成年大鼠骨髓间充质干细胞复合组织工程人工神经修复1cm坐骨神经缺损

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)作为组织工程化人工神经的种子细胞移植治疗外周神经损伤的效果。方法从成年大鼠的骨髓中分离培养得到BMSC,复合去细胞神经支架构建"组织工程化人工神经"。移植后分为BMSC+去细胞SD大鼠神经导管组(BMSC治疗组)和空细胞SD大鼠神经导管组(阴性对照组),每组各5只。比较两组大鼠术后2、4、8周损伤侧坐骨神经功能指数(SFI),术后8周损伤侧坐骨神经传导功能和小腿三头肌湿重恢复率等修复效果的指标。结果BMSC治疗组的坐骨神经修复术后2、4、8周损伤侧坐骨神经功能指数,术后8周损伤侧坐骨神经传导功能和小腿三头肌湿重恢复率均优于阴性对照组(均为P0.05)。结论 BMSC复合去细胞神经支架的组织工程化人工神经可有效促进神经再生和功能恢复。     

冻干去细胞同种异体神经种植类许旺细胞修复坐骨神经缺损的实验研究

目的研究冻干去细胞异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法50只成年雌性DA大鼠随机分为5组，每组10只，分别用5种移植物桥接大鼠1．5cm坐骨神经缺损。A组：冻干去细胞异体神经种植类许旺细胞移植组；B组：冻干去细胞异体神经移植组；C组：去细胞异体神经移植组；D组：新鲜异体神经移植组；E组：自体神经移植组。术后4、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果术后24周A、E组间差异无统计学意义（P〉0．05），A、E组的各项指标均优于B、C、D组（P〈0．05或P〈0．01）。结论冻干化学去细胞神经是良好的神经移植替代材料。     

去细胞异种神经复合骨髓基质干细胞修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨去细胞异种神经(acellular xenogeneic nerve,AXN)复合骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)修复周围神经缺损的效果.方法 体外培养大鼠BMSCs;取雌性Wistar大鼠60只,随机分为3组,每组20只,建立右坐骨神经10 mm缺损修复模型.A组:BMSCs与AXN复合修复神经缺损;B组:单纯AXN修复神经缺损;C组:自体神经移植组.术后4、12周依次进行干细胞的转归、移植免疫、神经电生理检测、新生神经组织学观察和小腿三头肌肌纤维横径等检测,判断坐骨神经功能恢复情况.结果 术后移植物内均可见细胞生长,A、C组细胞数目较多,排列整齐,只有A组S-100免疫组化染色阳性细胞内可见BrdU阳性表达,术后12周再生神经已通过远端缝合口.A组、C组组织学及电生理检测指标均优于B组(P＜0.05),A组与C组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BMSCs作为种子细胞可以在体内存活,并可分化为SCs,其与AXN复合构建组织工程神经修复神经缺损的效果接近于自体神经移植.     

兔化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损

目的：以化学去细胞兔神经移植修复大鼠坐骨神经缺损，从而探索化学去细胞异种神经移植修复神经缺损的可能性；方法：以30％TritonX-100和40%脱氧胆酸钠顺序处理新鲜取材的兔神经(直径15nm左右)，移植修复成年wistar大鼠l.0cm坐骨神经缺损．4个月后行电生理及组织学检查，观察神经再生情况；结果：移植神经未被宿主排斥，大量再生的神经纤维长过移植物，并恢复电传导功能；结论：化学去细胞异种神经可以作为修复周围神经缺损的一种很有前途的方法。     

异种化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损的功能评价

[目的]评价异种化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损后神经功能恢复,从而为临床应用去细胞异种神经移植修复神经缺损提供更为充分的理论依据.[方法]雄性Wistar大鼠15只,致左侧坐骨神经1 cm缺损,以等粗兔化学去细胞神经移植修复.每2周测定坐骨神经指数,移植后4个月动物麻醉后暴露移植段神经,刺激近侧神经干、于同侧胫后肌群记录运动诱发电位,之后取移植段神经切片后行HE组织化学及NF-160免疫组织化学染色. [结果]去细胞异种神经移植物未被宿主排斥,大量神经纤维长入移植物,神经电生理及坐骨神经指数显示宿主坐骨神经功能有部分恢复.[结论]去细胞异种神经移植可以作为修复周围神经缺损的一种有效方法.     

