百里醌抑制体外骨肉瘤细胞转移的实验研究

目的:探讨百里醌抑制体外骨肉瘤细胞转移的作用及其机制。方法:本研究应用不同浓度百里醌作用人骨肉瘤Sa OS-2细胞后,观察百里醌对体外骨肉瘤Sa OS-2细胞迁移和侵袭的作用;Western blotting检测骨肉瘤细胞中MMP-2和MMP-9表达的变化。结果:百里醌可呈浓度依赖性抑制体外人骨肉瘤骨肉瘤Sa OS-2细胞迁移和侵袭,同时百里醌可下调骨肉瘤Sa OS-2细胞中MMP-2和MMP-9的表达。结论:百里醌可抑制体外骨肉瘤细胞转移,该作用可能通过下调MMP-2和MMP-9的表达而实现。     

百里醌对大肠癌生长和转移的抑制作用

目的探讨百里醌对大肠癌生长及转移的影响及其机制。方法百里醌作用大肠癌细胞株SW480后,cell count-ing kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖;荧光显微镜下观察细胞形态;划痕试验和Transwell小室实验分别测定大肠癌细胞体外迁移和侵袭能力;用Western blotting检测大肠癌细胞中Mucin-4、HER-2和FAK蛋白表达;建立起裸鼠大肠癌皮下移植模型,观察百里醌对裸鼠大肠癌移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67和Mucin-4阳性表达。结果与对照组相比较,百里醌可显著抑制体外大肠癌SW480细胞生长、迁移和侵袭,并明显诱导细胞凋亡;百里醌可呈显著下调大肠癌细胞中Mucin-4和HER-2的表达,并抑制FAK磷酸化;百里醌可显著抑制裸鼠大肠癌皮下移植瘤生长;百里醌可明显降低大肠癌肿瘤组织中Ki-67和Mucin-4的阳性表达。结论百里醌可显著抑制大肠癌生长和转移,该作用可能通过抑制Mucin-4蛋白表达而实现。     

Apigenin对人乳腺癌细胞体外侵袭及诱导血管生成能力的影响

目的证实Apigenin可抑制乳腺癌细胞侵袭能力及诱导血管生成的能力,从而达到抑制乳腺癌的作用。方法建立肿瘤细胞体外侵袭模型和体外血管形成模型,观察乳腺癌细胞株ZR-75-30在Apigenin作用下其侵袭能力和诱导血管生成能力的改变;免疫细胞化学染色和RT-PCR检测Apigenin对ZR-75-30细胞MMP-9基因蛋白表达的影响。结果在Apigenin作用下,ZR-75-30细胞的侵袭能力和诱导血管生成的能力明显受到抑制,MMP-9基因和蛋白的表达下降。结论Apigenin可能通过抑制MMP-9表达,进而抑制ZR-75-30细胞侵袭和诱导血管生成能力,达到抗乳腺癌的作用。     

VEGF,b-FGF诱导人脐血单个核细胞向血管内皮祖细胞分化的研究

目的:研究VEGF, b-FGF诱导下人脐血单个核细胞向血管内皮祖细胞(EPCs)分化.方法:从新鲜脐血中用Ficoll密度梯度离心法获取单个核细胞,在加有VEGF,bFGF的M199培养基中培养,培养7 d,免疫组化(SABC法)和免疫荧光检测细胞表面抗原的表达.结果:人脐血血单个核细胞(MNCs)经体外VEGF, b-FGF的诱导分化,表达内皮祖细胞的表面标志KDR, CD1133和CD34.结论:人脐血单个核细胞在一定的培养条件下可诱导分化为内皮祖细胞.     

百里醌抑制膀胱癌细胞生长的实验研究

目的探讨百里醌对体外膀胱癌细胞株BIU-87生长的影响及其机制。方法百里醌单独作用人膀胱癌细胞株BIU-87及预处理NF-κB激活剂TPA后百里醌再作用BIU-87细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测膀胱癌细胞质中IκBα蛋白表达。结果与对照组相比较,百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞株BIU-87生长,并明显诱导细胞凋亡;预处理TPA可显著削弱百里醌对BIU-87细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;百里醌干预后膀胱癌细胞质中IκBα的表达明显上调。结论百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞生长,并诱导细胞凋亡,该作用可能通过促进其胞质中IκBα的表达而实现。     

