钾通道阻断剂抑制乳腺癌细胞增殖作用的实验研究

目的探讨选择性钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)对多西紫杉醇(DOC)抗人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖、凋亡、周期的影响。方法通过MTT比色法分析DOC、4-AP以及两药联合应用对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖的影响;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法和PI单染法检测2种药物对MDA-MB-435S凋亡和周期的影响。结果0.04～50μmol/LDOC可剂量依赖性抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S的增殖;4-AP(5mmol/L)本身具有抑制MDA-MB-435S细胞的增殖作用,并可使DOC(25μmol/L)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S达最大抑制率的时间明显提前,DOC和4-AP对MDA-MB-435S细胞的增殖抑制有相加或协同作用,并呈剂量和时间依赖性。DOC(2μmol/L)单用24h时促进MDA-MB-435S细胞凋亡的作用并不明显,当与4-AP(5mmol/L)联合应用后能明显增加细胞早期凋亡的发生率;单用DOC可使MDA-MB-435S细胞阻断在G2/M期,单用4-AP可使MDA-MB-435S细胞阻断在G0/G1期,两药联合应用可使细胞阻断在G2/M期。结论DOC和4-AP分别在G2/M期和G0/G1期抑制MDA-MB-435S细胞增殖,4-AP通过促进DOC诱导MDA-MB-435S细胞凋亡从而抑制其增殖作用。     

胸腺肽α1诱导膀胱癌细胞株BIU87凋亡的实验研究

目的研究胸腺肽α1诱导膀胱癌细胞株BIU87凋亡的作用及其机制。方法用50~400μg/ml胸腺肽α1作用BIU87细胞24~72 h后,MTT比色法检测细胞生长活性,单细胞凝胶电泳法和流式细胞仪分别检测BIU87细胞DNA损伤和凋亡作用。结果胸腺肽α1能显著抑制膀胱癌细胞株BIU87细胞的体外生长(P<0.01),呈时间与剂量依赖性;流式细胞仪检测显示不同浓度凋亡率分别为(4.69±0.60)%、(21.15±3.10)%、(33.15±2.40)%、(40.87±1.50)%、(48.47±1.02)%;单细胞凝胶电泳检测显示不同浓度DNA损伤比率分别为5%、20%、41%、62%、85%。结论胸腺肽α1通过抑制BIU87细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,显著抑制膀胱癌细胞生长。     

槲皮素体外抑制乳腺癌细胞侵袭转移及相关机制

目的 探讨槲皮素对高转移性人乳腺癌细胞MDA-MB-435S侵袭能力的影响及其相关机制.方法 人乳腺癌细胞MDA-MB-435S以12.5、25、50、100和200μM终浓度的槲皮素处理后,台盼蓝拒染法检测细胞生长与增殖的变化;Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化;RT-PCR法及Western blot法分别检测基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA水平和蛋白水平的表达变化.结果 经槲皮素处理后,人乳腺癌细胞MDAMB-435S体外增殖及侵袭能力均明显下降,MMP-9 mRNA和蛋白表达亦明显下调,且均与药物剂量呈正相关.结论 槲皮素在体外剂量依赖性的抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的侵袭力,其机制可能与下调该细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达有关.     

益气活血方对乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞的影响

目的:观察益气活血方对乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法观察益气活血方对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞增殖的影响;釆用四甲基偶氮唑蓝法等观察益气活血方对MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞黏附能力的影响;采用Transwell小室模型观察益气活血方对MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞侵袭能力的作用。结果:益气活血方对MDA-MB-435S和MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用,呈现时间和质量浓度依赖性(P0.05)。益气活血方对MDA-MB-435S和MDA-MB-231细胞体外黏附具有抑制作用,当质量浓度为80mg·L-1时,对MDA-MB-435S细胞体外黏附抑制作用呈现时间依赖性(P0.05);益气活血方对MDA-MB-231细胞体外黏附的抑制作用呈现时间和质量浓度依赖性(P0.05)。益气活血方对MDA-MB-435S和MDA-MB-231细胞侵袭能力具有抑制作用,呈质量浓度依赖性(P0.05)。结论:益气活血方可以通过抑制影响乳腺癌MDA-MB-435S细胞和MDA-MB-231细胞的增殖、黏附和侵袭,达到抑制乳腺癌转移的作用。     

