人参皂苷Rb1对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:研究人参皂苷Rb1对大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)mRNA表达的影响。方法:不同浓度的人参皂苷Rb1作用于体外培养的大鼠成骨细胞不同时间,采用MTT法检测药物对成骨细胞增殖功能的影响,PNPP法检测成骨细胞中ALP活性分析药物对成骨细胞分化的影响,半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG/RANKL mRNA,分析药物对破骨细胞分化的影响。结果:人参皂苷Rb1(1.12×10-9-1.12×10-5mol/L)作用于体外培养的大鼠成骨细胞3d时,1.12×10-8-1.12×10-6mol/L人参皂苷Rb1可显著促进成骨细胞的增殖(P0.05或P0.01);1.12×10-7-1.12×10-6mol/L人参皂苷Rb1可显著促进成骨细胞的分化(P0.01);1.12×10-9-1.12×10-8mol/L人参皂苷Rb1可显著上调成骨细胞中OPG/RANKLmRNA的比值,抑制破骨细胞的分化(P0.01);1.12×10-7-1.12×10-5mol/L人参皂苷Rb1可显著下调成骨细胞中OPG/RANKLmRNA的比值,促进破骨细胞的分化(P0.01)。结论:人参皂苷Rb1对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、分化及破骨细胞的分化有显著影响。     

薯蓣皂苷元对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:研究薯蓣皂苷元对体外培养的大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配基(OPG/RANKL) mRNA的影响,探讨薯蓣皂苷元预防与治疗骨质疏松的作用机制。方法:在体外培养的大鼠成骨细胞培养基中分别加入不同浓度的薯蓣皂苷元作用不同时间,用MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,检测成骨细胞内ALP活性分析药物对成骨细胞分化的影响,用半定量RT-PCR检测成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的表达量,分析药物对破骨细胞重要信号传导通路OPG/RANKL/RANK系统的影响。结果:3.64×10-8-3.64×10-7mol/L的薯蓣皂苷元作用于大鼠成骨细胞3d,可促进成骨细胞的增殖(P<0.01),上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P<0.01);作用7d,可提高成骨细胞内ALP活性(P<0.05或P<0.01)。结论:适量浓度薯蓣皂苷元可促进成骨细胞的增殖、分化及抑制破骨细胞的形成。     

补肾益骨方对去势大鼠成骨细胞增殖及BMP-2表达的影响

目的:观察补肾益骨方对去势大鼠成骨细胞增殖及骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响。方法:取12周龄Wistar雌性大鼠40只,随机分为A(模型组)、B(治疗组)、C(阳性对照组)、D(正常对照组)四组,每组10只,前3组行完整双侧卵巢摘除术,D组行假手术,术后常规饲养12周,再分别予以生理盐水、补肾益骨方水提液、α-D3水溶液及生理盐水灌胃治疗12周,处死大鼠,取右胫骨上端做病理切片,通过HE染色观察成骨细胞增殖、免疫组化染色观察BMP-2表达。结果:治疗组成骨细胞数量明显增加,而且通过免疫组化染色发现BMP-2棕色深染的阳性细胞比例明显高于模型组。结论:补肾益骨方能促进成骨细胞分化、增殖,加速骨形成,具有治疗骨质疏松的作用。推测骨中BMP-2含量增加是其重要的治疗机理之一。     

补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究

目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2(BMP-2)、Smad5表达的影响方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只.制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细...     

红曲对体外培养大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

为研究红曲对体外培养大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响,从而为治疗骨质疏松症开发出中药新药提供细胞学依据。取成年SD大鼠48只,随机将大鼠分为A组(空白组)、B组(倍美力组)、C组(普拉固组)、D、E、F组(红曲高、中、低剂量组)6组,按10ml.kg-1分别予以生理盐水,倍美力水溶液(0.00625mg.ml-1),普拉固水溶液0.2mg.ml-1)及红曲水提液(1.25g.ml-1、0.625g.ml-1、0.125g.ml-1)灌胃。灌胃10天后,腹腔静脉取血制备含药血清;将从胎鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中,然后应用BMP-2免疫组化染色方法观察红曲对体外培养成骨细胞BMP-2表达的影响。结果显示,通过免疫组化染色发现BMP-2棕色深染位于细胞浆,红曲高、中剂量组成骨细胞棕色深染数量明显高于空白组,低剂量组与空白组无明显差异,阳性细胞比例呈剂量依赖性增长。表明红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞BMP-2表达;在细胞和分子水平为中药红曲治疗骨质疏松症提供了客观化的依据。     

