Janus激酶2/信号转导和转录激活子3信号通路在心肌细胞缺氧损伤中的作用

目的探讨Janus激酶2/信号转导和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在心肌细胞缺氧损伤中的作用。方法体外培养的新生大鼠心肌细胞,构建缺氧模型,按随机数字表法分为正常对照组、缺氧组、JAK2抑制剂AG490处理组和STAT3抑制剂Statti c处理组。采用细胞计数试剂盒CCK-8检测心肌细胞活力,采用比色法检测细胞上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,并采用缺口末端标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡率。采用蛋白质印迹(Western blot)检测JAK2及STAT3蛋白表达及磷酸化情况。结果与正常对照组相比,缺氧组心肌细胞成活率明显降低,为对照组的30.14%±6.23%(P<0.01),细胞上清液中LDH、MDA含量升高明显,分别为(50.11±2.58)U/L和(19.55±1.81)mol/L(均为P<0.01),SOD活力则显著降低,为(10.21±0.57)U/ml(P<0.01),缺氧组凋亡率明显升高,为24.24%±4.37%(P<0.01),JAK2、STAT3磷酸化水平上调。AG490及Stattic预处理后,JAK2及STAT3磷酸化水平降低,心肌细胞成活率明显升高(P<0.01),LDH、MDA含量显著低于缺氧组(均为P<0.01),SOD活力则高于缺氧组(P<0.01)。结论 JAK2/STAT3信号通路参与了缺氧所致心肌细胞损伤,抑制JAK/STAT通路有助于减轻缺氧所致心肌损伤。     

丹参酮Ⅰ在肝缺血再灌注损伤小鼠模型中的保护作用

目的探讨丹参酮Ⅰ(T-Ⅰ)在小鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)模型中的保护作用。方法C57BL/6J小鼠36只随机分为假手术(sham)组(n=6)、缺血再灌注(IR)组(n=6)、IR+T-Ⅰ(5 mg/kg)组(n=6)、IR+T-Ⅰ(10 mg/kg)组(n=6)、IR+T-Ⅰ(20 mg/kg)组(n=6)和IR+T-Ⅰ(40 mg/kg)组(n=6),各组均腹腔注射给药,sham组与IR组注射等量溶剂橄榄油,IR+T-Ⅰ组每日给药1次,连续给药7 d,末次给药2 h后建立70%的HIRI模型,再灌注6 h后收集血清及肝脏标本;试剂盒检测血清ALT、AST水平,检测肝组织内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、Caspase-3及还原型谷胱甘肽(GSH)指标;HE染色观察肝组织病理情况,TUNEL法检测肝细胞凋亡水平,免疫组化检测Caspase-3、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果IR+T-Ⅰ(20 mg/kg)组的血清ALT[(192.48±23.67)U/L]、AST[(123.19±9.16)U/L]较IR组[ALT:(336.90±41.52)U/L,AST:(206.90±18.81)U/L]均显著下降(P值均<0.01),确定了20 mg/kg为最佳浓度;与IR组[MDA:(3.48±0.95)μmol/mg;Caspase-3:(1.04±0.35)μmol/mg;SOD:(160.29±27.37)U/mg;GSH:(1.03±0.42)μmol/mg]比较,IR+T-Ⅰ(20 mg/kg)组的MDA[(1.34±0.21)μmol/mg]、Caspase-3[(0.69±0.97)μmol/mg]均显著降低(P值均<0.05),而SOD[(274.47±30.53)U/mg]及GSH[(2.12±0.27)μmol/mg]均明显升高(P值均<0.05);HE染色显示,IR组肝小叶结构紊乱,肝细胞灶性或大面积变性坏死;与IR组相比,IR+T-Ⅰ(20 mg/kg)组肝细胞坏死面积减小,肝组织结构基本完整;免疫组化结果显示,与IR组比较,IR+T-Ⅰ(20 mg/kg)组的小鼠肝细胞凋亡数目明显减少,Caspase-3蛋白表达明显减少,HO-1蛋白表达明显增加。结论T-Ⅰ通过抑制肝脏氧化应激反应和肝细胞凋亡对小鼠HIRI中起到保护作用。     

