STAT3 siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3及其下游基因表达的影响

目的：观察RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9蛋白表达的影响及其相关性及对细胞生长的影响,探讨肺癌基因治疗的新途径。方法：采用化学合成法,合成针对STAT3基因不同位点设计的3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列（siRNA1-3）和1条带有荧光标记的应用STAT3-siRNA转染处理人肺腺癌细胞系A549,转染16h后荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测STAT3基因表达的变化,蛋白免疫印迹法检测转染后A549细胞STAT3,CyclinD1,BAX,Bcl-2,Caspase-9蛋白表达,AM-BLUE检测A549细胞生长情况。结果：经RNA干扰能有效减低A549细胞STAT3mRNA表达水平（P〈0.05）,转染后A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低（P〈0.05）,而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高（P〈0.05）。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关（r=0.854,0.910,P〈0.05）;与BAX蛋白表达程负相关性（r=-0.848,P〈0.05）;与Caspase-9蛋白表达程无相关性（r=-0.787,P〉0.05）。RNA干扰法沉默STAT3基因后,A549细胞增殖受到明显抑制。结论：STAT3-siRNA可有效抑制STAT3、CyclinD1、Bcl-2在人肺腺癌A549细胞中的表达,升高BAX、Caspase-9在人肺腺癌A549细胞中的表达,抑制A549细胞生长。     

STAT3-siRNA表达载体对肝癌细胞pim-2基因表达的影响

目的:探讨STAT3-siRNA对肝癌细胞pim-2基因表达的影响.方法:设计靶向stat3基因的siRNA-SECs,构建重组表达质粒,在体外基于脂质体来实现介导,对SMMC-7721转染,在对转染效果进行分析的过程中所采用的主要方法为Western blot和半定量RT-PCR分析.结果:转染STAT3-siRNA...     

雷公藤红素对肝癌细胞株HepG2的影响及作用机制

目的：研究雷公藤红素（Celastrol）对肝癌细胞株HepG2增殖活力的影响。方法将人正常肝细胞LO2及人肝癌细胞株HepG2接种在DEME培养基中,传代后取对数生长期细胞进行实验,用MTT法测定不同浓度雷公藤红素对正常肝细胞LO2及肝癌细胞株HepG2增殖的量效关系（1、2、4、8、16、32μmol／L）和在0.5μg／mL浓度的雷公藤红素作用下的时效关系（1、2、4、8、12、24 h）,Hoechst 荧光染色观察凋亡细胞形态变化以及Western blot检测肝癌细胞株HepG2中半胱氨酸蛋白酶（ caspase ）－3、caspase －8、caspase －9与胞内磷脂酰肌醇3激酶（p－PI3K）、t－胞内磷脂酰肌醇3激酶（t－PI3K）、磷酸化蛋白激酶（p－AKT）、t－AKT、细胞外信号调节激酶（p－ERK）、t－ERK的表达情况。结果经MTT法检测,不同浓度雷公藤红素对正常肝细胞的增殖没有明显抑制作用,而对肝癌细胞HepG2的抑制率依次为6.83％、15.11％、18.32％、21.77％、23.77％、25.51％,作用强度随着浓度的升高而增强;在浓度为0.5μg／mL雷公藤红素作用下,不同时间抑制率分别为6.66％、10.63％、13.31％、15.50％、20.54％、32.34％,呈时间依赖性;Hoechst 荧光染色在显微镜下均显现凋亡细胞。 Western blot结果显示, caspase－3、caspase－8、caspase－9、p－PI3K、p－AKT、p－ERK显影,caspase－3、caspase－8、caspase－9表达量增加,而p－PI3K、p－AKT、p－ERK表达量降低。结论雷公藤红素通过诱导HepG2凋亡及细胞自噬作用,发挥增殖活力抑制作用,可能与调控caspase－3、caspase－8、caspase－9、p－PI3K、p－AKT、p－ERK等相关因子的表达情况有关。     

解毒消癥饮对肝癌细胞株HepG2线粒体膜电位的影响

目的 探讨中药复方解毒消癥饮诱导肿瘤细胞凋亡的机制. 方法 采用体外培养人肝癌细胞株HepG2,用解毒消癥饮含药血清干预24 h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测线粒体膜电位的改变. 结果 解毒消癥饮含药血清组与对照组和空白血清组比较,细胞增殖明显抑制,线粒体膜电位明显下降,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 解毒消癥饮诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的机制可能是通过崩溃线粒体跨膜电位,从而引发细胞早期凋亡.     

