麝香配伍冰片对缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响

目的 研究大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的损伤及麝香配伍冰片对血脑屏障的影响.方法 采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血2 h再灌注24 h、48 h模型,比较各组神经功能评分,用实时荧光定量PCR方法 检测各组脑组织情况.结果:再灌注24 h时麝香配伍冰片组、麝香组、尼莫同组积分下降明显,再灌注48h时麝香配伍冰片组、安宫牛黄丸组积分较相应模型组积分下降明显(均P ＜0.01);麝香配伍冰片组、安宫牛黄丸组可显著降低脑组织中ICAM-1 mRNA、LFA-1 mRNA的表达(P ＜0.01),冰片组ICAM-1 mRNA和再灌注48h时LFA-1mRNA也有明显降低(P ＜0.05);麝香配伍冰片组、安宫牛黄丸组、冰片组脑组织MMP-9 mRNA表达均受到明显抑制;三组TIMP-1 mRNA表达明显升高,再灌注24h时麝香组也有相同变化趋势;麝香配伍冰片组、安宫牛黄丸组、冰片组脑组织AQP-4 mRNA的表达受到明显抑制.结论麝香配伍冰片可以通过抑制ICAM-1 mRNA、LFA-1 mRNA、MMP-9 mRNA和AQP-4 mRNA 的表达,提高TIMP-1 mRNA的表达来减轻血脑屏障损伤,这可能是芳香开窍药醒脑开窍的机理.     

清肠化湿方对溃疡性结肠炎湿热证小鼠NLRP6蛋白及相关炎症因子表达的影响

目的探讨清肠化湿方对溃疡性结肠炎(UC)湿热证小鼠NLRP6蛋白及相关炎症因子和紧密连接蛋白Claudin-2、Claudin-5的影响。方法 60只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白组,模型组,美沙拉嗪组,低、中、高剂量中药组。除空白组外,其余小鼠置于高温、高湿环境,喂养高糖高脂饲料,饮用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)蒸馏水1周造成UC湿热证模型。低、中、高剂量中药组分别予浓度8.125、16.250、32.500 g/(kg·d)清肠化湿方灌胃,美沙拉嗪组小鼠予美沙拉嗪溶液灌胃,空白组和模型组给予相同体积的生理盐水灌胃。灌胃7天,观察小鼠的一般情况、体重、粪便性状及隐血情况,进行DAI评分,记录小鼠每小时排出的湿粪粒数以及湿粪重量,测量小鼠结肠长度。HE染色观察结肠病理情况; Western Blot法检测结肠NLRP6、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白(Caspase-1)、紧密连接蛋白(Claudin-2)、Claudin-5表达水平;ELISA法检测血清白细胞介素-18(IL-18)、IL-1β含量;Real-time PCR法检测结肠NLPR6、caspase-1、Claudin-2、Claudin-5 mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠DAI评分升高(P0.01),结肠长度变短(P0.01);结肠黏膜病理受损严重;NLRP6、Claudin-5蛋白表达降低(P0.05),Caspase-1、Claudin-2蛋白表达增加(P0.05,P0.01);血清中炎症因子IL-1β含量增高(P0.05);NLRP6、Claudin-5 mRNA表达降低(P0.01),Caspase-1、Claudin-2 mRNA表达增加(P0.05,P0.01)。与模型组比较,美沙拉嗪组、中剂量中药组DAI评分降低(P0.01),结肠长度增长(P0.01)、病理情况改善;中剂量中药组NLRP6、Claudin-5蛋白表达上调(P0.05),各治疗组Caspase-1蛋白表达减少(P0.05),美沙拉嗪组及中、高剂量中药组Claudin-2蛋白表达减少(P0.01);美沙拉嗪组及低、中剂量中药组血清IL-1β含量降低(P0.05,P0.01),美沙拉嗪组、高剂量中药组NLRP6 mRNA表达上调(P0.01,P0.05),各治疗组Caspase-1 mRNA表达下调(P0.05),美沙拉嗪组及中、高剂量组Claudin-2 mRNA表达下调,中、高剂量组Claudin-5 mRNA表达上调(P0.05)。结论清肠化湿方能够调节NLRP6蛋白及相关炎症因子、紧密连接蛋白表达水平,从而减轻肠道炎症反应,缓解肠黏膜损伤。     

