淫羊藿总黄酮胶囊活性成分宝藿苷Ⅱ对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

目的:从淫羊藿总黄酮胶囊中制备分离宝藿苷Ⅱ,检测不同浓度宝藿苷II对体外培养的MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法:分别用10、20、40nmol/ml的宝藿苷II作用MC3T3-E1细胞,CCK-8法检测细胞存活率;比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活力;ELISA法检测骨钙素(OT)含量;茜素红染色分析并用氯化十六烷基吡啶测定钙沉积量;Western Blot法检测宝藿苷Ⅱ对BMP2信号通路蛋白表达的影响。结果:10、20、40nmol/ml的宝藿苷Ⅱ均可明显促进MC3T3-E1的增殖;提高MC3T3-E1分泌ALP和OT的能力;矿化结节数量明显增多且钙沉积量吸光度值显著增大;明显提高BMP2、Runx2和Osterix蛋白表达量,且呈剂量依赖性。结论:淫羊藿总黄酮胶囊活性成分宝藿苷II可以明显促进MC3T3-E1细胞的增殖分化。     

淫羊藿苷可促进人成骨细胞增殖与分化

北京大学第三医院科研人员在观察淫羊藿苷对人成骨细胞增殖和分化的影响时发现，淫羊藿苷具有促进人成骨细胞增殖和分化的作用，这一作用可能与其升高人成骨细胞BMP-2mRNA的表达有关。     

淫羊藿苷治疗骨质疏松症的研究进展

骨质疏松症是以骨量减少、骨组织结构损害为特征的慢性疾病,在中老年人群中（尤其在绝经后女性人群中）发病率较高。该病严重威胁患者身心健康,给患者家庭带来沉重负担。临床治疗骨质疏松的西药因不良反应多和价格昂贵等影响了其应用。淫羊藿作为我国传统中药,使用安全、容易获取,被广泛应用于骨科疾病的治疗。前期研究证实,淫羊藿的主要成分淫羊藿苷在治疗骨质疏松症中有良好应用前景,其可通过上调成骨标志物碱性磷酸酶（ALP）、RUNX2、BMP-2等的表达促进成骨细胞、骨髓间充质干细胞（BMSCs）的增殖分化作用,并实现骨再生及骨形成,在这一过程中Wnt/β-catenin、OPG/RANK/RANKL等信号通路发挥重要作用。基于此,本文对淫羊藿苷治疗骨质疏松症的作用及可能机制作一综述。     

金叶子异槲皮苷对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响

该研究对从金叶子中分离得到的异槲皮苷的成骨活性进行了系统评价。在1×10-4,1×10-5,1×10-6,1×10-7mol·L-1异槲皮苷浓度作用下检测了MC3T3-E1细胞增殖活力和碱性磷酸酶活性;在异槲皮苷作用的第3天对MC3T3-E1碱性磷酸酶、I型胶原以及转录因子Runx2和Osterix的基因表达水平进行了检测;并通过茜素红染色的方法在第21天对MC3T3-E1进行了胞外基质矿化能力的评价。结果显示,异槲皮苷在1×10-7~1×10-5mol·L-1能促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化及矿化能力,上调成骨相关基因的表达,而且该作用呈现出一定的浓度依赖性,在浓度为1×10-6mol·L-1时促进作用最强。在1×10-4mol·L-1时表现出明显的细胞毒性。因此,从金叶子中分离得到的异槲皮苷有一定的成骨活性,这可能是传统中药金叶子治疗骨折的主要药效成分。     

淫羊藿苷对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响

目的研究淫羊藿苷(ICA)不同作用浓度及不同作用时间对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的抑制作用。方法采用MTT法观察ICA对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响;应用ICA诱导小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化,油红O染色测定细胞内脂质含量,观察ICA对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果 67μg/m L ICA对细胞增殖起抑制作用,持续至96 h并达到最大;30μg/m L和15μg/m L ICA在72 h、96 h对细胞增殖起抑制作用。结论较高浓度ICA对3T3-L1前脂肪细胞的分化有抑制作用,而低浓度ICA对3T3-L1前脂肪细胞的分化作用不明显。     

