EGF对人牙周膜细胞增生与ALP活性表达的影响

探讨表皮生长因子 (EGF)对人牙周膜细胞的增生与碱性磷酸酶 (ALP)活性表达的影响 ,为EGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据。采用MTT和ALP活性检测法 ,观察不同质量浓度 ( 0 .1～ 1 0 μg/L)EGF第 2 4、4 8和 72h对体外培养的第 3代人牙周膜细胞 (PDLCs)的作用。与对照组比较 ,在 2 4～ 72h ,0 .1～ 5 μg/L的EGF可显著抑制PDLCs的增生 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ;1 0 μg/LEGF培养 4 8h对PDLCs有促进增生的作用 (P <0 .0 5 ) ,培养 72h有稳定增生的作用 (P >0 .0 5 )。 0 .1、0 .5 μg/LEGF可显著抑制PDLCs的ALP活性 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ;1～ 1 0 μg/LEGF在 2 4h可显著增强PDLCs的ALP活性 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ,在培养 4 8和 72h有稳定ALP活性的作用 (P >0 .0 5 )。提示在一定的作用时间内 ,1 0 μg/LEGF对人PDLCs的生长和分化可同时具有促进作用。     

成骨生长肽对钛表面人牙周膜成纤维细胞增殖分化影响的研究

目的:研究成骨生长肽(Osteogenic growth peptide,OGP)对人牙周膜成纤维细胞(Periodontal ligament cells,PDLCs)在钛金属表面增殖分化的影响.方法:将纯钛试件放在12孔培养板内,取生长良好的第五代人牙周膜成纤维细胞接种在试件表面,加入不同浓度的OGP(10-11～10-7mol/L),分别在接种后1、3、5、7 d应用MTT法检测细胞增殖;接种后3、7、10 d应用酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性的表达.结果:OGP在该浓度范围内时,对钛表面的人牙周膜成纤维细胞的增殖率有明显的促进作用(P＜0.05),并且能促进细胞内ALP表达活性(P＜0.05),最佳作用浓度为10-9mol/L.结论:OGP可促进钛片表面人牙周膜成纤维细胞的增殖活性,同时可以增强细胞碱性磷酸酶表达的活性,提示OGP在口腔种植领域中具有良好的应用前景.     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞的影响

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年来研究较为热门的生物因子,为具有多种功能的多肽生长因子,能广泛促进来源于中胚层及神经外胚层细胞的增殖,是体内重要的创伤愈合因子之一。bFGF有主动诱导分化和加速生长作用,可以促进牙周膜成纤维细胞的分化和增殖,促进牙周组织的修复和再生。     

体外不同动态力学应变对人牙周膜成纤维细胞增殖和功能活性的影响

目的探讨体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)在动态力学微应变范围内细胞增殖和功能活性的变化。方法采用四点弯曲细胞力学加载装置对体外培养的HPDLF进行加载,通过流式细胞术(FCM)分析细胞周期的改变和定量分析细胞总蛋白含量和碱性磷酸酶(ALP)活性,研究不同作用方式、大小和时间的动态力学应变对细胞增殖和功能活性的影响。结果加载装置所产生的动态力学微应变范围对HPDLF的G0/G1期、S期细胞百分比、增殖指数PI、总蛋白含量及ALP活性产生明显的影响(P<0.05),其中G0/G1期细胞百分比减少,S期细胞百分比、PI、总蛋白含量及ALP活性增高,且此影响均与应变的大小和作用时间密切相关;动态力学应变加载方式的不同对HPDLF的G0/G1期、S期、G2/M期细胞百分比、PI、总蛋白含量及ALP活性均有明显的影响(P<0.05),梯度加载组的促增殖和对总蛋白含量及ALP活性的上调作用均明显高于1000、4000μstrain两组。结论HPDLF细胞增殖和功能活性增加与动态力学应变的作用方式、应变大小、作用时间密切相关。     

IRE1α促进人牙周膜成纤维细胞增殖

目的 研究内质网跨膜蛋白IRE1α对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)增殖的影响.方法 将成功构建的人IRE1α基因重组质粒染入hPDLFs细胞,采用免疫印迹法检测IRE1α重组基因在真核细胞内的表达情况,XTT法和流式细胞仪(FCM)检测转染后hPDLFs细胞增殖和细胞周期变化.结果 酶切及测序结果证实IRE1α重组质粒构建成功;免疫印迹分析结果证实,IRE1α重组质粒能在hPDLFs细胞内正确表达;在内质网应激(ERs)状态下,与衣霉素(tunicamycin,TM)对照组相比,XTT检测结果显示:IRE1 α实验组hPDLFs细胞增殖率明显增高(P＜0.01);FCM结果分析显示:IRE1α实验组hPDLFs细胞s期比例增加而G1期减少(P＜0.05).结论 在ERS状态下,IRE1α促讲hPDLFs细胞增殖,促进hPDLFs细胞从G1期进入S期.     