益气解毒活络中药组分配伍对高糖高脂环境下人肾小球系膜细胞PPAR-γmRNA及蛋白表达的影响

目的:观察益气解毒活络中药组分配伍对高糖高脂环境下人肾小球系膜细胞PPAR-γmRNA及蛋白表达影响,探讨益气解毒活络中药有效成分防治糖尿病肾病的可能机制。方法:体外培养人肾小球系膜细胞株(GMC),分为正常对照组,高糖高脂模型组、中药组(第1组、第2组、第3组),qRT-PCR法检测各组24、48 h PPAR-γmRNA的表达,WesternBlot法检测各组24、48 h PPAR-γ蛋白活性的表达。结果:(1)各组24、48 h PPAR-γmRNA表达比较:24 h:与正常组比较模型组及中药配伍组均有显著差异(P0.01),与模型组比较各中药配伍组PPAR-γmRNA表达均明显上升,且有显著差异(P0.01),各中药配伍组组间比较发现第1组PPAR-γmRNA表达最高(P0.01)。48 h:与正常组比较除去第1组未见明显差异(P0.05),模型组及其余各用药组均有显著差异(P0.01);与模型组比较各中药配伍组PPAR-γmRNA表达均明显上升,且有显著差异(P0.01);各中药配伍组组间比较发现第1组PPAR-γmRNA表达最高(P0.01)。正常组24、48 h两时间点PPAR-γmRNA表达未见显著差异(P0.05),模型组及第1、2、3组48h PPAR-γmRNA表达显著高于24 h PPAR-γmRNA表达(P0.01)。(2)各组24、48h PPAR-γ蛋白表达比较:GMC细胞24 h PPAR-γ蛋白表达比较:模型对照组PPAR-γ蛋白低表达,各中药配伍组均能够调高PPAR-γ的表达,各中药配伍组组间比较发现第1组调高PPAR-γ作用最显著。GMC细胞48 h PPAR-γ蛋白表达比较:模型对照组PPAR-γ蛋白低表达,各中药配伍组均能够调高PPAR-γ的表达,各中药配伍组组间比较发现第1组调高PPAR-γ作用最显著。结论:益气解毒活络中药有效成分可能是通过上调PPAR-γ表达水平的作用来保护受损的GMC,从而起到减缓糖尿病肾病病程进展,保护受损肾脏的作用。     

麝香配伍乳香对慢性前列腺炎小鼠PKA及PKC表达的影响

目的探讨麝香、乳香及其配伍使用对慢性前列腺炎小鼠的干预效果及其对紧密连接蛋白的磷酸化关键通路蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)、蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)水平的影响。方法除空白对照组外,其余各组先造模成功,然后随机分为模型组、麝香组、乳香组、麝香-乳香组、高剂量麝香-乳香组5组,每组6只。使用双重免疫佐剂配合SD大鼠前列腺蛋白提纯液对造模组所有NOD小鼠进行免疫诱导,建立慢性前列腺炎模型。各组分别予相应药物连续灌胃7天后予以脱颈处死,解剖分离出小鼠前列腺组织,采用HE染色法观察前列腺组织病理改变,采用荧光免疫双标检测前列腺组织中PKC、PKA的表达情况。结果肉眼大体观:解剖时可见模型组小鼠前列腺组织腺体呈深红色,质地韧,与周围组织有粘连。病理结果:显微镜下主要表现前列腺腺腔扩张,多数腺腔内可见炎细胞,以淋巴细胞和单核细胞的浸润为主,与正常组对比,模型组前列腺组织病理表现差异显著,表明造模成功。炎症细胞浸润情况:空白组无浸润,模型组最为明显,其他各组经不同药物干预后,表现为麝香组、乳香组、麝香-乳香组及高剂量麝香-乳香组依次递减的规律。PKC及PKA水平:与空白组比较,模型组PKA及PKC水平差异具有统计学差异(P0.05);与模型组比较,麝香组、乳香组、麝香-乳香组、高剂量麝香-乳香组PKA、PKC水平差异具有统计学差异(P0.05);与麝香组及乳香组比较,麝香-乳香组PKA、PKC水平差异具有统计学差异(P0.05);不同浓度麝香-乳香联合使用具有增强调节的功效,组间比较差异具有统计学意义(P0.05),表现为浓度依赖性。结论麝香、乳香影响紧密连接蛋白的水平可能通过影响PKA、PKC蛋白水平的而发挥作用,麝香配伍乳香具有增效作用。     