淫羊藿苷调节PTEN激活成骨基因表达缓解大鼠骨质疏松症的实验研究

目的：探讨淫羊藿苷（ICA）调节PTEN激活成骨基因表达缓解大鼠骨质疏松症（OP）的相关作用机制。方法：术中收集患骨质疏松症和骨质正常者股骨骨髓8 mL，诱导骨髓间质干细胞（BMSCs）成骨分化14 d后，采用qRT-PCR检测PTEN的表达；随后选取7周龄的雌性大鼠36只，采用经典的雌性大鼠卵巢切除法复制绝经后骨质疏松症大鼠模型，术后12周鉴定为骨质疏松模型后开始给药干预，在同等饲养条件下造模大鼠以ICA处理或/和抑制PTEN表达治疗10周后，采取颈椎脱臼法处死大鼠，取双侧股骨干骺端骨组织，采用qRT-PCR法检测大鼠骨组织中PTEN及成骨基因（RUNX2、OPN）的表达、Western blot法检测成骨标志蛋白（RUNX2、OPN）的表达，并制成石蜡切片，采用IHC染色观察PTEN在细胞中的表达、HE染色观察骨组织微观结构。结果：PTEN在OP患者骨组织中高表达，诱导BMSCs成骨分化14 d后表达被抑制，造模组大鼠骨组织中PTEN表达也较高，IHC染色见细胞中PTEN表达呈阳性、HE染色骨小梁明显稀疏；ICA处理或/和抑制PTEN表达后PTEN的表达被显著抑制，同时逆转了其对成...     

淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响

目的:观察淫羊藿苷对人成骨细胞增殖和分化的影响。方法:将人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,取第3,4代细胞,MTT法观察淫羊藿苷对人成骨细胞的增殖作用,碱性磷酸酶(ALP)比活性测定观察淫羊藿苷对人成骨细胞分化的影响,RT-PCR方法检测淫羊藿苷对人成骨细胞 BMP-2 mRNA表达的影响。结果:浓度为20μg·mL^-1的淫羊藿苷能够显著促进人成骨细胞的增殖和分化,且使BMP-2 mRNA的表达升高。结论:淫羊藿苷具有促进人成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高人成骨细胞BMP 2 mRNA的表达有关。     

淫羊藿苷对rBMSCs成骨和成脂分化的影响

目的:研究淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)成骨和成脂方向分化的影响。方法:在37℃5%CO2和饱和湿度的条件下贴壁筛选法体外培养rBMSCs。采用1×10-5mol.L-1的淫羊藿苷干预rBMSCs的成骨性分化,第3,6,9,12天进行碱性磷酸酶(ALP)活性测定,第15天进行钙化结节染色,第12,24,48,72 h提取总RNA,采用实时聚合酶链反应(Real time PCR)方法分析检测骨成型蛋白2(BMP-2)和骨特异性转录因子(Runx-2)mRNA表达水平。采用1×10-5mol.L-1的淫羊藿苷干预rBMSCs的成脂性分化,第5,10,15,20天进行甘油三酯含量的测定,第21天进行油红O染色,于12,24,48,72 h提取总RNA,采用Real Time PCR方法分析检测PPARγ和C/EBPα的mRNA表达水平。结果:淫羊藿苷显著提高了细胞中ALP的活性,增加了钙化结节数,并且升高了成骨性相关因子BMP-2和Runx-2的基因表达量。淫羊藿苷降低了细胞中甘油三酯的含量,减少了脂滴的形成,并且减弱了成脂转录因子过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和增强子结合蛋白(C/EBPα)的基因表达量。结论:淫羊藿苷对rBMSCs分化的调节有双向性,即它在促进rBMSCs成骨性分化的同时又抑制rBMSCs成脂分化。     