化学去细胞异种神经移植后宿主的许旺细胞在移植物内的增殖

目的 观察化学去细胞异种神经移植后宿主许旺细胞向移植物内增殖的情况。方法 移植化学去细胞兔神经修复大鼠1cm坐骨神经缺损，4个月后处死动物，取移植物行苏木精-伊红染色、S-100免疫组织化学染色及透射电镜观察。结果 再生神经纤维顺利长入移植物，围绕再生纤维有大量胞体S-100免疫组化反应阳性的细胞呈条索状排列，半薄切片显示移植物内再生轴突排列整齐，透射电镜显示有细胞包绕再生轴突并形成髓鞘。结论 化学去细胞异种神经移植后宿主许旺细胞可随再生纤维长入移植物并形成髓鞘。     

种植脂肪干细胞的去细胞神经修复坐骨神经缺损的实验研究

目的 探讨脂肪干细胞(ADSCs)应用于组织工程化外周神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.方法 48只体重200～220 g的雌性F344大鼠随机分成6组,每组8只,分别用下面6种不同的实验组修复15 mm长坐骨神经缺损.A组:种植ADSCs的去细胞神经;B组:种植诱导ADSCs的去细胞神经;C组:种植许旺细胞(SCs)的去细胞神经;D组:去细胞神经;E组:自体神经移植;F组:空白对照.通过神经电生理检测、荧光金逆行示踪、组织学检测和坐骨神经功能指数测定评价各组修复神经缺损的效果.结果 术后12周,F组未见桥接物,A组和B组的神经电生理等各项指标均分别优于D组(P＜0.05或P＜0.01),与C组和E组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 初步结果显示ADSCs及诱导后ADSCs作为种子细胞,与去细胞神经构建的组织工程化外周神经移植体,能够修复外周神经缺损.     

优化法去细胞大鼠神经同种异体移植修复坐骨神经缺损

[目的]以优化法去细胞大鼠神经移植,修复同种异体坐骨神经缺损,观察术后动物的免疫排斥、早期功能恢复及神经再生情况。[方法]以优化去细胞方法处理新鲜取材的成年SD大鼠坐骨神经,移植修复同种异体1.0cm坐骨神经缺损,以自体神经和新鲜异体神经移植为对照,术后1个月行坐骨神经功能指数评价、神经电生理和组织学检查,观察动物在功能恢复、免疫排斥及神经再生方面的情况。[结果]自体神经和去细胞异体神经移植组动物的坐骨神经功能指数无显著差异(P>0.05),大体观察均可见神经连续性良好。电生理检测表明2组动物移植神经均已恢复电传导能力,在传导速度(CV)上无显著差异(P>0.05),但均未达到正常神经水平(P<0.05)。组织学观察则显示2组再生神经纤维均已长入移植段远端。S-100免疫组化显示两者在雪旺氏细胞数、形态和排列等方面无明显差异。2组在CD8 T细胞和巨噬细胞免疫组化染色阳性面积百分比上差异无统计学意义(P>0.05)。计算移植神经中段轴突密度后表明两者无显著差异(P>0.05),但都比正常神经小(P<0.05),比新鲜异体神经移植组大(P<0.05)。[结论]优化去细胞神经移植组与自体神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面无显著差异。优化法去细胞神经在移植修复同种异体神经缺损时,可以达到免疫耐受,其早期功能恢复和神经再生情况良好,在修复周围神经缺损时可以作为自体神经移植的一种替代疗法。     

胶原蛋白-明胶支架材料修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的制备胶原蛋白一明胶神经支架材料（CG材料）并研究其在修复大鼠10mm坐骨神经缺损实验中的疗效。方法以I型胶原蛋白、明胶通过冷冻干燥技术制备具有轴向微管结构的神经支架材料，用其桥接修复sD大鼠坐骨神经10mm缺损。术后16周分别行透射电镜，S-100、β-tubulin class Ⅲ、NFl60免疫荧光染色以及电生理检测，观察支架材料引导神经再生的疗效。结果制备的材料内部为孔径均匀且平行排列的微管结构，术后16周通过透射电镜和免疫荧光染色可见大量再生神经纤维，电生理检测神经传导速度及波幅接近自体神经移植。结论胶原蛋白一明胶支架材料能够有效的促进周围神经再生。     