氧化应激与总肺缺血再灌注细胞凋亡的相关性及川芎嗪干扰的影响

目的探讨氧化应激在兔肺组织细胞凋亡中的作用及川芎嗪的影响。方法制备兔在体原位肺缺血再灌注(IR)损伤模型(PIRI),于IR 1、3、5 h分别测各组血浆MDA及SOD活力。应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL),检测IR损伤引起的肺细胞凋亡的变化;进行氧化应激指标与细胞凋亡的相关性分析。结果 IR组1、3、5 h各组血浆SOD活力较假手术组比较显著降低(均P<0.05),TMP组在缺血1 h再灌注1、3、5 h SOD与IR组比较SOD活力明显升高(P<0.05,P<0.01)。在缺血1 h再灌注1、3、5 h IR组与假手术组比较MDA含量显著增高(P<0.01),TMP组在再灌注1、3、5 h的MDA含量显著高于假手术组(P<0.05,P<0.01),但低于IR组(P<0.05,P<0.01)。肺IR后IR组1、3、5 h发生明显的肺细胞凋亡(均P<0.01),而TMP组细胞凋亡指数与同一时相IR组比较显著降低(P<0.05,P<0.01);SOD与细胞凋亡指数呈负相关(r=-0.665,P<0.05),MDA与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.764,P<0.05)。结论氧化应激导致的细胞凋亡在肺IR损伤机制中可能发挥着重要作用,川芎嗪可抑制氧化应激反应从而减轻细胞凋亡的发生,此机制可能是川芎嗪减轻肺IR损伤的机制之一。     

山药多糖对大鼠急性心肌梗死后心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的探讨山药多糖(CYPS)对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法大鼠心肌细胞随机分为空白对照(NC)组、缺氧/复氧(H/R)组、H/R+75 mg/L CYPS组、H/R+150 mg/L CYPS组、H/R+300 mg/L CYPS组,噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞存活率;流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;Western印迹法检测心肌细胞细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved caspase)-3、成纤维细胞生长因子(FGF)9蛋白表达。比较FGF9过表达及沉默FGF9表达对H/R损伤心肌细胞存活率及凋亡率的影响。观察CYPS不同剂量组及FGF9表达对心肌细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响。结果与NC组相比,H/R组心肌细胞存活率显著降低(P<0.05),CDK4蛋白水平及GSH-Px、SOD含量显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率与Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05);与H/R组相比,CYPS不同剂量组心肌细胞存活率显著升高(P<0.05),CDK4蛋白水平及GSH-Px、SOD含量显著升高(P<0.05),而细胞凋亡率与Cleaved caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05);CYPS可促进H/R损伤心肌细胞中FGF9表达水平升高(P<0.05);FGF9过表达对H/R损伤心肌细胞具有保护作用;沉默FGF9逆转CYPS对H/R损伤心肌细胞的保护作用。结论CYPS可通过上调FGF9表达对H/R损伤的心肌细胞发挥保护作用,其作用机制可能与抑制心肌细胞凋亡及增强抗氧化能力有关。     

姜黄素通过微小核糖核酸-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖诱导的损伤研究

目的：探究姜黄素（curcumin,Cur）通过mi R-34a介导的自噬途径保护心肌细胞免受高糖（high glucose,HG）诱导的损伤。方法：将心肌细胞分为Con组（正常培养细胞）、HG组（30mmol/L葡萄糖培养细胞）、HG+Cur-L组（姜黄素25μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞）、HG+Cur-M组（姜黄素50μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞）、HG+Cur-H组（姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞）、HG+Cur+mi R-NC组（转染mi R-NC,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30mmol/L培养细胞）、HG+Cur+mi R-34a（转染mi R-34a,使用姜黄素100μmol/L和葡萄糖30 mmol/L培养细胞）、HG+Cur+mi R-34a+3-MA组（转染mi R-34a,使用姜黄素100μmol/L、葡萄糖30 mmol/L及自噬抑制剂3-MA 10μmol/L培养细胞）。采用q RT-PCR检测mi R-34a表达水平;CCK8检测细胞活性;ELISA检测LDH含量、SOD、GSH-Px活性...     

