血清反应因子参与单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮间充质转分化

目的:探讨血清反应因子(SRF)在肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)过程中的作用和可能机制。方法:将54只清洁级(SPF级)SD大鼠中36只行单侧输尿管结扎(UUO组),另外18只为假手术组(Sham组)。在UUO术后3 d和14 d分别处死18只大鼠并留取肾脏组织,应用免疫组织化学方法检测肾小管上皮细胞中SRF、E-cadherin、α-SMA和Snail的表达变化。结果:UUO组3 d和14 d的肾组织中SRF、α-SMA和Snail表达显著增高(P<0.05),其中SRF在3 d和14 d的阳性率分别为83.3%、94.4%,假手术组为5.56%;E-cadherin表达显著下降(P<0.05)。结论:SRF可能参与了单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮间充质细胞转分化的过程。     

EMMPRIN在大鼠肾间质纤维化过程中的表达变化

目的 检测细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在大鼠肾间质纤维化模型中的表达变化.方法 64只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)和模型组(UUO组),每组16只.假手术组,仅游离输尿管不结扎,模型组,行单侧输尿管结扎术,分别于术后3、7、14 d处死大鼠并留取肾脏组织.肾脏标本行HE、Masson染色方法检测间质纤维化损伤的程度.应用免疫组织化学方法检测肾组织中EMMPRIN,α-SMA,E-cadherin的表达.结果 HE染色显示:UUO术后肾间质肾小管萎缩、扩张,胞外基质沉积,炎细胞浸润增加.Masson染色显示:UUO术后大鼠肾组织胶原纤维组织增生,出现明显的间质纤维化改变.免疫组织化学结果显示:与假手术组相比,UUO模型3d组的EMMPRIN表达显著增高,同时有α-SMA表达升高和E-cadherin表达显著下降(P＜0.05);随着梗阻时间的延长,模型7d组EMMPRIN的表达逐渐减弱(P＜0.05).结论 EMMPRIN可能参与了UUO大鼠肾间质纤维化的早期上皮间质转分化过程,而随着纤维化程度加重,后期表达逐渐减少.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对小鼠肾间质纤维化及CTGF的影响

目的观察丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对UUO小鼠肾间质纤维化(RIF)的影响及其作用机制。方法清洁级雄性CD1小鼠20只,随机分为:A组(单纯对照组)、B组(UUO造模组)、C组(STS低剂量组)、D组(STS高剂量组)。每组各5只,行右侧输尿管结扎术,单纯对照组只找到输尿管并不结扎,STS组小鼠在手术前3天开始腹腔内注射STS,低、高剂量组STS浓度分别为15 mg/kg.d、30 mg/kg.d,其他2组予同等剂量的生理盐水。UUO 7天后处死小鼠提取肾组织,Masson染色观察肾小管间质胶原纤维分布,Realtime PCR观察肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原、α-SMA的mRNA表达,Western blot观察肾组织中α-SMA蛋白质表达。结果与对照组相比,UUO小鼠Ⅰ型胶原、α-SMA、CTGF的表达增加,RIF明显(P<0.01),STS可明显抑制UUO小鼠肾组织Ⅰ型胶原、α-SMA、CTGF的表达(P<0.05),减轻RIF。结论 STS具有抑制UUO小鼠肾间质纤维化的作用,且这种作用可能与其对CTGF的抑制有关。     

血清反应因子促进人腹膜间皮细胞的转分化

目的探讨血清反应因子(SRF)在人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化中的作用。方法腹膜间皮细胞由腹膜透析(PD)患者透出液离心后进行培养,观察不同透龄患者的原代腹膜间皮细胞改变,并用免疫荧光细胞化学方法检测SRF及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Snail、E-钙黏素(E-cadherin)的表达。细胞经高糖刺激发生转分化后,将SRF siRNA转染至细胞中使SRF下调,用免疫荧光细胞化学技术及Western blot法检测E-cadherin和α-SMA、Snail的表达。采用染色体免疫共沉淀(ChIP)及报告基因方法检测SRF与Snail的结合情况。结果无菌收集50例PD患者透出液,原代培养HPMC,随着透析时间的延长,细胞从铺路石样逐渐转变为成纤维细胞样;SRF表达显著增强时,间质标志分子α-SMA的表达增强,而上皮标志分子E-cadherin表达减弱。永生化的HPMC经高糖刺激72 h使其发生转分化后,用小干扰RNA使SRF沉默。与对照组相比,免疫荧光细胞化学染色显示SRF下调后,α-SMA、Snail的表达明显减弱,而E-cadherin表达明显增强;Western blot结果显示SRF的表达水平降低时,E-cadherin表达升高,而α-SMA、Snail的表达明显减少。ChIP结果提示,SRF可与Snail启动子区2个结合位点SRE1和SRE2结合,报告基因结果显示,SRF主要与SRE2位点结合并启动Snail的表达。结论 SRF在已发生间充质转分化的HPMC或腹膜纤维化时高表达,可能通过启动Snail表达来促进HPMC转分化。     

