切除血小板源生长因子α受体基因功能结构域对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞生长的影响

目的 探讨切除血小板源生长因子（PDGF）-α受体基因功能结构域对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞（SHR-VSMC）增殖和肥大的影响。方法 采用免疫印迹（Western blot),^3H-TdR及^3H-Leu掺入等方法，观察在SHR及WKY大鼠血管平滑肌细胞中，PDGF-AA和PDGF受体表达的差异性；应用基因重组技术切除PDGF-α受体基因功能结构域后，对PDGF-AA刺激SHR-VSMC增殖和肥大的影响。结果 SHR-VSMC中PDGF-AA和PDGF-α受体蛋白表达较WKY-VSMC明显增加，而PDGF-β受体蛋白表达在SHR-VSMC与WKY-VSMC无明显差异；在不同浓度刺激下，增殖细胞核抗原（PCNA）及^3H-TdR及^3H-Leu掺入率在SHR-VSMC明显增强且呈剂量依赖关系；切除PDGF-α受体基因功能结构域后，PCDN及^3H-TdR及^3H-Leu掺入率显著降低。结论 SHR-VSMC中PDGF-A链及其α受体的自泌性增高，可能是导致SHR-VSMC异常生长，从而触发血管反应性和血管构型变化的重要原因之一，切除PDGF-α受体基因功能结构域将有效防止高血压平滑肌细胞的增殖和肥大。     

PDGF-AA对高血压血管平滑肌细胞钙信号的影响

目的　明确自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞 (SHR VSMC)增殖与血小板源生长因子 -AA(PDGF AA)、PDGF α受体表达的关系及钙信号在其中的作用。方法　在培养的血管平滑肌细胞模型中 ,采用免疫印迹 (Westernblot)、3 H TdR及3 H Leu掺入、荧光探针标记测定单细胞内钙浓度等方法 ,观察不同来源大鼠 (SHR/Wistar)VSMC ,PDGF AA、PDGF α受体和PDGF β受体表达的差异性以及在PDGF AA刺激下 ,VSMC增殖肥大反应、胞内 [Ca2 + ]i变化和钙离子阻断剂 (nimodipine)对其的影响。结果　与Wistar VSMC相比SHR VSMC中PDGF AA、PDGF α受体蛋白表达明显增加 ,而PDGF β受体蛋白表达在SHR VSMC与Wistar VSMC无明显变化。在PDGF AA刺激下 ,增殖细胞核抗原(PCNA)、3 H掺入率及胞内 [Ca2 + ]i浓度在SHR VSMC明显增强 ;钙离子阻断剂 (nimodipine)明显抑制PCNA表达及3 H掺入 ,胞内 [Ca2 + ]i浓度明显下降。结论　自发性高血压大鼠VSMCPDGF A链及其α受体的自发性增高 ,可能是导致SHR VSMC异常增殖、肥大 ,从而触发血管反应性和血管构型变化的重要原因之一 ;细胞膜钙通道在调控VSMC的钙内流时起主要作用     

槲皮素对血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响

目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素（quercetin）对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的血管平滑肌细胞（SMC）酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。方法：采用噻唑蓝比色法,流式细胞术分析槲皮素对PDGF诱导的SMC增殖的影响,应用免疫印迹法分析观察槲皮素对PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。结果：与对照组相比,槲皮素处理组可显著地抑制PDGF诱导的SMC增殖及酪氨酸磷酸化蛋白的表达,尤以酪氨酸磷酸化蛋白分子量为85～180kD明显。结论：槲皮素可显著地抑制PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达。     

瘦素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨leptin对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖影响，并研究leptin b型受体在VSMC中的表达。方法 本文主要采用培养的自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC），研究Leptin受体b(OB-Rb)的mRNA的表达，以及对平滑肌细胞增殖的影响。结果 OB－Rb的mRNA仅在SHR大鼠的平滑肌细胞表达，而没有在正常对照大鼠（WKY）的平滑肌细胞中表达。Leptin仅仅可以刺激SHR大鼠VSMC的DNA合成率的增加而对WKY大鼠的VSMC则无作用。同样，Leptin对VSMC细胞增殖的作用，也仅仅在SHR大鼠可以发现，而WKY大鼠则没有。结论 上述研究的结果显示；高血压时，Leptin是一种对血管平滑肌细胞的增殖因子，也许在高血压的发生，发展过程中起重要的作用。     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂治疗肾脏疾病的前景

