102例先天性甲状腺功能减低症甲状腺发育不良相关基因突变检测

目的对102例先天性甲状腺功能减低症患儿进行甲状腺发育不良相关基因促甲状腺激素受体(TSHR)、PAX8、NKX2-1、NKX2-5、FOXE-2基因突变分析。方法对102例先天性甲状腺功能减低症患儿采外周血并提取DNA,用wafergen验证检测患儿促甲状腺激素受体(TSHR)、PAX8、NKX2-1、NKX2-5、FOXE-2基因突变。PCR扩增患儿甲状腺发育不良相关基因突变位点所在的基因序列,以DNA测序技术检测基因突变。结果发现5种TSHR基因突变c.154CA[p.Pro52Thr]、c.394GC[p.Gly132Arg]、c.2066TG[p.Val689Gly]、c.1576GA[p.Ala526Thr]和c.2272GA[p.Glu758Lys],2种PAX8基因单核苷酸多态性位点(SNP)rs189229644和rs200138601,未检测到PAX8、NKX2-1、NKX2-5和FOXE-2基因突变。结论中国人群先天性甲状腺功能减低症患儿存在较高频率的促甲状腺激素受体基因突变,值得进一步开展深入研究。     

先天性甲状腺功能减低症一家系TPO基因突变分析

目的对一个有2例患者的先天性甲状腺功能减低症家系进行甲状腺过氧化物酶(TPO)基因突变研究。方法对该家系中4名成员采样并提取DNA,用PCR扩增先证者TPO基因各外显子、外显子-内含子交界区以及3’端和5’端非翻译区,以DNA测序技术检测基因突变,并与该家系中其他成员进行对照分析。结果先证者和其患同病的姐姐为TPO基因c.2268insT突变的纯合子,其父母均为此突变的杂合子。结论 TPO基因突变是中国人群先天性甲状腺功能减低症发生的原因之一。     

先天性甲状腺功能减低症一家系DUOX2基因突变检测

目的对一个先天性甲状腺功能减低症家系进行二元氧化酶2(DUOX2)基因突变研究。方法对该家系中4名成员采样并提取DNA,用wafergen验证检测先证者甲状腺过氧化物酶(TPO)基因、二元氧化酶2(DUOX2)基因和二元氧化酶成熟因子2(DUOXA2)基因。PCR扩增先证者DUOX2基因各外显子、外显子-内含子交界区以及3'端和5'端非翻译区,以DNA测序技术检测DUOX2基因突变,并与该家系中其他成员进行对照分析。结果先证者为DUOX2基因c.3200CT突变和新的c.1708CT突变的复合杂合子,其父亲为c.1708CT突变杂合子,其母亲及胞姐均为c.3200CT突变杂合子。结论 DUOX2基因突变是中国人群先天性甲状腺功能减低症发生的原因之一。     

先天性甲状腺功能减低症一家系DUOXA2基因突变分析

目的对一个先天性甲状腺功能减低症家系进行二元氧化酶成熟因子2(DUOXA2)基因突变研究。方法对该家系中4名成员采样并提取DNA,用wafergen验证检测先证者甲状腺过氧化物酶(TPO)基因、二元氧化酶2(DUOX2)基因和二元氧化酶成熟因子2(DUOXA2)基因。PCR扩增先证者DUOXA2基因各外显子、外显子-内含子交界区以及3′端和5′端非翻译区,以DNA测序技术检测DUOXA2基因突变,并与该家系中其他成员进行对照分析。结果先证者为DUOXA2基因c.413_414ins A突变和c.537CA突变的复合杂合子,其父亲及胞姐均为c.537CA突变杂合子,其母亲为c.413_414ins A突变的杂合子。结论 DUOXA2基因突变是中国人群先天性甲状腺功能减低症发生的原因之一。     

先天性甲状腺功能减退症患儿PAX8基因突变遗传分析

目的 探讨南宁市先天性甲状腺功能减退症壮族患儿PAX8基因突变及其状况.方法 以21例南宁市壮族人群先天性甲状腺功能减退症患儿及其父母为研究对象.经知情同意后,提取患儿及其父母的外周血并提取DNA,用PCR扩增患儿PAX8基因所有11个外显子、外显子一内含子交界区以及3'端和5'端非翻译区,再利用Sanger测序方法对...     

