丹瓜方对糖尿病大鼠视网膜组织MCP-1和NF-κB p65表达的影响

目的 研讨丹瓜方对糖尿病大鼠视网膜组织中MCP-1和NF-κB p65的影响。方法 将40只造模成功的GK大鼠随机分成模型组、二甲双胍组、辛伐他汀组、丹瓜方组4组,10只Wistar大鼠为正常组。采用Western blot法检测大鼠视网膜组织中MCP-1和NF-κB p65的表达。结果 与正常组比较,模型组视网膜组织MCP-1、NF-κB p65蛋白表达显著提高（P<0.01）;与模型组比较,二甲双胍组、辛伐他汀组和丹瓜方组MCP-1、NF-κB p65蛋白表达均显著下降（P<0.01）。结论 MCP-1和NF-κB p65可能均是糖尿病视网膜病变的影响因子,二甲双胍、辛伐他汀、丹瓜方均能降低GK大鼠视网膜组织中MCP-1和NF-κB p65的表达,从而预防或减少糖尿病视网膜病变的发生,其中以丹瓜方效果最好。     

丹瓜方对ApoE－/－糖尿病模型小鼠脑组织Caspase-3蛋白及Bcl-2、Bax mRNA表达水平的影响

目的研究丹瓜方对糖尿病模型Apo E－/－小鼠糖脂代谢、脑组织胱冬肽酶－3（Caspase-3）蛋白表达及β淋巴细胞瘤基因－2（Bcl-2）、Bax mRNA表达水平的影响。方法采用链脲佐菌素（streptozo tocin,STZ）注射法对Apo E－/－小鼠制备糖尿病模型。将成模后的32只小鼠按体重分层,再按血糖水平排序,采用随机数字表分为模型组［无菌水（SW）,15 mL/（kg·d）］、丹瓜方组［丹瓜方（DGR）, 15 mL/（kg·d）］、联合组［吡格列酮（PG） 4.3 mg/（kg·d）＋DGR 15 mL/（kg·d）］及吡格列酮组［PG, 4.3 mg/（kg·d）］,每组8只。另选血糖正常的8只同龄同品系C57小鼠作为对照组。灌胃干预12周。监测空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）,测定血清TC、LDL-C水平;实时荧光定量PCR（qPCR）法检测Apo E－/－小鼠脑组织Bcl-2、Bax mRNA表达,采用Western blot法测定脑组织Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组Apo E－/－小鼠血清FBG、TC、LDL-C及脑组织Caspase-3表达水平升高（P<0.01）;与模型组比较,丹瓜方组FBG、TC及LDL-C水平降低,Bcl-2、Bax mRNA水平升高（P<0.01, P<0.05）。丹瓜方组Caspase-3蛋白表达水平低于模型组、联合组及吡格列酮组各组（P<0.01）;联合组Bcl-2/Bax 比值高于模型组（P<0.05）,丹瓜方组高于吡格列酮组（P<0.01）。结论丹瓜方可调节糖尿病糖脂代谢及脑组织Caspase-3蛋白及Bcl-2、Bax mRNA表达,可能对糖尿病造成的脑组织细胞凋亡有一定的防治作用。     

丹瓜方对ApoE－/－糖尿病小鼠肝脏AdipoR2表达的影响

目的研究祛瘀化痰的复方中药丹瓜方对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)糖尿病小鼠肝脏脂联素受体(AdipoR2)表达及其对肝脏的影响。方法将8周龄的Apo E-/-小鼠,随机分为模型对照组、丹瓜方组、吡格列酮组和联合治疗组,另设同龄C57BL/6J小鼠为C57组,4组Apo E-/-小鼠均注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,并分别予以相应的药物干预,12周后,观察丹瓜方对糖脂代谢的影响,并分别检测肝脏AdipoR2 mRNA及蛋白表达,用HE、红油O脂肪染色、Masson等观察肝脏组织形态学改变。结果丹瓜方组Apo E-/-小鼠的空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较模型组显著降低;丹瓜方组Apo E-/-小鼠肝脏AdipoR2蛋白及mRNA表达明显高于模型对照组(P0.01),并优于吡格列酮组(P0.05,P0.01);丹瓜方组在改善糖尿病Apo E-/-小鼠肝细胞脂肪异位沉积和纤维化等病理改变上明显优于吡格列酮组和联合治疗组。结论丹瓜方能够明显地改善肝脏脂代谢,减轻肝脏脂肪沉积和纤维化,可能与丹瓜方促进肝脏AdipoR2的表达有关。     