半夏总生物碱对人肝癌细胞增殖的抑制作用研究

目的：探讨半夏总生物碱（ TATP）对人肝癌细胞株QJY-7703增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（ MTT）比色法及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对QJY-7703细胞株的生长抑制作用;应用单细胞凝胶电泳技术检测TATP导致QJY-7703细胞的DNA损伤情况。结果人肝癌细胞QJY-7703经TATP处理后,其体外增殖能力明显下降,且与药物的剂量、加药时间呈正相关,与对照组比较,差异均有统计学意义（24 h：对照组QJY-7703细胞增殖OD490＝0．486±0．037,TATP组2．5、10．0、30．0、50．0 mg/L时的OD490分别为0．475±0．026、0．377±0．029、0．286±0．026、0．242±0．023;48 h：对照组OD490＝0．793±0．046,TATP组2．5、10．0、30．0、50．0 mg/L时的OD490分别为0．747±0．028、0．497±0．025、0．287±0．021、0．207±0．020）（P＜0．01或P＜0．05）。单细胞凝胶电泳（SCGE）中,TATP组细胞尾DNA含量：对照组为（6．92±4．85）mg/L,TATP组10．0、40．0 mg/L时分别为（17．30±5．39）mg/L、（36．52±8．67）mg/L;尾长：对照组为（16．06±9．17）μm,TATP组10．0、40．0 mg/L时分别为（29．29±13．09）μm、（65．33±17．06）μm;尾动量：对照组为（0．97±0．34）μm,TATP组10．0、40．0 mg/L时分别为（7．87±4．04）μm、（21．43±7．67）μm,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0．01）,且呈现浓度依赖性。结论在体外培养的条件下,一定剂量的TATP能明显抑制QJY-7703细胞增殖,其机制可能与DNA的损伤作用有关。     

外源性BDE-209对小鼠精子DNA的损伤

目的采用碱性单细胞凝胶电泳技术检测BDE-209染毒小鼠精子DNA的损伤,探讨BDE-209影响受精卵发育的可能机制。方法附睾尾取精法体外获得昆明小鼠精子,分别置于HTF培养基中。按照培养基中BDE-209终浓度的不同将实验分为5组:A组:0μg/ml;B组:2.5μg/ml;C组:5μg/ml;D组:10μg/ml;E组:20μg/ml。精子培养后,做单细胞凝胶电泳,再用彗星分析软件对细胞进行分析(SCGE),比较各组精子损伤的差异。结果在SCGE试验图片中,A组平均尾长为(1.15±1.27)μm。随着BDE-209浓度的增加,D组和E组,可见到部分细胞拖尾,平均尾长分别为(2.13±1.29)μm和(2.83.±2.46)μm,明显长于A组(P<0.01)。细胞尾部DNA的含量比也明显增加(P<0.01)。D组及E组的Olive尾矩、尾长/头长比A组长(P<0.01),C组的尾长/头长比A组大(P<0.05)。小鼠精子DNA损伤中各指标变化与BDE-209浓度的相关系数均大于0.9。结论外源性的BDE-209可造成小鼠精子DNA的损伤,导致小鼠精子DNA链的断裂。外源性BDE-209对小鼠精子DNA的损伤作用呈明显的剂量-效应关系。     

不同浓度吗啡复合罗哌卡因对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和细胞周期的作用影响

目的 观察不同浓度的吗啡复合罗哌卡因对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、转移侵袭和细胞周期的影响。方法 人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞接种于培养板24h,随机分为8组：对照组（C组）、罗哌卡因400μg/ml组（R组）、吗啡3μg/ml组（LM组）、吗啡30μg/ml组（MM组）、吗啡300μg/ml组（HM组）、罗哌卡因400μg/ml组+吗啡3μg/ml组（R+LM组）、罗哌卡因400μg/ml+吗啡30μg/ml组（R+MM组）和罗哌卡因400μg/ml+吗啡300μg/ml组（R+HM组）。处理乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞24h后,检测其增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞周期。结果 人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的增殖抑制情况：单独应用吗啡时,LM组、MM组、HM组均对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用（P<0.05）,并且抑制率随着吗啡浓度的升高而依次增加。单独应用罗哌卡因时对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用（P<0.05）。吗啡与罗哌卡因联合应用时,高浓度吗啡组与罗哌卡因具有协同作用。人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的迁移情况：单独应用吗啡时,LM组、MM组、HM组均能够抑制细胞迁移率（P<0.05）,迁移率随着吗啡浓度的升高而依次降低。单独应用罗哌卡因能够抑制细胞迁移率（P<0.05）。吗啡与罗哌卡因联合应用时,低浓度和中浓度吗啡组与罗哌卡因具有协同作用（P<0.05）。人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的侵袭情况：单独应用吗啡时,MM组、HM组均能够抑制细胞侵袭能力（P<0.05）,并且侵袭能力随着吗啡浓度的升高而依次降低,单独应用罗哌卡因时能够抑制细胞的侵袭能力（P<0.05）。吗啡与罗哌卡因联合应用时,中、高浓度组吗啡和罗哌卡因具有协同作用。人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的细胞周期情况：单独应用高浓度吗啡,能够抑制细胞进入G2/M期（P<0.05）。单独应用罗哌卡因,能够抑制细胞进入G2/M期（P<0.05）,低浓度吗啡与罗哌卡因联合应用对于将细胞抑制在G0/G1期和S期具有协同作用（P<0.05）。结论 吗啡复合罗哌卡因能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭,具有联合作用并呈剂量依赖性。     

