硫氢化钠抑制人巨噬细胞炎性因子的分泌

目的 探讨硫化氢(H2S)在人巨噬细胞炎性因子分泌中的调节作用,以深入了解H2S拮抗动脉粥样硬化的分子机制.方法 体外培养人单核细胞系THP-1细胞,经100 nmol/L佛波酯(PMA)作用24 h后使其分化为人巨噬细胞.而后将人巨噬细胞随机分为4组:对照组、氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL) 50 mg/L组、ox-LDL+硫氢化钠(NaHS) 100及500 μmol/L干预组.对照组细胞未经ox-LDL及NaHS诱导;ox-LDL组细胞经终浓度为50 mg/Lox-LDL诱导;ox-LDL+ NaHS 100μmol/L干预组细胞经终浓度为50 mg/L ox-LDL及100μmol/L NaHS共同诱导;ox-LDL+ NaHS 500 μmol/L干预组细胞经终浓度为50 mg/L ox-LDL及500μmoL/L NaHS共同诱导.各组细胞均培养48 h后收集上清,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)及白细胞介素-10(IL-10)水平.结果 与对照组相比,促炎因子TNF-α、MIF水平在ox-LDL组显著升高(P＜0.05),而抗炎因子IL-10水平显著降低(P＜0.05);与ox-LDL组相比,TNF-α、MIF水平在ox-LDL+ NaHS 100及500μmol/L干预组明显下降(P＜0.05),而IL-10水平明显升高(P＜0.05).结论 NaHS显著抑制ox-LDL刺激的促炎因子MIF、TNF-α的分泌,而促进抗炎因子IL-10的分泌.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对IFN-γ/LPS刺激的小鼠髓源性巨噬细胞极化的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对IFN-γ/LPS刺激的小鼠髓源性巨噬细胞促炎细胞因子表达的影响。方法:取6~8周龄C57BL/6小鼠骨髓细胞,经100 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)体外诱导分化为骨髓巨噬细胞(BMDM),加入50 ng/ml干扰素γ(IFN-γ)和1μg/ml细菌脂多糖(LPS)刺激,并同时暴露于12.5~50μmol/L EGCG处理48 h,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测巨噬细胞促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和i NOS的mRNA表达水平和蛋白含量。结果:IFN-γ和LPS处理可刺激巨噬细胞IL-1β、TNF-α和i NOS表达显著上调,而EGCG则能抑制IFN-γ和LPS刺激的IL-1β、TNF-α和i NOS表达,且存在剂量依赖性。结论:EGCG能够减弱IFN-γ和LPS刺激的髓源性巨噬细胞的促炎作用。     

花青素Cyanidin-3-O-glucoside 对脂多糖和白介素-4 刺激的小鼠骨髓巨噬细胞极化的影响

目的:探讨树莓花青素矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对小鼠骨髓巨噬细胞(BMDM)炎性细胞因子表达和生成的影响,进而了解C3G调控BMDM极化的机制。方法:取小鼠骨髓细胞,用100 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导为BMDM。将诱导成功的BMDM分为两组,一组BMDM经C3G预处理12 h,再与1μg/ml脂多糖(LPS)共处理12 h;另一组BMDM经C3G和20 ng/ml IL-4共处理24 h。采用MTT法检测不同浓度C3G对BMDM细胞活性的影响,qRT-PCR法和ELISA法分别检测BMDM促炎细胞介质IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1、i NOS和抑炎细胞介质IL-10、Arg-1的mRNA水平和蛋白水平。结果:MTT检测结果显示1、5、10、15、20、25和30μg/ml的C3G对BMDM细胞活力无明显可见的影响,qRT-PCR和ELISA分析结果显示1μg/ml LPS显著上调BMDM促炎细胞介质的表达,20 ng/ml IL-4显著上调BMDM抑炎细胞介质的表达; 5、10和20μg/ml C3G处理既可明显降低LPS刺激的BMDM促炎细胞介质表达,也可增强IL-4刺激的BMDM抑炎细胞介质表达。结论:C3G通过下调巨噬细胞促炎细胞介质表达和上调巨噬细胞抑炎细胞介质表达,调控BMDM极化,并影响巨噬细胞的炎性反应。     