解毒消瘕饮对肝癌细胞株HepG2线粒体膜电位的影响

目的 探讨中药复方解毒消瘕饮诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用体外培养人肝癌细胞株HepG2,用解毒消瘢饮含药血清干预24h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测线粒体膜电位的改变。结果解毒消瘕饮含药血清组与对照组和空白血清组比较,细胞增殖明显抑制,线粒体膜电位明显下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论解毒消瘢饮诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的机制可能是通过崩溃线粒体跨膜电位,从而引发细胞早期凋亡。     

siRNA抑制肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的研究

目的 研究siRNA对肝癌细胞株HepC2中Survivin基因表达的抑制作用。方法 设计、合成一对Survivin编码基因的反向重复序列，中间间隔9个核苷酸序列，通过定向克隆至载体Psilencer2．1，构建siRNA真核表达载体，经稳定转染HepG2细胞后应用RT-PCR及流式细胞术检测肝癌细胞中Survivin基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况。结果 测序证实siRNA真核表达载体构建成功。通过RT-PCR及流式细胞术检测，siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制Survivin基因表达分别达73％和75％。结论 构建的：Psilencer( )-Survivin重组质粒能有效抑制Survivin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。     

抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制研究

目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响,并对其影响肝癌细胞增殖的机制进行探讨,为STAT5A基因在肝细胞癌中的功能研究提供实验依据。方法:构建针对STAT5A基因的shRNA真核表达载体,脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,采用半定量RT-PCR的方法检测细胞中STAT5A mRNA的变化;蛋白质印迹技术检测转染前后细胞中STAT5A蛋白、细胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表达的变化;采用MTT法检测细胞增殖的情况。结果:酶切及测序结果显示shRNA表达载体均构建成功,转染HepG2细胞48h后,与对照组相比,RT-PCR结果显示实验组细胞中STAT5A mRNA的抑制率为72.03%(P<0.05),蛋白质印迹法显示STAT5A蛋白的抑制率为66.27%(P<0.05),细胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表达下降47.16%(P<0.05),同时MTT法显示细胞生长速度减慢、增殖抑制明显。结论:抑制STAT5A基因的表达可有效抑制HepG2细胞的增殖,其机制可能是通过下调Cyclin D1的表达实现的。     

蛋白质组学技术对肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞的热激蛋白的鉴定

目的：采用蛋白质组学技术鉴定肝癌细胞株HepG2的G2／M期细胞内的热激蛋白。方法：提取肝癌细胞株HepG2的G2／M期细胞的蛋白质，采用双向电泳的方法分离蛋白质，应用图像扫描仪及质谱（MALDI—TOF—MS）分析鉴定HepG2的G2／M期细胞表达的蛋白质。结果：采用双向电泳技术分离，并用质谱成功鉴定出HepG2的G2／M期细胞的热激蛋白。结论：肝癌细胞株HepG2的G2／M期细胞内的热激蛋白的成功鉴定，为探讨HSP在细胞生长和增殖中的作用奠定了基础，并为临床上肿瘤的治疗提供参考依据。     

电离辐射对人HepG2肝癌细胞caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察电离辐射对人HepG2肝癌细胞Caspase-3蛋白表达的影响.方法:采用6MV-X射线照射人HepG2肝癌细胞,Western blotting蛋白印迹法检测细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达.结果:6MV-X照射后48小时,2Gy、4Gy、6Gy剂量组HepG2细胞Caspase-3蛋白的表达明显高于假照射对照组(0Gy)(P＜0.05,P＜0.01).结论:电离辐射可诱导HepG2细胞Caspase-3蛋白表达增高.     