优化法去细胞兔神经移植修复大鼠坐骨神经缺损

目的 以优化法去细胞兔臂丛神经，移植修复大鼠坐骨神经缺损，观察免疫排斥情况、早期功能恢复及神经再生情况。方法 以优化法处理新鲜取材的新西兰大白兔臂丛神经分支，移植修复成年sD大鼠坐骨神经1．0cm缺损，分别于术后1个月及3个月行功能评价、电生理和组织学检查，观察免疫排斥、功能恢复及神经再生情况。结果 实验组与自体神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面无显著差异，却明显优于新鲜兔神经移植组。3个月取材时的神经再生及功能恢复情况优于1个月取材时。结论 优化法去细胞神经在移植修复异种神经缺损时，可以达到免疫耐受，其早期功能恢复和神经再生情况良好，在修复周围神经缺损时有望作为自体神经移植的一种替代疗法。     

Comparison of acellular nerve allograft modification with Schwann cells or VEGF

Background

Individual contributions of exogenous Schwann cells (SCs) and vascular endothelial growth factor (VEGF) were evaluated in acellular nerve allografts (ANAs). ANA processing removes SCs and vasculature, likely contributing to reduced regeneration compared to autografts. Exogenous SCs may improve the regenerative microenvironment, and VEGF has been shown to stimulate angiogenesis. Replacing these components in ANAs may improve regeneration.

Methods

A rat sciatic nerve transection model was used to study 20-mm grafts. Four graft types were studied: (1) isograft, (2) ANA, (3) ANA-SCs, and (4) ANA-VEGF. After 10 weeks in vivo, the midgraft and distal nerve to the grafts were analyzed for axonal regeneration using histomorphometry to assess total myelinated axon counts, density, width, and percent neural tissue.

Results

The most axons in the distal nerve were regenerated in the isograft followed by the ANA- SC group, with 9171 ± 1822 and 7103 ± 1576 regenerated axons respectively. Both the ANA and ANA-VEGF groups had significantly fewer regenerated axons compared to the isograft (p < 0.05) with 5225 ± 2994 and 5709 ± 2657 regenerated axons, respectively. The ANA and ANA-VEGF groups also had significantly reduced fiber density and percent nerve compared to the isograft; the isograft and ANA-SC groups were not significantly different (p < 0.05).

Conclusions

These results show that SCs improve axonal regeneration in a 20 mm ANA to a greater extent than VEGF. VEGF treatment showed a trend toward increased axonal regeneration but was not significantly different compared to the untreated ANA. The role of VEGF may be clearer in longer grafts where ischemia is a greater factor.     

同种异体神经复合体修复兔坐骨神经缺损的研究

目的 用种植胎兔雪旺细胞的去细胞同种异体神经复合体修复兔缺损的坐骨神经,观察坐骨神经再生及功能恢复.方法 健康成年新西兰白兔48只,体质量1.5-2.0 kg,随机分成2组.两组动物均切除一段坐骨神经,造成2.0 cm长的缺损.实验组:用种植胎兔雪旺细胞的同种异体神经复合体修复坐骨神经.对照组:仅用去细胞同种异体神经修复.术后4、8、16周进行大体观察、标本光镜和电镜观察且进行量化分析、肌湿重检测.结果 手术区局部均未出现明显的排斥反应,实验组足部溃疡愈合情况优于对照组,实验组再生神经纤维数目、有髓神经纤维轴突直径、髓鞘厚度4、8、16周分别为(906.25±30.68,1726.25±51.89,2825.13±22.79)、(5.35±0.62,5.46±0.38,5.59±0.80),(1.65±0.37,1.75±0.41,1.83±0.49)均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).小腿三头肌湿重于术后4周两组间差异无统计学意义(P>0.05),实验组术后8、16周分别为(5.62±0.99,7.38±0.26)恢复优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 种植雪旺细胞的去细胞同种异体神经复合体对神经再生及功能恢复有更好的促进作用.     