猪苓多糖对M1型巨噬细胞细胞因子表达的调节作用

目的通过诱导构建M1型巨噬细胞模型研究猪苓多糖对白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和转化生长因子β(TGF-β)、IL-10 mRNA的表达影响,探讨猪苓多糖对巨噬细胞的免疫调节机制。方法实验分为空白对照组、γ干扰素(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞模型组、猪苓多糖高中低剂量组,浓度分别为200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL。用IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞,用流式细胞术检测M1型巨噬细胞特异性指标CD16/CD32、CD86的表达,实时荧光定量PCR检测IL-1β、IL-10、iNOS、TNF-α、TGF-β的mRNA表达,观察不同剂量猪苓多糖对M1型巨噬细胞的影响。结果与空白组比较,IFN-γ的诱导RAW264.7巨噬细胞分化M1型巨噬细胞的特异性标志物CD16/CD32、CD86的表达明显升高。100μg/mL猪苓多糖组在3、6、9、12、24 h,IL-1β、iNOS、IL-10、TGF-β、TNF-α的mRNA表达升高,不同剂量猪苓多糖给药6 h后各因子的表达量升高(P0.01)。结论 IFN-γ单独作用于巨噬细胞,可以有效的诱导RAW264.7巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞;猪苓多糖促进M1型巨噬细胞IL-1β、iNOS、IL-10、TNF-α的mRNA表达。     

白藜芦醇苷通过上调SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞增殖和炎性因子表达

目的观察白藜芦醇苷对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞(MDM)炎性增殖与细胞因子表达的影响及机制。方法培养THP-1巨噬细胞,分为对照组(仅加入普通培养基)、ox-LDL组(80μmol/L ox-LDL处理细胞24 h)、白藜芦醇苷处理组(100μmol/L白藜芦醇苷预处理2 h后,再加入80μmol/L ox-LDL处理24 h)、EX-527组(10μmol/L EX-527预处理细胞2 h)。CCK-8法检测各组细胞增殖率,分光光度计检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)含量,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)负载法检测活性氧(ROS)的含量;实时定量PCR法检测白藜芦醇苷对组蛋白去乙酰化酶沉默信息调节因子1(SIRT1)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)mRNA水平的影响,Western blot法检测SIRT1、MCP-1、TNF-α、IL-6的蛋白水平。结果 ox-LDL促进THP-1巨噬细胞增殖。100μmol/L白藜芦醇苷组明显抑制ox-LDL诱导的细胞增殖,同时明显增加SOD含量,降低胞内MDA与ROS含量。ox-LDL抑制THP-1巨噬细胞中SIRT1 mRNA与蛋白表达,促进MCP-1、TNF-α、IL-6 mRNA与蛋白表达。白藜芦醇苷显著增加ox-LDL诱导后SIRT1 mRNA与蛋白表达,抑制MCP-1、TNF-α、IL-6 mRNA与蛋白表达,EX-527能抑制白藜芦醇苷上述保护作用。结论白藜芦醇苷可通过上调SIRT1表达提高抗巨噬细胞增殖的能力,减少ox-LDL诱导细胞内活性氧生成、抑制炎性因子表达。     

IL-22 对骨髓来源巨噬细胞相关炎症因子表达的影响

目的:探讨IL-22对骨髓来源巨噬细胞相关炎症因子表达的影响。方法:从小鼠的股骨分离骨髓细胞,经过分化培养获得骨髓来源巨噬细胞,再用脂多糖(LPS)刺激诱导为M1型巨噬细胞。IL-22干预M1型巨噬细胞后,采用流式细胞术检测巨噬细胞标志物;用ELISA分别检测IL-1β和TNF-α的分泌水平;用RT-PCR分别检测炎症因子i NOS、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平。结果:经过分化培养,骨髓来源巨噬细胞的纯率为(99. 3±0. 4)%,IL-22干预M1型巨噬细胞后,与LPS组相比,LPS+IL-22组的M1型巨噬细胞比例下降(P0. 05),细胞炎症因子i NOS、IL-1β和TNF-αmRNA表达下降(P0. 05),IL-1β和TNF-α分泌水平降低(P0. 05)。结论:IL-22可抑制LPS诱导的骨髓来源巨噬细胞炎症因子的表达,减轻其炎性反应。     