血清反应因子促进人腹膜间皮细胞的转分化北大核心CSCD

目的探讨血清反应因子(SRF)在人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化中的作用。方法腹膜间皮细胞由腹膜透析(PD)患者透出液离心后进行培养,观察不同透龄患者的原代腹膜间皮细胞改变,并用免疫荧光细胞化学方法检测SRF及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Snail、E-钙黏素(E-cadherin)的表达。细胞经高糖刺激发生转分化后,将SRF siRNA转染至细胞中使SRF下调,用免疫荧光细胞化学技术及Western blot法检测E-cadherin和α-SMA、Snail的表达。采用染色体免疫共沉淀(ChIP)及报告基因方法检测SRF与Snail的结合情况。结果无菌收集50例PD患者透出液,原代培养HPMC,随着透析时间的延长,细胞从铺路石样逐渐转变为成纤维细胞样;SRF表达显著增强时,间质标志分子α-SMA的表达增强,而上皮标志分子E-cadherin表达减弱。永生化的HPMC经高糖刺激72 h使其发生转分化后,用小干扰RNA使SRF沉默。与对照组相比,免疫荧光细胞化学染色显示SRF下调后,α-SMA、Snail的表达明显减弱,而E-cadherin表达明显增强;Western blot结果显示SRF的表达水平降低时,E-cadherin表达升高,而α-SMA、Snail的表达明显减少。ChIP结果提示,SRF可与Snail启动子区2个结合位点SRE1和SRE2结合,报告基因结果显示,SRF主要与SRE2位点结合并启动Snail的表达。结论 SRF在已发生间充质转分化的HPMC或腹膜纤维化时高表达,可能通过启动Snail表达来促进HPMC转分化。     

miR-143-3p在人腹膜间皮细胞转分化过程中的作用及机制

目的探讨miR-143-3p在高糖刺激的人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化中的作用及相关机制。方法将永生化的HPMC给予50mmol/L高糖刺激72h后,反转录PCR及Westernblot法检测miR-143-3p、血清反应因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)及Snail的mRNA和蛋白表达变化;利用miR-143-3p的模拟物、模拟物阴性对照、抑制剂及抑制剂阴性对照;pcDNA3.1空载体与pcDNA3.1-SRF质粒;SRF-siRNA和阴性对照分别转染高糖刺激72h后的HPMC,反转录PCR及Westernblot法检测miR-143-3p、SRF、α-SMA、E-cadherin及Snail的mRNA和蛋白表达水平。结果反转录PCR及Westernblot法检测结果显示,高糖刺激HPMC72h后,miR-143-3p、SRF、α-SMA及Snail表达增加,而E-cadherin表达下降;上调miR-143-3p的表达后,SRF、α-SMA及Snail表达增加,而E-cadherin表达降低。下调miR-143-3p的表达后,SRF、α-SMA及Snail表达减少,而E-cadherin表达增加。利用pcDNA3.1-SRF质粒上调SRF表达,则miR-143-3p、α-SMA及Snail表达增加,而E-cadherin表达下调;SRF-siRNA沉默SRF后,miR-143-3p、α-SMA及Snail表达下调,而E-cadherin表达增加。结论SRF/miR-143-3p信号通路轴参与了高糖刺激所引起的人腹膜间皮细胞的转分化过程,其机制可能是通过SRF上调miR-143-3p的表达,间接参与人腹膜间皮细胞的转分化。     

维生素D通过调控Traf6/TAK1通路抑制2型糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化北大核心CSCD