电针调控SAMP8小鼠血脑屏障增强盐酸多奈哌齐对β-淀粉样蛋白的清除

目的:观察电针对快速老化(SAMP8)小鼠血脑屏障中β-淀粉样蛋白(Aβ)代谢途径相关因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)、P糖蛋白(Pgp)、紧密连接蛋白Claudin-5的调控,探讨电针加强盐酸多奈哌齐清除Aβ的机制。方法:30周龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组、药物组、针药组,每组6只,以6只同周龄抗快速老化SAMR1小鼠作为对照组。药物组采用盐酸多奈哌齐灌胃,1.3 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续4周;针药组在药物组的基础上予"印堂""百会"穴电针治疗,每次15 min,频率2 Hz,电流1 mA,每日1次,每周6次,连续4周。运用Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力及空间探索能力的变化;HE染色观察各组小鼠海马区神经元形态;实时荧光定量PCR法检测小鼠海马区MMP9、LRP-1、Pgp、Claudin-5、AβmRNA相对表达量。结果:与对照组相比,模型组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P0.01),穿越原平台次数明显减少(P0.01),海马神经元结构形态发生明显改变,MMP-9、AβmRNA表达水平明显增加(P0.01),LRP-1、Pgp、Claudin-5 mRNA表达水平明显下降(P0.01)。与模型组相比,药物组、针药组逃避潜伏期均明显缩短(P0.01,P0.05),穿越原平台次数明显增加(P0.01),海马神经元细胞排列规则整齐、细胞层数明显增加,AβmRNA表达水平明显下降(P0.01),LRP-1、Pgp mRNA表达水平明显上调(P0.05,P0.01);针药组MMP-9 mRNA表达水平明显下降(P0.01),Claudin-5 mRNA表达水平明显上调(P0.01)。与药物组相比,针药组逃避潜伏期从第4天开始明显缩短(P0.05,P0.01),穿越原平台次数明显增高(P0.01),海马神经元损伤减轻,MMP-9、AβmRNA表达水平明显下降(P0.01),LRP-1、Pgp、Claudin-5 mRNA表达水平明显上调(P0.01)。结论:电针可能通过下调MMP-9,上调LRP-1、Pgp、Claudin-5增强盐酸多奈哌齐对Aβ在血脑屏障中的转运,从而增强盐酸多奈哌齐治疗阿尔茨海默病的效果。     

益气养阴活血通络法干预肺成纤维细胞TGF-β1/Smads信号传导通路的机制

目的:探讨益气养阴活血通络法调控肺成纤维细胞转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/Smads信号传导通路机制。方法:SPF级雄性Wistar大鼠30只,采用随机数字法,将30只大鼠随机分为3组,中药含药血清组,西药含药血清组,正常血清组,第4天末次给药后提取含药血清。气管内注入博来霉素造肺纤维化大鼠动物模型,采用胰蛋白酶消化液消化法培养肺成纤维细胞。细胞分为模型组,中药组,西药组,抑制剂组。免疫荧光法鉴定肺成纤维细胞,并分别于第24,48,72 h取材,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β_1,Smad2,Smad4,Smad7 mRNA的表达及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:第24,48,72 h检测结果显示,与模型组比较,中药组、西药组、抑制剂组细胞内TGF-β_1,Smad2,Smad4 mRNA表达水平明显下调(P0.01);第24 h西药组TGF-β_1mRNA表达水平明显低于中药组(P0.05);第48,72 h检测结果均显示与中药组比较,西药组、抑制剂组TGF-β_1mRNA表达水平均明显下调(P0.05,P0.01);第24,48 h检测结果显示与模型组比较,中药、西药、抑制剂各组细胞内Smad2 mRNA表达水平下调明显(P0.01);中药组、西药组、抑制剂组3者表达水平相近,无统计学意义。第72 h检测结果显示与中药组比较,西药组、抑制剂组Smad2 mRNA表达水平均明显下调(P0.05);第24,48,72 h检测结果均显示与中药组比较,西药组、抑制剂组Smad7 mRNA表达水平均明显下调(P0.01)。第24,48,72 h检测结果均显示与模型组比较,中药组、西药组与抑制剂组凋亡率明显上调(P0.01);中药组细胞凋亡率明显高于抑制剂组(P0.01)。结论:益气养阴活血通络法可能通过下调肺成纤维细胞TGF-β_1,Smad2,Smad4含量和上调Smad7含量调控TGF-β_1/Smads信号通路,从而延缓特发性肺纤维化(IPF)进展。     