近年来 ,随着细胞间及细胞内信息传递的分子机制研究的深入 ,细胞信号传导通路在细胞生理、病理过程中所起的作用日益被人们所认识。它不仅调节细胞的分裂、增生、分化、死亡等正常生理过程 ,异常的信号传导通路还导致许多炎症性疾病和增生性疾病如肿瘤、皮肤病等[1 ] 。针对这一发病机制 ,人们提出了“信号传导治疗”(ｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙ)的概念 ,即通过抑制或阻断异常信号传导通路中的各组成部分的功能及作用 ,来阻断该信号通路 ,以达到治疗疾病的目的。用于信号传导治疗的药物包括 :小分子物质、抗体、…     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂对缺氧复氧时内皮细胞连接通讯功能的影响

目的:缺氧复氧刺激能损伤内皮细胞间隙连接通讯功能,本研究观察了酪氨酸蛋白激酶抑制剂genistein对这种损伤的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞株ECV304分3组给予不同处理。①常氧对照组:常氧状态下培养12～18小时;②缺氧复氧组:氧浓度低于1％状态下培养12～14小时,再置于常氧状态复氧0～6小时;③genistein组:加入不同浓度genistein(2μM、10μM、50μM)后,给予缺氧复氧组相同的处理。在试验各时段应用荧光漂白回复技术对细胞间隙连接通讯功能进行分析,结果用荧光回复率表示。结果:不同浓度genistein对复氧2小时的内皮细胞荧光回复率作用不同。低浓度genistein(2μM)对荧光回复率没有作用;中、高浓度genistein(10μM、50μM)能使荧光回复率上升(P<0.05)。结论:gensetein能保护缺氧复氧时内皮细胞间隙连接通讯功能。提示缺氧刺激通过酪氨酸蛋白激酶途径损伤内皮细胞的间隙连接通讯功能。     

瘦素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨leptin对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖影响,并研究leptin b型受体在VSMC中的表达.方法本文主要采用培养的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC),研究Leptin受体b(OB-Rb)的mRNA的表达,以及对平滑肌细胞增殖的影响.结果 OB-Rb的mRNA仅在SHR大鼠的平滑肌细胞表达,而没有在正常对照大鼠(WKY)的平滑肌细胞中表达.Leptin仅仅可以刺激SHR大鼠VSMC的DNA合成率的增加,而对WKY大鼠的VSMC则无作用.同样,Leptin对VSMC细胞增殖的作用,也仅仅在SHR大鼠可以发现,而WKY大鼠则没有.结论上述研究的结果显示;高血压时,Leptin是一种对血管平滑肌细胞的增殖因子,也许在高血压的发生、发展过程中起重要的作用.     

酪氨酸激酶抑制剂对气道上皮修复的影响

近年来气道上皮损伤及炎症后修复在参与急性肺损伤及支气管哮喘(简称哮喘)气道炎症中的作用已引起重视，我们通过观察特异性酪氨酸激酶抑制剂Tyrphostin AG1478对大鼠气管上皮细胞修复的影响，了解其对表皮生长因子受体(EGFR)的拮抗作用。     

新生自发性高血压大鼠心肌细胞与成纤维细胞的相互作用

为研究自发性高血压大鼠心肌细胞与成纤维细胞在体外培养下的相互作用。收集上述细胞的24h培养上清液作为这两种细胞的条件培养基，观察血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂洛沙坦或酪氨酸蛋白抑制剂金雀异黄素对细胞^3H-TdR和^3H-Leu掺入率的影响。结果发现，心肌成纤维细胞培养基可明显促进这两种细胞的生长，该作用不能被洛沙坦抑制，而可被金雀异黄素抑制。心肌细胞培养基无促进这两种细胞生长作用。结果提示，成纤维细胞可能分泌经酪氨酸蛋白激酶介导的促生长因子，调控心肌细胞和心肌成纤维细胞的生长。     

血管紧张素Ⅱ对高血压大鼠心肌成纤维细胞作用研究

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠左心室心肌成纤维细胞促生长作用以及可能存在的信号传导途径。方法 体外培养心肌成纤维细胞(CFB)，分别加入不同浓度AngⅡ、AT1R拮抗剂洛沙坦、酪氨酸蛋白激酶抑制剂(Genistein)，测定细胞^3H—TdR和^3H—Leu掺入率。结果 AngⅡ浓度依赖性促进CFB的^3H—TdR和^3H—Leu掺入率，洛沙坦可完全抑制该效应．Genistein部分抑制该效应。结论 外源性AngⅡ通过CFB的AT1R对该细胞产生增殖反应，作用的信号传导途径部分是由酪氨酸蛋白激酶系统介导。     

Adrenomedullin stimulates proline-rich tyrosine kinase 2 in vascular smooth muscle cells