骨康含药血清对大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

目的:通过观察骨康含药血清对成骨细胞BMP-2表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法:将6只大白兔随机分为3组:正常血清组、骨康含药血清组和雌二醇含药血清组,分别将血清添加入体外分离、培养的成骨细胞,每组8个样本,采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞BMP-2的表达。结果:骨康含药血清组BMP-2含量显著低于空白对照组(P<0.05),骨康含药血清组与雌二醇含药血清组BMP-2的含量无明显差异。结论:在去势状态下,骨康可能通过促进BMP-2的分泌,达到治疗骨质疏松症的目的。     

葛根素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的:探讨葛根素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,葛根素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果:葛根素在1×10-4mol/L~1×10-8mol/L浓度范围内24h,48h促进成骨细胞增殖,在1×10-6mol/L~1×10-8mol/L范围内48h及1×10-8mol/L72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论:葛根素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

杜仲总提物对大鼠成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的观察杜仲总提取物(DZCE)对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖、分化及分泌Ⅰ型胶原能力的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,分为对照组、地塞米松(DEX)10-8mol/L组、杜仲总提取物不同剂量组(10μg/L、1μg/L、0.1μg/L)共5个组,CCK-8(cell counting Kit-8)检测细胞增殖情况。由Pierce BCA蛋白分析试剂盒进行蛋白定量,然后由碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测成骨细胞的分化情况。用In cell western方法测定成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白(Col1αI)分泌随时间的变化情况。各组干预24 h后,实时荧光定量法检测成骨细胞Col1αI mRNA的表达情况。结果 1杜仲总提取物各剂量均能刺激成骨细胞的细胞增殖(P0.01),同时也都能使成骨细胞的分化能力增强(P0.05)。2药物干预后,Ⅰ型胶原蛋白的分泌随时间的变化情况是第1天的高中剂量,第3天的中低剂量能使成骨细胞的I型胶原蛋白表达提高(P0.05),第5天、第7天、第9天,各组Ⅰ型胶原蛋白的分泌量均增加,但杜仲总提取物各剂量组与空白组差异无统计学意义(P0.05)。3PCR检测发现,杜仲总提取物各剂量组的I型胶原基因的表达增加,而且这种促进I型胶原分泌的能力有量效趋势。结论杜仲总提取物能显著提高成骨细胞增殖、分化和Col1αⅠ的表达。     

人参皂苷对大鼠成骨细胞增殖及成骨细胞中PINP、β-CTX分泌的影响

目的:探讨人参皂苷对大鼠成骨细胞增殖及成骨细胞中I型前胶原氨基端前肽(PINP)、β-胶原降解产物(β-CTX)分泌的影响。方法:将出生24 h的SD大鼠头盖骨成骨细胞行体外原代及传代培养,分别在培养液中加入不同浓度(0、1、5、10、20μmol/L)的人参皂苷传代培养21 d,行茜素红染色并于倒置相差显微镜中观察成骨细胞矿化结节,应用Western blotting法测定大鼠成骨组织中PINP、β-CTX表达水平。结果:人参皂苷可促进大鼠成骨细胞增殖及矿化结节形成,且呈时间及浓度依赖性。随着人参皂苷浓度增加及作用时间延长,大鼠成骨细胞中PINP、β-CTX表达水平显著升高(P0.05)。结论:人参皂苷可促进大鼠成骨细胞增殖及矿化结节形成,其可能作用机制与人参皂苷可诱导成骨细胞组织中PINP、β-CTX分泌有关。     

补肾活血方对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的观察中药补肾活血方对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。方法取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞：应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法（PNPP）及茜素红染色方法观察不同浓度补肾活血方对体外培养成骨细胞在24、48、72h不同时段的增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化结节形成的影响。结果不同浓度的补肾活血方均可促进成骨细胞增殖率提高,以中、高浓度组的作用较为明显（P〈0．01）;不同浓度补肾活血方可使ALP活性增强（P〈0．01）;中、高浓度组补肾活血方矿化结节数量,显著多于对照组（P〈0．01）。结论补肾活血方具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用。     