茶多酚对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察茶多酚对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响.方法 采用组织块培养法培养原代人牙周膜成纤维细胞并传代,经免疫组化SABC法检测角蛋白和波形丝蛋白鉴定,取5～8代细胞用于实验;按茶多酚不同浓度分1 mg/ml(B组)、0.5mg/ml(C组)、0.25mg/ml(D组)、0.125mg/ml(E组)、0.0625mg/ml(F组)组和空白对照组(A组),采用细胞计数法、MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞DNA含量.结果 不同浓度茶多酚均促进人牙周膜成纤维细胞的增殖和DNA合成(P＜0.05),茶多酚作用的最适浓度为0.5 mg/ml,最佳作用时间为48 h.结论 茶多酚对人牙周膜成纤维细胞增殖具有明显的促进作用.     

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子-1对牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法通过体外细胞培养技术,用噻唑盐(MTT)法检测bFGF和IGF-1单独或联合应用时对人PDL细胞增殖的影响。结果bFGF和IGF-1单独应用时均可明显促进PDL细胞增殖,在实验的5d范围内,bFGF浓度在1～100ng/ml和IGF-1浓度在1～100ng/ml时呈浓度-时间依赖关系,bFGF最佳效应浓度为10ng/ml(比对照组增加了247.8%),IGF-1最佳效应浓度为100ng/ml(比对照组增加了236.5%),两者的最佳效应时间均为3d。以二者的最佳效应浓度联合应用时,作用更为显著,培养3d时比对照组增加了290.4%(P<0.001)。结论bFGF和IGF-1均能促进人PDL细胞的分化和增殖,二者联合应用有协同效应。     

神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖的影响

目的 探讨神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)分别及联合作用对体外培养的人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖的影响.方法 体外培养人牙周膜细胞,与不同浓度的NGF、bFGF或NGF+bFGF作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDLC增殖的情况.结果 不同浓度的NGF、bFGF都可促进人PDLC的增殖,这种促进作用呈一定的浓度依赖性.NGF与bFGF联合应用对人PDLC的增殖有协同作用,且与单独应用相比具有统计学差异.结论 NGF、bFGF都可促进人PDLC的增殖,且二者联合具有协同作用.     

体外不同张应力对人牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的 观察不同张应力对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)增殖活性的影响，进一步了解HPDLF的应力-生物学效应及其在正畸治疗中可能的生长增殖规律。方法 利用自行设计的膜式动态张应力-体外细胞培养研究系统对分离培养的HPDLF进行对照组(0kPa)、静张应力组(5kPa)、动态张应力组1(5kPa-0kPa-5kPa)、动态张应力组2(5kPa-2．5kPa-5kPa)不同水平及频动范围张应力加载，每组再分16h、24h和32h3个观察时间点，以^3H-TdR掺入法检测其S期细胞增殖活性。结果 静张应力对HPDLF具有明显的促增殖作用，有使其增殖高峰提前的趋向;动态张应力对HPDLF的增殖活性有一定的抑制作用。结论 不同张应力对HPDLF的增殖活性的影响明显不同，静张应力作用具有明显的促增殖作用，而动态张应力有一定的抑制作用。     

bFGF对人牙周膜细胞增殖的影响

目的 检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养人牙周膜细胞的增殖效应,探讨bFGF参与正畸牙移动的作用机制。方法 体外培养人牙周膜细胞,将第5代细胞按细胞数约为4×10<'3>/孔接种在96孔培养板的50孔中,每5孔为一组,共分为10组。根据每组bFGF浓度不同,分为无bFGF组、0.5 ng/mL bFGF组、1.0 ng/mL bFGF组、2.0 ng/mL bFGF组、4.0 ng/mL bFGF组、8.0 ng/mL bFGF组、16.0 ng/mL bFGF组、32.0 ng/mL bFGF组、64.0 ng/mL bFGF组及128.0 ng/mL bFGF组。显微镜下观察各组细胞均进入对数生长期时,用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法染色,在酶联免疫检测仪上测出各孔吸光度(opficM density,OD)值,并计算各组OD均值。结果 与对照组OD均值比较：实验组OD值随bFGF浓度(0.5～16.0 ng/mL)的增加先逐渐增加(P<0.05,0.01),达到峰值(16.0 ng/mL)后,又随bFGF浓度(32.0～128.0 ng/mL)的增加而逐渐减少(P<0.05,0.01)。结论 bFGF可能参与了正畸牙移动中牙周组织的改建,bFGF较低浓度时有促进人牙周膜细胞增殖的作用,而较高浓度时有抑制人牙周膜细胞增殖的作用。     