目的:研究维生素D(Vit D)对2型糖尿病肾病(DKD)大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)的抑制作用及对肿瘤坏死因子受体相关分子6(Traf6)/转化生长因子β活化激酶1(TAK1)通路的影响。方法:将48只SD雄性大鼠分为正常组(Control组)、模型组(Vehicle组)和治疗组(Vit D组)。Vehicle组及Vit D组建立DKD大鼠模型,饲以高脂高糖饲料并腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)。建模成功后,Vehicle组及Vit D组给予0.03μg/(kg·d)骨化三醇(溶于0.05 ml花生油)灌胃8周,Vehicle组给予等量花生油灌胃,Control组不做任何处理。8周时测定FBG、尿蛋白、血肌酸酐、血尿素氮含量,处死大鼠并留取肾脏。采用ELISA法检测IL-6、IL-1β及TNF-α含量;HE染色观察肾脏组织形态学改变;Masson染色观察肾脏组织纤维化改变;免疫组化染色观察E-钙黏蛋白(E-cadherin)、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达;Western blot方法检测Traf6、p-TAK1蛋白的表达量。结果:与Control组相比,Vehicle组大鼠FBG、尿蛋白、血肌酸酐、血尿素氮含量,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量,TGF-β1、α-SMA、Traf6、p-TAK1蛋白显著增加,E-cadherin蛋白显著减少(均P<0.05),与Vehicle组相比,Vit D组FBG、尿蛋白、血肌酸酐、血尿素氮含量,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量,TGF-β1、α-SMA、Traf6、p-TAK1蛋白显著减少,E-cadherin蛋白显著增多(均P<0.05)。结论:Vit D能够明显改善大鼠DKD损伤,抑制机体炎症反应及肾小管EMT的发生,从而抑制肾小管间质纤维化(RIF),可能通过抑制TRAF6/TAK1信号通路发挥对DKD大鼠的保护作用。     

硒与苯那普利抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

目的研究亚硒酸钠与苯那普利对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的保护作用及其机制。方法将大鼠随机分为假手术组、UUO组(结扎单侧输尿管建立UUO模型)、UUO+硒组(亚硒酸钠0.2 mg/kg·d灌胃)和UUO+苯那普利组(苯那普利10 mg/kg·d灌胃),每组18只。术后第7、14和21天,各组随机处死6只大鼠,肾组织行HE和Masson染色,观察RIF程度;免疫组化法检测结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)的表达;Western blot检测CTGF和TGF-β1蛋白表达;比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量。结果术后第7、14和21天,硒组和苯那普利组RIF较UUO组明显减轻(P<0.05);肾组织CTGF、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ表达强度和MDA含量明显低于UUO组(P<0.01或P<0.05);GSH-Px和SOD含量明显高于UUO组(P<0.05)。两干预组之间各项指标无明显差异。UUO组TGF-β1、CTGF、α-SMA、ColⅢ的表达和RIF指数与MDA含量呈正相关(P<0.05),与SOD和GSH-Px含量呈负相关(P<0.05);CTGF与α-SMA、ColⅢ的表达呈正相关(P<0.05),CTGF、α-SMA和ColⅢ表达与RIF病变程度呈正相关(P<0.05)。结论亚硒酸钠与苯那普利均可减轻UUO模型大鼠RIF。     

丙戊酸钠减轻博莱霉素致大鼠肺纤维化

目的:探讨丙戊酸钠在博莱霉素诱导的肺纤维化中的作用及机制。方法:42只大鼠随机分为正常对照组、模型组和治疗组。造模采用博来霉素5 mg/kg气管内注射,自造模14 d开始分别采用生理盐水(0.5m L/d)、丙戊酸钠(300 mg·kg-1·d-1)和地塞米松(0.6 mg·kg-1·d-1)腹腔内注射治疗14 d。模型组分别在造模后14和、28 d处死。治疗组在造模后28 d处死。然后通过HE染色、Masson染色、羟脯氨酸(HYP)检测和Western blotting检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的变化,综合分析丙戊酸钠对肺纤维化发展的干预作用。结果:HE染色显示丙戊酸钠治疗组的肺泡结构、肺间质的形态优于生理盐水组和地塞米松治疗组。Masson染色及HYP检测用于衡量肺组织内胶原的分布及含量,可见丙戊酸钠治疗组肺组织内胶原的分布及含量均显著低于地塞米松治疗组及生理盐水组。丙戊酸钠可以降低α-SMA的表达,同时上调上皮标志性蛋白E-cadherin的表达。结论:丙戊酸钠可以通过减少胶原的表达与分布及下调间充质蛋白α-SMA,同时上调上皮蛋白E-cadherin的表达从而减轻博来霉素诱导大鼠肺纤维化。     