虫草素对MDA-MB-231细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的研究虫草素对高转移潜能乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及其TMSG-1蛋白表达的影响。方法采用MTT法观察不同浓度的虫草素(0、1、2、4和8μg/ml)对MDA-MB-231细胞增殖的作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;免疫印迹法检测经不同浓度的虫草素(0、1、2、4和8μg/ml)处理48 h后,MDA-MB-231细胞TMSG-1蛋白的表达。结果虫草素能够以剂量依赖方式显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.01)。流式细胞术结果显示,虫草素可显著促进MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.01)。虫草素可以呈剂量依赖方式增强MDA-MB-231细胞TMSG-1的表达。与对照组相比,2μg/ml虫草素即可明显上调MDAMB-231细胞TMSG-1蛋白的表达(P<0.05)。结论虫草素可以呈剂量依赖方式抑制MDA-MB-231细胞的生长并诱导其凋亡;虫草素可能通过上调MDA-MB-231细胞TMSG-1蛋白的表达,发挥其潜在的抑制肿瘤细胞浸润转移的作用。     

光动力疗法对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的体外实验研究

目的观察光动力疗法(PDT)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的杀伤效果,选择最佳作用参数(光敏剂浓度和光照强度);探讨PDT的作用机制,为PDT在乳腺癌的动物荷瘤模型和临床运用提供理论依据。方法实验分为空白对照组、单纯激光组、单纯光敏剂组和实验组(照光 光敏剂)。对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行HpD-PDT实验,应用MTT法检测其光密度值OD492,观察不同实验条件下对人乳腺癌细胞在体外的抑制作用,并绘制其抑制曲线和观察其形态学变化。结果HpD-PDT组(HpD2μg/ml,5J/cm2)于治疗后24h明显抑制体外培养的人乳腺癌细胞,而空白对照组、单纯使用光敏剂组(HpD2μg/ml)及单纯激光照射组(5J/cm2)对细胞增殖均无明显影响。HpD-PDT后12h,透射电镜可见:实验组细胞内出现大量的核碎裂、核融解、核消失等坏死征象。结论HpD-PDT可明显抑制体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长,光动力疗法为乳腺癌新的治疗手段提供了理论及实验依据。     

中药薏苡仁酯作用喉癌Hep-2细胞的体外研究

目的　研究中药薏苡仁酯对喉癌Hep 2细胞的增殖抑制作用及机制。方法　应用MTT法测定不同浓度的薏苡仁酯对Hep 2细胞增殖抑制情况 ;应用单细胞凝胶电泳法 ,检测薏苡仁酯引起Hep 2细胞的DNA损伤情况。结果　 5 μl/ml～ 4 0 μl/ml的薏苡仁酯作用 4 8h后明显抑制Hep 2细胞的增殖作用 (P <0 .0 1) ;5 μl/ml和 10 μl/ml的薏苡仁酯作用 4 8h后引起Hep 2细胞DNA损伤 (P <0 .0 1)。结论　在体外培养的条件下中药薏苡仁酯能明显抑制Hep 2细胞的增殖 ,其机制与DNA的损伤作用有关     