丹瓜方对Apo E－/－糖尿病模型小鼠糖脂代谢及血管细胞黏附分子-1及mRNA表达水平的影响

目的研究丹瓜方对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠复合糖尿病模型糖脂代谢指标、血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）及其mRNA表达水平的影响,探讨丹瓜方防治糖尿病合并血管病变的部分机制。方法 Apo E^-/-小鼠皮下注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病模型。将32只成模鼠按照体重分层,再按血糖水平以随机数字表法分为模型组[无菌水（SW）,15 m L/（kg·d）]、丹瓜方组[丹瓜方（DG）,15 m L/（kg·d）]、联合用药组[吡格列酮（PG）,4.3 mg/（kg·d）加DG1 5 mL/（kg·d）]、吡格列酮组[PG,4.3 mg/（kg·d）],每组8只。选血糖正常的8只同龄同品系C 57小鼠作为对照组。灌胃干预12周。监测各组小鼠空腹血糖（FBG）、体重、摄食量及饮水量;测量皮温及鼠尾长度,并通过肉眼观察肝脂肪变程度;测定各组小鼠血清HbA1 c、TC、LDL-C水平,采用放射免疫法测定ET-1,生化法—硝酸还原酶法测定NO,E LISA法测定VCAM-1,应用实时荧光定量PCR（qPCR）检测肾组织VCAM-1 mRNA表达。结果与对照组比较,模型组小鼠体重及摄食量减少,饮水量增加（P〈0.05）,且血糖值曲线全程高于对照组（P〈0.01）。与模型组比较,丹瓜方组小鼠体重增量、HbA1 c、TC、LDL-C、ET-1、VCAM-1水平显著降低,皮温升高（P〈0.05或P〈0.01）。与吡格列酮组比较,丹瓜方组小鼠体重、体重增量、FBG、TC及LDL-C水平降低（P〈0.05或P〈0.01）、饮水量和摄食量增加,鼠尾较长（P〈0.01）;各组小鼠NO水平比较,差异无统计学意义。与对照组比较,模型组肝脂肪变程度较重（P〈0.05）;与模型组及吡格列酮组比较,丹瓜方组脂肪变程度明显减轻（P〈0.05,P〈0.01）,吡格列酮组肝脂肪变程度重于模型组（P〈0.01）,而联合用药组肝脂肪变程度处于丹瓜方组和吡格列酮组之间。丹瓜方组VCAM-1 mRNA的表达显著低于模型组（P〈0.01）,且低于联合用     

益气活血方对糖尿病大鼠p38MAPK通路的影响

目的:观察益气活血方对糖尿病大鼠基于p38丝裂原活化的蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对血管内皮功能受损的综合调节作用机制。方法:采用高脂高糖饮食和应用链脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病模型,将大鼠随机分成7组,分别为正常组,模型组,丹蛭降糖胶囊高、中、低剂量组(1.08,0.72,0.54 g·kg-1·d-1),盐酸吡格列酮胶囊组(10 mg·kg-1·d-1),丹蛭降糖胶囊+盐酸吡格列酮胶囊结合组(1.08 g·kg-1·d-1+10 mg·kg-1·d-1)。大鼠造模成功后分别按相应剂量药物ig给予,每日1次,连续8周,后腹主动脉采集血液样本和腹主动脉进行相关检测,蛋白质免疫印迹(Western blot)法测定p38MAPK,上游MAPK激酶3/6(mitogen activated protein kinase kinasse3/6,MKK3/6),下游核转录因子c AMP反应元件结合蛋白1(c AMP response element-bingding protein,CREB1)以及其丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)信号蛋白在内皮细胞的蛋白表达量;实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)方法测定单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),血管内皮细胞抵抗素在血管内皮中的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组p38MAPK,MKK3/6,CREB1蛋白及MCP-1,血管内皮细胞抵抗素mRNA表达水平明显升高(P0.01),MKP-1蛋白表达水平明显降低(P0.01);各给药组p38MAPK,MKK3/6,CREB1蛋白及MCP-1,血管内皮细胞抵抗素mRNA表达水平均明显降低,MKP-1蛋白表达水平均明显升高,与模型组大鼠比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:益气活血方通过调节糖尿病大鼠血管p38MAPK信号通路蛋白表达水平,从而达到降低血管内皮功能损伤的作用。     

