丹参酮ⅡA对大鼠肾间质纤维化的抑制作用

目的：探讨丹参酮ⅡA对大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法：30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丹参酮ⅡA组。结扎大鼠单侧输尿管建立肾间质纤维化动物模型。丹参酮ⅡA经腹腔注射，剂量为1．5mg／（kg·d）。术后第10天取梗阻侧肾组织作HE、Masson染色，观察肾间质病理改变。免疫组化法检测肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原的蛋白表达与定位。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测三者的mRNA水平。结果：模型组术后第10天梗阻侧出现明显的肾间质纤维化，肾组织TGF-β1、α—SMA和Ⅰ型胶原的蛋白及mRNA表达显著增加（P〈0．01）。丹参酮ⅡA组肾间质纤维化程度减轻，肾组织TGF-β1、α—sMA及Ⅰ型胶原表达下调（P〈0．05）。结论：丹参酮ⅡA对大鼠肾间质纤维化有明显的抑制作用，其机制可能与下调TGF-β1表达，抑制成纤维细胞增殖和表型转化，减少胶原沉积有关。     

丹参酮ⅡA微乳对放射性肺损伤大鼠Smad7蛋白的影响

目的初步探讨丹参酮ⅡA微乳对放射性肺损伤的干预作用及其对Smad7表达的影响。方法60只Wistar大鼠随机分为对照组(N组)、模型组(B组)、脂质体微乳治疗组(C组)、丹参酮ⅡA磺酸钠治疗组(D组)、丹参酮ⅡA微乳治疗组(E组)。采用放疗体外照射致大鼠肺损伤模型,苏木精-依红(HE)观察肺组织病理形态变化,紫外分光光度法检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量;荧光定量RT-PCR检测肺组织Smad7 mRNA表达。结果 (1)B、C、D、E组肺组织病理改变呈肺泡炎至间质纤维化演变过程;(2)与B组比较,D、E组肺组织Smad7 mRNA的表达及外周血水平GSH含量均明显增高(P0.05),其中E组增高最显著。结论丹参酮ⅡA微乳可缓解肺泡炎及纤维化,对肺损伤有预防及治疗作用。     

低分子肝素联合依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织结缔组织生长因子表达的影响

目的观察低分子肝素联合血管紧张素转换酶抑制剂依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法采用单侧输尿管梗阻模型,雄性SD大鼠40只随机分为假手术组、模型组、低分子肝素组、依那普利组和联合组,各8只。低分子肝素和依那普利组从造模前24 h开始分别以低分子肝素钙410 U/kg皮下注射每日2次、依那普利10 mg·kg-1·d-1灌胃,联合组给予上述2种治疗联用,模型组和假手术组以等体积的生理盐水皮下注射和灌胃。于造模后第14天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,行HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,采用real-time PCR方法检测肾组织CTGF mRNA和Ⅰ型胶原mRNA的表达,应用Western印迹检测肾小管上皮细胞转分化标志CTGF蛋白表达。结果模型组大鼠肾间质损伤指数评分逐渐增加,肾间质胶原相对面积逐渐增大,CTGF mRNA、Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达增加。与模型组比较经低分子肝素、依那普利和二者联合治疗后,肾间质损伤指数和肾间质胶原相对面积下降,CTGF mRNA、Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达均减少(P<0.05),联合组优于两药单独治疗组比较(P<0.05),单独用药组组间比较无统计学意义(P>0.05)。结论低分子肝素和依那普利联合治疗可减轻梗阻侧肾间质纤维化程度,这一作用可能与抑制梗阻侧肾组织CTGF和I型胶原表达有关,低分子肝素和依那普利的单独用药效果不如联合治疗。     