盐酸吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TLR4表达的影响

目的研究盐酸吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法 57只雄性SD大鼠,分为实验组(n=48)和正常对照组(n=9)。实验组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50 mg/kg建立糖尿病大鼠模型,正常对照组注射等剂量无菌枸橼酸钠缓冲液。建模成功的45只大鼠随机分为5组,每组9只。吡格列酮5 mg/(kg·d)、吡格列酮10 mg/(kg·d)组、吡格列酮5 mg/(kg·d)联合TLR4特异性抑制剂Eritoran 5 mg/(kg·d)、吡格列酮10 mg/(kg·d)联合TLR4特异性抑制剂Eritoran 5 mg/(kg·d),未干预组。吡格列酮采用灌胃的方法给药,对照组给予等量生理盐水灌胃。联合应用TLR4特异性抑制剂Eritoran组于第5周给予腹腔注射Eritoran 5 mg/(kg·d),连续6周。于第8周末各组大鼠留24 h尿液测量尿微量白蛋白,采用Western blot法检测肾组织中TLR4表达水平。心尖部取血2 mL,测空腹血糖、血CRP。免疫组织化学染色检测各组大鼠肾组织中TLR4及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达。结果与对照组相比,实验组大鼠24 h尿微量蛋白、血CRP含量显著增高;肾组织TLR4的表达明显增加,治疗前与治疗后比较存在差异(P0.05);与未干预组相比,各干预组大鼠24 h尿微量白蛋白、血CRP含量下降,肾组织TLR4的表达亦减弱,差异有统计学意义(P0.05);10 mg/(kg·d)吡格列酮组与5 mg/(kg·d)吡格列酮组比较,肾组织TLR4的表达减弱,差异有统计学意义(P0.05);10 mg/(kg·d)吡格列酮联合5 mg/(kg·d)Eritoran组与5 mg/(kg·d)吡格列酮联合5 mg/(kg·d)Eritoran组比较,肾组织TLR4的表达均明显减弱,但差异无统计学意义(P0.05)。结论吡格列酮下调糖尿病大鼠肾脏组织TLR4表达,调节促炎和抗炎之间平衡,发挥抗炎作用。     

胰激肽原酶减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

目的:探讨胰激肽原酶(PK)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致肾间质纤维化大鼠肾脏的保护作用。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠建立UUO模型后随机分为4组:UUO7组、UUO14组、UUO+PK7组和UUO+PK14组,其中UUO+PK7组和UUO+PK14组给予腹腔注射PK(7.2 U·kg~(-1)·d~(-1))治疗14 d,分别于第7天和第14天处死大鼠;假手术组给予生理盐水。采用Masson染色、HE染色和透射电镜观察各组大鼠的肾间质纤维化程度;免疫组化和Western blot法分别检测炎症因子、致纤因子、氧化应激、细胞凋亡及细胞自噬调控因子的表达。结果:PK治疗明显减轻UUO大鼠肾小管间质纤维化程度,并呈时间依赖性,这种改善伴随着炎症介质[单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和Toll样受体2(TLR-2)]及致纤因子[转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)]的表达下调。UUO所致氧化应激表现为氧化酶[NADPH氧化酶2(NOX-2)和NOX-4]的表达增加和抗氧化酶[超氧化物岐化酶1(SOD1)和SOD2]的表达下降,这种改变与细胞凋亡(Bcl-2/Bax和cleaved caspase-3)及细胞自噬(LC3B、beclin-1和P62)调控因子表达失衡紧密相关,PK逆转了上述所有指标。结论:PK可能通过干预氧化应激和程序性细胞死亡对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏具有抗纤维化作用。     