新型黑麦酮酸D衍生物D69抗乳腺癌活性研究

目的研究一种来源于海洋微生物次级代谢产物的新型黑麦酮酸D衍生物D69对人乳腺癌的体内外抑制活性,并初步探讨其分子机理。方法通过镜下观察以及MTT比色法检测D69的细胞毒作用,构建人乳腺癌裸鼠移植瘤模型研究D69体内抗肿瘤活性。结果 D69对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435和ZR-75-30的生长具有显著的抑制作用,且呈剂量依赖性增强。其对MDA-MB-435和ZR-75-30细胞半数抑制浓度（IC50）分别为0.031μmol/L和0.036μmol/L,而对人永生化乳腺上皮细胞HMEC的抑制作用较低,IC50为0.686μmol/L。人乳腺癌裸鼠移植瘤模型验证D69能显著抑制在体肿瘤的生长。结论 D69可能是一种潜在的乳腺癌化疗药物的先导化合物。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S细胞周期的影响

目的：观察三羟异黄酮(genistein，Gen)对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA—MB—435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法：用噻唑蓝(MIT)法观察Gen对MDA—MB-435S细胞生长的影响；流式细胞仪观察Gen处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应关系；吖啶橙／溴乙锭染色法(acridine orange/ethidium bromide staining)在荧光显微镜下观察Gen对MDA—MB—435S细胞的凋亡作用。结果：随剂量增大和作用时间延长，Gen对MDA—MB—435S细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2—M期，而且随剂量的增大，作用时间的延长，阻滞作用也增强。吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见，随Gen剂量增大，细胞凋亡也逐渐明显。结论：Gen可抑制人乳腺癌细胞的增殖，其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2—M期阻滞。     

Cyclin E Expression and Chemotherapeutic Sensitivity in Breast Cancer Cells

The effects of the cyclin E expression levels on chemotherapeutic sensitivity of breast cancer cell line were explored. After the cyclin E expression was knockdown in MDA-MB-435 by RNA interference, FACS analysis and SA-p-gal staining were used to evaluate the response sensitivity of breast cancer cells to DNA damage drugs (adriamycin, etc.). Adriamycin could induce G1 arrest in cyclin E knockdown MDA-MB-435 breast cell line and increase the percentage of cell senescence in cyclin E knockdown MDA-MB-435 cells. It was suggested that cyclin E knockdown could increase the chemotherapeutic sensitivity of breast cancer cells to DNA damage drugs.     

注射用多西他赛磺丁基-β-环糊精包合物的体外抗肿瘤作用

为了评价注射用多西他赛磺丁基-β-环糊精包合物(ML061)对各种体外培养肿瘤细胞的细胞毒性作用,本研究选取MDA-MB-435、MDA-MB-435s、NCI-H446、HO-8910、Bcap-37、KB、SMMC-7721、HT-29、SW480、LS-174t、SGC-7901、MCF-7、A549、NCI-H460等14个肿瘤细胞株,分别用不同质量浓度(200,20,2,0.2,0.02,0.002,0.000 2,0.000 02μg/mL)ML061处理肿瘤细胞72 h,用MTT法测定细胞活力,并计算药物对各肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50。结果发现,ML061可抑制多种体外培养的肿瘤细胞株的活力,且这种抑制作用呈剂量依赖性。与阳性对照药市售多西他赛注射液奥名润相比,在选取的14个肿瘤细胞株中,ML061对Bcap-37、MDA-MB-435、MDA-MB-435s、NCI-H446和SW480的IC50小于0.1μg/mL。ML061对人卵巢癌Bcap-37、人结肠癌SW480、人小细胞肺癌NCI-H446、人乳腺癌MDA-MB-435及MDA-MB-435s等肿瘤细胞株的体外抑制作用较强。总之,ML061抑制多种体外培养的肿瘤细胞增殖,与阳性对照药奥名润相同,以Bcap-37、SW480、NCI-H446和MDA-MB-435s这4个细胞株较为敏感,而MDA-MB-435对ML061的敏感性高于奥名润。     

乳腺癌中STAT3对HSP27和c-MYC表达的调控作用

目的:研究人乳腺癌组织中信号转导和转录激活因子3(STAT3)对热休克蛋白27(HSP27)和c-MYC的调控作用. 方法:应用免疫组化检测51例人乳腺癌组织STAT3,HSP27,c-MYC蛋白的表达,分析他们的相互关系及与临床预后相关指标的关系. 在体外应用诱骗寡核苷酸(Decoy ODNs)抑制乳腺癌细胞MDA-MB-435S STAT3活性,Western blot检测MDA-MB-435S细胞HSP27,c-MYC蛋白表达,MTT检测肿瘤细胞增殖力,FCM检测MDA-MB-435S细胞周期和凋亡. 结果:在人乳腺浸润性导管癌组织中,STAT3的表达与HSP27和c-MYC表达均成正相关(rs=0.454,P=0.001;rs=0.541,P=0.000). 使用Decoy ODNs抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S STAT3活性能使其HSP27和c-MYC表达明显下调(P均<0.01),并使细胞阻滞于G0/G1期,凋亡增加,细胞增殖能力下降(P<0.01). 结论:STAT3表达可能通过上调HSP27和c-MYC的表达,抑制乳腺癌细胞的凋亡和促进其增殖,从而有利于乳腺癌进展并使其恶性程度增高.     