淫羊藿苷可促进人成骨细胞增殖与分化

北京大学第三医院研究人员发现,浓度为20μg/mL淫羊藿苷能够增加MTT的吸光度值,刺激人成骨细胞增殖,并且能显著提高人成骨细胞的碱性磷酸酶活性。碱性磷酸酶是参与骨代谢的重要蛋白质,被认为是细胞外基质成熟的早期标志,碱性磷酸酶的活性可以代表成骨细胞的早期分化水平。因此,     

基于Wnt/β-catenin信号通路的淫羊藿苷治疗膝骨关节炎机制研究现状

<正>骨关节炎（osteoarthritis,OA）以关节软骨的变性、退化、破坏为主要临床表现的退行性病变,常累及膝盖、髋关节和脊柱。OA不但会导致患者的关节疼痛、变形、关节活动范围受限,而且会显著提高心血管事件、下肢深静脉血栓栓塞^[1]、髋部骨折^[2]及全因死亡率^[3]的风险。目前全球已有超过3亿多人被骨关节炎疾病所影响,在我国40岁以上中老年人群原发性骨关节炎的总体患病率也已经高达46.3%^[4],并且根据统计数据显示,2019年我国60岁及以上的老年人口数已达2.54亿,占总人口的18.10%^[5]。“十四五”期间中国人口老龄化会进一步加剧,骨关节炎的患病率也会随之上升。     

淫羊藿苷对强直性脊柱炎成纤维细胞向成骨型分化的影响

目的 异位成骨是强直性脊柱炎病理过程的核心环节.成纤维细胞是AS异位成骨的靶细胞,BMP/Smad信号传导通路是骨形成过程中的一条重要通路.该研究通过观察淫羊藿苷对体外培养强直性脊柱炎成纤维细胞增殖和凋亡的作用,同期观察淫羊藿苷对体外培养AS成纤维细胞成骨表型表达及BMP/Smad信号通路蛋白表达的影响,初步探讨淫羊藿...     

仙茅苷促MC3T3-E1成骨样细胞增殖、分化及钙化作用的研究

目的:考察仙茅苷对MC3T3-E1成骨样细胞的增殖、分化及钙化功能的影响。方法:用不同浓度仙茅苷加入MC3T3-E1细胞培养体系中,MTT法检测细胞增殖水平;用茜素红染色法考察骨小结形成能力;以对硝基苯二钠基质动力学法检测碱性磷酸酶的活性。结果:仙茅苷(10-4～10-8mol.L-1)对细胞增殖有促进作用,高浓度(10-4～10-6 mol.L-1时作用明显,其中48h为最佳作用时间;仙茅苷以10-7、10-9 mol.L-1浓度在96h时可促进MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性;仙茅苷浓度为10-9 mol.L-1时对于骨小结形成最为有效。结论:仙茅苷对MC3T3-E1成骨样细胞的增殖、分化及骨小结形成均有促进作用。     

淫羊藿活性成分促进骨细胞增殖分化研究进展

近年来以股骨头坏死为代表的各类骨伤疾病发病率呈逐年上升趋势,淫羊藿作为常用的补肾强骨中药被广泛应用于中医骨科临床并对治疗各种骨伤疾病取得了显著疗效。但淫羊藿中何种成分行使功能,是临床用药及相关药品研发亟需解决的关键问题。近年来研究发现,淫羊藿中的淫羊藿苷、淫羊藿次苷、淫羊藿总黄酮、淫羊藿多糖以及一些微量元素均具有促进骨细胞增殖分化作用,其中淫羊藿苷、淫羊藿次苷、淫羊藿总黄酮在分子学领域的药理机制研究取得了巨大进展,大量实验研究表明,上述成分可以通过控制骨细胞相关基因的表达、调节信号通路促进骨形成蛋白2(BMP2)以及骨保护素(OPG)蛋白的合成,在细胞因子水平解释了淫羊藿促进骨细胞增殖分化的内在机制,对于淫羊藿中含有的淫羊藿多糖及微量元素促进骨细胞增殖分化作用,研究学者只进行了验证实验,其深层次的作用机制有待进一步探究。本文以淫羊藿中主要活性成分淫羊藿苷、淫羊藿次苷、淫羊藿总黄酮、淫羊藿多糖以及一些微量元素为依据,综述各成分促进骨细胞增殖及分化作用研究进展,以期为新药研发和提高临床疗效提供一定理论参考。     