氯沙坦对肾间质纤维化大鼠肾组织ACE2 mRNA、TGF-β1 mRNA表达的影响

目的研究氯沙坦对肾间质纤维化大鼠肾组织ACE2 mRNA、TGF-β1 mRNA表达的影响。方法复制腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠模型,随机分成氯沙坦组和模型对照组,氯沙坦治疗组大鼠予氯沙坦(10 mg·kg-1.d-1)混悬液灌胃30 d,模型组予等量蒸馏水灌胃,另设正常对照组予等量蒸馏水灌胃。在实验结束时留取血、尿、肾组织标本,检测Scr、BUN、24 h MTP等生化指标,采用Real Time PCR测定肾组织ACE2 mRNA、TGF-β1 mRNA表达水平。结果氯沙坦组较模型组Scr、BUN、24 h MTP均显著下降(P<0.01)。Real Time PCR结果显示模型组较正常组ACE2 mRNA表达水平下降(P<0.01),而TGF-β1 mRNA的表达水平反而增加(P<0.01);经治疗后氯沙坦组较模型组ACE2 mRNA表达水平明显增加(P<0.01),TGF-β1 mRNA的表达水平明显减少(P<0.01)。结论氯沙坦具有肾功能保护作用,其作用机制除了拮抗AT1R外,还可能与上调ACE2 mRNA表达水平,抑制TGF-β1 mRNA的表达水平而发挥抗肾间质纤维化作用有关。     

尾加压素Ⅱ及其受体在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及意义

目的 探讨尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)及其受体(GPR14)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质中的表达及意义.方法 将24只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)及模型组(UUO组),采用左侧输尿管结扎术复制UUO模型.术后第14和28天分别处死两组大鼠,取左肾进行HE和Masson染色,并用免疫组化检测肾间质中UⅡ和GPR14的表达,RT-PCR检测UⅡ和GPR14 mRNA表达.结果 HE和Masson染色显示模型组大鼠肾小管间质增宽,炎细胞浸润,纤维组织增多,随时间进展病变更加明显(P＜0.01);免疫组化显示UUO组2 w时肾间质UⅡ及GPR14表达明显增多,与Sham组比较差异显著(P＜0.01);UUO组4 w时UⅡ及GPR14持续高表达(P＜0.01).RT-PCR显示2 w后,与Sham组比较,UUO组大鼠肾组织中UⅡmRNA表达明显增加(P＜0.01),GPR14表达也有增加趋势,但无显著差异性;4 w后UUO组UⅡmRNA表达仍明显高于Sham组(P＜0.01),GPR14表达也明显升高(P＜0.01).结论 UⅡ及GPR14 的蛋白表达和mRNA水平在UUO大鼠肾间质中明显增加,提示UⅡ的表达与肾纤维化有关,可能参与了肾纤维化的过程.     

基于Nrf2通路研究丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠血压及血管活性物质的影响

目的探讨丹参酮ⅡA通过转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)通路对自发性高血压大鼠(SHR)的疗效及血管活性物质的影响。方法15只健康雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为空白对照组,60只雄性自发性高血压大鼠随机分为自发性高血压组、丹参酮ⅡA低剂量组(25 mg/kg)、丹参酮ⅡA高剂量组(50 mg/kg)和苯那普利组(10 mg/kg)。连续灌胃8周,在1周、5周、8周时测量各组大鼠收缩压情况;苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠胸主动脉形态学;眼底观察各组大鼠视网膜动脉变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素(ET)、去甲肾上腺素(NE)和血栓素B₂(TXB₂)的含量变化;免疫组化检测各组大鼠胸主动脉中AT1R的阳性表达;免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠胸主动脉中Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)、依赖还原型辅酶/Ⅱ醌氧化还原酶Ⅰ(NQO1)蛋白表达水平。结果与自发性高血压组相比,丹参酮ⅡA低剂量组、丹参酮ⅡA高剂量和苯那普利组均能降低大鼠收缩压(P<0.05);丹参酮ⅡA低剂量组、丹参酮ⅡA高剂量和苯那普利组均能改善血管内皮损伤和提高血管弹性;与空白对照组比较,自发性高血压组大鼠视网膜动脉直径略窄,丹参酮ⅡA低剂量组、丹参酮ⅡA高剂量组和苯那普利组均能使大鼠视网膜动脉直径变宽;自发性高血压组大鼠血清中AngⅡ、ET、NE和TXB₂的含量均明显增加(均P<0.01),丹参酮ⅡA低剂量、丹参酮ⅡA高剂量和苯那普利能降低AngⅡ、ET、NE和TXB₂的含量(均P<0.05或P<0.01);AngⅡ的受体(ATIR)在自发性高血压大鼠胸主动脉中呈阳性表达,在丹参酮ⅡA低剂量组、丹参酮ⅡA高剂量组和苯那普利组中阳性表达降低;自发性高血压组大鼠胸主动脉中Nrf2、HO-1和NQO1的蛋白表达量降低(均P<0.01),丹参酮ⅡA低剂量、丹参酮ⅡA高剂量和苯那普利能提高大鼠胸主动脉中Nrf2、HO-1和NQO1的蛋白表达量(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠具有明显的降压作用,其机制可能与抑制血管活性物质的表达和激活Nrf2通路有关。     