胰岛素样生长因子Ⅰ对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的：研究胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）对人牙周膜成纤维细胞( PDLF)增殖能力的影响，为牙周组织改建工作提供理论依据。方法：取本实验室自行制备生长状态良好的转染IGF-Ⅰ的PDLF和未转染IGF-Ⅰ的PDLF，分别用0.25%胰蛋白酶消化，制成细胞悬液，经计数后进行接种并计数，绘制成细胞生长曲线，比较2种细胞生长速度的差异；用0.25%胰蛋白酶分别消化转染和未转染IGF-Ⅰ的PDLF，培养后采用MTT法测定A值，并比较2种细胞增殖活性的差异;采用碱性磷酸酶（ALP）比色法检测比较转染和未转染IGF-Ⅰ的PDLF的ALP活性。结果：细胞生长曲线显示转染IGF-Ⅰ的PDLF的生长速度高于未转染IGF-Ⅰ的PDLF，差异有显著性（P<0.05）；转染IGF-Ⅰ的PDLF的增殖能力及ALP活性高于未转染IGF-Ⅰ的PDLF，差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。 结论： IGF-Ⅰ可能通过PDLF发挥其调节牙周组织改建的作用。     

核酶对人皮肤瘢痕成纤维细胞增殖和TIMP-1表达的影响

目的:探讨核酶对人金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)基因表达的特异性抑制作用,以寻找治疗增生性瘢痕的新方法.方法:应用特异切割TIMP-1的嵌合型核酶基因克隆pU6-Rz182转染增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar derived fibroblasts,HSF),G418筛选稳定表达核酶的细胞克隆,MTT法检测并绘制细胞生长曲线,观察核酶对细胞生长的影响;RT-PCR检测核酶对靶基因TIMP-1表达的抑制.结果:在mRNA水平,与正常对照组相比,稳定表达活性核酶Rz182的HSF中TIMP-1的表达被抑制了87.9%,而点突变核酶抑制达36.4%,两者之间差异非常显著(P<0.01).HSF细胞生长进入平台期后,转染核酶基因组与点突变组及对照组相比,活细胞数显著降低(P<0.01),而点突变组与对照组无明显差异.结论:核酶U6Rz182能特异地抑制HSF中TIMP-1的表达,并使HSF的增殖受到抑制.     

PDGF-BB和bFGF对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜(PDL)细胞碱性磷酸酶(ALPase)活性的影响.方法 从第三代开始体外培养人PDL细胞,取4-8代细胞分为空白对照组与实验组,对照组为纯细胞培养液,实验组细胞用0.1,1,10,100 ng/ml的PDGF-BB,1,10,50,100 ng/ml的bFGF,或二者联合,100 ng/mlPDGF-BB 50 ng/ml bFGF或0.1 ng/ml PDGF-BB 1 ng/ml bFGF进行干预.第3天后,人工裂解一半细胞,所有实验组与空白对照组分为细胞裂解液组与培养液组,用酶动力学方法检测ALPase活性(用吸光度值表示).用SPSS V13.0进行统计.结果 第3天PDGF-BB作用的细胞裂解液吸光度峰值位于0.1 ng/ml,细胞培养液吸光度峰值位于1 ng/ml.第3天bFGF作用的细胞裂解液吸光度峰值位于1 ng/ml,细胞培养液吸光度峰值位于10 ng/ml.100 ng/ml PDGF-BB 50 ng/mlbFGF或0.1 ng/ml PDGF-BB 1 ng/ml bFGF的吸光度值也比对照组显著增高,但是联合作用比单独作用意义不显著(P>0.05).结论 PDGF-BB和bFGF均可明显促进PDL细胞碱性磷酸酶活性.     

抑制Kv1.3表达能够降低人牙周膜成纤维细胞增殖和分化成骨能力

目的 探讨Kv1.3在人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)增殖和分化成骨能力中的作用.方法 通过体外分离并培养健康人和牙周炎患者牙周膜成纤维细胞,应用细胞免疫荧光法、Q-PCR和Western blot检测Kv1.3在牙周炎hPDLFs中表达变化;并通过siRNA沉默抑制Kv1.3表达,使用MTT和流式细胞仪观察对hPDLFs的增殖和分化成骨能力的作用.结果 细胞免疫荧光结果显示与健康组比较,牙周炎组hPDLFs中Kv1.3显著低表达(P<0.05);Western blot结果显示Kv1.3-siRNA能够明显抑制细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和C-myc蛋白表达(P<0.05);流式细胞仪检测显示Kv1.3-siRNA能够显著抑制细胞G2/M期;同时,Western blot结果显示Kv1.3-siRNA明显降低碱性磷脂酶(ALP)和骨钙素(OCN)蛋白表达.结论 抑制Kv1.3表达能够明显抑制hPDLFs的增殖和分化成骨能力.     