3-硝基酪氨酸与糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡的关系研究

目的探讨2型糖尿病大鼠心肌组织及血中3-硝基酪氨酸(3-nitmtynosine,3-NT)与糖尿病心肌病(diabeticcardiomyopathy,DCM)心肌细胞凋亡的关系。方法选取8周龄的雄性大鼠60只,将其随机分为4组,空白对照组、DCM组、糖尿病+缬沙坦预处理组、DCM+缬沙坦处理组,每组15只。用TUNEL法检测DCM心肌细胞的凋亡指数(AI);用免疫组化的方法检测心肌组织中3-NT的表达指数(EI);用ELISA法检测血清中3-NT的浓度。结果 (1)四组间SD大鼠的心脏重量指数比较有显著性差异(P<0.01),DCM组、DCM+缬沙坦处理组心脏重量指数>大于空白对照组、糖尿病+缬沙坦预处理组。(2)四组SD大鼠心肌组织免疫组化方法检测表明,心肌组织中3-NT的表达指数与心肌细胞的凋亡指数呈正相关(P<0.01),而血中3-NT的含量与心肌细胞的凋亡指数无相关关系(P>0.05)。(3)四组SD大鼠间的AI比较有显著差异(P<0.01)。两两比较各组AI,DCM组>糖尿病+缬沙坦预处理组、DCM+缬沙坦处理组>空白对照组。(4)四组SD大鼠免疫组化的3-NT表达指数比较有显著差异(P<0.01)。各组免疫组化的3-NT表达指数两两比较,DCM组显著大于其他三组。(5)四组SD大鼠血中3-硝基酪氨酸的浓度比较无显著统计学意义(P>0.05)。结论 (1)DCM大鼠心肌组织中3-NT的表达显著增多并与心肌细胞凋亡密切相关,缬沙坦能够抑制DCM大鼠心肌细胞中3-NT的表达,并由此抑制DCM大鼠心肌细胞凋亡。(2)循环血中的3-NT水平不能真实反映DCM大鼠心肌组织中3-NT表达水平及其对心肌细胞凋亡的影响。     

虎杖苷对脂多糖介导的肺泡上皮细胞线粒体损伤的影响

目的探讨虎杖苷对脂多糖(LPS)介导的肺泡上皮线粒体损伤的影响及可能机制。方法 A549细胞分为4组:对照组为细胞仅接受0.1%DMSO处理7 h;模型组为细胞给予DMSO预处理,1 h后与LPS(5 mg/L)共孵育6 h;治疗组为细胞接受虎杖苷(50μmol/L)预处理,1 h后与LPS(5 mg/L)共孵育6 h;抑制剂组为细胞接受沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)抑制剂(50μmol/L 3-TYP)及虎杖苷50μmol/L预处理,1 h后与LPS(5 mg/L)共孵育6 h。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活性;荧光素-荧光素酶法检测细胞ATP水平;钙黄绿素-氯化钴探针检测线粒体通透性转变孔(mPTP)状态;DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(ROS)水平;荧光探针JC-1检测线粒体膜电位(MMP);Western blotting检测细胞SIRT3表达。应用SPSS 20.0软件进行统计分析。组间比较采用单因素方差分析、LSD两两比较或Tamhane′s T2检验。结果与对照组比较,模型组中SIRT3表达、JC-1红色/绿色荧光、钙黄绿素荧光、ATP水平及细胞活力分别显著下降至(73.3±4.5)%、(54.0±6.5)%、(2 035±217)U、(72.2±4.8)%及(73.7±3.7)%,ROS水平显著增加为(218.0±21.7)%;与模型组比较,治疗组中SIRT3表达、JC-1红色/绿色荧光、钙黄绿素荧光、ATP水平及细胞活力分别显著上升为(86.7±7.6)%、(75.8±7.6)%、(2 571±199)U、(86.7±6.3)%及(83.0±3.6)%,ROS水平显著下降为(180.0±18.1)%;与治疗组比较,抑制剂组中SIRT3表达、JC-1红色/绿色荧光、钙黄绿素荧光、ATP水平及细胞活力分别显著下降为(69.0±7.8)%、(62.8±6.2)%、(2 116±254)U、(72.8±5.8)%及(73.3±4.1)%,ROS水平显著增加为(212.0±18.2)%。结论虎杖苷可以显著改善LPS介导的肺泡上皮线粒体损伤,其机制可能与激活SIRT3有关。     