黄芪总黄酮与丹参酮ⅡA磺酸钠对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞内质网伴侣蛋白及L-型钙通道表达的作用

目的:观察黄芪总黄酮(TFA)与丹参酮ⅡA磺酸钠对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78及L-型钙通道(LCCs)mRNA表达的影响。方法:48只雄性Balb/c小鼠分为对照组、VMC组、TFA组和丹参酮ⅡA磺酸钠治疗组(丹参组),每组12只。注射柯萨奇(CV)B3病毒10d处死小鼠取心脏行心肌病理观察,采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测对照组、VMC组、TFA组、丹参组心肌细胞LCCsɑ1亚单位mRNA表达量,采用Western blotting技术检测4组心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78表达量。结果:1与对照组比较,VMC组心室肌LCCsɑ1亚单位的mRNA表达量明显增多(P0.01);与VMC组比较,TFA可使VMC小鼠心室肌细胞LCCsɑ1亚单位的mRNA表达量减少(P0.01),而丹参酮ⅡA磺酸钠可使VMC小鼠心室肌细胞LCCsɑ1亚单位的mRNA表达量减少(P0.01)。2与对照组比较,VMC组心室肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78表达量明显增多(P0.01);与VMC组比较,TFA可使VMC小鼠心室肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78表达量减少(P0.01),而丹参酮ⅡA磺酸钠可使VMC小鼠心室肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78表达量减少(P0.05)。结论:TFA与丹参酮ⅡA磺酸钠可以降低VMC小鼠心室肌细胞LCCsɑ1亚单位的mRNA表达量,缓解VMC小鼠心肌细胞内质网应激,抑制心肌细胞钙超载介导的内质网应激,从而改善心肌损伤。     

1,25-(OH)2D3对UUO模型大鼠ILK及TGF-β1表达的影响

目的 探讨1,25-(OH)2D3减轻单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的作用及其机制.方法 将96只雄性SD大鼠随机分为对照组、UUO组、假手术组、干预组各24只,其中UUO组和干预组均于左肾下极处游离并结扎左输尿管建立UUO模型,假手术组开腹后仅游离左输尿管,对照组不行特殊处理.其后干预组予1,25-(OH)2D3 0.5 μg(溶于1 mL花生油中)灌胃、余三组均予1 mL花生油灌胃;各组分别于术后第1、3、7、14天每天各处死6只大鼠,留取左侧肾脏标本,光镜观察肾脏组织形态学改变及肾脏病理损害,免疫组化法观察整合来连接激酶( ILK)、转化生长因子(TGF) -β1蛋白表达,RT-PCR法检测ILK mRNA表达.结果 ①与对照组相比,UUO组肾皮质变薄、肾间质炎细胞浸润明显增多、纤维化随时间延长而加重(P＜0.05);与UUO组相比,干预组肾组织炎细胞浸润减少、纤维化程度减轻、病变积分明显降低(P＜0.05).②与对照组相比,UUO组ILK蛋白阳性表达随时间延长显著增加(P＜0.01);与UUO组比较,干预组ILK蛋白表达减少(P＜0.01);与对照组相比,UUO组TGF-β1蛋白随时间延长阳性表达显著增加(P＜0.01);与UUO组比较,干预组TGF-β1蛋白表达减少;ILK蛋白表达与TGF-β1蛋白表达呈显著正相关(r =0.872,P＜0.05).③与对照组比较,UUO组和干预组ILK mRNA表达均随时间延长明显增强(P＜0.01),其中干预组表达在7、14 d无显著差异;干预组各期均显著低于UUO组(P＜0.01).结论 1,25-(OH) 2D3可减轻UUO大鼠肾间质纤维化、保护肾脏功能,可能机制为间接或直接抑制肾间质ILK、TGF-β1表达;此为防治肾间质纤维化提出了新的方向.     