丹瓜方对糖尿病动脉粥样硬化大鼠炎性标志物及内皮细胞功能的影响

目的观察丹瓜方对高脂糖尿病动脉粥样硬化大鼠炎症标志物及内皮细胞功能的影响。方法选取GK自发性糖尿病鼠40只,以高脂饲养联合代谢抑制丙基巯氧嘧啶及内皮型一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯,塑造高脂糖尿病动脉硬化模型。将糖尿病成模鼠按体重分层、再按血糖由高至低根据随机数字表法分为丹瓜方组[8 m L/(kg·d)]、二甲双胍组[150 mg/(kg·d)]、辛伐他汀组[2 mg/(kg·d)]、模型组[无菌水,8 m L/(kg·d)],每组10只。另取同龄、体重可比Wistar大鼠10只作为正常组并饲以常规饲料。灌胃给药,每日1次,干预24周。检测炎性标志物hs-CRP、IL-6及血管内皮因子内皮型一氧化氮(e NO)、内皮素1(ET-1)及TNF-α及其m RNA表达,血管性血友病因子(v WF)及其m RNA表达。结果与正常组比较,模型组空腹血糖、Hb A1c、TC、LDL-C、hs-CRP及TNF-α水平升高,NO水平降低(P0.01),TNF-α、v WF免疫组化阳性率及TNF-αm RNA表达升高(P0.01)。与模型组比较,各用药组FBG、TC、LDL-C降低,二甲双胍组hs-CRP及TNF-α水平降低,NO水平及v WF m RNA表达升高(P0.05,P0.01),丹瓜方组Hb A1c、TG、hs-CRP、TNF-α及TNF-α免疫组化阳性率降低,NO水平升高(P0.05,P0.01),辛伐他汀组TNF-α免疫组化阳性率降低,3组TNF-αm RNA的表达降低(P0.01)。与二甲双胍组比较,丹瓜方组TC、LDL-C降低(P0.01)。结论丹瓜方对合并高血脂的动脉粥样硬化糖尿病鼠的部分血管炎性标志物具有多层次干预作用,对血管内皮细胞功能有一定改善作用。     