海参皂苷Echinoside A通过MMP-9信号通路抑制肿瘤转移

从富含海参皂苷的革皮氏海参中分离纯化出Echinoside A（EA）,并研究了其抗肿瘤细胞转移活性及其作用机制。通过MTT法检测了EA对肿瘤细胞(HepG2)和人脐静脉内皮细胞生长的影响;采用细胞黏附实验、划痕愈合实验和Transwell小室侵袭模型研究了EA对肿瘤细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响;采用体外小管形成实验和鸡胚绒毛尿囊膜(CAM )血管新生模型研究了EA对血管新生的影响。实验结果表明：EA能显著抑制肿瘤细胞和内皮细胞的增殖,抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭和黏附能力,显著抑制 CAM 新生血管生成作用。免疫细胞化学和Western-blotting实验表明,EA能显著下调MMP-9和VEGF的蛋白表达,提高TIMP-1的表达,但是对NF-κB p65的表达无显著性影响;提示EA具有显著的抑制肿瘤转移作用,其作用机制可能是通过MMP-9信号通路并进一步抑制血管内皮生长因子的蛋白表达实现。     

芹菜素对A375黑色素瘤生长、迁移和血管生成的影响及其作用机制

目的  探讨芹菜素对A375黑色素瘤增殖、迁移和血管生成的影响及其作用机制。方法  采用四唑氮化合物（MTS）法检测芹菜素对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响;裸鼠皮下移植瘤模型考察芹菜素对体内黑色素瘤生长的影响;划痕实验检测芹菜素对细胞体外迁移的影响;小管形成实验检测芹菜素对人黑色素瘤血管生成的影响;Western blot检测芹菜素对A375细胞中调控增殖及血管生成相关蛋白表达的影响,如血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、磷酸化P38（p-P38）、总蛋白P38（t-P38）、磷酸化Erk（p-Erk）、总蛋白Erk（t-Erk）。结果  体外芹菜素处理A375细胞后,肿瘤细胞的体外增殖及体内生长较空白对照组明显受抑制;肿瘤细胞的迁移能力较溶剂对照组明显减弱;小管形成实验中,芹菜素能够抑制肿瘤细胞诱导的血管生成;分子机制研究发现,芹菜素能抑制血管生成相关蛋白VEGF及MMP-9的表达,同时芹菜素也能抑制调控肿瘤细胞增殖相关蛋白,如p-P38及p-Erk的表达。结论  芹菜素能抑制A375黑色素瘤生长、迁移及血管生成,其机制可能与抑制调控肿瘤细胞增殖及血管生成相关蛋白的表达有关。

     

脐血来源内皮祖细胞的生物学特性与安全性评价

目的:探讨脐血来源的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的生物学特性,评价其长期体外培养后的安全性.方法:分离脐血单个核细胞(mononuclear cells,MNCs),采用MCDB1 31.培养基联合VEGF等生长因子进行培养.观察培养细胞的形态,测定其生长动力学,采用流式细胞仪及免疫细胞化学方法检测其表型,应用细胞荧光化学法分析EPCs对乙酰化低密度脂蛋白(acetylated low-density lipoprotein,ac-LDL)的摄取功能,Matrigel上培养并检测其形成血管能力,染色体核型分析其遗传稳定性,裸鼠实验、软琼脂实验观察致瘤性.结果:脐血来源的内皮祖细胞体外进行长期传代培养,群体倍增水平可达42代,有内皮细胞表面抗原的表达,具有内吞ac-LDL的功能和结合UEA-1的特性及体外形成血管的能力,分离培养的EPCs不同代次的内皮细胞均具有正常核型,并未见致瘤性.结论:脐血来源的内皮祖细胞具有较高的增值潜能,在体外传代可以大量扩增,长期传代时核型稳定,无致瘤性,是作为细胞治疗和基因治疗的理想种子细胞.     

脐血血管内皮祖细胞移植对心肌梗死血管形成的影响

目的 探讨犬脐血血管内皮祖细胞(EPCs) 移植对心肌梗死血管形成的影响.方法 取妊娠犬脐血,体外分离、培养、扩增EPCs,免疫组化鉴定.建立成年杂种犬梗死模型,经BrdU标记的EPCs灌注移植入梗死区域,1、4、8周后处死动物,取心肌标本HE染色确认梗死模型、免疫组化染色BrdU观察EPCs参与梗死心肌血管形成、vW因子染色观察梗死心肌血管并计数以观察EPCs移植组与对照组血管形成差异.结果 免疫组化检测结果表明培养的细胞为EPCs;HE染色示心肌梗死区有大量瘢痕组织、成纤维细胞及小血管形成;免疫组化检测显示梗死心肌区域标本内小血管上存在BrdU阳性细胞;EPCs移植组与对照组心肌梗死后第1、4、8周的心肌缺血区和梗死区的血管计数均无显著差异.结论 犬脐血EPCs梗死心肌移植可参与血管形成,但不能促进心肌的血管再生.     