双环醇对肾间质纤维化大鼠肾组织Drp-1表达的影响

目的探讨双环醇对单侧输尿管梗阻大鼠。肾问质纤维化中发动蛋白-1（Drp-1）表达的影响及对肾脏的保护作用。方法81只SD大鼠,采用UUO致单侧肾间质纤维化模型,随机分假手术组、模型组、治疗组各27只。治疗组予双环醇灌胃治疗;假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃。于术后7、14、21d取动脉血分离血清测定肌酐和尿素氮水平,观察肾功能变化;取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色,观察肾脏病理学变化;采用免疫组化方法检测肾组织Drp-1表达。结果治疗组血清肌酐和尿素氮水平明显低于模型组（P〈0．01）;。肾小管间质损伤评分和肾间质纤维化相对面积及肾组织Drp-1蛋白表达均显著低于模型组（P均〈0．05）。结论Drp-1参与了大鼠肾问质纤维化的病理过程;双环醇可通过抑制Drp-1而延缓肾间质纤维化的进展。     

丹参酮ⅡA对大鼠心肌梗死后心房颤动易感性的影响

目的观察丹参酮ⅡA对大鼠心肌梗死后心房颤动诱发率及持续时间的影响,并初步探讨其作用机制。方法将大鼠分为假手术组、心肌梗死组、丹参酮ⅡA组,大鼠心肌梗死后1周开始给予丹参酮ⅡA灌胃4周。采用经食管高频起搏左房技术检测心房颤动诱发率和持续时间,Masson染色和羟脯氨酸检测左房总胶原蛋白含量,蛋白免疫印迹法检测左心房Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白含量并检测纤维化相关因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)变化。结果丹参酮ⅡA组给药4周后,心房颤动诱发率低于心肌梗死组,持续时间显著短于心肌梗死组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与心肌梗死组比较,丹参酮ⅡA组左心房心肌纤维化面积百分比降低,Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白含量降低,MMP-9蛋白表达降低,TIMP-1蛋白表达升高,MMP-9/TIMP-1比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA通过调节MMP-9/TIMP-1平衡抑制左心房纤维化,从而降低心肌梗死大鼠心房颤动发生率和持续时间。     

依那普利联合灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏保护作用及机制

目的探讨依那普利联合灯盏花素对大鼠糖尿病肾脏保护作用及机制。方法大鼠随机分5组：对照组、糖尿病组、依那普利给药组、灯盏花素给药组及依那普利与灯盏花素联合给药组。8周后观察肾组织病理形态学变化，检测尿白蛋白排泄率（AER）、肾组织尿丙二醛（MDA）含量及肾组织蛋白激酶（PKC）活性；应用Western杂交检测肾组织PKC蛋白表达，免疫组化方法检测肾组织转化生长因子（TGF）β1蛋白表达。结果各给药组均可抑制糖尿病大鼠AER增加及肾组织病理结构损害，联合组优于单独给药组；对肾组织及尿MDA含量增加的抑制作用联合组也优于单给药组；各给药组均可抑制肾组织PKC活性与表达，以联合组最明显；糖尿病大鼠肾小球与肾小管-间质TGFβ1蛋白表达明显高于对照组，各给药组肾组织TGFβ1蛋白表达明显低于模型组，其中以联合组最明显。结论依那普利与灯盏花素联合给药对糖尿病肾脏保护作用优于任一单给药组，其机制部分与其对肾组织氧化应激增加、PKC激活及TGFβ1表达有协同抑制作用有关。     