Cavernous nerve regeneration using acellular nerve grafts

INTRODUCTION: The restoration of erectile function following complete transection of nerve tissue during surgery remains challenging. Recently, graft procedures using sural nerve grafts during radical prostatectomy have had favorable outcomes, and this has rekindled interest in the applications of neural repair in a urologic setting. Although nerve repair using autologous donor graft is the gold standard of treatment currently, donor nerve availability and the associated donor site morbidity remain a problem. In this study, we investigated whether an "off-the-shelf" acellular nerve graft would serve as a viable substitute. We examined the capacity of acellular nerve scaffolds to facilitate the regeneration of cavernous nerve in a rodent model. MATERIALS AND METHODS: Acellular nerve matrices, processed from donor rat corporal nerves, were interposed across nerve gaps. A total of 80 adult male Sprague-Dawley rats were divided into four groups. A 0.5-cm segment of cavernosal nerve was excised bilaterally in three of the four groups. In the first group, acellular nerve segments were inserted bilaterally at the defect site. The second group underwent autologous genitofemoral nerve grafts at the same site, and the third group had no repair. The fourth group underwent a sham procedure. Serial cavernosal nerve function assessment was performed using electromyography (EMG) at 1 and 3 months following initial surgery. Histological and immunocytochemical analyses were performed to identify the extent of nerve regeneration. RESULTS: Animals implanted with acellular nerve grafts demonstrated a significant recovery in erectile function when compared with the group that received no repair, both at 1 and 3 months. EMG of the acellular nerve grafts demonstrated adequate intracavernosal pressures by 3 months (87.6% of the normal non-injured nerves). Histologically, the retrieved regenerated nerve grafts demonstrated the presence of host cell infiltration within the nerve sheaths. Immunohistochemically, antibodies specific to axons and Schwann cells demonstrated an increase in nerve regeneration across the grafts over time. No organized nerve regeneration was observed when the cavernous nerve was not repaired. CONCLUSION: These findings show that the use of nerve guidance channel systems allow for accelerated and precise cavernosal nerve regeneration. Acellular nerve grafts represent a viable alternative to fresh autologous grafts in a rodent model of erectile dysfunction.     

雪旺氏细胞植入硬脊膜管修复周围神经缺损的实验研究

本文报道两组10mm大鼠坐骨神经缺损,分别用含雪旺氏细胞和不含雪旺氏细胞的硬脊膜管桥接修复,术后2、4个月行光镜、电镜、神经电生理和计算机图像分析检测,证实植入雪旺氏细胞者,再生神经生长及成熟较早,肢体功能恢复较快,雪旺氏细胞和硬脊膜管结合,对周围神经再生有更大的促进作用。     

优化法去细胞神经同种异体及异种移植的比较

目的 分别以优化法去细胞(OA)大鼠坐骨神经及兔臂丛分支移植修复大鼠坐骨神经缺损,观察免疫排斥情况、早期功能恢复及神经再生情况,以比较此优化法处理的同种异体及异种神经移植物修复周围神经缺损的能力. 方法 以新鲜新西兰大白兔臂丛分支、自体坐骨神经、OA处理过的新鲜取材的SD大鼠坐骨神经及新西兰大白兔臂丛分支,移植修复成年SD大鼠坐骨神经1.0 cm缺损,即新鲜异种神经移植组、自体神经移植组、OA异种神经移植和OA异体神经移植组,分别于术后1个月及3个月行功能评价(SFI)、电生理(CV)和组织学检查,观察免疫排斥、功能恢复及神经再生情况. 结果 术后1个月,OA异体和OA异种神经移植组的SFI、CV、轴突密度分别为:61.38±5.59、(32.23±0.91)m/s、(22.26±1.74)m/s和(0.782±0.081)(个/100 μm2),3个月分别为59.00±5.40、(31.80±0.99)m/s、(23.35±2.40)m/s和(0.778±0.046)(个/100μm2);术后1个月,异体和异种神经移植CD8+T细胞和巨噬细胞染色阳性百分比分别为0.17385±0.01805、0.09299±0.01565和0.30223±0.09449、0.19537±0.02010.同种异体神经移植组与异种神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面差异无统计学意义(P＞0.05),且都明显优于未处理新鲜神经移植组(P＜0.05).3个月时的神经再生及功能恢复情况优于1个月组(P＜0.05). 结论 优化去细胞法处理的同种异体及异种神经移植物在修复周围神经缺损时,均可以达到免疫耐受,移植动物早期功能恢复和神经再生情况良好.     

