赖方式正向调节ADAMTS4/5的表达;ADAMTS4/5 和IL-1β在OA病变机制中发挥重要的作用.