地塞米松对体外培养人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的：研究地塞米松（DEX）对体外培养人牙周膜成纤维（PDLF）细胞增殖的影响,寻找体外培养人PDLF(hPDLF)细胞的优化条件,为牙周组织再生的研究工作奠定基础。方法：体外分离培养的hPDLF细胞随机分为5组,分别用5种含10%胎牛血清的DMEM细胞培养基培养5～8代:①空白对照组（无DEX）;②含5 mg•L^-1DEX;③含10 mg•L^-1 DEX;④含20 mg•L^-1 DEX;⑤含50 mg•L^-1 DEX。以MTT法测定DEX对hPDLF细胞增殖率的影响;采用倒置相差显微镜观察hPDLF细胞在添加不同浓度DEX的胎牛血清培养基中培养后的细胞形态学改变。结果：将hPDLF细胞接种于24孔板后的第3天,细胞出现汇合现象。细胞在孔底呈鳞片状。采用DEX条件DMEM细胞培养液培养,可见 细胞逐渐变成多层,细胞形态变小,突起变钝。MTT法检测结果表明含不同浓度DEX的DMEM培养基中培养的hPDLF细胞数均高于对照组（P<0.05）;不同浓度的DEX对hPDLF细胞增殖均有影响(P<0.05）,且随着浓度增加,hPDLF细胞增殖能力逐渐增高。结论：DEX能使体外培养的hPDLF细胞表现很强的增殖活性。     

压力环境对人牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的探讨不同压力环境对人牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法采用酶动力学方法,比较不同压强的压力在不同的作用时间下对人牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果压力增加导致牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性降低。结论颌力过大将造成牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性降低,可能影响牙周组织健康。     

人牙周膜成纤维细胞的体外培养

目的：建立人牙周膜成纤维细胞体外培养的方法。方法：采用组织块贴附法原代培养人牙周膜成纤维细胞并传代。结果：牙周膜成纤维细胞体外培养成功率为20％。5代后细胞生长旺盛。经免疫组织化学SABC法证实为来源于中胚层的成纤维细胞。结论：采用组织块贴附法培养原代人牙周膜成纤维细胞。胰酶消化传代后，生长状况良好，可作为人牙周膜成纤维细胞的实验模型。     

IL-1β对牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞上ICAM-1表达调节的免疫组化研究

目的 :了解牙龈成纤维细胞 (humangingivalfibroblast,HGF)、牙周膜细胞 (periodontalligamentfibroblast,PDLF)上细胞间粘附分子 1(intercellularadhesionmolecule- 1,ICAM - 1)的表达以及白细胞介素 - 1β(interleukin -1β ,IL - 1β)作用后ICAM - 1的表达。 方法 :取正畸拔牙 ,体外培养牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞 ,检测其未受和受IL - 1β作用后ICAM - 1的表达情况 ,图像分析结果。结果 :正常牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞上ICAM - 1表达阴性或弱阳性 ,IL - 1β作用后 ,ICAM - 1表达强阳性 ,和对照组相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。 结论 :牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞受IL - 1β作用后ICAM - 1的表达增强 ,提示ICAM - 1参与牙周炎的病理过程。     

黄芩苷对脂多糖诱导牙周膜成纤维细胞表达炎症因子的影响

【】目的：探讨黄芩苷对脂多糖促人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达的影响。方法：将培养后的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的黄芩苷处理,CCK8实验观察不同浓度黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性。将培养后的人牙周膜成纤维细胞分为空白对照组、LPS组、黄芩苷组和LPS+黄芩苷组。空白对照组仅加入2%胎牛血清的培养液;LPS组加入加入100μg/mLLPS ;黄芩苷组分别加入黄芩苷200、500ng/mL ;LPS+黄芩苷组加入100μg/mL LPS,同时分别加入黄芩苷 200ng/mL 、500ng/mL。24h收集细胞, 检测各组IL-6、IL-8、IL-1βmRNA表达的变化。结果： 500ng/mL浓度以下黄芩苷添加至细胞没有明显的细胞增殖毒性。单独加入黄芩苷200ng/mL和500ng/mL的黄芩苷组和空白对照组比较,IL-6、IL-8、IL-1β均无明显变化(P＞0.05)。 和空白对照组比较,LPS组IL-6、IL-8、IL-1β明显上升,差异有统计学意义 (P<0.05),同时加入LPS和200ng/ml黄芩苷,相比单独加入LPS组,IL-6、IL-8、IL-1β明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。而同时加入LPS和500ng/mL黄芩苷,相比单独加入LPS组,IL-6、IL-8、IL-1β明显上升,差异有统计学意义 (P<0.05) 结论：黄芩苷在低浓度时显示有抑炎作用,而在浓度增加达到500ng/mL时显示有促炎作用。