苦参碱抑制LPS诱导巨噬细胞IL-1β、TNF-α分泌及机制研究

目的:探讨苦参碱抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞分泌炎症因子包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)对Toll样受体4(TLR4)、c-Jun表达的影响。方法:购买并培养小鼠RAW264.7巨噬细胞株,分成四组,即空白对照组、苦参碱组、LPS组、苦参碱干预组,通过浓度为100μg/L的LPS DMEM孵育1 h,之后将LPS弃去,然后加入不含血清的DMEM或125.25 mg/L苦参碱DMEM继续培养。分别收集上述四组细胞处理完毕后5、30、60、120min的细胞及培养液。通过PCR法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞TLR4及c-Jun mRNA的表达,通过免疫细胞化学法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞c-Jun蛋白的表达;通过ELISA法测定各组培养液中TNF-α、IL-1β的分泌。结果:苦参碱诱导组与空白对照组相比,TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量和TNF-α及IL-1β分泌量各项指标差异无统计学意义(P0.05);LPS组各个时间点TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量和TNF-α及IL-1β分泌量明显高于空白对照组,且高水平能够维持2 h以上(P0.05);苦参碱干预组能够有效的抑制LPS诱导的巨噬细胞TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量,降低炎症因子TNF-α、IL-1β的分泌量。结论:苦参碱可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞丝裂原活化的蛋白激酶信号通路上TLR4、c-Jun的过表达从而有效的降低终末炎症因子TNF-α及IL-1β的释放,进而有效的抑制炎症反应,减轻内毒素炎症反应的程度。     

β-胡萝卜素对脂多糖刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制

目的:探讨β-胡萝卜素对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制。方法:采用5μg/ml的LPS刺激巨噬细胞24 h后用不同浓度的β-胡萝卜素(20、40、80、160μmol/L)处理细胞3 h,MTT法测细胞活性,荧光定量PCR测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量,ELISA测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌量,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量。5μg/ml的LPS和不同浓度的NF-κB抑制剂PDTC(1、5、10μg/ml)共同处理巨噬细胞24 h,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量,荧光定量PCR、ELISA测炎症因子的表达和分泌。比较LPS+PDTC组和LPS+PDTC+β-胡萝卜素组炎症因子和NF-κB p65蛋白相对表达的变化。结果:与LPS组相比,不同浓度的β-胡萝卜素对LPS刺激的巨噬细胞的细胞活性有提升作用,对炎症因子和NF-κB p65蛋白的表达有抑制作用;抑制NF-κB蛋白的表达可以抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子的分泌;LPS+PDTC+β-胡萝卜素组对炎症因子的抑制作用比LPS+PDTC组明显,且差异显著(P0.05),但两组对NF-κB p65蛋白的表达不明显。结论:β-胡萝卜素可以通过抑制NF-κB通路中NF-κB p65蛋白的表达抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌,且此通路不是唯一相关的通路。     

C1632通过MAPK和NF-κB抑制巨噬细胞M1型极化

目的 探讨C1632抑制巨噬细胞炎症和M1型极化的作用及机制。方法 RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞系）经LPS(10 ng/ml)和IFN-γ（20 ng/ml）处理24 h，诱导M1型极化后，分为对照组（DMSO 0.1%）、M1型巨噬细胞组（LPS和IFN-γ处理）、M1型巨噬细胞+C1632组（C1632质量浓度10μg/ml、25μg/ml和50μg/ml）。CCK8和流式细胞术检测C1632对M1型巨噬细胞活性和凋亡的影响。显微观察巨噬细胞极化形态。定量PCR检测炎性分子（IL-1β、IL-6、TNF-α、CXCL10、iNOS）和Lin28以及let7家族水平。流式细胞术检测CD80、CD86和MHC2水平。Western blot检测p38和NF-κB的磷酸化水平。LPS腹腔注射构建脓毒症小鼠模型。结果 相较于对照组的M1型巨噬细胞，C1632处理后能明显抑制其活性和形态学改变，并且显著下调IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS和CXCL10等促炎因子的转录水平，抑制CD80、CD86和MHC2的蛋白水平。小鼠巨噬细胞中低表达或不表达Lin28，且C1632处理后...     

降钙素基因相关肽通过降低炎性小体活性抑制巨噬细胞功能

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)抑制巨噬细胞炎性反应的机制。方法使用不同浓度CGRP处理LPS活化/未活化的小鼠巨噬细胞(RAW264.7),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞内促炎细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和还原型辅酶Ⅱ氧化酶-活性氧簇-NOD样受体蛋白3(NLRP3)mRNA表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测细胞上清分泌型IL-1β和TNF-α蛋白表达量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内NLRP3蛋白表达水平。结果 CGRP显著降低LPS活化/未活化RAW264.7细胞内炎性因子IL-1β、TNF-α、NLRP3 m RNA水平与蛋白水平,同时,NLRP3下游调节分子Caspase-1的蛋白水平被显著下调。在mRNA水平,NLRP3随CGRP剂量变化而变化的趋势与IL-1β、TNF-α非常相似。结论CGRP抑制巨噬细胞炎性激活,其机制可能与CGRP抑制NLRP3表达与活性有关。