坐骨神经创伤性华勒氏变性中雪旺细胞凋亡初步研究

目的探讨成年大鼠坐骨神经创伤性华勒氏变性中雪旺细胞凋亡的存在及其时相性变化规律.方法利用成年雌性SD大鼠坐骨神经横断复制华勒氏变性模型.将74只SD大鼠随机分为12组.1个正常组(8只)、11个实验组(66只).每只实验组大鼠双后肢再随机分为试验肢(构成试验组)和对照肢(构成对照组).分别于术后1 h,6 h,12 h,24 h,2 d,3 d,4 d,8 d,14 d,21 d,30 d共11个时相点,切取坐骨神经中下段标本.检测各组神经纤维形态学改变,雪旺细胞S-100蛋白和凋亡基因相关产物Bcl-2、Fas、Bax表达水平变化,并用TUNEL法检测雪旺细胞凋亡指数.结果①试验组雪旺细胞数量术后24 h开始明显减少,术后8 d才开始重新增多.②S-100蛋白表达对照组变化无统计意义(P＞0.05),试验组则在术后1 h,21 d两个时间点变化有统计意义(P＜0.05).③雪旺细胞凋亡抑制基因产物Bcl-2表达,正常组双侧肢变化无差异(P＞0.05),而对照组术后6 h明显升高,术后24 h、4 d、21 d轻度增高(P＜0.01),试验组术后6 h,24 h,8 d,14 d,30 d进行性升高(P＜0.01).④雪旺细胞凋亡促进基因产物Bax表达,正常组双侧肢比较无差异(P＞0.05),而对照组术后6 h,3～21 d持续高表达(P＜0.01),试验组14 d开始进行性上升(P＜0.01).⑤雪旺细胞凋亡促进基因产物Fas表达,正常组双侧肢比较无差异(P＞0.05),对照组仅轻度增高(P＞0.05),而试验组术后12 h开始进行性升高(P＜0.01).⑥TUNEL法凋亡试剂盒原位检测显示正常组雪旺细胞凋亡发生率极低,双侧肢比较无差异(P＞0.05);试验组分别在术后6 h,24 h,2 d,21 d出现大量雪旺细胞凋亡阳性核(P＜0.01),高峰出现在华勒氏变性早期.结论成年大鼠坐骨神经横断后,远侧段创伤性华勒氏变性早期存在雪旺细胞凋亡高峰.并且雪旺细胞凋亡的发生,及凋亡相关促进基因Bax、Fas和抑制基因Bcl-2的表达均具有特定的时相性变化特点.     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的雪旺细胞对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

目的　研究胶质细胞源性神经营养因子 (glialcellline derivesneurotrophicfactor ,GDNF)基因对周围神经断伤后促进轴突再生及神经元的保护作用。方法　应用体外获取的GDNF修饰的雪旺细胞结合细胞外基质凝胶及生物可降解聚乳酸 聚羟基乙酸共聚物管 (polyCDL lactide co glycolide ,PLGA)构建的神经移植复合体 ,修复大鼠坐骨神经的缺损。 2 0只成年Wistar大鼠按桥接物的不同随机分为 4组 ,每组 5只。A组 :细胞外基质凝胶 PLGA管桥接组 ;B组 :雪旺细胞 细胞外基质凝胶 PLGA管桥接组 ;C组 :GDNF基因修饰的雪旺细胞 细胞外基质凝胶 PLGA管桥接组 ;D组 :自体神经桥接组。术后 12周检测运动神经传导速度 ,并进行再生神经的组织形态学观察以及计量学分析。结果　术后 12周 ,坐骨神经的运动神经传导速度 ,轴突数、髓鞘的厚度、神经纤维的直径、神经组织面积的百分比和脊髓前角运动神经元存活率等 ,C组均优于A、B组 (P <0 .0 1) ,而与D组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论　雪旺细胞的转基因处理可能弥补单纯细胞移植神经营养因子含量的不足 ,而达到与自体神经移植相似的效果。