噬菌体裂解法在结核菌检测中的研究进展

噬菌体生物扩增法(PhaB)是一项接近于细菌培养的微生物学实验室技术,它能快速准确地检出结核分枝杆菌以及检测结核菌的药物敏感性,近年来在结核病诊断研究中备受关注。PhaB是一种敏感度和特异性均较高的方法。本文就分枝杆菌噬菌体的特性、在快速检测结核菌及药敏试验中应用研究进展予以综述。     

噬菌体扩增技术在结核分枝杆菌检测中的应用体会

作为对人类最具威胁性的传染病之一,近年来结核病流行正逐步加剧.目前对结核病诊断主要依靠与实验室检查、临床症状、体征及胸片等其他辅助检查相结合.     

SEPTIC技术快速检测结核分枝杆菌

目的评价SEPTIC(sensing of phage-triggered ion cascade)技术在结核分枝杆菌快速检测中的应用价值。方法制备纳米阱微芯片,用于检测噬菌体感染细菌时导致细胞内离子释放发生的微范围内的电位变化。调整大肠杆菌、结核分枝杆菌、耻垢分枝杆菌及其相应噬菌体的浓度。将细菌和噬菌体等体积混合,37℃孵育1 min,取5μl混合液滴于探针上,30 s后开始采集数据,每2 min采集一个数据文件,共采集10 min,计算机分析采集结果。结果当结核分枝杆菌与分枝杆菌噬菌体D29混合反应时,在0~8 min内显示了非常明确的1/f功率谱特征,而且功率谱强度明显高于阴性反应的功率谱,并出现了明确的电压超出±4σ范围的波形,持续约0.2 s的时间,可认为发生了一次细菌被噬菌体感染的事件,表明探针明确地捕获了细菌被噬菌体感染的事件。结论SEPTIC技术能在较短时间内检测、鉴定出活菌的存在,有可能为结核分枝杆菌的检测提供一种简便、快捷的方法。     

噬菌体生物扩增法快速鉴定结核分枝杆菌的临床价值

目的:探讨噬菌体生物扩增法(Phab)快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法:应用Phab、罗氏法及涂片法共同检测236例痰标本。结果:痰标本3种方法检测结果比较:236份临床确诊的活动性肺结核患者痰标本,涂片、罗氏培养和Phab法检查结果分别有64份(27.1%)、78份(33.1%)和114份(48.3%)阳性;比较Phab与涂片和培养的阳性检测率,Phab检出率远高于涂片法,差异有统计学意义(χ2=77.706,P<0.01),Phab检出率高于罗氏法检出率,差异有统计学意义(χ2=95.678,P<0.01)。结论:FASTPlaque TB方法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法。     

Genotype MTBDR plus快速检测耐多药结核病的临床应用

目的评价Genotype MTBDR plus快速检测耐多药结核病的临床应用价值。方法对涂阳肺结核患者痰标本和临床分离菌株分别用传统比例法药敏试验和Genotype MTBDR plus进行异烟肼和利福平耐药性检测,以比例法药敏试验为金标准对Genotype MTBDR plus检测结果进行比较分析。结果在368例涂阳痰标本中,比例法药敏试验与Genotype MTBDR plus检测异烟肼、利福平耐药率比较,差异均无统计学意义(P均0.05);两种方法检测异烟肼和利福平的一致率分别为95.38%(351/368)和97.55%(359/368)。在85例临床分离菌株中,比例法药敏试验与Genotype MTB-DR plus检测异烟肼、利福平耐药率比较,差异均无统计学意义(P均0.05)。两种方法检测异烟肼和利福平一致率分别为92.94%(79/85)和96.47%(82/85)。与比例法药敏试验比较,Genotype MTBDR plus检测涂阳痰标本和菌株中异烟肼的灵敏度分别为76.32%(29/38)、78.57%(11/14),特异性分别为97.58%(322/330)、95.77%(68/71));检测利福平的灵敏度分别为93.55%(29/31)、91.67%(11/12),特异性分别为97.92%(330/337)、97.26%(71/73)。结论 Genotype MTBDRplus能快速检测结核分枝杆菌对异烟肼、利福平的耐药性,和传统药敏试验比较具有较高的一致性和特异性,是目前快速诊断耐多药结核病的一种较为理想的检测方法,适宜在有条件的实验室开展。     

Xpert MTB/RIF试验检测结核分枝杆菌及其耐药性研究

目的 探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)在检测结核分枝杆菌(M.tubercutosis,MTB)及其利福平耐药性方面的应用价值.方法 收集151例疑似结核患者标本,分别进行液体变色培养基培养、涂片镜检、传统比例法药敏试验以及Xpert MTB/RIF试验检测,分析Xpert MTB/RIF试验检测MTB及其耐药性的敏感度和特异度.结果 以液体变色培养基培养试验作为金标准,Xpert MTB/RIF试验检测MTB的敏感度和特异度分别为75.8％(25/33)和79.7％(94/118),两者一致性好(K=0.472).以传统比例法药敏试验为金标准,Xpert MTB/RIF试验检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为80.0％(4/5)和89.3％(25/28),两者一致性好(K=o.595).结论 Xpert MTB/RIF试验检测MTB及其耐药性具有较高的灵敏度和特异度.     