A novel vasodilator peptide, adrenomedullin (AM) stimulates extracellular signal-regulated kinase (ERK) 1/2 via yet uncharacterized 120 kDa tyrosine kinase(s) in rat vascular smooth muscle cells (VSMC). In the present study, we have examined whether the AM-activated tyrosine kinase is proline-rich tyrosine kinase 2 (PYK2) associable with adapter proteins. AM rapidly (within 30 sec) and dose dependently increased tyrosine kinase activity, whose effect was enhanced in the presence of o-vanadate, a phosphatase inhibitor. A tyrosine kinase with an apparent molecular mass of 120 kDa corresponding to that of PYK2 was predominantly localized to the cytosolic fraction, whereas the tyrosine-phosphorylated 180-kDa protein was observed in the membrane fraction from EGF-treated cells, but not from AM-treated cells. AM induced rapid (within 30 sec) and transient phosphorylation of PYK2, but not focal adhesion kinase. AM caused autophosphorylation of tyrosine residue(s) of PYK2 and promoted its association with adaptor proteins (Shc/Grb2). AM rapidly (within 1 min) activated c-Src and enhanced its association with tyrosine-phosphorylated PYK2. These data suggest that AM stimulates PYK2 which, in turn, activates c-Src and induces recruitment of adaptor proteins (Shc/Grb2), thereby leading to activation of p21(ras)/ERK1/2 cascade in VSMC.     

同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞的增殖作用

目的 :探讨同型半胱氨酸 (Hcy)对血管平滑肌细胞 (VSMC)生长的影响。方法 :采用MTT法检测细胞数量及流式细胞术测定细胞周期。结果 :5× 10 -4mol/LHcy干预处于生长静止期的细胞 4 8、72h细胞数量较对照组明显增加 (P <0 .0 1) ,分别增加了 5 0 .75 %和 84 .83%。当采用 1× 10 -4,2 .5× 10 -4,5× 10 -4,1× 10 -3mol/L的Hcy干预细胞 72h后 ,其细胞数量分别较对照组增加了4 1.5 6 % ,5 8.4 4 % ,6 6 .2 3% ,74 .0 2 %。并且当 5× 10 -4mol/LHcy干预细胞 2 4、36、4 8h后 ,其S期、G2 /M期在细胞周期的比例也明显增加 (P <0 .0 1)。结论 :Hcy能明显诱导VSMC增殖 ,并呈现时间和剂量依赖关系 ,提示Hcy通过诱导VSMC的增殖可导致动脉粥样硬化的发生。     

血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移与胞浆蛋白酪氨酸激酶的激活

目的　探讨血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells,VSMCs)迁移与胞浆蛋白酪氨酸激酶 (proteintyrosinekinase,PTK)活性变化的关系。方法　用不同浓度的血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ ,AngⅡ )刺激培养的VSMCs,利用γ 3 2 P同位素参入法测定细胞胞浆PTK活性变化 ;自制改良的BoydenChamber检测VSMCs迁移。结果　基础状态下可观测到很少量的VSMCs迁移。AngⅡ浓度为 1× 10 - 1 0 、1× 10 - 9、1× 10 - 8、1× 10 - 7和 1× 10 - 6mol L时细胞迁移数分别比对照组升高了3 7、4 6、5 9、6 6和 6 3倍 ,存在组间差异 ,峰值浓度为 1× 10 - 7mol L。AngⅡ浓度为 1× 10 - 1 0 ,1× 10 - 9,1× 10 - 8,1× 10 - 7和 1× 10 - 6mol L时胞浆PTK活性分别增高了 1 0、1 7、2 4、3 2和 2 4倍 ,峰值浓度为 1× 10 - 7mol L。统计分析显示AngⅡ诱导的VSMCs迁移与胞浆PTK激活效应显著正相关 (r=0 96 ,P <0 0 1)。 2 5 μmol L、40 μmol L的PTK抑制剂Genistein均可显著地减少AngⅡ诱导的VSMCs迁移 (与单纯 1× 10 - 7mol LAngⅡ组比较 ,P <0 0 1)。结论　激活酪氨酸激酶信号链可能是AngⅡ诱导VSMCs迁移的胞内信号转导机制之一。     

白藜芦醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察白藜芦醇 (resveratrol,Res)对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖、DNA合成及细胞凋亡的影响 ,并探讨其机制。方法　体外培养大鼠主动脉VSMC ,分为不同浓度的Res组及对照组。观察细胞生长曲线 ;四甲基偶氮唑盐 (MTT)微量酶反应法检测细胞活性 ;3H 胸腺嘧啶脱氧核苷 (3H TdR)掺入法观察其对DNA合成的影响 ;HE染色 ,DNA梯带检测及流式细胞术检测细胞凋亡。结果　与对照组比较 ,本研究各浓度Res组VSMC计数均有不同程度的减少 ,3H TdR掺入率明显降低 ,细胞增殖受抑制 ,VSMC凋亡增加 ,并呈浓度依赖性。结论　Res对体外培养的大鼠主动脉VSMC增殖有明显的抑制作用 ,可能是通过抑制细胞DNA合成 ,诱导细胞凋亡等途径发挥作用     