5个表皮松解性掌跖角化症家系的KRT9基因突变谱分析和产前DNA诊断

目的绘制5个表皮松解性掌跖角化症(EPPK)家系的致病突变谱。应其中3个家系的要求,实施相关的产前DNA诊断。方法分别抽取5个家系相关成员的抗凝外周血,纯化基因组DNA。PCR扩增EPPK的主要致病基因角蛋白9(KRT9)的编码氨基酸的全部7个外显子(第1~7外显子)及其相邻DNA区域的序列,Sanger测序鉴定基因突变。用AS-PCR法验证所发现的KRT9基因突变。抽取3个家系的相关孕妇的羊水,纯化胎儿基因组DNA,PCR、Sanger测序和AS-PCR法确定胎儿的KRT9基因型。结果 2个EPPK家系的致病基因KRT9突变为最常见的突变:位于第1外显子的c.487CT(p.Arg163Trp)杂合性错义突变;其余3个家系的杂合性错义突变分别为:c.482AG(p.Asn161Ser)、c.488GA(p.Arg163Gln)和c.566AG(p.Tyr167Cys)。遗憾的是,3个家系的产前DNA诊断均显示胎儿存在对应的KRT9基因突变,表明为患病。结论对于临床上疑似为EPPK的家系,可快速筛查KRT9基因突变,辅助临床精准诊断本病。在首先确定了家系的基因突变谱之后,可行羊膜穿刺术或PGD,以预防EPPK患儿的出生,实现优生优育。     

两例 ELANE基因突变所致先天性中性粒细胞减少症患者的临床及遗传学分析

目的探讨ELANE基因突变所致的先天性粒细胞减少症(congenital neutropenia, CN)的临床特点。方法对两例发生反复感染的CN患儿的临床表现、外周血中性粒细胞计数、高通量全外显子组测序结果进行回顾, 对疑似位点通过Sanger测序进行验证。结果全外显子组测序发现先证者1ELANE基因第2外显子存在c.170C>T(p.Ala57Val)错义突变;先证者2ELANE基因第3外显子存在c.251T>G(p.Leu84Arg)错义突变, 既往未见报道。Sanger测序提示两例患儿的父母均未携带上述突变。结论 ELANE是CN的重要致病基因, 新致病变异的检出丰富了其突变谱。     

先天性甲状腺功能减退伴甲状腺肿大患儿DEHAL1基因突变研究

目的研究山东地区先天性甲状腺功能减退伴甲状腺肿大患儿碘化酪氨酸脱碘酶（iodotyrosine deiodinase,DEHAL1）基因突变类型及特点,为基因诊断提供理论依据。方法对18例经新生儿筛查确诊为先天性甲减伴甲状腺肿大患者,采用PCR扩增与直接测序的方法,对DEHAL1基因全部外显子进行基因突变检测。结合测序验证及生物信息学分析,探讨山东地区先天性甲状腺功能减退伴甲状腺肿大患者常见的DEHAL1基因突变类型和特点。结果在18例先天性甲减伴甲状腺肿大患者中,均没有发现DEHAL1基因全部外显子基因突变。分别在5例患者中和4例患者中发现DEHAL1c.678 T〉C（p.C265R）和DEHAL1 c.679 G〉A（p.R265H）两个单核苷酸多态性位点。结论山东地区先天性甲减伴甲状腺肿大患者中,DEHAL1基因突变率低,可能不是该地区先天性甲减伴甲状腺肿大的主要病因。     