血红素氧合酶-1在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的探讨血红素氧合酶(HO)-1在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义。方法 30只大鼠根据随机数字法分为对照组(正常大鼠)、糖尿病组(糖尿病模型)、氯高铁血红素(hemin)组(糖尿病模型+hemin治疗)。免疫荧光染色观察视网膜HO-1、核因子相关因子(Nrf) 2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)表达,RT-PCR检测大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK mRNA表达,Western印迹测定各组大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK蛋白表达。结果免疫荧光染色显示:HO-1为绿色荧光,Nrf2、pERK为红色荧光,对照组大鼠只检测到极少量的HO-1、Nrf2、pERK阳性表达。糖尿病组大鼠HO-1、Nrf2、pERK阳性表达均增加,hemin组大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK阳性表达明显增加。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜HO-1 mRNA和HO-1蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜HO-1 mRNA和HO-1蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜Nrf2mRNA和Nrf2蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜pERK mRNA和pERK蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜pERK mRNA和pERK蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。结论糖尿病大鼠视网膜HO-1水平升高,HO-1水平升高可能通过Nrf2/ERK信号通路对糖尿病视网膜发挥保护作用。     

细胞凋亡和细胞自噬在慢性环孢素A肾毒性中的作用

目的探讨细胞凋亡和细胞自噬在慢性环孢素A(CsA)肾毒性中的作用。方法 Sprague-Dawley大鼠分为两组:对照组:皮下注射橄榄油(1 ml·kg-1·d-1)4 w;慢性CsA肾毒性组:皮下注射CsA(15 mg·kg-1·d-1)4 w。检测两组大鼠的体重和肾功能;三色染色检测肾小管间质纤维化程度;ELISA法检测血、尿8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平;原位末端标记法(TUNEL)染色观察细胞凋亡;免疫印迹法检测细胞凋亡调控基因(Bcl-2、Bax、Caspase-3)和细胞自噬体膜型LC3-Ⅱ蛋白的表达;Pearson直线相关分析肾小管间质纤维化程度与细胞凋亡和LC3-Ⅱ蛋白表达的相关关系。结果与对照组相比,毒性组大鼠体重减轻、肾功能低下、血尿8-OHdG水平升高,同时肾毒性组可见明显的肾小管间质纤维化和大量TUNEL阳性细胞。免疫印迹结果表明,毒性组Bax、Caspase-3、LC3-Ⅱ蛋白的表达明显增加,反之,Bcl-2的表达显著减少。直线相关分析提示,肾小管间质纤维化程度与TUNEL阳性细胞数和LC3-Ⅱ蛋白表达呈正向相关。结论细胞凋亡和细胞自噬参与了慢性CsA肾毒性肾小管间质的损伤。     

血管内皮功能紊乱在高尿酸血症肾损害中的作用

目的探讨血管内皮功能紊乱在高尿酸血症肾损害发病机制中的作用。方法将36只雄性Wister大鼠随机分为对照组、高尿酸血症模型组(模型组)和苯溴马隆治疗组(治疗组),每组12只。应用氧嗪酸钾(尿酸酶抑制剂)联合高酵母饲料建立高尿酸血症肾损害大鼠模型,治疗组在建立高尿酸血症模型基础上加用苯溴马隆(立加利仙)降尿酸治疗,对照组给予普通饲料及等量蒸馏水灌胃,于2、4、6周末自大鼠颈静脉窦取血,检测血尿酸、肌酐水平。6周末处死全部大鼠,取肾组织进行HE、Masson染色,观察肾脏病理改变并测量肾间质纤维化面积,检测肾间质小管内皮型一氧化氮合酶、内皮素1、低氧诱导因子1α表达。结果 2周末,模型组血尿酸水平较对照组及治疗组明显升高;6周末,模型组血肌酐水平较对照组及治疗组明显升高,而后两组之间无明显差异。模型组肾间质纤维化面积较对照组及治疗组均显著增加,模型组大鼠肾组织内皮型一氧化氮合酶表达明显低于对照组及治疗组,而内皮素1及低氧诱导因子1α表达均明显高于对照组及治疗组。结论血尿酸水平升高可减少肾间质小血管内皮型一氧化氮合酶合成并促进内皮素1表达,从而影响肾间质血管内皮功能,通过缺血缺氧机制导致肾间质纤维化。     