α-平滑肌肌动蛋白和E-钙依赖性黏附素在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达

目的： 检测单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化模型肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙依赖性黏附素(E-Cad)表达的动态变化,并观察比较在肾小管间质纤维化不同阶段的病理变化。方法:采用 54只雄性健康SD大鼠随机分为正常组、假手术组和模型组,模型组行左侧输尿管结扎术,正常组21 d处死6 只动物,假手术组和UUO组分别于术后 3、7、14、21 d 各处死6只动物,共48只,取肾组织常规行HE染色、六胺银染色光镜下观察,取肾皮质电镜下观察病变情况。采用蛋白印迹法检测肾组织α-SMA、E-Cad 蛋白表达。结果: (1)随着造模时间的延长,肾小管间质纤维化逐渐加重,UUO术后21 d的肾小管扩张与萎缩均明显,肾间质有大量的纤维化组织出现。(2)与假手术组相比,模型组肾组织α-SMA于术后第3 d 即表达增加,并随梗阻时间延长表达逐渐增加,至UUO术后21 d达高峰。21 d模型组与假手术组比较,有显著差异(P<0.01)。(3)而E-Cad 蛋白于术后第3 d 即表达降低,并随梗阻时间延长逐渐降低。 结论: 在UUO阻塞性肾病中,α-SMA蛋白表达呈时间依赖性上调,而E-Cad 蛋白表达呈时间依赖性下调,提示在阻塞性肾病中,肌纤维母细胞的活化是一个动态的过程,可能与肾小管上皮细胞转分化有关。     

依普利酮通过下调VEGF表达抑制UUO模型大鼠对侧肾脏血管新生并减轻肾脏纤维化

目的:观察依普利酮抑制单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠对侧肾脏血管新生及肾脏纤维化的作用.方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、UUO组和依普利酮组,每组10只.除假手术组外,其余各组大鼠行UUO手术复制梗阻性肾病模型.依普利酮组以100 mg·kg-1·d-1加入饲料中喂养,连续给药180 d后摘取对侧肾...     

整合素连接激酶在梗阻性肾病肾小管上皮细胞转化中的作用

目的观察整合素连接激酶（ILK）在单侧输尿管梗阻小鼠（UUO）肾脏中的表达,并探讨其在肾小管上皮细胞转化中的作用。方法将10周龄健康雄性CD-1小鼠随机分为假手术组（C,n=20）和UUO组（n=40）,分别于术后1、3、7、14d处死小鼠。采用Masson染色观察肾间质纤维化程度;用免疫组织化学（sP法）的方法观察ILK、E-钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;Westernblot半定量分析梗阻侧肾组织ILK的蛋白水平;用即时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测ILK、E-cadherin和α-SMA mRNA的表达。结果免疫组织化学显示ILK在假手术组只有微量表达,主要位于肾小球脏层上皮细胞,UUO术后1d ILK蛋白表达显著增多（t=16．5,P＜0．01）,7d达高峰。术后3d肾小管上皮细胞及肾间质α-SMA阳性细胞数显著增多（t=21．0,P＜0．01）,肾小管上皮细胞表达E-cadherin明显减少（t=5．6,P＜0．01）。根据免疫组织化学结果分析,术后1～7d,ILK蛋白表达与α-SMA蛋白表达呈正相关（R=0．88,P＜0．01）,与E-cadherin表达呈负相关（R=-0．87,P＜0．01）。Westernblot结果显示ILK蛋白表达于术后1d明显增加,7d达高峰,14d表达不再增加（P＞0．05）。RT-PCR结果显示术后1d ILK mRNA表达增多（t=141．6,P＜0．01）,E-cadherin mRNA表达于术后3d显著减少（P＜0．01）,α-SMA mRNA表达于术后3d开始增多（P＜0．01）。结论UUO模型早期整合素连接激酶表达增高,可能通过介导肾小管上皮细胞．间充质转化而参与肾脏纤维化的发生发展。     