噬菌体扩增技术快速检测结核分枝杆菌的临床应用

结核病细菌学检查主要靠痰涂片和培养的方法,阳性率只有30％左右。结核菌培养则需1-2mo。结核抗体检测假阳性率、假阴性率都很高。FAST-plaqueTB噬菌体扩增技术检测结核杆菌,具有特异性和灵敏度高的优点,而且快速、简便。     

结核/非结核分枝杆菌核酸检测对结核性脑膜炎的诊断价值

目的 探讨脑脊液中结核/非结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis/nontuberculous mycobacteria,MTB/NTM)核酸检测诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的临床价值。方法 收集120例TBM患者的临床资料,采用随机数字表法将患者分为TBM A组(n=67,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测)和TBM B组(n=53,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测),另收集其他中枢神经系统感染患者脑脊液18例为对照组(C组,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测、GeneXpert MTB/RIF检测)。结果 TBM A组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测阳性率分别为13.43%(9/67)、10.45%(7/67)、46.27%(31/67);TBM B组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为15.09%(8/53)、11.32%(6/53)、47.17%(25/53),GeneXpert MTB/RIF检测阳性病例中利福平耐药基因检测阳性2例。C组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测和GeneXpert MTB/RIF检测均为阴性。结论 MTB/NTM核酸检测与GeneXpert MTB/RIF检测均可辅助早期诊断TBM,相较于后者更经济,并能鉴别非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria, NTM)感染,及时减少NTM病误诊、误治,值得临床推广。     

线性探针技术快速检测耐药结核分枝杆菌的 应用评价

目的 评价线性探针技术(Geno-Type?MTBDRplus)检测结核分枝杆菌耐药性的可靠性和及时性.方法 用线性探针技术对240株结核分枝杆菌进行利福平、异烟肼耐药性检测,以比例法药敏试验作为金标准,比较线性探针法与比例法药敏试验耐药结果的符合程度,评价其准确性和应用价值,同时比较二者检测报告时间.结果 与比例法相比较,线性探针技术检测异烟肼敏感性96.8%,特异性95.3%;阳性预测值97.4%,阴性预测值94.3%;检测利福平敏感性95.8%,特异性91.8%;阳性预测值94.4%,阴性预测值93.4%.比例法检出耐多药88例,检出率为36.7%,线性探针法检出耐多药87例,检出率36.3%,一致率为98.9%,检测耐多药的敏感度98.9%,特异性100%;阳性预测值100%,阴性预测值99.3%,两种方法检出率差异无统计学意义(校正x2=0.0000,P=1.0000).结论 线性探针技术检测利福平、异烟肼耐药性与比例法具有高度一致性,有较高的敏感性和特异性,而且操作简便、结果准确,报告时间短,可以作为地市级快速检测结核分枝杆菌耐药性的方法.     

TB快速检测试剂盒的应用评价

目的结核分枝杆菌是引起结核病的主要原因,结核分枝杆菌的快速诊断尤为重要,它能给临床提供正确的诊断依据,目前市场上检测结核分枝杆菌方法虽多,但灵敏度和特异性参差不齐.方法我室选用结核快速诊断试剂盒,通过对3285例有发热咳嗽等临床症状的住院和门诊病人初筛与细菌学、CT、胸片、结核菌素实验的比对.结果快速诊断试验组阳性率明显高于其他组有显著性差异P<0.05,与临床诊断确诊组无显著性差异P>0.05,说明在基层卫生组织尤其是广大农村更快更正确诊断结核病快速切断传染源尤为重要,建议试剂厂家尽快生产出灵敏度强和特异性高的快速诊断试剂盒,以满足临床之急需.     

MPB64抗原检测对非结核分枝杆菌快速鉴别的意义

目的探讨结核分枝杆菌MPB64抗原在快速鉴别非结核分枝杆菌的诊断中的应用价值。方法对89例痰结核分枝杆菌培养阳性标本,进行培养液结核分枝杆菌MPB64抗原免疫胶体金法检测,并对结果进行比较分析。结果25例确诊非结核性标本,抗原检测均阴性;64例确诊结核性标本中,62例抗原检测阳性,阳性率为96.9%。用MPB64抗原胶体金法检测非结核分枝杆菌,敏感性为96.9%,特异性为100%,诊断一致率为97.8%。结论分枝杆菌MPB64抗原胶体金法可快速鉴别结核分枝杆菌及非结核分枝杆菌,具有高度的特异性和敏感性,是早期诊断与鉴别诊断非结核分枝杆菌感染的一种有价值的检测方法。     

变色液体培养基快速检测结核分枝杆菌及其耐药性

肺结核病已成为全球的公共卫生问题[1],控制结核病的发展与蔓延的关键是耐药结核病的控制.快速变色液体培养基在检测阳性率方面显著高于涂片法,也高于罗氏培养法[2].在检测时间上远远短于罗氏培养法,因此能达到快速诊断的目的,且其检验过程不需特殊仪器,操作过程简化,提高了检出效率.本研究采用变色液体培养基快速检测肺结核患者痰标本中的MTB,同时做H(异烟肼)、R(利福平)、S(链霉素)、E(乙胺丁醇)的敏感性试验和比例法药敏试验,对结果进行比较,现报告如下.     