电针对脑梗死大鼠脑血管内皮细胞Apelin-APJ系统的影响

目的:观察脑梗死后调控血管发生通路上关键因子APJ及其配体Apelin的变化规律及针刺对其干预效应规律。方法:Wistar大鼠随机分为模型组(90只),电针组(90只),假手术组(90只)和空白组(10只),前3组又分为大脑中动脉阻滞(MCAO)后1、3、6、9、12、24h,3、7、12d共9个时相组,每组10只。各电针组电针"水沟"穴20min,1、3、6、9、12、24h组造模后即刻治疗1次,并于相应时点取材,3、7、12d组每日治疗1次,末次治疗结束后取材。应用实时荧光定量法(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑血管内皮细胞Apelin、APJ mRNA及蛋白表达的变化。结果:与空白组相比,假手术组Apelin和APJ mRNA表达量差异无统计学意义(P0.05)。与假手术组比较,模型组12h、12dApelin和APJ mRNA表达下调(P0.05,P0.01)。与同时相模型组比较,电针组Apelin mRNA在12h、7d的表达量上调(P0.01);电针组APJ mRNA在6、9、12h的表达量上调(P0.05,P0.01)。与空白组相比,假手术组Apelin和APJ蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。与假手术组比较,模型组Apelin蛋白表达量1、3、6、24h及3、7、12d下调(P0.01,P0.05),模型组APJ蛋白表达量1、3、6、9h及3d下调(P0.01,P0.05)。与同时相模型组比较,电针组Apelin蛋白表达在6、24h及3、7、12d均上调(P0.05,P0.01),电针组APJ蛋白表达量于1、9、12、24h及3、7、12d上调(P0.05,P0.01)。结论:电针可上调MCAO大鼠脑血管内皮Apelin-APJ mRNA及蛋白的表达,这对于脑缺血后血管新生及侧支循环的建立有重要作用。     

活血方对月经出血模型小鼠子宫内膜NF-κB通路与金属基质蛋白酶的影响

目的 探讨活血方对子宫内膜崩解的影响及可能作用机制.方法 将130只C57BL/6J雌性小鼠随机分为假手术组10只、模型组60只、中药组60只.模型组与中药组均采用激素序贯处理复制小鼠月经出血模型,并对左侧宫腔诱导蜕膜化.从造模第9天中药组灌胃活血方20g/(kg·d),假手术组与模型组给予等量的生理盐水.在孕酮撤退后0、8、12、16、24、32h分别于两组中选取一定只数小鼠进行阴道涂片检测,观察小鼠子宫内膜崩解脱落情况,HE染色观察双侧子宫角的病理变化并计算子宫系数,免疫组织化学法检测子宫组织MMP3、MMP9、P50、P65表达,Real-time PCR检测左侧子宫组织MMP3 mRNA、MMP9 mRNA的表达,Western blot方法检测左侧子宫组织MMP3、MMP9蛋白表达与P50、P65核蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组小鼠子宫左侧有明显病理改变,从12h出血小鼠比率增加,左侧子宫系数明显增加(P＜0.05);与模型组比较,中药组的出血时程明显缩短,在0、8、12h左侧子宫系数增加、32h降低(P＜0.05).与模型组比较,中药组左侧子宫组织MMP3 mRNA、MMP9 mRNA 0～32 h表达均明显上调(P＜0.05);MMP3及MMP9蛋白在0～12h显著升高,32h显著下调(P＜0.05);与模型组比较,中药组小鼠左侧子宫组织P50核蛋白在0、12h显著上调,在8、16、24、32h显著下调(P＜0.05);P65核蛋白在0、12、24h显著上调,在32 h显著下调(P＜0.05或P＜0.01). 结论 活血方可缩短子宫内膜崩解时程,其机制可能与调节崩解相关因子MMP3、MMP9的表达及NF-κB信号通路的快速激活与及时关闭相关.     

制川乌、白芍配伍对大鼠海马区P-糖蛋白表达的影响

目的考察制川乌、白芍配伍对大鼠海马区P-糖蛋白表达的影响。方法 24只大鼠随机均分为正常组、制川乌组、白芍组、配伍组,给予相应药物凝胶14 d,RT-PCR法检测海马区Mdr1a mRNA表达,Western blot法检测P-糖蛋白表达。另取28只大鼠随机均分为上述4组,给药后尾静脉注射罗丹明123,荧光分光光度法检测罗丹明123在大脑及血浆中的含有量,计算通透指数Kp。结果与正常组比较,制川乌组、白芍组均可显著下调P-糖蛋白表达(P0.05,P0.01),并且前一组对Mdr1a mRNA表达也有显著抑制作用(P0.01)。与制川乌组比较,配伍组Mdr1a mRNA、P-糖蛋白表达均显著增加(P0.05,P0.01);与白芍组比较,配伍组两者表达均呈降低趋势,但无显著差异(P0.05)。与正常组比较,仅制川乌组通透指数Kp显著增加(P0.05)。结论制川乌、白芍配伍后,可降低前者对P-糖蛋白表达的抑制作用而减毒增效。     

滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠肠黏膜屏障的调控作用

目的观察脾阴虚状态下肠黏膜屏障的改变及滋补脾阴方药的调控作用。方法将SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组(简称C组)6只和模型组(简称M组)14只。采用饮食不节与劳倦过度结合耗伤阴液法建立脾阴虚大鼠模型。脾阴虚造模后将M组随机分为脾阴虚组(简称S组)和滋补脾阴方药组(简称Z组)。每周收集粪便进行16S rRNA测序。采用qPCR技术检测空肠Claudin-1、Occludin、ZO-1 mRNA水平;Western Blot法检测空肠Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达;ELISA法检测肠道炎症因子水平。结果在门水平上,S组较C组厚壁菌门比例增加(P0.05),拟杆菌门下降(P0.05),Z组较S组厚壁菌门减少(P0.01),拟杆菌门增加(P0.01);在属水平上,S组较C组乳杆菌属和Paraprevotella属比例升高(P0.05,P0.01),瘤胃球菌属和粘放线菌属下降(P0.01,P0.05);Z组比较于S组乳杆菌属比例明显减少(P0.0001),瘤胃球菌属和粘放线菌属增加(P0.05,P0.01),Paraprevotella属呈下降趋势(P0.05)。与C组比较,S组空肠Claudin-1 mRNA和蛋白表达下降(P0.05,P0.01),Occludin mRNA和蛋白表达降低(P0.01),ZO-1 mRNA和蛋白表达呈降低趋势(P0.05);与S组比较,Z组Claudin-1 mRNA和蛋白水平升高(P0.01),Occludin mRNA和蛋白表达增加(P0.05),ZO-1 mRNA和蛋白水平呈上升趋势。S组空肠IFN-γ和IL-17含量较C组增加(P0.001),sIgA、TGF-β、IL-4与IL-10水平下降(P0.01,P0.001);Z组较S组IFN-γ、IL-17含量减少(P0.001,P0.01),sIgA、TGF-β、IL-4与IL-10含量升高(P0.01,P0.001)。结论滋补脾阴方药能够调节肠道菌群中厚壁菌门、拟杆菌门、瘤胃球菌属、乳酸杆菌属与粘放线菌属比例,增加Claudin-1、Occludin mRNA和蛋白表达,并调节Th1/Th2、Th17/Treg细胞分泌的细胞因子水平,改善脾阴虚大鼠肠黏膜生物屏障、机械屏障及免疫屏障的异常变化。     

糖肾清2号对糖尿病肾病模型小鼠免疫炎性分子的调节作用

目的探讨糖肾清2号抑制糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠免疫炎性损伤的分子机制。方法将30只健康雄性KK-Ay小鼠,予高脂饲料诱导3周制备DN模型,随机分为模型组、缬沙坦组、糖肾清2号大、中、小剂量组,每组6只,另设6只C57BL/6J小鼠为正常组,正常组及模型组予去离子水0.1mL/(10g·d)灌胃;缬沙坦组给予缬沙坦13.33mg/(kg·d)灌胃;糖肾清2号大、中、小剂量组分别按含生药量40.66,20.33,10.17g/(kg·d)剂量灌胃。各组小鼠1次/d灌胃,连续干预12周。采用RT-PCR技术检测肾脏组织IL-1β、iNOS、MCP-1mRNA转录水平。Western blot技术、免疫组化测定肾脏组织iNOS蛋白表达水平。ELISA法检测血清IL-1β、MCP-1蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组IL-1β、MCP-1、iNOS mRNA转录及蛋白表达水平显著上调(P0.01,P0.05)。与模型组比较,缬沙坦组、中药各组IL-1β、MCP-1mRNA转录及蛋白表达水平显著下调(P0.01,P0.05);缬沙坦组、中药大剂量组iNOS mRNA转录水平及蛋白表达水平显著下调(P0.01,P0.05),中药中剂量组iNOS mRNA转录水平显著下调(P0.01)。与中药小剂量组比较,中药大剂量组iNOS mRNA转录水平及蛋白表达水平显著下调(P0.01,P0.05),中药中剂量组iNOS mRNA转录水平显著下调(P0.01)。结论糖肾清2号改善DN肾组织免疫炎性损伤的分子机制可能与抑制IL-1β、iNOS、MCP-1的生物活性有关。     

