HDM通过肺泡巨噬细胞TLR4诱导哮喘小鼠气道炎症的机制研究

目的:研究HDM通过肺泡巨噬细胞(AM)Toll样受体4(TLR4)的高表达及诱导AM的活化,探讨其对哮喘小鼠气道炎症的影响.方法:BALB/c小鼠随机分为哮喘模型组(OVA)A,HDM处理组(HDM+OVA)B,对照组(生理盐水)C.用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型;HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的含量,实时定量PCR法测定AM的TLR4的表达,流式细胞技术(FCM)检测AM的CD80、CD86的表达.结果:与A组相比,B组BALF上清中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,AM的TLR4mRNA表达明显增高(P<0.05),CD80的表达差异无统计学意义,CD86的表达水平显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:HDM通过AM的TLR4的高表达诱导AM的活化,加重哮喘的气道炎症.     

糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR4的表达及对LPS反应性的研究

目的 观察糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)的表达水平及其对脂多糖(LPS)反应性的变化,探讨该变化在糖尿病机体防御病原体感染中的作用.方法 将32只Wistar雄性大鼠用随机数字表法分为正常组(A组)、糖尿病组(B组)、正常+LPS组(C组)及糖尿病+LPS组(D组).用免疫细胞化学染色法、RT-PCR及Western blot方法检测各组大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达的变化.结果 B组及C组大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达与A组相比均明显增高(P<0.001);D组大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达较B组及C组升高更为明显(P<0.001).结论 与正常大鼠相比,糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达明显增高,LPS刺激后其增高更加显著,提示糖尿病机体处于促炎症状态,相关的机制尚有待深入的研究.     

地塞米松对小鼠脾脏巨噬细胞内TLR4和TLR2表达的影响

为观察小鼠脾巨噬细胞内的TLR4和TLR2在脂多糖 (LPS )刺激后 ,地塞米松 (Dx )对其表达量的影响 ,在向BALB/c小鼠腹腔内注射LPS和Dx后采用贴壁法分离小鼠脾巨噬细胞 ,通过半定量RT PCR方法测定了TLR4和TLR2mRNA的表达量。结果显示 :①LPS刺激后 ,小鼠脾巨噬细胞内TLR4mRNA显著上调 (吸光度比为 0 11) ,TLR2上调不明显 (吸光度比为0 0 0 8) ;②预先注射不同剂量Dx ,分别为 0 1mg/kg、 1mg/kg、 10mg/kg ,再用LPS刺激小鼠。注射了Dx后巨噬细胞TLR4mRNA表达量较单纯注射LPS的小鼠显著降低 (吸光度比分别为 0 0 93、 0 0 5 0和 0 0 14 ) ;但TLR2mRNA表达量随着Dx使用剂量增加而增加 (吸光度比分别为 0 0 5 4、 0 0 80和 0 16 1)。该项研究表明TLR4是参与LPS引起炎症反应的主要Toll样受体 ,而TLR2不起主要作用 ;Dx对LPS刺激后TLR 4mRNA的表达有抑制作用 ,而对TLR2mRNA的表达有增强作用 ;Dx抑制LPS引起的炎症反应可能与抑制TLR4的表达有关     

Toll样受体信号通路中MyD88的研究进展

MyD88是Toll样受体信号通路中的重要转导蛋白,其依赖的信号通路以及调控的基因产物在固有免疫和适应性免疫中均发挥着关键作用。本文对MyD88及其依赖的信号通路做一简要综述,以期为临床预防和治疗疾病提供新的思路和方法。     