尿激酶联合黄芪对环孢素A诱导的肾病大鼠肾组织Snail1表达的影响及意义

目的:探讨尿激酶(u-PA)联合黄芪(AM)对环孢菌素A(CsA)诱导的肾病大鼠肾组织Snail1蛋白表达的影响及意义。方法:采用灌胃给以CsA(25mg·kg-1.d-1),复制大鼠慢性肾病模型,将大鼠随机分为5组:对照组、模型组、u-PA、AM及联合治疗组,4周末取标本。Masson染色观察肾间质纤维化;免疫组织化学和Western印迹检测大鼠肾组织Snail1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞特异蛋白1(FSP1)的表达。结果:与对照组相比,模型组肾组织胶原沉积加重,Snail1蛋白表达显著上调,E-cadherin蛋白表达明显减少,FSP1表达明显增强(均P0.05)。与模型组相比,治疗各组胶原沉积减弱、Snail1、FSP1表达均被显著抑制(均P0.05);E-cadherin表达则增高(P0.05),且联合组的治疗效果更显著。结论:u-PA与AM能减轻CsA诱导的肾脏纤维化,这机制可能与其抑制肾组织Snail1的表达有关。     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达

目的：检测大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型不同时期，肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，观察比较在间质纤维化不同阶段，3者的动态变化及关系。 方法： 采用雄性SD大鼠36只，分为假手术组和模型组，模型组行左侧输尿管结扎术，再分3、7、14、21和28 d共6组，每组6只，于各时点处死大鼠，取肾组织，常规HE、Masson染色，按小管间质损害的特征进行半定量评分。免疫组化检测CTGF、TGF-β1和α-SMA表达。 结果： 随梗阻时间的延长，小管间质纤维化加重，28 d间质已基本被纤维化组织所代替。随间质纤维化程度的加重，CTGF和α-SMA表达逐渐增加，两者与小管间质损害积分呈正相关，CTGF与α-SMA的表达之间也呈正相关。TGF-β1表达在7-14 d达高峰后，逐渐减少，但仍高于对照组。 结论： UUO致CTGF表达增加可能与TGF-β升高有关，CTGF可能通过促进间质中肌成纤维细胞的形成而参与肾间质纤维化。     

大黄素对大鼠肾纤维化肾间质中血小板源性生长因子(PDGF-B)表达的影响及意义

目的探讨大黄素对大鼠肾间质纤维化模型中血小板源性生长因子(PDGF-B)表达的影响及意义。方法清洁级Wister雄性成年大鼠160只随机分为4组:正常对照组、假手术组、模型组及大黄素治疗组。制备单侧输尿管梗阻(UUO)模型[1];治疗组在UUO的基础上每天以大黄素40mg/kg灌胃,分别在术后1d、3d、7d、14d,每组取10只大鼠处死,取左侧肾脏行免疫组织化学方法检测肾组织中PDGF-B的表达水平,动态观察PDGF-B在各组大鼠术后梗阻侧肾脏1、3、7、14天的组织学变化及大黄素对其影响。结果模型组PDGF-B的表达持续升高;治疗组PDGF-B的表达水平低于模型组(P0.01)。结论中药大黄素可以通过减少PDGF-B的表达来发挥其延缓肾间质纤维化进程的作用,对肾纤维化有治疗作用。     

活性维生素D3在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a表达的影响

目的探讨活性维生素D3[1,25(OH)2D3]在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a的影响。方法 150只SD雄性大鼠随机分为纤维化发生干预组(90只)和纤维化后干预组(60只),纤维化发生干预组分为模型组Ⅰ、给药组Ⅰ和对照组Ⅰ(n=30),纤维化后干预组分为模型组Ⅱ、给药组Ⅱ和对照组Ⅱ(n=20)。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博来霉素(5mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入等体积生理盐水。给药组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射活性维生素D3,模型组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射等量的活性维生素D3溶剂(0.1%乙醇和99.9%的丙二醇),对照组Ⅰ/Ⅱ分别在术后第2天和第14天腹腔注射等量的生理盐水。各种处理均为两天1次。纤维化发生干预组分别于手术后第14天、第21天和第28天处死大鼠取材,纤维化后干预组分别于手术后第21天和第28天处死大鼠取材,各小组每个时间点10只大鼠。用Masson染色法观察各组实验大鼠肺中胶原纤维的差异,用碱水解法检测羟脯氨酸含量的变化,用实时定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col)ⅠmRNA及miR-29a的相对表达量,用免疫组织化学方法检测α-SMA和ColⅠ蛋白质表达水平,并经图像分析进行量化。结果博来霉素处理后,第14天大鼠肺部已经出现纤维化,随着时间推移,纤维化进一步加重。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的羟脯氨酸含量、α-SMA和ColⅠ的mRNA和蛋白质表达都明显高于对照组Ⅰ/Ⅱ,而其miR-29a表达与对照组Ⅰ/Ⅱ相比则明显减少。给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达与模型组Ⅰ/Ⅱ相比有所增加(P0.05)。在纤维化发生干预组中,与模型组Ⅰ相比,给药组Ⅰ在3个时间点羟脯氨酸含量、α-SMA、ColⅠ的mRNA和蛋白质表达都显著降低(P0.05),但在纤维化后干预组中的给药组Ⅱ中羟脯氨酸含量、α-SMA、ColⅠ的mRNA和蛋白质表达比模型组Ⅱ虽有所降低,但差异无显著性(P0.05)。结论活性维生素D3对大鼠肺纤维化的发生发展具有一定的抑制作用,其预防效果更好一些,并且能促进miR-29a的表达,活性维生素D3可能是通过促进miR-29a的表达来抑制肺纤维化的发生发展。     