不同刺灸法对功能性便秘大鼠结肠组织肠神经相关蛋白表达的影响

目的:比较手针、电针和艾灸对功能性便秘大鼠结肠组织肠神经活动相关蛋白降钙素基因相关肽(CGRP)、瞬时感受器电位香草素受体1(TRPV 1)、蛋白酶激活受体-4(PAR-4)表达的影响。方法:60只SD大鼠随机分为空白对照组(8只)、模型组(11只)、西沙必利组(8只)、手针组(11只)、电针组(11只)和艾灸组(11只)。以盐酸洛哌丁胺混悬液连续灌胃6d制备功能性便秘模型。西沙必利组和3个刺灸干预组分别于每日灌胃后1h给予相应干预:西沙必利组予西沙必利混悬液3mg/kg灌胃;其余3组分别采用手针、电针和艾条温和灸的方法对大鼠"天枢""上巨虚"穴干预15min,连续6d。计量第6天24h粪便量,采用炭餐指示剂进行小肠推进率实验,分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot技术检测结肠组织CGRP、TRPV 1、PAR-4mRNA及其蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型组24h粪便量、小肠推进率显著降低(P0.01);与模型组比较,西沙必利组、手针组、电针组的粪便量和小肠推进率均升高(P0.05,P0.01),艾灸组小肠推进率也升高(P0.01);与西沙必利组及电针组比较,手针、艾灸两组的小肠推进率均降低(P0.01)。与空白对照组比较,模型组CGRP、TRPV 1、PAR-4蛋白及mRNA表达水平均升高(P0.01);与模型组比较,各治疗组蛋白及mRNA表达水平除艾灸组CGRP外其余均降低(P0.05,P0.01);与西沙必利组比较,艾灸组3种蛋白表达水平均升高(P0.05,P0.01),3个刺灸干预组PAR-4mRNA表达水平均升高(P0.01),手针组CGRP mRNA表达水平降低(P0.05)、TRPV 1mRNA表达水平升高(P0.05);3个刺灸干预组之间比较,手针、电针两组CGRP、TRPV 1蛋白及CGRP、PAR-4 mRNA表达均低于艾灸组(P0.05,P0.01),电针组TRPV 1mRNA表达低于手针组(P0.05)。结论:3种刺灸方法对功能性便秘大鼠结肠组织CGRP、TRPV 1、PAR-4蛋白及mRNA表达均有不同程度的降低作用。     

紧密连接蛋白Claudin-3在人乳腺癌组织的表达与临床意义

目的探讨Claudin-3在不同转移淋巴结个数乳腺癌患者中表达的差异。方法将128例乳腺癌组织标本按淋巴结转移个数分组,转移淋巴结个数4个为A组,≥4个为B组,2组各64例。应用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测2组乳腺癌组织Claudin-3的表达水平并进行比较。结果 A组Claudin-3 mRNA表达低于B组,2组比较有显著性差异(P0.05)。不同年龄、激素受体状态、CerbB-2、p53、ki67和组织学分级患者Claudin-3表达水平比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论 Claudin-3表达上调可促进乳腺癌的淋巴结转移,与预后不良有关。     

加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织Occludin，ZO-1，Claudin-1蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin),密封蛋白-1(Claudin-1),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组(3.2×10~(-3)g·kg~(-1)),加味四君子汤加减低、中、高剂量组(4.77,9.54,19.08 g·kg~(-1))。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,治疗7 d后处死,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1蛋白的表达,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白显著减少(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白均显著增高(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达下调(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达上升(P0.01)。结论:加味四君子汤可能通过增加紧密连接蛋白Occludin,ZO-1,Claudin-1的表达,保护血脑屏障,减轻缺血性脑卒中大鼠脑水肿。     

溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织闭合蛋白影响的实验研究

目的观察溃结宁膏穴位敷贴对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜的作用并探讨其作用机制。方法选用SD大鼠40只,随机分为空白组、模型组、敷贴组、SASP组,并建立溃疡性结肠炎大鼠模型,造模结束后,敷贴组给予溃结宁膏穴位敷贴,治疗结束后,观察大鼠宏观表征改变,计算疾病活动指数(DAI);Western blotting法检测大鼠结肠组织Claudin-1、Claudin-2、Claudin-8蛋白的表达。结果 1)治疗结束后,与模型组比较,敷贴组和SASP组的大鼠宏观表征改变有一定程度的改善(P 0.01);2)与空白组比较,其余3组的Claudin-2蛋白表达上升(P 0.01),Claudin-1、Claudin-8等蛋白的表达下降(P 0.01);与模型组比较,敷贴组和SASP组上述蛋白指标均显著改善(P 0.05);与SASP组比较,敷贴组各项指标差异不明显(P 0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴可以一定程度上降低实验大鼠Claudin-2蛋白的水平,同时使得Claudin-1、Claudin-8的蛋白表达上升,从而达到减轻肠道炎症反应,促进结肠黏膜愈合,重建肠黏膜机械屏障的完整性的目的。     