基于TLR4信号通路探讨右美托咪啶对内毒素诱导的急性肺损伤纤维化大鼠细胞外基质重塑的作用

目的：基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨右美托咪啶对内毒素诱导的大鼠急性肺纤维化的保护作用。方法：采用随机数字表法将大鼠分为4组：对照组、模型组、低浓度右美托咪啶组、高浓度右美托咪啶组。模型组和低、高浓度右美托咪啶组大鼠气管内联合腹腔内注射内毒素诱导肺损伤纤维化,其中低、高浓度右美托咪啶组在建模前30 min分别腹腔注射右美托咪啶15μg/kg和25μg/kg。测定肺组织湿重/干重（W/D）,同时进行HE染色和Masson染色观察大鼠肺组织病理变化及纤维化情况。ELISA法检测大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6水平,RT-PCR检测整合素α5、Fn mRNA的表达水平,免疫荧光染色检测大鼠肺组织α-SMA的表达,Western blot法检测MyD88、NF-κB、p-NF-κB、TLR4蛋白表达。结果：与对照组相比,模型组大鼠W/D升高,TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高,肺组织中MyD88、p-NF-κB、TLR4蛋白表达明显升高。与模型组相比,低、高浓度右美托咪啶组大鼠W/D降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显降低,肺组织中MyD88、p-NF...     

异鼠李素通过调控TLR4/NF-κB信号通路对高氧诱导大鼠急性肺损伤的保护作用北大核心CSCD

目的:探讨异鼠李素对高氧诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及其可能机制。方法:32只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、异鼠李素组、异鼠李素+瑞沙托维组[瑞沙托维(TAK-242)为TLR4特异性抑制剂],每组8只,除正常对照组正常饲养外,其余各组大鼠均置于自制高氧箱中3 d构建ALI模型,模型构建成功后,按照各组给药剂量进行腹腔注射。模型组及正常对照组腹腔注射等体积生理盐水。各组注射用药均为1次/d,连续7 d。采集大鼠腹主动脉血、肺泡灌洗液、肺组织,血气分析仪测定大鼠氧分压(PaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2)),烘箱法测定大鼠肺组织湿重/干重(W/D),HE染色观察大鼠肺组织病理学变化,并对其进行肺组织损伤评分,免疫荧光染色法观察各组大鼠肺组织中TLR4表达水平,ELISA检测大鼠肺泡灌洗液中炎症因子水平,Western blot测定大鼠肺组织Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路相关蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠PaO_(2)值显著降低,PaCO_(2)、W/D值显著升高,肺组织损伤严重,肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著升高;与模型组相比,异鼠李素组及异鼠李素+瑞沙托维组大鼠肺组织损伤得到缓解,PaO_(2)值显著升高,PaCO_(2)、W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著降低;与异鼠李素组相比,异鼠李素+瑞沙托维组大鼠肺组织损伤得到改善,PaO_(2)值显著升高,PaCO_(2)、W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著降低。结论:异鼠李素能缓解高氧诱导的大鼠ALI,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路有关。     

布托啡诺抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨布托啡诺抑制Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 实验分组1:(2.5、5.0、10、20、40、80、160、320)μg/mL布托啡诺处理人卵巢癌细胞A2780,计算细胞半数抑制浓度（IC50）。实验分组2：对照组（正常培养）、布托啡诺组（13.24μg/mL布托啡诺）、布托啡诺+LPS组（13.24μg/mL布托啡诺+1μg/mL LPS）,CCK-8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell检测细胞侵袭和迁移情况;蛋白质免疫印迹检测细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达情况。结果 细胞IC50为13.24μg/mL。与对照组相比,布托啡诺组细胞OD450水平、迁移和侵袭数量、细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）;与布托啡诺组相比,布托啡诺+LPS组细胞OD450水平、迁移和侵袭数量、细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平升高（P<0.05）,细胞凋...     

Toll样受体4(TLR4)信号通路及其靶向药物的研究进展

先天免疫系统利用模式识别受体(PPR)或其他分子受体识别入侵的细菌等病原微生物,通过触发炎症反应来阻止感染的传播,在抗菌防御中起着至关重要的作用.Toll样受体4(TLR4)是哺乳动物先天免疫系统的核心,在细菌内毒素介导的炎症中起关键作用.TLR4可以识别Gram阴性菌细胞壁上的脂多糖(LPS),从而激活TLR4信号通...     