一例异丁酰辅酶A脱氢酶缺乏症患儿的临床及基因变异分析

目的分析异丁酰辅酶A脱氢酶缺乏症患儿的临床和基因突变特点。方法收集1例新生儿串联质谱筛查发现的可疑异丁酰辅酶A脱氢酶缺乏症患儿的临床资料,采用基于高通量测序技术的基因Panel进行致病基因突变检测。结果串联质谱检测C4升高(波动于0.57～0.68μmol/L之间,参考值:0.08～0.43μmol/L),C4/C3升高(波动于0.44～0.73μmol/L,参考值0.05～0.39μmol/L),C4/C2升高(波动于0.04～0.07μmol/L,参考值0.01～0.04μmol/L),无特殊临床症状。基因检测示ACAD8基因第4外显子c.444GT(p.Pro148Pro)及第10外显子c.1166GA(p.Arg389Gln)复合杂合突变,其父携带c.444GT突变,其母携带c.1166GA突变。其中c.1166GA为文献未报道过的新突变。结论 ACAD8基因复合杂合突变是本例患儿的遗传学病因,新突变的检出丰富了基因突变谱。     

先天性甲状腺功能减退症患儿FOXE1基因突变研究

目的研究山东地区先天性甲状腺功能减退症(CH)伴甲状腺发育不全患儿转录因子2(FOXE1)基因突变类型及特点,为CH的诊断及治疗提供理论依据。方法选取60例CH伴甲状腺发育不全患儿,提取外周静脉血基因组DNA,采用PCR扩增与直接测序技术,对FOXE1基因全部编码序列进行突变筛查。结果在60例先天性甲状腺功能减退症伴甲状腺发育不全患者外显子测序中未发现基因突变位点,在6例患者中发现1个单核苷酸多态性(SNP)位点(rs755282859,c.483GA),变异频率为10%。结论 FOXE1基因突变率较低,可能不是山东地区CH伴甲状腺发育不全的主要原因。     

RNASEH2C基因复合杂合变异所致艾卡迪综合征3型患儿1例的临床及遗传学分析

目的探讨1例RNASEH2C基因变异所致Aicardi-Goutières综合征3型(AGS 3)患儿的临床特征与遗传学病因。方法选取2021年3月27日于湖南省儿童医院就诊的1例AGS3患儿为研究对象。对患儿及其父母进行家系全外显子组测序, 并利用Sanger测序对候选变异进行验证。对变异进行晶体结构模拟分析, 并构建质粒进行蛋白表达。通过检索文献, 总结AGS 3型的表型与遗传学特点。结果患儿RNASEH2C基因存在复合杂合变异c.494G>C(p.Ter165Ser)(父源)与c.434G>T(p.Arg145Leu)(母源), 既往均未见报道。蛋白结构预测分析c.434G>T(p.Arg145Leu)变异可能破坏局部结构的稳定性, 体外功能实验表明该变异将导致蛋白表达降低。c.494G>C(p.Ter165Ser)变异破坏了终止密码子, 导致蛋白产物延长。结论本研究发现了两个RNASEH2C基因的新变异, 进一步丰富了AGS 3型的表型与变异谱。     

九例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者的分子发病机制与临床特性

目的 探讨9个遗传性凝血因子Ⅶ( coagulation factorⅦ,FⅦ)缺陷症家系的基因突变类型与临床特征.方法 检测凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间及FⅦ活性和抗原等指标以明确诊断;用PCR法扩增先证者F7基因的全部外显子及侧翼序列、5′和3′非翻译区.PCR产物纯化后直接测序,寻找基因突变,用反向测序证实所发生的突变.结果 9个家系中的先证者凝血酶原时间均延长,FⅦ活性在2.0％～6.0％之间,7例先证者的FⅦ抗原显著减低.共发现8种F7基因突变,其中g.8355 A＞T(Gln100Leu)、g.11243T＞C(Ser269Pro)和g.11520_11521insT 3种突变为首次发现;6种突变发生在催化区;缺失突变和插入突变各1种,其余均为错义突变;所有的基因突变均来自先证者的父亲和(或)母亲,发现5个家系存在近亲婚配.g.27_28delCT、Cys329Gly、Arg304Trp和His348Gln突变在无亲缘关系的家系中重复出现.不同基因突变类型的临床表型有较大差异:2例His348Gln及1例Arg304Trp纯合突变可表现为轻型和无症状,2例g.27_28delCT纯合、杂合突变分别表现为中型、无症状,4例双杂合突变分别表现为1例(Ser269Pro和Cys329Gly)无症状、2例(Arg304Trp和Cys329Gly与Arg277Cys和g.11520_11521insT)轻型、1例(Gln100Leu和His348Gln)中型.结论 中国汉族人群中存在导致F7基因缺陷的突变热点.遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者的临床表型与FⅦ活性、F7基因突变类型无明显的相关性.     