WNT4及其抑制因子SFRP1在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达

目的观察WNT4/β-catenin信号通路及其抑制因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织中的表达变化,探讨其在肾脏纤维化发生发展中的可能作用。方法将大鼠随机分为正常对照(NC)组和DN组,8只/组。尾静脉注射STZ 55 mg/kg复制IDDM模型。HE、PAS及Masson染色观察肾组织形态学结构和纤维化病变;免疫组织化学法观察WNT4和β-catenin蛋白在肾组织的表达部位;Western blot检测WNT4、SFRP1、β-catenin、p-GSK-3β、GSK-3β、CollagenⅠ、α-SMA和E-cadherin蛋白在肾组织中的表达;Real-time PCR检测WNT4及SFRP1 mRNA在肾组织中的表达。结果与NC组相比,DN组大鼠肾组织纤维化病变明显;WNT4蛋白和mRNA表达显著增多(P<0.05);β-catenin、p-GSK-3β、α-SMA和CollagenⅠ蛋白的表达显著增多(P<0.05);E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.05);SFRP1蛋白和mRNA表达显著下降(P<0.05)。结论在DN发病中,WNT4/β-catenin信号通路异常活化;SFRP1表达减少可能抑制该通路,促进了DN肾纤维化的发生发展。     

SAHA对糖尿病大鼠肾组织Twist和HDAC1表达的影响

目的:通过观察辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对糖尿病(DM)大鼠肾组织Twist、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及相关上皮-间充质转化和纤维化指标表达的影响,初步探讨SAHA对糖尿病肾病Twist表达变化的可能干预机制。方法:以链脲佐菌素复制DM大鼠模型,实验分为正常对照(NC)组、DM组和SAHA组,每组12只。造模成功8周后,SAHA组用SAHA(25 mg·kg~(-1)·d~(-1))进行灌胃。治疗8周后处死大鼠,HE和Masson染色观察肾组织形态变化;免疫组织化学染色观察肾组织中Twist的表达变化;Western blot法检测肾组织中Twist、HDAC1、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和IV型胶原(Col-Ⅳ)蛋白的表达;real-time PCR检测肾组织中Twist的mRNA表达。结果:DM组的血糖、24 h尿蛋白量和肾脏指数均显著高于NC组;而SAHA组肾脏指数与DM组相比有明显降低(P0.05),24 h尿蛋白量虽有降低,但差异无统计学显著性,而血糖无明显改变。与NC组对比,DM组大鼠肾组织中HDAC1、α-SMA和Col-Ⅳ蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调,Twist的mRNA和蛋白表达上调(P0.05);SAHA组大鼠肾组织中的Twist、HDAC1、α-SMA和Col-Ⅳ蛋白表达量明显低于DM组(P0.05),且Twist的mRNA的表达比DM组低,E-cadherin蛋白表达较DM组有所上升(P0.05)。相关性结果显示,在糖尿病大鼠肾组织中,Twist与HDAC1蛋白表达呈正相关(P0.05)。结论:SAHA可下调DM大鼠肾组织中Twist的表达,减轻糖尿病肾病大鼠肾纤维化病变,其机制可能与抑制HDAC1和Twist形成进而促进Ecadherin转录有关。