年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中miR-181a和SIRT1的表达关系及意义

目的探讨白内障晶状体上皮细胞微小RNA-181a(miR-181a)与沉默信息调节因子(SIRT)1的表达关系,研究其在年龄相关性白内障患者的诊治及病情评估方面的临床意义。方法选取诊断为年龄相关性白内障患者62例为白内障组,另选取同期近视矫正手术患者42例为对照组,利用RT q-PCR法,检测两组晶状体上皮细胞miR-181a与SIRT1表达水平;Pearson法测定miR-181a与SIRT1相关性;利用Lipofectamine 2000转染miR-181a模拟物和抑制剂,调节人晶状体上皮细胞miR-181a表达水平,RT q-PCR法检测SIRT1表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测晶状体上皮细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱氨酸(GSH)、谷胱氨酸过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果与对照组相比,白内障组miR-181a表达水平显著升高,SIRT1表达水平显著降低(P<0.05);Pearson相关分析显示,miR-181a和SIRT1呈负相关关系(r=-0.719,P<0.05);miR-181a模拟物组SIRT1表达水平显著低于模拟物阳性对照组(P<0.05),miR-181a抑制剂组,SIRT1表达水平显著高于抑制剂阴性对照组(P<0.05);白内障组SOD、GSH、GSH-Px水平明显低于正常组(P<0.05),MDA水平明显高于正常组(P<0.05);miR-181a表达水平与SOD、GSH、GSH-Px因子呈负相关关系(r=-0.702,-0.739,-0.776),与MDA水平呈正相关关系(r=0.679);SIRT1表达水平与SOD、GSH、GSH-Px呈正相关关系(r=0.699,0.743,0.763),与MDA水平呈负相关关系(r=-0.684)。结论白内障晶状体上皮细胞中miR-181a高表达,SIRT1低表达,miR-181a可调控人晶状体上皮细胞中SIRT1表达;SIRT1低表达可促使晶状体上皮细胞凋亡,从而影响或导致了年龄相关性白内障的发病。     

吴茱萸次碱通过SIRT1通路干预氧化应激诱导血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察吴茱萸次碱通过沉默信息调节因子(SIRT)1通路干预氧化应激诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖作用。方法原代培养大鼠VSMCs,用叔丁基过氧化氢(t-BHp)诱导VSMCs增殖。缩胆囊素八肽(CCK-8)法检测各组细胞增殖率;分光光度计检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量;荧光分光计检测活性氧(ROS)水平;RT-PCR法检测吴茱萸次碱对SIRT1 mRNA表达的影响;Western印迹法测SIRT1蛋白的表达量,并运用EX-527抑制SIRT1的表达。结果与空白组比较,t-BHp组SOD含量显著降低,MDA含量显著升高,SOD水平显著升高,SIRT1 mRNA与蛋白的表达显著下降(均P0.05);与tBHp组比较,吴茱萸次碱组SOD含量显著升高,MDA含量显著降低,SOD水平显著降低,SIRT1 mRNA与蛋白的表达显著上升(均P0.05);与吴茱萸次碱组比较,EX-527组SOD含量显著降低,MDA含量显著升高,SOD水平显著升高,SIRT1 mRNA与蛋白的表达显著下降(均P0.05)。结论吴茱萸次碱可通过上调SIRT1表达提高抗细胞增殖的能力,抑制t-BHp诱导细胞内ROS生成、提高抗氧化能力,发挥保护血管的生物效应。     

缺氧后处理与氧自由基清除剂预处理对心肌细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察缺氧后处理与氧自由基清除剂超氧化物歧化酶(SOD)联合过氧化氢酶(CAT)预处理,对心肌细胞膜和线粒体Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨两者调控心肌细胞凋亡的机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,分对照组、缺氧/复氧组、缺氧后处理组及缺氧/复氧+SOD+CAT组。应用荧光探针测定心肌细胞线粒体活性氧水平,Hoechst染色及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Wesiern blot法检测心肌细胞膜和线粒体Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与对照组比较,缺氧/复氧组、缺氧后处理组、缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞线粒体活性氧及细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与缺氧/复氧组比较,缺氧后处理组、缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞线粒体活性氧及细胞凋亡率明显降低(P<0.01);缺氧后处理组及缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白明显上调,Bax蛋白明显下调。结论缺氧后处理及氧自由基清除剂预处理抑制线粒体活性氧爆发,减轻缺氧/复氧再灌注心肌细胞凋亡,其抗凋亡可能机制与细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白表达上调及Bax蛋白表达下调有关。     