丹栝方干预糖尿病动脉粥样硬化大鼠糖脂代谢及氧化应激研究

目的探讨丹栝方对糖尿病动脉粥样硬化大鼠糖脂代谢及血清活性氧族(ROS)、胸主动脉核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)阳性表达及其mRNA表达水平的影响,以揭示其干预糖尿病慢性并发症的部分机制。方法选取自发性糖尿病GK大鼠(Goto-Kakisaki Wistar rats)40只,以含代谢抑制剂丙硫氧嘧啶的高脂饲料饲养及内皮型一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯腹腔注射,制备高脂糖尿病动脉硬化模型。将GK糖尿病成模鼠先按体重分层,再按血糖浓度根据随机数字表法分为丹栝方组[丹栝方,8mL/(kg·d)]、二甲双胍组[二甲双胍,150mg/(kg·d)]、辛伐他汀组[辛伐他汀,2mg/(kg·d)]、模型组[纯净水,8mL/(kg·d)],每组各10只;另取同龄、体重可比Wistar大鼠10只作为正常对照组(正常组)。各组均灌胃干预24周。监测空腹血糖(FBG)、体重,测定HbA1c、TC、LDL-C、HDL-C、TG、血清ROS,免疫组化法分析主动脉NF-κB,Real-time PCR检测主动脉NF-κB(P65) mRNA表达。结果正常组体重最终显著超过其他各组(P<0.01),四组GK造模组间比较,差异无统计学意义。四组GK造模鼠全程FBG都高于正常组(P<0.01,P<0.05);首次FBG、基线血糖各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),末次FBG二甲双胍组和丹栝方组都显著低于模型组(P<0.01)和辛伐他汀组(P<0.05)。干预24周后,四组GK造模鼠FBG、HbA1c、TC、LDL-C、HDL-C、胸主动脉NF-κB的阳性表达率,及模型组、二甲双胍组、丹栝方组胸主动脉NF-κB mRNA的表达均高于正常组(P<0.01,P<0.05);二甲双胍组、丹栝方组、辛伐他汀组TG、血清ROS,及辛伐他汀组胸主动脉NF-κB mRNA表达低于正常组(P<0.01,P<0.05)。药物干预三组FBG、TC、LDL-C、血清ROS、胸主动脉NF-κB mRNA的表达,丹栝方组、二甲双胍组胸主动脉NF-κB的阳性表达率,及丹栝方组HbA1c、TG显著低于模型组(P<0.01,P<0.05)。二甲双胍组、丹栝方组FBG低于辛伐他汀组(P<0.05)。辛伐他汀组、丹栝方组胸主动脉NF-κB mRNA的表达,及丹栝方组TC、LDL-C显著低于二甲双胍组(P<0.01)。结论丹栝方通过综合调节血糖、血脂,下调氧化应激,以发挥其防治糖尿病的慢性并发症作用。     

丹瓜方干预Apo E^-/-糖尿病模型小鼠脑组织IGF-1表达研究

目的探讨丹瓜方对Apo E^-/-糖尿病模型小鼠脑组织胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)表达水平的影响,以探究丹瓜方防治糖尿病脑病的部分机制。方法以链脲佐菌素(STZ)对Apo E^-/-小鼠塑造糖尿病模型。将成模后的小鼠按体质量分层,依照随机数字表随机分为模型组、丹瓜方组、吡格列酮组、联合组,每组8只。选取血糖正常的同龄同品系C57小鼠8只作为对照组。分组灌胃干预12周。ELISA法测定IGF-1表达。结果与C57组IGF-1(19.89±0.95)ng/m L比较,其余各组均明显降低(P<0.01);丹瓜方组(14.31±0.99)ng/m L和联合用药组IGF-1水平(11.58±0.92)ng/m L明显高于模型组(7.25±0.42)ng/m L;丹瓜方组IGF-1水平明显高于联合用药组(P<0.01)。结论通过适度提升糖尿病鼠脑组织中IGF-1表达,可能是丹瓜方防治糖尿病脑病的部分机制。     

丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠腹主动脉超微结构、MCP-1、抵抗素mRNA表达的影响

目的探索丹蛭降糖胶囊(太子参、丹皮、水蛭、泽泻、菟丝子等)对实验性2型糖尿病大鼠腹主动脉超微结构、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、抵抗素mRNA表达的影响。方法采用高脂高糖饮食和腹腔注射链尿佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,将大鼠随机分成7组,即正常组,模型组,丹蛭降糖胶囊高、中、低剂量组,盐酸吡格列酮组,丹蛭降糖胶囊+盐酸吡格列酮组。大鼠造模成功后分别按相应剂量药物经胃给予灌药,连续8周,处死后剪取腹主动脉进行电镜观察,并检测血管内皮细胞抵抗素及MCP-1 mRNA表达。结果腹主动脉电镜显示治疗组内膜表面突起、增厚,内弹性膜不连贯,线粒体增多、肿胀,粗面内质网断裂及减少等情况较模型组有所改善。治疗组的MCP-1和抵抗素mRNA表达水平较模型组均有下调,与模型组大鼠比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论改善情况依次为丹蛭降糖胶囊高剂量组盐酸吡格列酮组丹蛭降糖胶囊中剂量组丹蛭降糖胶囊+盐酸吡格列酮组丹蛭降糖胶囊低剂量组。     