脐血血管内皮祖细胞移植对心肌梗死血管形成的影响

目的 探讨犬脐血血管内皮祖细胞(EPCs) 移植对心肌梗死血管形成的影响.方法 取妊娠犬脐血,体外分离、培养、扩增EPCs,免疫组化鉴定.建立成年杂种犬梗死模型,经BrdU标记的EPCs灌注移植入梗死区域,1、4、8周后处死动物,取心肌标本HE染色确认梗死模型、免疫组化染色BrdU观察EPCs参与梗死心肌血管形成、vW因子染色观察梗死心肌血管并计数以观察EPCs移植组与对照组血管形成差异.结果 免疫组化检测结果表明培养的细胞为EPCs;HE染色示心肌梗死区有大量瘢痕组织、成纤维细胞及小血管形成;免疫组化检测显示梗死心肌区域标本内小血管上存在BrdU阳性细胞;EPCs移植组与对照组心肌梗死后第1、4、8周的心肌缺血区和梗死区的血管计数均无显著差异.结论 犬脐血EPCs梗死心肌移植可参与血管形成,但不能促进心肌的血管再生.     

人脐血内皮祖细胞的体外培养

目的从人脐带血中分离内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）,建立人脐血内皮祖细胞体外培养的方法,为实现内皮祖细胞的移植及实验研究提供足量的细胞来源。方法采用密度梯度离心法分离人脐带血内皮祖细胞,在EGM-2培养基中培养,采用流式细胞仪、免疫组化和免疫荧光鉴定EPCs。结果脐带血单个核细胞在经EGM-2培养过程中出现梭形贴壁和铺路石样等形态;1周后既分化成EPCs,细胞免疫荧光CD133染色率在培养第7天为（67.2±2.12）%,免疫组化CD34染色率为（89.67±2.05）%,流式细胞仪鉴定该种细胞CD133与KDR的双阳性率达87.8%。可确定该细胞为EPSc。结论采用本培养方法可获得良好的内皮祖细胞用于实验研究。     

过表达Periostin蛋白对内皮前体细胞功能影响的实验研究

目的构建Periostin蛋白过表达慢病毒载体, 并检测其对内皮前体细胞(EPCs)功能的影响。方法从小鼠骨髓中获取EPCs, 并进行鉴定。采用Oligos设计获得目的基因, 构建慢病毒载体LV5/Periostin。慢病毒感染EPCs, 荧光显微镜下观察被感染细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况, Western blotting检测Periostin蛋白表达情况。CCK-8法和流式细胞计数检测被感染细胞的增殖和凋亡情况, 划痕法和Transwell小室法检测被感染细胞迁移和侵袭能力的改变情况。结果被重组慢病毒感染的EPCs明显表达GFP; 过表达慢病毒组细胞增殖活性较阴性对照组低, 而凋亡细胞较阴性对照组多(P < 0.05);过表达慢病毒组细胞的迁移率较空白对照组细胞高, 侵袭细胞数目较多(P < 0.05)。结论可以从小鼠骨髓中成功分离和培养EPCs, 过表达Periostin蛋白会降低EPCs体外增殖的活性, 促进其凋亡; 但会增加EPCs的体外迁移和侵袭能力。     

雌激素受体激动剂对人脐血内皮祖细胞增殖和迁移的影响

目的:观察选择性雌激素受体(ER)激动剂PPT(α亚型激动剂)和DPN(β亚型激动剂)对人脐带血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells EPCs)增殖和迁移的影响,并与17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)的作用进行比较。方法:采用密度梯度离心法分离获得脐带血单个核细胞,硫氰酸荧光素标记荆豆凝集素I(FITC-UEA-I)、DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-ac-LDL)双染及CD133免疫荧光鉴定EPCs。培养的EPCs分别加入不同浓度的E2、PPT和DPN(分别为1×10-10mol/L、1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L)进行细胞增殖实验分析(WST)、显微镜下EPCs计数及Transwell技术测定对EPCs迁移的影响。结果:E2及PPT呈浓度依赖性促进EPCs的增殖和迁移,PPT刺激作用等同于E2,DPN无刺激作用。结论:雌激素α亚型激动剂PPT明显刺激内皮祖细胞的增殖和迁移,其作用与17β-雌二醇相同。     

Tip30基因表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的：分析Tip30表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。方法：聚乳酸-羟乙酸(polylactic-co-glycolic acid, PLGA)纳米粒介导腺相关病毒质粒pAAV-Tip30真核表达质粒转染HepG2细胞。RT-PCR检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2,MMP-9和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA水平;Western印迹 检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平;Transwell法检测肝癌细胞迁移能力;四氮唑盐(MTS)法和细胞集落形成实验检测细 胞增殖能力;细胞-细胞黏附试验、细胞-基质黏附实验检测Tip30表达对肝癌细胞黏附能力的影响。结果：过表达Tip30 基因的HepG2肝癌细胞明显降低了MMP-2,MMP-9的mRNA表达和蛋白的翻译;肝癌细胞的增殖、锚定非依赖性生长及 肝癌细胞迁移能力均明显受到抑制。结论：体外实验研究证明Tip30基因可抑制肝癌细胞侵袭转移的能力。     