参麦注射液对心肌缺血再灌注损伤大鼠钙调神经磷酸酶活性的影响

目的探讨参麦注射液(SMI)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中钙调神经磷酸酶(CaN)活性变化的影响。方法 30只大鼠随机分为假手术组、模型组和SMI组各10只,检测各组心肌CaN变化,并测定其心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、腺苷三磷酸(ATP)、CaN活性。结果与假手术组比较,模型组CaN活性、心肌细胞凋亡率、MDA含量明显升高(P<0.01),SOD含量、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显下降(P<0.01);与模型组比较,SMI组CaN活性、心肌细胞凋亡率、MDA含量明显下降(P<0.05),SOD含量、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显升高(P<0.05)。结论 SMI能够抑制大鼠心肌细胞CaN活性,对缺血再灌注心肌有一定保护作用。     

庚醇预处理对兔缺血再灌注心肌线粒体结构、功能及线粒体Cx43的影响

目的观察庚醇预处理对心肌缺血再灌注时线粒体的结构、功能和缝隙连接蛋白43(Cx43)影响,以探讨庚醇预处理心肌保护的可能机制。方法兔64只,建心肌缺血再灌注模型,随机分4组(每组16只):假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IP组)、庚醇预处理(HT组)。测定心肌梗死面积,电镜观测线粒体超微结构改变,检测线粒体膜电位、ca浓度、丙二醛(MD A)和超氧化物歧化酶(SOD)的改变。Western blotting检测线粒体Cx43蛋白变化。结果 IP组和HT组心肌梗死面积分别为18.97%±2.80%、19.97%±3.80%,均明显低于IR组35.67%±5.80%,P<0.01。电镜检测发现,与sham组比较,其它组线粒体损伤明显(P<0.01);与IR组比较,HT组和IP组线粒体损伤明显减轻(P<0.05)、线粒体跨膜电位明显升高、线粒体ca浓度明显下降(P<0.01);与IR组比较,IP组SOD活性明显升高、MD A含量显著下降(P<0.01)。与sham组比较,IR组线粒体Cx43蛋白显著下降(P<0.05);与IR组比较,HT组和IP组心肌线粒体Cx43明显升高(P<0.05)。结论庚醇预处理可保护缺血再灌注心肌,其机制可能与提高线粒体跨膜电位、减轻线粒体钙超载和提高线粒体Cx43表达有关。     

异氟烷预处理对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:采用Langendorff离体心脏灌注模型,研究异氟烷预处理对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法:24只SD大鼠随机分为4组,每组6只,分别为缺血再灌注损伤组(IR组)、异氟烷预处理1组(IsoP 1组)、异氟烷预处理2组(IsoP 2组)和异氟烷预处理3组(IsoP 3组)。监测复灌后心功能恢复情况、冠脉流出液中磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氨酶(LDH)的释放量和心肌存活面积的变化。结果:复灌期间3组IsoP心脏各对应时间点的LVEDP均显著低于对照组(P<0.05~<0.01);再灌注30 min时IsoP各组LVDP的恢复均高于IR组(P<0.05),IsoP3组±dp／dtmax在再灌注30 min时的恢复百分比均高于IR组(P<0.05),IsoP1组+dp／dt max高于IR组(P<0.05);复灌后异氟烷预处理组各时间点的CK、LDH释放量均低于IR组(P<0.01);IsoP2组、IsoP1组和IsoP3组心肌存活面积百分比均高于IR组(P<0.01);预处理各组之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论:IsoP对大鼠离体缺血再灌注心肌有保护作用,可以显著减轻心肌细胞的损伤,改善心功能,增加心肌存活面积。     