淫羊藿苷对与复合支架共培养脂肪干细胞成骨分化的影响

目的探讨淫羊藿苷对与复合支架共培养的脂肪干细胞成骨分化的影响。方法将透明质酸溶液、丝素蛋白溶液、壳聚糖溶液按照1∶2∶4的比例配置成混合液,应用3D打印机制作复合支架。将脂肪干细胞随机分为对照组、共培养组和淫羊藿苷组。对照组常规培养脂肪干细胞,共培养组加入复合支架和脂肪干细胞培养,淫羊藿苷组加入复合支架、脂肪干细胞及10μg/L淫羊藿苷培养。成骨诱导7 d后,MTT法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和I型胶原(Col-I)表达水平。结果共培养组和淫羊藿苷组细胞相对存活率明显低于对照组(P均<0.05),但淫羊藿苷组明显高于共培养组(P>0.05);3组间细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05);共培养组和淫羊藿苷组ALP、BSP、RUNX2、Col-I表达水平均明显高于对照组(P均<0.05),淫羊藿苷组BSP、RUNX2表达水平均明显高于共培养组(P均<0.05)。结论淫羊藿苷能促进与复合支架共培养的脂肪干细胞的增殖和成骨分化。     

淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程BMP-2/RunX2/OSX通路的影响

目的探讨淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化过程中BMP-2/RunX2/OSX信号通路的影响。方法将培养的第3代BMSCs随机分为对照组、实验组及抑制剂组,对照组细胞予0.2%二甲基亚砜加OS液加DMEM/F12培养基培养,实验组加入20μg/mL淫羊藿总黄酮进行干预,抑制剂组予20μg/mL淫羊藿总黄酮加1μg/mL NOGGIN重组蛋白干预,9天后测定碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色法染色并观察钙结节密度,RT-PCR法检测成骨相关蛋白(Ⅰ型胶原、骨钙蛋白及骨桥蛋白)及BMP-2/RunX2/OSX信号通路相关因子的转录表达。结果与对照组比较,实验组经定向成骨诱导后BMSCs ALP活性增强,钙结节密度显著增大,Ⅰ型胶原、骨钙蛋白和骨桥蛋白表达量增加,成骨相关转录因子BMP-2、RunX2和OSX的表达量亦增加(P0.05)。与实验组比较,抑制剂组BMSCs ALP活性降低(P0.05),钙结节密度降低,Ⅰ型胶原、骨钙蛋白及骨桥蛋白表达水平降低(P0.05)。结论 20μg/mL淫羊藿总黄酮能通过BMP-2/RunX2/OSX信号通路促进BMSCs定向成骨分化的进程。     

淫羊藿苷对体外培养乳鼠颅骨成骨细胞增殖、分化及成熟的影响

目的:研究淫羊藿苷对体外培养大鼠乳鼠颅骨成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖和分化成熟的影响。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法培养ROB,每3 d换液1次,铺满80%皿底后传代培养。采用终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L的淫羊藿苷进行药物干预,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养9 d后的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性,筛选出最佳浓度。以最佳药物浓度干预ROB的分化成熟,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组之间的钙化结节数量及碱性磷酸酶阳性克隆数(coloniesstained positive for alkaline phosphatase,CFU-FALP);提取总RNA,Real Time RT-PCR检测Runx-2与Osterix mRNA的表达情况;Western-blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果:淫羊藿苷剂量依赖性抑制细胞的增殖,但可强烈促进ROB的分化成熟,最佳药物浓度为1×10-5mol/L。该浓度下的淫羊藿苷可显著增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与...     

黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞活性的影响及其机制探讨

目的:探讨黄芪甲苷对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1细胞活性的影响及其作用机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,用不同浓度的黄芪甲苷进行预处理后,MTT法测定细胞增殖情况,碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞分化情况,Western blotting分析转化生长因子TGF-β1、成骨细胞信号转导蛋白Smad2/3表达水平;应用小干扰RNA(siRNA)转染法观察TGF-β1 siRNA对MC3T3-E1细胞增殖及活性的影响,加入抗Smad2/3抗体,探讨Smad2/3在黄芪甲苷介导的细胞增殖分化中的作用。结果:黄芪甲苷在一定浓度范围内剂量依赖性促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力。进一步机制分析表明,黄芪甲苷处理可诱导TGF-β1蛋白表达,TGF-β1siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降;此外,黄芪甲苷可显著性诱导Smad2/3表达,经TGF-β1 siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的Smad2/3表达显著下降;加入Smad2/3抗体后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降。结论:黄芪甲苷可通过刺激TGF-β1-Smad2/3通路的活化促进成骨细胞的增殖和分化,从而有利于骨形成。因此,本研究将为骨折愈合的治疗提供新的研究方向。     

淫羊藿苷促进体外培养大鼠骨髓间 充质干细胞的成骨性分化

目的:研究淫羊藿苷对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响.方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5mol·L-1的淫羊藿苷进行药物干预,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)及钙化结节数量,提取总RNA,RT Real-time PCR检测bFGF,IGF-1,Osterix(OSX),Runx-2 mRNA的表达情况.结果:1×10-5mol·L-1淫羊藿苷可提高碱性磷酸酶(ALP)活性,增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与成骨性分化相关因子bFGF,IGF-1,OSX,Runx-2 mRNA的表达.结论:淫羊藿苷可显著促进rBMSCs的成骨性分化,提示淫羊藿苷具有开发为抗骨质疏松或促进骨折愈合新药的潜力.     

新疆马鹿角提取物对MC3T3-E1成骨细胞RANKL/OPGmRNA表达的影响

目的 研究新疆马鹿角提取物对MC3T3-E1成骨细胞核因子-kβ受体活化因子配体(RANKL)/护骨素(OPG)mRNA表达的影响.方法 体外培养MC3T3-E1成骨细胞,分别加入含不同剂量新疆马鹿角提取物的培养液,72 h后分别提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测RANKL/OPG mRNA表达.结果 培养72 h后RANKL/OPG mRNA表达的灰度值(0.312±0.0710),与对照组(2.017±0.1320)比较,新疆马鹿角提取物呈浓度依赖性降低RANKL mRNA的表达,增加OPG mRNA的表达,各剂量组RANKL/OPG mRNA吸光度比值降低.结论 新疆马鹿角提取物可能通过调节成骨细胞RANKL/OPG的基因表达,而抑制破骨细胞介导的骨吸收.     

淫羊藿苷对人成骨细胞的作用

为探讨淫羊藿苷对人成骨细胞的影响,采用分次酶消化法做离体人成骨细胞培养,得到性状稳定、纯度高的成骨细胞;用MTT法做淫羊藿苷对成骨细胞增殖的研究。结果发现不同浓度的淫羊藿苷对成骨细胞的生长增殖均有促进作用,以10ng·ml-1浓度时其作用最强(P<0.05);生化方法测定淫羊藿苷浓度为100ng·ml-1和10ng·ml-1对成骨细胞分泌碱性磷酸酶(AKP)有促进作用。表明淫羊藿苷促进成骨细胞增殖的同时,增强了成骨细胞成骨活性。