RNAi沉默STAT3基因对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的：研究pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,阐明RNA干涉技术在卵巢癌生物治疗领域中的作用。方法：应用人卵巢癌细胞系SKOV3对15例裸鼠建立人卵巢癌皮下移植瘤模型,随机分为3组：对照组（生理盐水）、空质粒对照组及重组质粒组（pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3）。应用电子穿孔仪将质粒转入裸鼠移植瘤内,观察重组质粒注射后第7、14、21和28天各组裸鼠皮下移植瘤体积变化。利用Western blotting检测重组质粒对STAT3蛋白表达的影响,采用HE及TUNEL染色方法观察肿瘤组织形态变化及细胞凋亡情况。结果：重组质粒瘤内注射对SKOV3裸鼠皮下移植瘤的生长有明显的抑制作用,与2个对照组比较,重组质粒组裸鼠移植瘤生长速度明显减慢（P<0.01）。重组质粒组瘤体内STAT3及CyclinD1、VEGF、survivin、c-myc蛋白表达明显低于2个对照组（P<0.01）。HE染色显示,重组质粒组肿瘤细胞出现大片细胞坏死,2个对照组肿瘤细胞以正常形态居多。TUNEL染色显示,重组质粒组癌组织有大量细胞凋亡,2个对照组几乎均为TUNEL阴性反应细胞。结论：pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒能明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3裸鼠皮下移植瘤的生长。     

siRNA沉默HBx基因对肝癌细胞YKL-40蛋白表达影响的研究

目的 观察HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒X(HBx)基因沉默对酿酒酵母YKL-40蛋白表达的影响.方法 构建靶向HBx基因的siRNA真核表达载体pRNAT-HBx和阴性对照质粒,同时设空白对照组,采用Lipofectinamine 2000脂质体转染法转染人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞.采用RT-PCR检测各组中HBx和YKL-40的mRNA水平,Western blot、细胞免疫荧光检测各组中HBx蛋白和YKL-40蛋白的表达.结果 pRNAT-HBx明显抑制HepG2.2.15细胞中HBx基因的表达,同时YKL-40的mRNA和细胞内蛋白表达水平也随之相应下调.结论 抑制HBx基因的表达能下调HepG2.2.15细胞中YKL-40蛋白的表达,提示HBx蛋白对YKL-40蛋白的表达具有一定的激活作用.     

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞侵袭和转移的影响

目的：探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞侵袭与转移的影响。方法：体外合成mTOR siRNA,并转染HepG2细胞24 h,同时设无义对照组（转染无义对照siRNA）、空白对照组（转染空脂质体）及正常对照组（不转染）。采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达;应用Transwell小室细胞体外实验检测转染后肝癌HepG2细胞的穿膜细胞数,评价肝癌细胞体外侵袭和转移能力的变化。结果：mTOR siRNA转染组HepG2细胞mTOR蛋白的表达低于各对照组（P〈0.05）;HepG2细胞侵袭和转移力均显著低于各对照组（P〈0.05）。结论：mTOR siRNA可有效抑制HepG2细胞mTOR蛋白的表达,且能抑制HepG2细胞的侵袭和迁移。     

STAT1和STAT2在磷脂酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞生长抑制中的作用

目的探讨磷脂酰乙醇胺(PE)诱导肝癌HepG2细胞生长抑制中STAT1和STAT2的作用。方法实验以人肝癌细胞系HepG2为材料,分别设置了空白对照组、0.125、0.25、0.5和1 mmol/L PE处理组。应用MTT法检测细胞生长,荧光免疫组化检测细胞内STAT1和STAT2表达。结果与对照组相比,PE各处理组对HepG2细胞生长的抑制作用具有剂量依赖性,并可诱导STAT1和STAT2高表达,而AG490可以部分逆转PE的效应。结论 STAT1和STAT2参与了PE诱导HepG2细胞的生长抑制过程。     

维拉帕米对肝癌细胞株HepG2细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨钙离子通道阻滞剂维拉帕米(VR)对人肝痛细胞株HepG2细胞增殖、DNA合成及细胞迁移的影响.方法 在HepG2细胞培养液中加入不同浓度的VR(0、1、5、10、1 5、20 μg/mL),采用甲基四唑蓝(MTT)法测定VR对HepG2细胞增殖的影响;5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'...     