紫檀芪减轻人肾小管上皮细胞高糖缺氧复氧损伤及其作用机制的研究

目的探究紫檀芪(PTE)对人肾小管上皮细胞(HK-2)高糖缺氧复氧损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法随机将HK-2细胞分为低糖缺氧复氧组(LR)、高糖缺氧复氧组(HR)、高糖缺氧复氧+PTE组(HR+P)、高糖缺氧复氧组+PTE+沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂组(HR+P+EX)。缺氧复氧结束后采用CCK-8试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞活性,超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD活性及MDA含量;活性氧簇(ROS)染色检测细胞内ROS含量;Western blot检测HK-2细胞SIRT1、Beclin1、泛素结合蛋白(SQSTM1/p62)和微管相关蛋白轻链3B(LC3B)的表达。结果与LR组比较,HR组LDH、MDA及ROS染色荧光强度增加,CCK-8及SOD降低,SQSTM1/p62表达上调(P0. 05),SIRT1、Beclin1、LC3B表达降低(P0. 05)。与HR组比较,HR+P组CCK-8和SOD增加,LDH、MDA及ROS荧光强度下降;SIRT1、Beclin1、LC3B表达上调(P0. 05),SQSTM1/p62表达下调(P0. 05)。与HR+P组比较,HR+P+EX组LDH、MDA及ROS染色荧光强度增加,CCK-8及SOD降低,SQSTM1/p62表达上调(P0. 05),SIRT1、Beclin1、LC3B表达降低(P0. 05)。结论 PTE通过促进HK-2细胞SIRT1表达,促进自噬的恢复,减轻高糖缺氧复氧引起的损伤。     

颈迷走神经刺激对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌氧化应激和细胞自噬的影响研究

目的:探讨颈迷走神经刺激(CVNS)对大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的影响及可能的机制。方法:24只,成年雄性,SPF级大鼠(200~250g),随机分为假手术组(SO,n=8)、缺血再灌注组(n=8)和颈迷走神经刺激+I/R组(CVNS+I/R,n=8)。选用I/R模型(缺血30min,再灌注4h)。假手术组仅开胸、穿线,但不结扎。再灌注2h后取颈静脉血和心肌组织,分别检测心肌损伤标志物:肌酸激酶(CK)和肌钙蛋白I(c Tn I);氧化应激水平:丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)表达;细胞自噬水平:beclin-1和LC3-II/I表达。结果:与SO组比较,I/R组中CK、c Tn I、MDA、Beclin-1和LC3-II/I显著增加(P0.05),SOD活性显著降低(P0.05),Bcl-2表达呈下降趋势,但差异无统计学意义(P0.05);与IR组比较,CVNS可以显著抑制CK、c Tn I、MDA、Beclin-1和LC3-II/I的表达(P0.05),增加Bcl-2的表达和SOD的活性(P0.05)。结论:CVNS可以显著抑制:(1)大鼠心肌IR损伤;(2)心肌细胞过度自噬,机制可能与增加Bcl-2表达、抑制氧化应激水平有关。     

微小RNA-124-3p通过靶向抑制RIPK1的表达对缺氧/复氧心肌细胞损伤中的保护作用及其机制研究

目的探讨微小RNA-124-3p(miR-124-3p)调控受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法大鼠心肌细胞随机分为Con组、H/R组、H/R+miR-124-3p组、H/R+miR-NC组、H/R+si-RIPK1组、H/R+siNC组、H/R+miR-124-3p+pcDNA组、H/R+miR-124-3p+pcDNA-RIPK1组。采用qRT-PCR法检测miR-124-3p与RIPK1 mRNA表达水平,Western blot法检测RIPK1蛋白表达情况,双荧光素酶报告基因检测验证miR-124-3p与RIPK1的靶向关系。流式细胞术检测细胞凋亡能力变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况。检测乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 H/R组心肌细胞miR-124-3p表达水平显著低于Con组(P0.05),而RIPK1 mRNA及蛋白水平均显著升高(P0.05);H/R组心肌细胞LDH活性、MDA水平及Bax蛋白水平均显著高于Con组(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),而SOD水平及Bcl-2蛋白水平均显著低于Con组(P0.05);miR-124-3p过表达与抑制RIPK1表达可降低细胞凋亡率、LDH活性、MDA水平及Bax蛋白水平,而提高SOD水平及Bcl-2蛋白水平;双荧光素酶基因检测结果证实RIPK1是miR-124-3p的靶基因;RIPK1过表达逆转了miR-124-3p过表达对H/R心肌细胞损伤的作用。结论MiR-124-3p过表达可通过下调RIPK1表达进而减轻心肌细胞H/R损伤进而对心肌细胞发挥保护作用。     