补气健脾法改善自身免疫甲状腺炎小鼠免疫失常机制研究

目的:观察益气化痰活血方对自身免疫甲状腺炎(AIT)小鼠甲状腺miR-155/SOCS1/STAT3信号通路的影响,探讨中医补气健脾法干预AIT部分免疫学机制。方法:60只8周龄NOD.H-2h4小鼠随机分为6组。正常组(NG)饲以蒸馏水,模型组(MG)、西药组(硒酵母片,Se G)、益气化痰活血方高剂量组(YG-1,36.40 g·Kg~(-1)·d~(-1))、益气化痰活血方中剂量组(YG-2,18.20 g·Kg~(-1)·d~(-1))、益气化痰活血方低剂量组(YG-3,9.10 g·Kg~(-1)·d~(-1))饲以含0.05%碘化钠水8周成模,再灌胃给药8周。光镜下观察甲状腺细胞形态;RT-PCR法检测小鼠甲状腺miR-155、白细胞介素-17(IL-17)mRNA表达;Western blot法测定小鼠甲状腺细胞因子信号抑制因子(SOCS1)、p-STAT3蛋白表达。结果:(1)与NG组比较,MG组甲状腺淋巴细胞浸润明显;与MG组比较,各给药组甲状腺炎均有不同程度改善。(2)与NG组比较,甲状腺IL-17、miR-155mRNA表达显著上调(P0.01),甲状腺p-STAT3蛋白显著升高(P0.01);与MG组比较,Se G、YG-1、YG-2组甲状腺IL-17mRNA表达均显著下调(P0.01);与Se G组比较,YG-2组IL-17mRNA下调更明显(P0.01);与MG组比较,各给药组miR-155mRNA均显著下调(P0.01),其中Se G、YG-2组无统计学差异(P0.05);各给药组p-STAT3均显著下调(P0.01),与Se G组比较,YG-2组下调更明显(P0.05)。(3)与NG组比较,MG组甲状腺SOCS1蛋白明显下降(P0.01),与MG组比较,Se G、YG-2、YG-3组SOCS1蛋白水平显著升高(P0.01),YG-1组SOCS1蛋白上调(P0.05)。结论:中医补气健脾法可能通过调控miR-155/SOCS1/STAT3信号通路改善AIT免疫失常。     

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血SD大鼠AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达影响随机平行对照研究

[目的]观测蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达影响。[方法]使用随机平行对照方法,45只SD大鼠常规饲料喂养3d,称重后随机数字表法分为5组,假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀低、中、高剂量组(简称"ZL低、中、高剂量组"),9只/组。按指标检测时间分为12h、48h、72h三个亚组,3只/组。自体尾部血注入法复制脑出血大鼠模型。灌胃干预:蛭龙活血通瘀胶囊按人体用量(3.6g/d)5倍、10倍、20倍定为低、中、高剂量。RT-PCR法检测AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达。[结果]AQP-4 mRNA:假手术组有微量表达,12h、48h及72h表达无明显差异(P0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P0.01);模型组呈进行性升高,72h最为显著;ZL各剂量组表达均低于模型组(P0.01);各时间点低、中剂量组均高于ZL高剂量组(P0.01)。MP-9 mRNA:假手术组有少量表达,术后12h、48h及72h表达无明显差异(P0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P0.01);模型组术后48h上升明显并达到高峰,72h略有下降,ZL各剂量组均低于模型组(P0.01);ZL低、中剂量组在各时点均明显高于高剂量组(P0.01)。TIMP-1 mRNA:假手术组仅有微量表达,术后12h、48h及72h无明显差异(P0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P0.01);模型组48h上升明显并达到高峰,72h略有下降;ZL各剂量组各时点均高于模型组(P0.01);ZL低、中剂量组各时点均明显高于高剂量组(P0.01)。[结论]蛭龙活血通瘀胶囊可明显降低脑出血大鼠脑组织AQP-4、MMP-9 mRNA,升高TIMP-1 mRNA,呈量效关系,ZL高剂量组作用最为明显。     

壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法取新生SD大鼠颅骨进行成骨细胞原代培养,传代后随机分为4组:假手术组、模型组、对照组、中药组。培养3代后进行鉴定,加入相应含药血清干预48 h。测定各组成骨细胞Wnt3a、β-catenin、LRP5、GSK3βmRNA及蛋白的表达情况。结果与假手术组比较,模型组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA降低(P0.05),GSK3β蛋白及mRNA升高(P0.05)。与模型组比较,对照组和中药组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3β蛋白表达降低(P0.05),中药组GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。与对照组比较,中药组β-catenin蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。结论壮骨止痛方可通过上调Wnt3a、β-catenin、LRP5蛋白的表达,下调GSK3β的表达调控Wnt/β-catenin信号通路。     

黄芪配伍莪术对小鼠结肠癌细胞CT26黏附和迁移能力的影响

目的探讨黄芪配伍莪术在体外对小鼠结肠癌细胞CT26黏附和迁移能力的影响及作用机制。方法体外培养CT26细胞,设对照组,分别以0.00625、0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2g/ml的黄芪、莪术药物浓度处理24h和48h后,采用CCK-8法检测黄芪配伍莪术对CT26细胞存活率的影响以选择合适的给药浓度。采用划痕实验检测黄芪配伍莪术对CT26细胞迁移能力的影响,采用细胞黏附实验检测黄芪配伍莪术对CT26细胞与细胞及与细胞外基质间黏附能力的影响。药物处理24h后采用Western blot法和RT-PCR法检测CT26细胞中黏附相关因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、抗癌1号蛋白(KAI1)、抑癌基因张力蛋白同源10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)、基质蛋白酶诱导因子(CD147)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白和mRNA表达。结果选择0.0125、0.025、0.05g/ml浓度进行后续实验。与对照组比较,24h时黄芪配伍莪术组0.025、0.05g/ml浓度及48h时0.0125、0.025、0.05g/ml浓度CT26细胞的迁移率均明显降低;与黄芪配伍莪术组0.0125g/ml浓度比较,24、48h 0.025、0.05g/ml浓度CT26细胞迁移率均明显降低;与黄芪配伍莪术组0.025g/ml浓度比较,24、48h 0.05g/ml浓度CT26细胞迁移率均明显降低;除黄芪配伍莪术组0.05g/ml浓度外,各组48h CT26细胞迁移率较本组24h均明显增加(P0.05或P0.01)。与对照组比较,黄芪配伍莪术组0.0125、0.025、0.05g/ml浓度与细胞外基质黏附率均明显下降;与黄芪配伍莪术组0.0125g/ml浓度比较,0.025、0.05g/ml浓度与细胞黏附率明显升高,0.05g/ml浓度与细胞外基质黏附率明显下降;与黄芪配伍莪术组0.025g/ml浓度比较,0.05g/ml浓度与细胞黏附率明显升高(P0.05或P0.01)。与对照组比较,黄芪配伍莪术组0.025、0.05g/ml浓度CT26细胞的E-cadherin、KAI1、PTEN蛋白及mRNA表达水平显著升高,CD147蛋白表达显著降低;与黄芪配伍莪术组0.0125g/ml浓度比较,0.025g/ml浓度E-cadherin蛋白及mRNA表达明显升高,0.05g/ml浓度E-cadherin、KAI1、PTEN蛋白及mRNA表达显著升高,CD147蛋白及mRNA表达下降;与黄芪配伍莪术组0.025g/ml浓度比较,0.05g/ml浓度的KAI1、PTEN蛋白及mRNA表达明显升高,CD147蛋白及mRNA表达下降(P0.05或P0.01)。结论黄芪配伍莪术可以增强CT26细胞间黏附,减弱与细胞外基质黏附能力,并抑制其迁移能力,其作用机制可能与促进同源性黏附相关因子E-cadherin、PTEN、KAI1表达,抑制异源性黏附相关因子CD147、MMP-9、HIF-1α表达有关。     

针刺内关、水沟对脑缺血再灌注大鼠大脑皮层Caspase-3、PARP-1表达的影响

目的探讨针刺内关、水沟抑制脑缺血再灌注大鼠大脑皮层Caspase-3、PARP-1 mRNA和蛋白表达的影响。方法 40只雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组、针刺组。采用改进的Longa线栓法制备大脑中动脉梗塞模型。参考Bederson6级5分法进行神经功能评分,运用Real-time PCR、Western Blot检测脑缺血后24 h大鼠大脑皮层Caspase-3、PARP-1的mRNA及蛋白表达量变化。结果与模型组相比,针刺组可改善缺血再灌注大鼠神经功能缺损症状(P0.01);针刺可下调Caspase-3、PARP-1的mRNA及蛋白表达,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05,P0.01;P0.05,P0.05)。结论针刺内关、水沟可下调脑缺血再灌注大鼠大脑皮层Caspase-3、PARP-1的mRNA及蛋白表达。