尿酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察尿酸（uricacid,UA）对动脉粥样硬化关键环节———血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:以体外培养的大鼠血管平滑肌细胞为实验对象,分为对照组、尿酸组和洛沙坦+尿酸组,每组处理后用MTT法分析细胞增殖活力,流式细胞仪（flowcytometry,FCM）检测细胞增殖周期。结果:尿酸作用后培养细胞的MTT值明显高于对照组（40mg/LUA:0.65±0.06;对照:0.37±0.07,P<0.01）,并且存在剂量依赖效应;尿酸所致上述效应还存在时间依赖性;洛沙坦能部分阻断尿酸刺激血管平滑肌细胞增殖作用。流式细胞分析显示尿酸作用使血管平滑肌细胞G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加。结论:尿酸能够促进血管平滑肌细胞增殖,存在剂量及时间依赖效应;该作用可能部分通过血管紧张素Ⅱ的受体介导。     

前蛋白转化酶枯草溶菌素9小分子干扰RNA对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)基因沉默后对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,初步探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)蛋白表达在其中的作用。方法建立PCSK9小分子干扰RNA(siRNA)模型,培养VSMC,分为空白对照组、阴性转染组和阳性转染组,选取转染效率最高的PCSK9siRNA对VSMC进行干预,分别于12、24、36、48、60h用MTT法测定吸光度(A)值,绘制增殖曲线,观察其对VSMC增殖的影响,转染48h后用Western blot印迹法检测细胞内LRP-1蛋白表达情况。结果与阴性转染组比较,阳性转染组24、36、48和60h的A值明显下降(P<0.05),PCSK9siRNA抑制VSMC的增殖(P<0.05)。与空白对照组和阴性转染组比较,阳性转染组LRP-1蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论 PCSK9siRNA能有效抑制VSMC的增殖作用,且这种作用可能与LRP-1蛋白表达上调有一定的关系。     

A proatherogenic role for cGMP-dependent protein kinase in vascular smooth muscle cells

Nitric oxide (NO) exerts both antiatherogenic and proatherogenic effects, but the cellular and molecular mechanisms that contribute to modulation of atherosclerosis by NO are not understood completely. The cGMP-dependent protein kinase I (cGKI) is a potential mediator of NO signaling in vascular smooth muscle cells (SMCs). Postnatal ablation of cGKI selectively in the SMCs of mice reduced atherosclerotic lesion area, demonstrating that smooth muscle cGKI promotes atherogenesis. Cell-fate mapping indicated that cGKI is involved in the development of SMC-derived plaque cells. Activation of endogenous cGKI in primary aortic SMCs resulted in cells with increased levels of proliferation; increased levels of vascular cell adhesion molecule-1, peroxisome proliferator-activated receptor gamma, and phosphatidylinositol 3-kinase/Akt signaling; and decreased plasminogen activator inhibitor 1 mRNA, which all are potentially proatherogenic properties. Taken together, these results highlight the pathophysiologic significance of vascular SMCs in atherogenesis and identify a key role for cGKI in the development of atherogenic SMCs in vitro and in vivo. We suggest that activation of smooth muscle cGKI contributes to the proatherogenic effect of NO and that inhibition of cGKI might be a therapeutic option for treating atherosclerosis in humans.     

曲古菌素A抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移的研究

目的观察曲古菌素A（trichostatin A,TSA）体外抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖、迁移和诱导凋亡的作用。方法采用MTT比色法和BrdU掺入法,观察TSA对胎牛血清诱导的VSMCs增殖的抑制作用。采用流式细胞术和Western blot检测细胞周期蛋白的表达,观察TSA对VSMC细胞周期的影响。采用ELISA法测定DNA片段和Western blot检测活化caspase3的表达,观察TSA诱导VSMC发生凋亡的作用。结果100μg/L TSA可抑制胎牛血清诱导的VSMC增殖而无明显的细胞毒作用,1000μg/L TSA可激活caspase3并诱导VSMC发生凋亡。TSA干预可延缓胎牛血清诱导的VSMC进入S期,此效应与抑制周期蛋白cyclin D1和周期蛋白cyclin A的表达有关。TSA能抑制胎牛血清诱导的张力纤维F-actin解聚和重组,抑制VSMC迁移。结论TSA能抑制胎牛血清诱导的VSMC增殖,使之停滞于静止期,大剂量TSA可诱导VSMC凋亡,并能抑制VSMC迁移。因此,TSA有望成为治疗血管增殖性疾病的一种新策略。