葛根素对成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨葛根素(Pue)对高糖培养的成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原m RNA(CollⅠm RNA)表达的影响,为临床治疗糖尿病骨质疏松症提供实验依据。方法:取出生24 h内的SD大鼠的颅骨,体外分离培养成骨细胞,待细胞形态稳定后,取对数生长期的成骨细胞,随机分为正常组、高糖组(葡萄糖浓度22 mmol/L)、葛根素各浓度组(葛根素浓度分别为10-8 mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)、高糖加葛根素各浓度组,每组设8个复孔,分别培养48 h,隔天换液并加药。测定成骨细胞的增殖能力、细胞内ALP活性以及CollⅠm RNA表达情况。结果:与正常组比较,葛根素各浓度组细胞增殖、细胞ALP活性、细胞CollⅠm RNA表达均显著增高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);高糖组、高糖+葛根素各浓度组明显低于正常组,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与高糖组比较,高糖+葛根素各浓度组细胞增殖、细胞ALP活性、细胞CollⅠm RNA表达均显著增高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:高糖情况下抑制成骨细胞的增殖、分化和Ⅰ型胶原表达,但加入葛根素后能提高成骨细胞的增殖、分化和Ⅰ型胶原表达,说明葛根素对糖尿病骨质疏松症有治疗作用。     

鹿瓜多肽注射液对大鼠成骨细胞增殖及分化的影响

目的:研究鹿瓜多肽注射液对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响。方法:体外分离、培养SD大鼠成骨细胞,CCK-8法检测成骨细胞增殖活性;碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测成骨细胞ALP活性比;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测成骨细胞Ⅰ型胶原(Col1α1)、骨钙素(Bglap)及Runx-2的表达水平。结果:鹿瓜多肽注射液干预成骨细胞3d,发现鹿瓜多肽注射液组成骨细胞活性较对照组明显增强(P<0.05);在鹿瓜多肽注射液干预细胞后第8天时,鹿瓜多肽注射液组成骨细胞ALP活性较对照组明显增加(P<0.05);鹿瓜多肽注射液组成骨细胞骨钙素及Runx-2表达均较对照组明显增强。结论:鹿瓜多肽注射液能显著促进成骨细胞发育成熟。     

生骨注射液对大鼠成骨细胞BMP-2 mRNA表达影响的实验研究

目的:研究生骨注射液对体外培养的大鼠成骨细胞BMP-2mRNA表达的影响,探讨生骨注射液促进骨折愈合的分子机制.方法:体外培养大鼠成骨细胞,分别给予不同浓度、时间的生骨注射液进行干预实验,然后用RT-PCR技术分别检测各组细胞BMP-2 mRNA的表达,并进行定量分析.结果:在不同浓度时,生骨注射液连续干预至第5 d,以1 mg/ml浓度条件下,BMP-2 mRNA表达最强;而以1 mg/ml生骨注射液干预1～5 d,BMP-2 mRNA的表达随时间逐渐增强.结论:生骨注射液对体外培养的大鼠成骨细胞BMP-2 mRNA表达有明显促进作用,其作用强度随浓度、时间而改变.     

红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响1

目的：研究中药红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法：取SD大鼠48只，随机将大鼠分为A组（空白组）、B组（倍美力组）、C组（普拉固组）、D、E、F组（红曲高、中、低剂量组）六组，按10ml／kg分别予以生理盐水、倍美力水溶液（6.25μg／ml）、普拉固水溶液（0．2mg／m1）及红曲水提液（1．25g／ml、0．625g／ml、0．125g／ml）灌胃。灌骨10天后，制备含药血清；将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中，然后应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果：经过10天红曲水提液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量（P〈0．01或P〈0．05）、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成，作用随红曲剂量的增加而增加。结论：成功地运用血清药理学的方法，模拟了体内的药理环境；证实了红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞增殖。     

酢浆草提取物对成骨细胞增殖及分化的影响

目的:探讨酢浆草水提物对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法:不同质量浓度酢浆草水提物(10,100,200 mg·L-1)作用人成骨肉瘤细胞株SaOS-2后,MTT法测定细胞增殖情况、磷酸对硝基苯酯(PNPP)法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测钙离子(Ca2+)和骨钙素(OTC)的分泌以及用茜素红染色法测定成骨细胞矿化结节数。结果:与空白组比较,酢浆草水提物能明显促进SaOS-2细胞的生长(P<0.01);ALP活性呈时间依赖性增加(P<0.05),以100 mg·L-1剂量组最为显著(P<0.01);增强了细胞分泌Ca2+(P<0.05)和OTC的能力(P<0.01);并且酢浆草中、高剂量组可以明显促进矿化结节形成(P<0.05)。结论:酢浆草水提物在体外可以促进成骨细胞的增殖、分化和矿化,提示酢浆草可能具有促进骨形成的能力。     