GeneXpert Mtb/RIF检测技术在结核病诊断中的应用评价

目的 评估GeneXpert Mtb/RIF检测技术对肺结核诊断和耐利福平肺结核筛查的效果,为筛选最佳实验室检测方法提供依据。方法 收集三亚市定点医院结核病门诊2015年5月—2016年12月243例临床诊断为肺结核的痰标本,分别进行涂片镜检、痰培养和GeneXpert Mtb/RIF检测,分析三种方法的敏感度和特异度。以比例法药敏为标准,分析GeneXpert检测利福平耐药的敏感度和特异度。结果 涂片镜检与GeneXpertMtb/RIF对比,GeneXpertMtb/RIF检测结核菌的敏感度为93.7%,特异度为28.9%,GeneXpertMtb/RIF检测与涂片镜检一致率为83.5%。痰培养与GeneXpertMtb/RIF对比,GeneXpert检测结核菌的敏感度为96.7%,特异度为56.6%,GeneXpert检测与痰培养的一致率为91.8%。利福平耐药大多与rpoB基因突变有关,GeneXpertMtb/RIF检测利福平耐药与比例法药敏一致率为98.1%, 敏感度为88.9%,特异度为98.9%,并且可检测出利福平耐药基因位点。结论 GeneXpert Mtb/RIF 检测技术适用于结核分枝杆菌及耐药结核分枝杆菌的快速筛查,在痰涂片和痰培养上补充GeneXpertMtb/RIF检测可提高病原学检出率,尽早发现耐多药病患。     

结核病实验室检测技术的研究进展

结核病是一种引起全球关注的慢性人畜共患传染病,病原体是结核分枝杆菌(MTB)。预防和控制结核病的关键是探索出快速精准的实验室检测技术。由于结核病临床表现多样化,MTB生长周期长,目前在全球范围内仍急需对结核病快速准确诊断的实验室检测方法。近年来,借助分子遗传学的发展,科研工作者对结核病发病机制的研究和认识不断深入,当前国内外关于结核病检测技术已有新的突破。因此,回顾目前结核病实验室检测新技术,将为结核病的精准防治提供新支持。     

噬菌体裂解法和抗酸染色法快速检测结核分枝杆菌的比较

目的比较分析噬菌体裂解法和抗酸染色法对结核病的诊断价值。方法采用噬菌体裂解法和抗酸染色法,同时检测150份临床确诊结核病患者的痰液标本。结果噬菌体法阳性率为63.3%(95/150),涂片法为40%(60/150),两法比较有显著性差异(P<0.01)。结论噬菌体裂解法检测结核病患者的痰液标本中的结核杆菌具有敏感性高和特异性强的特点,同时还能区分标本中是否有活菌的存在,对结核病诊断和治疗可提供有价值的依据,具有较高的应用和推广价值。     

运用线性探针技术快速检测耐多糖结核分枝杆菌的效果评价

目的 评估线性探针技术快速检测耐多药结核分枝杆菌的效果。方法 选取317例结核分枝杆菌分离株分别进行MGIT960液体药物敏感性试验和线性探针快速检测,以液体法作为金标准,探讨线性探针检测技术的敏感性和特异性以及Kappa值。结果 317株结核分枝杆菌复合群样本分别进行MGIT960液体药物敏感性试验和线性探针快速检测,其中液体法利福平(RFP)耐药率为5.5%,异烟肼耐药率为11.5%,耐多药(MDR)患者检出率为4.7%;线性探针快速检测法利福平(RFP)耐药率为7.4%,异烟肼耐药率为11.7%,MDR检出率为5.7%。以液体法为金标准,线性探针检测技术检测利福平和异烟肼的敏感性和特异性分别为94.3％、97.7％和86.3％、98.0％。结论 线性探针检测技术是一个敏感、特异和快速的诊断MDR的有效方法。     

基因芯片方法快速检测MDR-TB及利福平和异烟肼耐药基因的研究

目的 使用基因芯片结合仪器法液体快速培养分析耐多药(multidrug resistant,MDR)结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)的耐药基因和表型特征.方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增-基因芯片杂交法检测耐多药结核分枝杆菌(multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB)菌株中利福平(rifampin,RFP)和异烟肼(isoniazid,INH)耐药基因的突变位点及类型,平行用BD MGIT960系统检测所选菌株对RFP和INH的敏感性.结果 以MGIT960药敏结果作为参考标准,34株MDR-TB中,基因芯片检测MTB对RFP、INH药的符合率分别为85.29%和94.11%;32株RFP耐药突变株中22株为rpoB 基因531位密码子突变,29株INH耐药突变株中24株为katG基因315位密码子突变.结论 基因芯片技术可快速、有效地检出MDR-TB,可以在未获得传统细菌表型药敏结果前指导临床用药治疗.