丹瓜方对GK糖尿病-动脉粥样硬化复合模型大鼠血糖、食量和体重的影响

目的:探讨丹瓜方对高脂饲料喂养的GK糖尿病-动脉粥样硬化复合模型大鼠血糖、食量和体重的影响。方法:40只成模GK大鼠,随机分为二甲双胍组、模型对照组、丹瓜方组、辛伐他汀组,自由进食高脂饲料,并予以相应的药物干预;另设10只同龄Wistar大鼠为正常对照组,喂食普通饲料;观察大鼠血糖、HbA1c、体重、食量的变化情况。结果:丹瓜方组血糖与空白对照组比较无差异,且优于其他各模型组;丹瓜方组HbA1c与二甲双胍组比较无差别,且低于模型对照组(P0.05);GK大鼠食量均明显减少,丹瓜方组食量低于空白对照组和模型对照组(P0.01);GK大鼠体重均低于空白对照组,丹瓜方组体重增幅最小(P0.05)。结论:丹瓜方在控制高脂饲料喂养的GK大鼠的血糖、体重和食量上具有明显优势。     

化瘀祛痰方对载脂蛋白E基因敲除小鼠肝脏脂质过氧化及p53、GPX4、xCT表达的影响

目的探讨化瘀祛痰方治疗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制。方法 24只载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,8只C57BL/6J小鼠作为空白组。除空白组外,其他各组给予高脂饲料喂养制备AS模型。化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方20g/(kg·d)灌胃;辛伐他汀组给予辛伐他汀2.275mg/(kg·d)灌胃,空白组与模型组均给予0.5ml生理盐水灌胃。各组均灌胃4周后,检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平,肝脏铁死亡相关因子p53、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、胱氨酸/谷氨酸反向转运体(xCT)蛋白及mRNA表达;观察肝脏组织形态学改变。结果与空白组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高,肝脏组织内ROS、MDA水平显著升高,SOD活性显著下降,肝脏组织p53蛋白及mRNA的表达增高,GPX4、xCT蛋白和mRNA水平显著降低(P0.01),HE染色显示肝细胞肿胀明显且胞浆内含有大量脂肪空泡蓄积。与模型组比较,化瘀祛痰组及辛伐他汀组小鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著降低,肝脏组织内ROS、MDA水平显著降低,SOD活性显著升高,p53蛋白及mRNA的表达降低,GPX4、xCT蛋白和mRNA水平显著升高(P0.05或P0.01);肝细胞形态恢复或者部分恢复,胞浆内脂滴含量明显减少。结论化瘀祛痰方可能通过调控p53/xCT通路影响肝细胞铁死亡,减轻肝脏脂质过氧化损伤,从而防治AS。     

基于TGF-β1/p38MAPK通路探讨益气升清方对糖尿病大鼠肾组织的影响

目的:探讨益气升清方对糖尿病大鼠肾组织TGF-β1/p38MAPK通路的影响。方法:SPF级大鼠60只,正常组10只,其余腹腔注射STZ制备DM模型。成模后随机分为模型组（等量蒸馏水）、厄贝沙坦组［27 mg/(kg·d)］、中药低剂量组［3.465 g/(kg·d)］、中药中剂量组［6.93 g/(kg·d)］、中药高剂量组［13.86 g/(kg·d)］,每组10只,给药8周,检测血糖、Scr、BUN,观察肾组织的病理,用荧光定量PCR和免疫组化法检测TGF-β1、p38MAPK、FN mRNA和蛋白的表达。结果:造模后各组血糖较正常组有显著性升高（P<0.01）,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。模型组大鼠血清BUN、Scr显著增高（P<0.01）,肾组织有大量TGF-β1、p38MAPK、FN mRNA及蛋白表达（P<0.01）;与模型组比较,各观察组病理损害明显减轻,血清BUN、Scr明显降低（P<0.01）,TGF-β1、p38MAPK、FN mRNA及蛋白表达明显减少（P<0.01）,厄贝沙坦组、中药中、高剂量组优于中药低剂量组（P<0.01）。结论:糖尿病大鼠TGF-β1/p38MAPK通路的激活导致肾间质病变,益气升清方可减少TGF-β1、p38MAPK的表达,从而减少FN的沉积,起到保护肾脏的作用。     