DBC2基因诱导乳腺癌细胞周期G1期阻滞的机制

目的 研究肿瘤抑癌基因DBC2(deletion in breast cancer 2)抑制乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖的可能机制.方法 野生型DBC2基因的真核表达载体pEBG-DBC2瞬时转染MDA-MB-435S细胞72 h,RT-PCR方法证实DBC2基因的过表达;流式细胞术检测DBC2的瞬时过表达对MDA-MB-435S细胞周期的影响,Western blot检测DBC2的过表达对细胞周期蛋白Cyclin D1表达的作用.结果 DBC2基因在MDA-MB-435S细胞中瞬时转染72 h后,其mR-NA表达水平即可成倍增加,同时DBC2基因的过表达可诱导该乳腺癌细胞周期的G1期阻滞,并随着时间的延长出现细胞凋亡.结论 DBC2基因体外抑制乳腺癌细胞生长的功能,可能通过抑制Cyclin D1的表达并使细胞停滞于G1期,以及诱导细胞凋亡等机制实现.     

三七花总皂苷抑制人乳腺癌细胞侵袭的体外研究

目的:研究三七花总皂苷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭能力的影响并探讨其相关机制。方法:MTT实验检测三七花总皂苷对肿瘤细胞增殖的抑制作用;Transwell小室法进行肿瘤细胞侵袭实验;RT-PCR检测β1-integrin、MMP-2、EGFR mRNA表达的变化;Western blotting检测β1-integrin、EGFR蛋白表达的变化。结果:在浓度为50～200μg/ml时,三七花总皂苷对人乳腺癌细胞的增殖具一定的抑制作用。Transwell小室实验显示,三七花总皂苷在浓度为10、50、100μg/ml均表现出侵袭抑制作用,浓度为50μg/ml侵袭抑制效果最佳,达到32.0%。三七花总皂苷对各浓度组对MDA-MB-231细胞β1-integrin、MMP-2和EGFR基因表达有下调作用(P0.01),一些浓度组对β1-integrin和EGFR蛋白的表达也具下调作用。结论:三七花总皂苷通过下调β1-integrin、EGFR mRNA和蛋白的表达,抑制肿瘤细胞与ECM粘附,降低肿瘤细胞运动能力,从而抑制人乳腺癌细胞的侵袭转移。     

青蒿素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435辐照后染色体畸变率的影响

目的应用常规染色体分析研究青蒿素对p53功能突变的人乳腺癌细胞MDA-MB-435的放射敏感作用。方法通过MTT法测定不同药物浓度及不同药物作用时间对细胞毒性的影响,常规染色体制片,计数细胞分类项中双着丝粒体（dic）和着丝粒环（r）数量,将经过青蒿素作用的乳腺癌细胞染色体畸变率（dic＋r）同单纯照射的细胞染色体畸变率进行统计分析。结果青蒿素对实验细胞MDA-MB-435毒性较小,200μmol/L浓度时作用24h细胞存活率〉95%,48h细胞存活率〉80%。参考存活曲线确定常规染色体畸变分析实验的药物浓度为200μmol/L,作用时间为24h。将得到的数据进行回归拟合,可以得到药物作用及未经药物作用的剂量效应曲线,比较两组曲线,青蒿素作用组的染色体畸变率明显高于单纯照射细胞（P〉0.05）。结论青蒿素能增加辐射对乳腺癌细胞MDA-MB-435的染色体损伤。     

GA对乳腺癌MDA-MB-435s细胞端粒酶活性的影响

目的：研究格尔德霉素（geldanamycin,GA）对乳腺癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法：培养人乳腺癌细胞株MDA—MB-435s,应用MTr法检测GA对MDA—MB-435s细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,用TRAP—ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果：不同浓度GA对MDA—MB-435s细胞增殖有明显抑制作用,呈时效-量效依赖关系,GA作用后细胞呈现G2／M期阻滞,细胞端粒酶活性下降（P〈O．05）。结论：GA对人乳腺癌MDA—MB-435s细胞增殖具有明显抑制作用,抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一。