炎症介导TLR4/NF-kB通路在过敏性鼻炎患者中的表达和作用

目的 探讨炎症介导TLR4/NF-κB信号通路在过敏性鼻炎患者中的表达变化及临床意义.方法 选取2016年3月至2017年5月本院就诊的60例过敏性鼻炎患者(观察组)给予糖皮质激素治疗,同期选取30例健康体检者为对照组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者糖皮质激素治疗前后血清中TNF-α、IL-Iβ、IL-4、IL-5、IL-12、IL-13、IL-33、TLR4和NF-κB的表达.结果 与对照组相比,观察组中的TNF-α、IL-Iβ、IL-4、IL-5、IL-13、IL-33、TLR4和NF-κB的表达显著升高,IL-12水平显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).与糖皮质激素治疗前相比,治疗后观察组患者血清内TNF-α、IL-Iβ、IL-4、IL-5、IL-13、IL-33、TLR4和NF-κB的表达显著降低,IL-12水平显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 过敏性鼻炎患者血清中TNF-α、IL-Iβ、IL-4、IL-5、IL-13、IL-33、TLR4和NF-κB呈高表达状态,IL-12水平呈低表达;给予过敏性鼻炎患者糖皮质激素治疗可有效缓解患者临床症状,具有一定的治疗作用.     

TLR4／NF-κB信号通路在SiO2所致矽肺模型肺泡巨噬细胞脂质代谢调控中的作用#br#

目的 探讨Toll样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）/核转录因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）通路在二氧化硅（SiO2）所致大鼠矽肺模型肺泡巨噬细胞的脂质代谢中的作用。 方法 按随机数字表法将36只SD大鼠分为正常组、模型组、抑制剂组。模型组、抑制剂组采用一次性气管内缓慢滴注1 mL SiO2悬浮液进行造模。造模成功后抑制剂组大鼠每天定时耳缘静脉注射TAK-242（TLR4/NF-κB信号特异性抑制剂）,剂量为0.5 mg/kg,正常组和模型组注射等剂量生理盐水。4周后处死大鼠收集支气管灌洗液（bronchial lavage fluid,BALF）,ELISA测定各组大鼠BALF中白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;提取BALF中的肺泡巨噬细胞进行培养,油红O染色观察各组大鼠肺泡巨噬细胞的脂滴形成;Western blot检测各组肺泡巨噬细胞中TLR4、MyD88、NF-κB的表达水平。 结果 与正常组相比,模型组、抑制剂组大鼠BALF中IL-6和TNF-α的含量,巨噬细胞中油红O阳性比例,巨噬细胞中TLR4、MyD88、NF-κB的表达升高,差异具有统计学意义（均P<0.05）;与模型组相比,抑制剂组大鼠上述指标降低,差异具有统计学意义（均P<0.05）。 结论 在SiO2所致大鼠矽肺模型中,TLR4/NF-κB信号参与肺泡巨噬细胞的脂质代谢的调控,抑制该信号的表达,能明显抑制矽肺的病理损伤。     

人脐血血清对巨噬细胞Toll样受体4表达及功能的影响

目的研究人脐血血清(cord blood serum,CBS)对巨噬细胞RAW264.7 Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)表达及功能的影响。方法取足月孕妇脐带血和外周血血清,与RAW264.7细胞共孵育,电镜下观察形态学变化,MTT法检测血清对RAW264.7细胞活性的影响;RT-PCR和流式细胞术检测RAW264.7细胞TLR4基因和蛋白表达水平;免疫荧光技术检测RAW264.7细胞I_κB_α水平,RR-PCR检测RAW264.7细胞COX-2的表达,以反映TLR4信号途径活化程度。结果人脐血血清可下调RAW264.7细胞TLR4的mRNA和蛋白表达水平;人脐血血清预孵育可抑制由LPS诱导的RAW264.7细胞NF-_κB激活和COX-2的表达。结论人脐血血清能抑制巨噬细胞TLR4的表达及其下游信号传递,这为阐明脐血血清对脐血细胞免疫功能调节的机制提供了新的实验线索。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路观察维生素D3对大鼠炎症性肠病的改善作用

目的 基于Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子κB（TLR4/MyD88/NF-κB）信号通路观察维生素D3（VD₃ ）对大鼠炎症性肠病（IBD）的改善作用。方法 选取32只大鼠随机分为对照组（Control组）、模型组（Model组）、低浓度VD₃ 组（VD₃ low组）、高浓度VD₃ 组（VD₃ high组）。采用3%右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）建立大鼠IBD模型,分别给予不同浓度VD₃ 干预。造模结束后计算大鼠疾病活动指数（DAI）得分并测量结肠长度;行HE染色及结肠组织病理学评分;qRT-PCR、Western blot及免疫组化检测TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平;ELISA检测血清促炎因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）、抗炎因子白介素10（IL-10）含量。结果 与Control组相比,Model组DAI评分、TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRN...     