Wnt3a基因沉默对内皮祖细胞增殖的影响

目的 探讨wnt3a基因沉默对内皮祖细胞( EPCs)增殖的影响. 方法 体外分离、培养及鉴定EPCs. 将沉默型pEGFP-shRNA-wnt3a重组质粒转染EPCs; Western blot法分析wnt3a 在 EPCs 中的表达变化;MTT 分析 wnt3a 沉默对EPCs增殖的影响. 结果 鉴定培养的细胞为EPCs;Western blot法结果提示pEGFP-shRNA-wnt3a转染EPCs后明显抑制了 wnt3a 蛋白的表达. MTT 提示沉默型 pEGFP-shRNA-wnt3a转染组吸光度值明显低于空白对照组. 结论 成功分离、培养出EPCs,wnt3a有效沉默明显抑制EPCs的增殖,为进一步的实验提供了基础.     

Gd-BOPTA标记对人脐血内皮祖细胞生物学特性的影响与MR成像研究

目的探讨Gd-BOPTA标记人脐血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的方法和对标记EPCs生物活性的影响,观察标记EPCs的体外磁共振成像特点。方法应用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养EPCs。采用jetPEITM-FluoF介导Gd-BOPTA标记EPCs,比较不同标记浓度和标记时间对EPCs生物活性的影响,收集未标记细胞和标记24 h的细胞进行体外MR成像,比较不同浓度标记的细胞在不同扫描序列中的信号强度变化。结果荧光显微镜下观察,标记的EPCs胞质内可见绿色荧光颗粒,透射电镜可见胞质内散在分布许多Gd颗粒,颗粒主要位于胞质的细胞器如高尔基体周围以及附着在细胞膜内层上。Gd-BOPTA标记规律呈"抛物线"样,即随着标记浓度增高和标记时间的延长,细胞内聚集的Gd颗粒增多,细胞的标记率也增高,但在浓度为25μg/ml标记24 h标记率达峰值[(88.2±1.6)%]后,标记率逐渐降低。在标记浓度低于25μg/ml标记24 h时,对细胞的黏附能力、迁移能力及增殖能力均无影响(P>0.05)。在T1 WI序列最大相对信号强度出现在浓度为25μg/ml时,而后信号降低,与对照管相比差异显著(P<0.05),在T2 WI和T2*WI序列上相对信号强度变化无显著性差异(P>0.05)。结论 jetPEITM-FluoF可介导Gd-BOPTA有效地标记EPCs,对MR信号的影响主要为T1WI正性效应,最适标记浓度和最佳标记时间分别为25μg/ml、24 h。     

胎儿生长受限孕妇外周血及新生儿脐血中内皮祖细胞数量与功能的变化

目的:观察胎儿生长受限(FGR)孕妇外周血及新生儿脐血中内皮祖细胞(EPCs)数量与功能的变化.方法:选择FGR孕妇及新生儿15例和对照组健康孕妇及新生儿15例,密度梯度离心法收集外周血及脐血中单个核细胞(MNCs),接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,诱导分化培养9 d后收集贴壁细胞进行细胞化学分析.激光共聚焦显微镜下...     

sEHi对冠心病患者内皮祖细胞功能的影响

目的：观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor, sEHi)tAUCB对冠心病(CHD)患者外周血来源的内皮祖细胞 (endothelial progenitor cells, EPCs)迁移、血管生成能力和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）表达的影响。方法：采用密度梯度离心法从CHD患者外周血获取单个核细胞培养7 d后,采用免疫荧光和流式细胞仪进行EPCs的鉴定;随后用不同浓度 (0, 10-6, 10-5, 10-4 mol/L) tAUCB干预24 h,分别用Transwell小室和Matrigel-Matrix管腔形成的体外模型检测其迁移、血管生成能力的变化,提取蛋白用Western印迹检测EPCs VEGF的表达。培养年龄性别匹配的健康对照者的EPCs作为对照组。 结果：与健康对照组相比,CHD患者EPCs的迁移及血管生成能力均显著下降 (P＜0.05);与处理前（0 mol/L tAUCB）相比,tAUCB呈浓度依赖性地显著增加CHD患者EPCs迁移、血管生成能力并促进CHD患者EPCs 表达VEGF。 10-6 mol/L tAUCB即明显增加CHD患者EPCs的上述功能并促进其VEGF的表达(P＜0.05)。结论：sEHi具有正向调节CHD患者EPCs功能的作用,其有望成为一类治疗CHD的新型药物。