益气化瘀化痰养阴剂对肝纤维化模型大鼠肝脏上皮间质表型的影响

目的探讨益气化瘀化痰养阴剂对肝纤维化大鼠肝脏上皮间质表型的影响。方法将30只SD大鼠随机分为益气化瘀化痰养阴剂组、肝纤维化模型组和正常对照组,益气化瘀化痰养阴剂组及肝纤维化模型组用CCl4和高脂低蛋白饮食建立肝纤维化大鼠模型,益气化瘀化痰养阴剂组每日用益气化瘀化痰养阴剂灌胃,肝纤维化模型组和正常对照组则用等体积生理盐水。12 w后,采用Masson染色及电镜观察大鼠肝脏纤维化程度。采用荧光定量PCR检测大鼠肝脏FSP1、TGF-β1、α-SMA及E-cad mRNA的表达,采用Western印迹法检测大鼠肝脏成纤维细胞特异蛋白(FSP1)、转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)及E-钙黏附蛋白(cad)蛋白的表达。结果与模型组相比,益气化瘀化痰养阴剂组肝组织Masson染色及电镜下均可见纤维化程度明显改善;益气化瘀化痰养阴剂组FSP1、TGF-β1、α-SMA mRNA及蛋白的表达较模型组明显降低(P<0.05),而E-cad mRNA及蛋白的表达较模型组明显升高(P<0.05)。结论益气化瘀化痰养阴剂对大鼠肝纤维化具有一定干预作用,该作用可能与其抑制肝组织上皮间质转化的发生有关。     

丹参酮ⅡA抑制血管平滑肌细胞增殖的机制

目的探讨丹参酮ⅡA抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的机制。方法组织贴块法培养SD大鼠腹主动脉VSMC,随后分为对照组:VSMC加入50μl 30%FBS培养液,A组:10 mg/L丹参酮ⅡA 25μl+30%FBS培养液25μl,B组:20 mg/L丹参酮ⅡA 25μl+30%FBS培养液25μl,每组设置4个复孔。采用四唑盐(MTT)法检测VSMC的细胞毒性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR检测p21 mRNA相对表达量。结果 MTT检测结果,对照组吸光度值明显高于药物干预A组和B组,差异有统计学意义(P均0.05);B组吸光度值明显低于A组,差异有统计学意义(P0.05)。丹参酮ⅡA干预的A组和B组细胞凋亡率明显高于对照组,而B组凋亡率明显高于A组,差异有统计学意义(P均0.05)。与对照组比较,A组和B组p21 mRNA的相对表达量明显升高,同时,B组p21 mRNA相对表达量明显高于A组,差异有统计学意义(P均0.05)。结论丹参酮ⅡA对VSMC的增殖有明显的抑制作用,其机制可能与细胞周期蛋白p21表达增强有关。     

DS-201对hRIFs体外增殖及cyclinD1基因表达的影响

体外培养鉴定人肾间质纤维化来源的成纤维细胞（hRIFs），用四甲基偶氮唑（MTT）法检测对照组与不同浓度丹参酮ⅡA磺酸钠（DS-201）组hRIFs的增殖活性；用免疫细胞化学SP法和图像分析技术检测各组细胞周期素D1（cyclinD1）基因的表达。随药物浓度升高和作用时间延长，DS-201对hRIFs增殖活性抑制作用逐渐增强，其机制可能与DS-201抑制hRIFs中cyclinD1基因表达，延长细胞周期有关。     