酪酸梭菌培养上清液通过下调TLR4/NF-κB信号通路抑制SW-480细胞增殖

目的研究酪酸梭菌培养上清液(C.butyricum culture supernatant;C.b.cs)对结肠癌SW-480细胞增殖的抑制作用,并探讨C.b.cs中可能的活性成分及相关分子机制。方法用C.b.cs处理后SW-480细胞,CCK-8及FCM检测细胞的增殖和凋亡。HPLC检测C.b.cs中主要的有机酸含量。Western blot及RT-q PCR检测经过C.b.cs和丁酸处理后的TLR4的表达。用TLR4配体脂多糖(LPS)激活TLR4,再用C.b.cs和丁酸处理细胞,观察TLR4和NF-κB的表达。结果 C.b.cs呈浓度依赖性地抑制SW-480增殖,并能诱导凋亡和G0/G1期阻滞。HPLC检测C.b.cs中乙酸和丁酸的含量分别为9.27 g/L和4.53 g/L。C.b.cs和丁酸可下调TLR4的表达(P0.01),并下调TLR4的下游基因NF-κB的表达(P0.05)。LPS激活TLR4的表达(P0.01)后,C.b.cs和丁酸下调TLR4和NF-κB的表达(P0.05)。结论 C.b.cs通过下调TLR4/NF-κB通路抑制SW-480细胞增殖,丁酸可能是发挥抑制作用的活性成分之一。     

妊娠期脂多糖接触激活体内TLR4信号通路引起胚胎脑内炎症应激

目的: 观察孕鼠腹腔脂多糖 (LPS) 注射后母体外周血单个核细胞 (PBMNC) 上Toll样受体4 (TLR4) 信号通路激活情况和胚胎脑组织中炎症性细胞因子的水平。方法: 10.5 d孕鼠腹腔注射LPS 0、3、6、12、24、48 和72 h后,通过蛋白免印迹测定孕鼠PBMNC 上TLR4、分化抗原14 (CD14)、髓样分化蛋白2 (MD-2)、p65和p50蛋白水平,Luminex 100免疫荧光法测定孕鼠血清、羊水、脑组织及胚胎脑组织细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-10蛋白水平,实时RT-PCR测定孕鼠PBMNC和胚胎脑组织TNF-α、IL-1β和IL-10 mRNA水平。结果: LPS腹腔注射诱导激活孕鼠PBMNC上TLR4信号通路,TLR4、CD14和MD-2蛋白水平短暂增高,核因子κB (NF-κB) 激活片段p65 和p50蛋白水平增高,TNF-α、IL-1β和IL-10 mRNA水平增高(P<0.01);孕鼠外周血和羊水TNF-α、IL-1β和IL-10水平短暂增高(P<0.01),脑内IL-1β蛋白水平短暂升高(P<0.01);胚胎脑内TNF-α和IL-1β蛋白和mRNA水平显著增高(P<0.01)。结论: 妊娠期母体LPS接触可激活母体外周免疫细胞TLR4信号通路,引发胚胎脑内炎症应激状态,可能增加出生后相关疾病的发生风险。     

桑黄素通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路改善重症肺炎大鼠肺损伤

目的 观察桑黄素对重症肺炎大鼠肺功能的影响,及对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路的调控作用。方法 SD大鼠分为正常对照组、模型组、桑黄素低（10 mg/kg）、高（40 mg/kg）剂量组、甘草酸（HMGB1通路抑制剂,30 mg/kg）组,每组12只;制备重症肺炎模型,给药2周,1次/d。检测大鼠肺活量、呼气容积、肺阻力、肺顺应性及肺泡灌洗液中白细胞数量及肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-4(IL-4)水平;苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病理变化;免疫荧光共定位法检测HMGB1与P型肺泡上皮细胞特异性-肺表面活性蛋白-C(SP-C)阳性共表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TLR4、p65NF-κB、磷酸化p65NF-κB(p-p65NF-κB)水平。取大鼠P型肺泡上皮细胞,肺炎克雷伯杆菌感染培养后,分为空白组、感染组、桑黄素（40μmol/L）组、HMGB1过表达腺病毒（ago-pC-HMGB1）组、桑黄素+ago-pCDNAHMGB1组、HMGB1空载体腺病毒（ago-pC-NC）组。透射电...     