刺囊酸对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究刺囊酸预处理对原代培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP 89 kDa)表达的影响.方法 实验随机分为6组:对照组,缺氧复氧损伤组,缺氧预处理组及低、中、高剂量刺囊酸组(0.5 μmol/L、5μmol/L和50 μmol/L),分别予以缺氧3h后再复氧2h,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western Blot杂交法检测心肌细胞Bcl-2、Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达变化.结果 与对照组比较,缺氧复氧损伤组心肌细胞Bcl-2蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01),Bax蛋白及PARP(89 kDa)表达显著高于对照组(P＜0.01),细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05).与缺氧复氧损伤组比较,不同剂量的刺囊酸预处理能显著提高细胞存活率,降低LDH活性,呈剂量依赖性;中剂量刺囊酸显著增加Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),抑制Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达(P＜0.05).结论 刺囊酸预处理可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制PARP(89 kDa)及Bax蛋白表达,抑制细胞凋亡,对抗心肌细胞缺氧复氧损伤.     

阿托伐他汀的新效应:升高心肌细胞载脂蛋白J表达

目的 观察阿托伐他汀对心肌细胞载脂蛋白(Apo)J的影响。方法 分离大鼠乳鼠心肌细胞,并给予PBS、AngII、阿托伐他汀和ApoJ干预;细胞随机分为对照组; AngII(0.1 μmol/L)组; 阿托伐他汀(10 μmol/L）预处理1h+AngII组; ApoJ(20 μg/ml）预处理1h+AngII组; 通过 MTT检测法和Caspase-3/7活性检测试剂盒检测细胞活性和细胞凋亡变化;利用Western blot检测心肌细胞ApoJ表达情况。结果 与对照组相比,AngII引起心肌细胞活性明显下降(P<0.01),凋亡细胞显著增加(P<0.01),心肌细胞ApoJ表达下调(P<0.01)。阿托伐他汀预处理后,再给予AngII干预,与AngII处理组相比,心肌细胞活性明显增加(P<0.01),凋亡细胞显著减少(P<0.01),心肌细胞ApoJ表达上调。给予外源性ApoJ预处理,再给予AngII干预,可抑制AngII引起的细胞损伤,作用与阿托伐他汀类似。结论 阿托伐他汀通过升高心肌细胞ApoJ表达,减轻AngII引起的细胞损伤。     

盐酸羟考酮通过JNK/p38MAPK信号通路调控异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡的机制

目的探究盐酸羟考酮对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养心肌细胞H9c2,设置对照组、ISO组、盐酸羟考酮1μmol/L组、盐酸羟考酮5μmol/L组、盐酸羟考酮10μmol/L组、ISO+SB203580〔c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38MAPK)信号通路阻断剂〕组。噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞存活率;流式细胞学法检测各组心肌细胞的凋亡率;Western印迹检测心肌细胞的B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)及JNK/p38MAPK信号通路相关蛋白的表达;测定培养细胞上清液乳脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量。结果与对照组比较,ISO组心肌细胞存活率降低,各给药组心肌细胞存活率明显升高(P<0.05);与对照组比较,ISO组心肌细胞的凋亡率明显升高(P<0.05),而盐酸羟考酮可显著降低细胞凋亡率(P<0.05);与ISO组比较,盐酸羟考酮10μmol/L组LDH、CK水平及Bax、磷酸化(p)-JNK、p-p38MAPK表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05);阻断JNK/p38MAPK信号通路可显著增加细胞存活率(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),促进Bcl-2表达(P<0.05),而抑制Bax表达(P<0.05)。结论盐酸羟考酮对ISO诱导的心肌细胞损伤具有抗凋亡作用,其作用机制可能与抑制JNK/p38MAPK信号通路的活化有关。     

葱白提取物干预脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤的实验研究

目的:探讨葱白提取物对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法:将H9c2细胞随机分为NC组、LPS组、葱白提取物低剂量组、葱白提取物中剂量组、葱白提取物高剂量组、anti-miR-194-5p+LPS组、anti-miR-NC+LPS组、miR-194-5p+葱白提取物高剂量组+LPS组、miR-NC+葱白提取物高剂量组+LPS组。蛋白质印迹法检测Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达;流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-194-5p表达水平。结果:LPS诱导的心肌细胞中Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达水平和H9c2细胞凋亡率升高,MDA含量升高,SOD和CAT活性降低,miR-194-5p表达水平升高(P<0.05)。低、中、高剂量葱白提取物处理后,Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率降低,MDA含量降低,SOD和CAT活性升...