丹参酮ⅡA对压力负荷增加大鼠心肌纤维化的影响及机制

目的 探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对压力负荷增加大鼠心肌纤维化的抑制作用及机制.方法 将32只成年雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、TanⅡA组及卡托普利组.后三组行肾上方腹主动脉缩窄术建立压力负荷增加心肌纤维化模型,假手术组仅分离腹主动脉而不结扎.造模后4周TanⅡA组腹腔注射TanⅡA 20 mg/(kg·d),卡托普利组予卡托普利100 mg/(kg·d)灌胃,均每天上午给药1次,连续给药4周;假手术组及模型组均不给药.8周后检测心脏质量指数和心肌组织病理学变化,ELISA法检测心肌羟脯氨酸(HYP)与血清TNF-α水平,免疫组化法检测心肌组织NF-κB p65蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组心脏质量指数、心肌HYP表达及血清TNF-α和心肌组织NF-κB p65含量均升高(P均＜0.01);与模型组比较,TanⅡA组的心脏质量指数、心肌HYP含量、血清TNF-α和心肌组织NF-κB p65水平均降低(P均＜0.01).结论 NF-κB信号介导的心肌炎症反应参与了压力负荷增加大鼠心肌纤维化的发生与发展.TanⅡA能抑制TNF-α和NF-κB信号通路而改善心肌纤维化.     

鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏肾上腺髓质素及TGF—β1的影响

目的观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化大鼠肾组织中肾上腺髓质素（ADM）、转化生长因子（TGF）-β1表达的影响。方法SD大鼠采用单侧输尿管结扎（UUO）的方法制备肾间质纤维化模型，将其随机分为鳖甲煎丸组、缬沙坦组与模型组，并设假手术组（分离输尿管后缝合腹部）。缬沙坦组、鳖甲煎丸组分别给予缬沙坦10mg&#183;kg^-1&#183;d^-1、鳖甲煎丸1．6g&#183;kg^-1&#183;d^-1灌胃，模型组和假手术组每日给予等容积的蒸馏水。所有动物于术后第14天断头处死，切取左肾，留取肾组织标本。采用免疫组化及RT-PCR方法观察梗阻侧肾脏ADM、TGF—β1在蛋白及基因水平的表达，放射免疫法测定ADM在肾组织中蛋白含量。结果模型组及各治疗组大鼠肾脏ADM蛋白含量、蛋白表达及mRNA的表达较假手术组明显降低，鳖甲煎丸组、缬沙坦组的含量均高于模型组（P〈0．05）；TGF—β1的蛋白及mRNA的表达各治疗组明显低于模型组（P〈0．05），鳖甲煎丸组、缬沙坦组两组之间比较无显著性差异。结论鳖甲煎丸能够上调肾间质纤维化大鼠肾脏ADM的蛋白及mRNA的表达，下调TGF—β1的表达，对肾脏起到保护作用。     

黄葵胶囊通过抑制缺氧诱导因子改善单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化的机制

目的研究黄葵胶囊是否可以通过抑制缺氧诱导因子(HIF)-1α的表达改善单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型的肾间质纤维化情况。方法将54只雄性成年Sprague-Dawley大鼠随机分组,每组18只,分为对照组(即假手术组,Sham组)、单侧输尿管结扎建立的肾纤维化模型组(UUO组)和模型+黄葵胶囊治疗组(HK组),UUO组及HK组大鼠进行左侧输尿管结扎建模,术后1 d起,HK组按照1 g/kg的剂量用黄葵胶囊进行灌胃,1次/d;Sham组及UUO组每天以等量生理盐水进行灌胃。治疗后第7、14天,分别处死各组中的9只大鼠,取左侧肾脏组织,HE染色进行肾脏组织病理检查及损伤评分,实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测肾脏组织中HIF-1αmRNA和蛋白的表达。结果 UUO组与HK组术后均出现了肾脏局部的病理损害,但HK组肾损伤明显较轻,各时间点HK组肾小管间质损伤指数与UUO组相比显著降低;术后7 d与14 d,UUO组及HK组中的HIF-1αmRNA及蛋白表达水平均较Sham组显著升高,而HK组中的HIF-1αmRNA及蛋白水平均显著低于UUO组。结论黄葵胶囊可以通过降低肾纤维化模型中HIF-1α的水平缓解病情,修复肾损伤,是一种有效的抗肾间质纤维化药物。