淡豆豉异黄酮对大鼠成骨细胞增殖及雌激素受体表达的影响

目的观察淡豆豉异黄酮对大鼠成骨细胞增殖及雌激素受体表达的影响。方法采用改良组织块法分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,分别给予不同质量浓度淡豆豉异黄酮(1、10、100、1 000μg/L)、1 000μg/L淡豆豉异黄酮+10 nmol/L雌激素受体拮抗剂ICI 182780、1 000μg/L大豆异黄酮进行干预,以1 nmol/L 17β-雌二醇作为阳性对照,MTT法检测成骨细胞增殖情况;RT-PCR和Western blot法分别检测成骨细胞ERβmRNA及蛋白表达水平。结果MTT结果显示,淡豆豉异黄酮在1~1 000μg/L范围内促进成骨细胞增殖;RT-PCR和Western blot结果显示,1~1 000μg/L淡豆豉异黄酮上调ERβmRNA及蛋白表达水平。而1 000μg/L淡豆豉异黄酮的上述作用能够被雌激素受体拮抗剂所拮抗。结论淡豆豉异黄酮能够促进大鼠成骨细胞的增殖,此作用可能是通过雌激素受体ERβ途径实现的。     

杜仲叶对SD大鼠成骨细胞增殖及骨钙素表达水平的影响

目的研究不同浓度杜仲叶提取物对成骨细胞增殖及骨钙素表达的影响。方法取新生SD大鼠(24~48 h,6只)通过酶消化法分离出乳鼠原代成骨细胞;用碱性磷酸酶染色进行成骨细胞鉴定;先用无血清无酚红培养基饥饿SD大鼠成骨细胞2h后,再给予五组浓度梯度杜仲提取物(0,1,10,50,100 mg/ml)对SD大鼠成骨细胞进行干预、其中以浓度为0 mg/ml设为对照组,继续培养48 h后用MTT方法检测细胞增殖情况;同上步骤,用Western bolt分别检测五组浓度杜仲叶影响骨钙素(OC)的表达水平。结果碱性磷酸酶染色后的SD大鼠成骨细胞呈紫红色;MTT法结果显示:与对照组相比,杜仲叶提取物对成骨细胞的增殖具有促进作用(P0.05),且具有浓度依赖性,其中浓度以50 mg/ml最为显著(P0.01)。Western bolt结果示各加药组与对照组比较,骨钙素蛋白表达水平均有显著的升高(P0.05),同时也具有一致的浓度依赖性。结论杜仲叶提取物通过影响骨钙素表达对成骨细胞增殖具有促进作用,并具有浓度依赖性。     

染料木素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的:探讨染料木素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,染料木素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果:染料木素在1×10~(-5)～1×10~(-9)mol/L浓度范围内作用24h、48h均能促进成骨细胞增殖,在1×10~(-7)～1×10~(-5)mol/L范围内作用72 h可提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论:染料木素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

异补骨脂素对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化成熟的影响

目的:研究异补骨脂素(Isopsoralen,IP)对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖与分化成熟的影响。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,3 d后首次换液,铺满90%皿底后传代培养;增殖分析采用96孔板,加入在培养液中终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L的异补骨脂素,MTT法分析;分化分析采用24孔板,于成骨性诱导培养第3、6、9、12、15天分别测碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性、钙含量、骨钙素,第12天进行ALP组织化学染色,第14天进行茜素红染色和钙化结节计数。结果:终浓度为1×10-4mol/L的异补骨脂素对细胞增殖有抑制作用,而1×10-5mol/L浓度虽对ROB增殖无明显影响,但能显著提高细胞ALP活性、增加钙含量、促进骨钙素分泌,并增加钙化结节数量。结论1×10-5mol/L异补骨脂素能促进ROB分化成熟,应为中药补骨脂抗骨质疏松的有效成分。     

淫羊藿甙对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的了解淫羊藿甙对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,探讨淫羊藿“补肾壮阳,益精健骨”的作用机制.方法体外培养大鼠成骨细胞,在96孔培养板和24孔培养板内分别加入0.2ml和0.4ml的4×105个/ml细胞,并在相应培养基中加入淫羊藿甙,终浓度分别为20μg/L、40μg/L、60μg/L,不加淫羊藿甙者作为对照.培养24h、48h、72h后检测细胞的增殖能力及碱性磷酸酶的活性.在6孔板内放置盖玻片,每孔内加入1×105个细胞,并加入淫羊藿甙(终浓度为20μg/L),继续培养24h、48h,用于I型胶原蛋白免疫组化研究.结果淫羊藿甙对大鼠成骨细胞的增殖无明显的刺激作用,但能促进成骨细胞合成分泌碱性磷酸酶和I型胶原蛋白.结论淫羊藿甙可促进成骨细胞的分化,使骨形成增加,起到“健骨”的作用.