Livin,Survivin在肝癌细胞的表达及5-Fu对其的诱导作用

目的:研究凋亡抑制蛋白Livin,Survivin在肝癌细胞株HepG2的表达及5-Fu对肝癌细胞内凋亡抑制蛋白Livin.survivin 的诱导作用,探讨Livin,Survivin在肝痈化疗抵抗中的作用机制.方法:培养人肝癌细胞株HepG2,加入低浓度的化疗药物5-Fu,分别在加约前、加药后24 h和48h采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(westem-blot)检测livin,survivin mRNA和蛋白的表达.结果:给予低浓度的5-Fu可诱导Livin,Survivin mRNA和蛋白的表达发生变化,其中Livin mRNA在加药后24 h和48 h分别较加药前提高了0.6倍和1.1倍,Livin蛋白在加药后24 h和48 h分别较加药前提高了1.3倍和2.7倍,SurvivinmRNA在加药后24 h和48 h分别较未加药提高了1.5倍和2.2倍,Survivin蛋白在加药后24 h和48 h分别较未加药提高了0.9倍和1.9倍.结论:Livin,Survivin在HepG2中有表达,5-Fu可诱导肝癌细胞内livin,Survivin的表达增加抵抗化疗药物诱导的细胞凋亡.值得进一步研究以评价5-Fu对肝癌治疗的实用价值.     

毛脉酸模中二苯乙烯类成分对HepG2细胞肿瘤相关基因表达的影响

目的:探讨毛脉酸模提取物二苯乙烯类成分与肝癌发生、发展的关系及其作用机制.方法:用二苯乙烯类成分处理人肝癌细胞株HepG2 48 h后,提取药物处理组和对照组细胞的总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用Cy3和cy5两种不同的荧光染料进行线性扩增标记,然后与人肿瘤相关基因表达谱芯片杂交,扫描后埘获得的数据用LuxScan 3.0软件分析.结果:经二苯乙烯类成分诱导后HepG2细胞的2474个肿瘤相关基闪中,有GADD153,HPRG等5个基因表达明显上调,PRL-1,PAI-1等9个基因明显下调.结论:二苯乙烯类成分能改变细胞周期进程、细胞增殖、细胞凋亡、血管生成等相关基凶的表达,此可能是其抗肿瘤作用的机制.     

血管生成素-2基因沉默载体构建及其对肝癌细胞的作用

目的:构建血管生成素(ang)-2基因沉默载体,并研究其对肝癌hepG2细胞株的作用。方法:根据ang-2基因序列设计shRNA,并与载体pLVX-shRNA连接,转化感受态细胞,提取质粒测序鉴定。将慢病毒shRNA载体及其辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,在HEK293T细胞中标定其病毒滴度。用包装好的慢病毒以及慢病毒阴性对照感染靶细胞hepG2,感染成功后通过Western Blot方法评价干扰载体对靶基因的干扰效果,并采用MTT法检测其对靶细胞增殖率的影响。结果:酶切鉴定和测序结果证实成功构建了ang-2基因沉默载体。包装并浓缩慢病毒,滴度为1×10~8 TU/ml。将ang-2基因沉默载体感染hepG2细胞,倒置显微镜下可见绿色荧光。Western Blotting检测ang-2蛋白表达水平较对照组明显降低(P<0.05),而对hepG2细胞增殖率无明显影响。结论:成功构建了ang-2基因沉默载体并感染靶细胞hepG2,证实其对目的基因具有很好的沉默效果。     

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞增殖与凋亡的影响.方法:体外合成mTOR siRNA,并转染HepG2细胞,同时设无义对照组(转染无义siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染).采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达;应用MTT法检测...     

特异性siRNA沉默LASP-1对HepG2细胞增殖和迁移的影响

目的应用RNA干扰技术沉默细胞内LASP-1蛋白的表达,探讨LASP-1蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的作用。方法根据LASP-1mRNA编码序列设计RNA干扰靶点并构建特异性小干扰RNA（siRNA）,通过脂质体转染入HepG2细胞,采用Westernblot法检测LASP-1蛋白的表达。采用CCK-8增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell和划痕愈合实验方法,观察HepG2细胞增殖及迁移情况。结果（1）LASP-1siRNA对LASP．1蛋白表达水平有显著的下调作用（P〈0．05）。（2）体外实验结果显示,与HepG2组及阴性对照组相比,siRNA组HepG2细胞增殖和克隆形成率明显被抑制（P〈0．05）,其迁移能力也下降（P〈0．05）。结论下调LASP-1蛋白表达可显著抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力,提示LASP-1在肝癌细胞恶性增殖和转移过程中具有重要作用,为临床上寻找抑制肝癌增殖转移的靶点提供新的思路和方法。