一例NEDD4L基因变异引起脑室旁结节状灰质异位7型患儿的临床与遗传学分析

目的对1例临床表现为全面发育迟缓、智力低下、腭裂、癫痫及四肢肌张力低下的患儿进行全外显子组测序分析,以明确其遗传学病因。方法抽取患儿及其父母外周血,提取全基因组DNA,应用二代测序技术对全外显子组基因进行变异检测、生物信息学预测分析及Sanger测序验证。结果测序结果显示患儿NEDD4L基因发生c.2117T>C(p.Leu706Pro)杂合变异,经Sanger验证患儿父母未检出该变异,为一新发变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)的指南预测c.2117T>C为疑似致病性变异。结论NEDD4L基因c.2117T>C(p.Leu706Pro)变异可能为患儿的遗传学病因。     

一例基因变异引起脑室旁结节状灰质异位7型患儿的临床与遗传学分析

目的 对1例临床表现为全面发育迟缓、智力低下、腭裂、癫痫及四肢肌张力低下的患儿进行全外显子组测序分析,以明确其遗传学病因。方法 抽取患儿及其父母外周血,提取全基因组DNA,应用二代测序技术对全外显子组基因进行变异检测、生物信息学预测分析及Sanger测序验证。结果 测序结果显示患儿NEDD4L基因发生c.2117T>C(p.Leu706Pro)杂合变异,经Sanger验证患儿父母未检出该变异,为一新发变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)的指南预测c.2117T>C为疑似致病性变异。结论 NEDD4L基因c.2117T>C(p.Leu706Pro)变异可能为患儿的遗传学病因。     

先天性甲状腺功能减退症一家系的临床表型和DUOX2基因突变分析

目的对一个先天性甲状腺功能减退症(congenital hypothyroidism,CH)家系进行患儿临床特征描述及相关致病基因突变分析,从遗传学角度明确其发病原因。方法采用二代测序(NGS)方法对该家系的就诊患儿进行甲状腺功能减退症相关致病基因突变检测,检出可疑致病位点后再结合PCR和Sanger测序在家系内进行遗传共分离验证。结果检测到就诊患儿在DUOX2基因上携带父源性c.3329GA(p.R1110Q)突变和母源性c.1873CT(p.R625X)突变,患儿姐姐也携带有相同的两个突变位点,该家系符合常染色体隐性遗传的遗传规律。DUOX2基因的c.3329GA(p.R1110Q)已有多篇文献报道为致病突变,c.1873CT(p.R625X)为首次报道的可疑致病突变。结论 DUOX2基因是该家系的致病基因,NGS结合Sanger测序可以快速准确的对该病进行基因突变检测,也可以为该家系的产前诊断提供可靠依据。     

ED1基因新突变导致无汗型外胚层发育不良

目的鉴定一个无汗型外胚层发育不良(HED)家系ED1基因的突变及探讨基因型与表型之间的关系,为该病的诊断,产前诊断及遗传咨询提供实验依据。方法对一个HED家系进行调查,临床资料收集及采集外周血,抽取基因组DNA;设计ED1基因外显子引物,行先证者DNA PCR扩增及序列测定,发现候选变异后对先证者的父母及120名匹配正常人进行突变位点序列分析;推导的该基因氨基酸序列(突变位点)用Clustal W软件进行多物种对比。结果先证者发现ED1基因c.158T>G(p.Leu53Arg)纯合突变,母亲为c.158T>G(p.Leu53Arg)杂合突变;先证者父亲及120例正常对照的序列分析结果未检测出相应位置突变。讨论 ED1基因突变检测是直接诊断HED有效手段之一,发现的c.158T>G(p.Leu53Arg)为新致病突变。     