LPS介导滋养层细胞TLR4信号传导通路对HBD-2表达的影响

目的研究LPS体外刺激滋养层细胞是否诱导表达HBD-2,并进一步探讨该表达与TLR4信号传导通路的关系。方法建立不同孕周的滋养层细胞原代培养体系,应用TLR4阻断剂预处理滋养层细胞30 min前后,给予不同质量浓度的LPS(25、50、100、200、400 ng/ml)作用72 h,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测滋养层细胞HBD-2 mRNA的表达。结果 1)LPS能诱导滋养层细胞HBD-2 mRNA表达,且这种表达与其具有浓度和时间依赖性;当质量浓度为200 ng/ml,刺激24 h时,HBD-2 mRNA的相对表达量最高;2)TLR4阻断剂能抑制LPS对滋养层细胞表达HBD-2 mRNA的诱导作用,与未阻断之前相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 LPS可能通过TLR4信号传导通路诱导滋养层细胞表达HBD-2 mRNA,将为宫内感染防治提供新靶点。     

CCK-8抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞TLR4及IL-1β的表达

目的观察八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对外源性脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活大鼠肺间质巨噬细胞(pulmonary interstitial macrophages,PIMs)Toll样受体4(Toll likereceptor4,TLR4)及IL-1β表达的影响,探讨CCK-8的抗炎作用机制。方法分离培养大鼠PIMs,经LPS、CCK-8及溶剂单独或共同孵育不同时间后,采用Northern blot、ELISA、RT-PCR技术检测TLR4 mRNA、IL-1β及IL-1β mRNA表达的变化。结果LPS(1mg／L)刺激可使PIMs中TLR4 mRNA表达明显增强;随着LPS孵育时间的延长,细胞中的IL-1β含量逐渐增多,24h达高峰,IL-1β mRNA表达水平同时明显升高;CCK-8可剂量依赖性抑制LPS诱导的大鼠PIMs TLR4 mRNA、IL-1β及IL-1β mRNA的表达。结论CCK-8对LPS激活的PIMs TLR4及IL-1β表达有负性调节作用,是CCK-8抗炎作用机制之一。     

体外培养大鼠肺泡巨噬细胞周期性牵张模型的建立及其炎性介质的变化

目的 建立体外培养大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)周期性牵张模型,观察有关炎性介质基因和蛋白表达的变化.方法 通过Flexercell 4000TTM应力加载系统对大鼠AM施加30%牵张应变,用RT-PCR法检测炎性介质mRNA的表达;用ELISA法检测炎性介质的分泌水平.结果AM细胞受30%牵张应变作用后,巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)基因表达和蛋白分泌水平均显著增加(P>005),而肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA表达和蛋白分泌水平与对照组无差异(P>005).结论 本牵张模型能够反映呼吸机相关性肺损伤(VILI)后炎性介质水平的变化,是研究VILI的理想模型.     

N-Ac-PGP通过激活TLR4诱导巨噬细胞的M1极化并提高慢性阻塞性肺疾病炎症水平

目的：探究N-乙酰化脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸（N-acetylated proline-glycine-proline, N-Ac-PGP）通过Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)诱导巨噬细胞M1极化对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease, COPD）炎症反应的影响。方法：检测COPD患者痰液中N-Ac-PGP和M1型巨噬细胞炎性细胞因子的表达。体外培养人单核细胞白血病细胞THP-1,使用佛波脂（phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）诱导使之分化为M0型巨噬细胞,然后使用脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）和N-Ac-PGP诱导M0型巨噬细胞极化为M1型。采用RTqPCR和Western blot法分别检测巨噬细胞表面标志物CD11b、CD45、CD86和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）的mRNA和蛋白表达水平。使用ELISA检测M1型巨噬细胞炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(tu-m...