一例Crigler-Najjar综合征Ⅱ型患儿的基因突变分析北大核心CSCD

目的对1例Crigler-Najjar综合征Ⅱ型患儿的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）基因进行突变分析,探讨其分子发病机制,为家系的遗传咨询及产前基因诊断提供依据。方法抽取患儿及其父母的外周静脉血提取基因组DNA,应用聚合酶链反应扩增UGT1A1基因的相应片段,经DNA测序法对UGT1A1基因进行突变检测,并随访患儿至3岁6个月。结果患儿为持续高未结合胆红素血症,DNA测序结果显示患儿UGT1A1基因的第1外显子存在c．610A〉G（p．Met 204 Val）杂合突变,第4外显子存在c．1091C〉T（p．Pro 364 Leu）杂合错义突变,患儿为UGT1A1基因复合突变杂合子。患儿父亲UGT1A1基因的第4外显子存在C．1091C〉T（p．Pro 364 Leu）的杂合错义突变,患儿母亲UGT1A1基因的第1外显子存在c．610A〉G（p．Met204 Val）杂合错义突变。结论UGT1A1基因第1外显子c．610A〉G、第4外显子c．1091C〉A复合杂合突变为该患儿的发病原因,为其家系的遗传咨询和产前基因诊断提供了依据。     

DUOX2基因突变引起先天性甲状腺功能减低伴甲状腺肿大的研究

目的研究先天性甲状腺功能减退(CH)患者DUOX2基因突变情况及基因型与表现型的关系。方法对10例CH患者伴甲状腺肿大的DUOX2基因的全部外显子进行基因突变筛查。结果在1例CH患儿中发现DUOX2基因单个等位基因的杂合性突变,为第17外显子cDNA的2101位点发生了C>T的突变(c.C2101T),导致第701密码子精氨酸变为终止密码(p.R701X)。结论我们的结果证实了DUOX2基因单个等位基因突变可引起CH伴甲状腺肿大。     

一例二氢嘧啶酶缺陷症患儿的基因变异分析

目的对1例二氢嘧啶酶缺陷症患儿进行基因变异分析, 探讨其可能的分子遗传学病因。方法收集先证者及其家系成员外周血, 提取基因组DNA, 应用全外显子测序技术确定致病基因, 并用Sanger测序进行验证。结果测序结果显示患儿的DPYS基因存在第5外显子c.905G>A(p.Arg302Gln)纯合变异, 父母均为c.905G>A(p.Arg302Gln)杂合变异携带者。结论 DPYS基因c.905G>A纯合变异可能是该家系患儿的致病原因, 致病变异的检出为家系的遗传咨询和产前诊断提供了依据。     

宁波地区先天性甲状腺功能减低症相关基因筛查情况分析

目的 了解宁波市新生儿先天性甲状腺功能减低症基因筛查情况。方法 收集2021年宁波市出生的2060例活产新生儿的足跟血,进行生化筛查以及干血斑DNA提取,应用靶向高通量测序技术对候选致病基因（DUOX2、DUOXA2、TG、TSHR、TSHB、THRA、THRB、TPO、PAX8）进行联合筛查,并分析筛查结果。结果 2060例活产新生儿中发现98例新生儿为携带者,携带率约4.75%(98/2060),本研究中候选基因携带率由高到低分别为DUOX2基因3.93%(81/2060)、DUOXA2基因0.73%(15/2060)、TG基因0.05%(1/2060)以及TSHR基因0.05%(1/2060),未筛查出携带TSHB基因、THRA基因、THRB基因、TPO基因、PAX8基因的新生儿,考虑与样本量不足有关,其中有2例携带DUOX2基因的新生儿,根据其TSH值临床确诊为先天性甲状腺功能减低症。结论 宁波地区新生儿基因筛查联合促甲状腺素值可以了解先天性甲状腺功能减低症人群基因突变率、携带率,为宁波地区制定最佳筛查及确诊方案提供依据,目前发现的致病基因及其致病位点可为未来的基因治疗提供一定...