丹蒌片抗痰瘀互结型动脉粥样硬化大鼠炎症反应及机制

目的观察丹蒌片对痰瘀互结型动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)大鼠炎症因子以及脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PLA2)和分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2,s PLA2)表达的影响,分析其可能机制。方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、丹蒌低剂量组(低剂量组)、丹蒌高剂量组(高剂量组),每组8只。正常组大鼠喂食基础饲料12周,余4组均采用高糖高脂饮食联合维生素D3腹腔注射复制大鼠痰瘀互结型AS模型。模型组、西药组、低剂量组、高剂量组分别给予生理盐水、阿托伐他汀钙混悬液[1.8 mg/(kg·d)]、丹蒌片低剂量[450 mg/(kg·d)]、高剂量混悬液[900 mg/(kg·d)]灌胃干预8周。观察大鼠一般情况。灌胃结束后,处死大鼠取血清,检测大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、IL-6、TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)、氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)、LP-PLA2、s PLA2,HE染色观察大鼠胸主动脉病理学改变,Western blot和荧光定量PCR法分别检测大鼠胸主动脉内LP-PLA2、s PLA2蛋白及mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠精神萎靡,反应迟钝,胸主动脉可见典型的AS斑块,血清TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、MCP-1、ox-LDL、LP-PLA2、s PLA2水平升高(P0.05),胸主动脉LP-PLA2、s PLA2蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。干预8周后,3个给药组大鼠均变活跃,胸主动脉HE染色见斑块消退。与模型组比较,3个给药组TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、MCP-1、ox-LDL、LP-PLA2水平降低(P0.01,P0.05),西药组血清s PLA2水平降低,大鼠胸主动脉LP-PLA2、s PLA2蛋白及mRNA表达降低(P0.01,P0.05);低剂量组胸主动脉LPPLA2蛋白及mRNA表达降低(P0.01,P0.05);高剂量组胸主动脉LP-PLA2、s PLA2蛋白及mRNA表达降低(P0.01,P0.05)。结论丹蒌片可能通过抑制LP-PLA2的表达,减少ox-LDL生成,从而发挥其抗炎、抗AS的作用。     

丹参提取物对系膜增生性肾小球肾炎大鼠TGF-β1/p38MAPK信号通路的影响研究

目的:观察丹参提取物对系膜增生性肾小球肾炎(Mesangial proliferative glomerulonephritis,MsPGN)大鼠肾组织转化因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)的影响。方法:将46只SD大鼠分为正常组、缬沙坦组、模型组、丹参提取物组,除正常组外,其余各组大鼠建立MsPGN模型。丹参提取物组按丹参5 g/(kg·d)的剂量灌胃给药;缬沙坦组按缬沙坦0.01 g/(kg·d)的剂量溶于温水灌胃,模型组和正常组每天给予等量温水灌胃,连续灌胃12周后处死大鼠。Western blot检测大鼠肾组织TGF-β1和p38 MAPK蛋白的表达,RT-PCR检测TGF-β1和p38MAPK的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白水平、TGF-β1和p38MAPK蛋白相对表达量及mRNA表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,给药6周和12周缬沙坦组、丹参提取物组24 h尿蛋白水平显著降低(P<0.05);TGF-β1和p38MAPK蛋白相对表达量及mRNA表达均显著下降(P<0.05);与缬沙坦组比较,丹参提取物组TGF-β1和p38MAPK mRNA表达均下降(P<0.05)。结论:丹参提取物的肾保护作用可能是通过下调TGF-β1、p38MAPK蛋白和mRNA水平,抑制TGF-β1/p38MAPK信号通路激活来实现的。     

抗纤灵方对5/ 6肾切除小鼠p38MAPK/NF-κBp65介导的炎症因子的影响

目的观察抗纤灵方对慢性肾衰模型小鼠酪氨酸磷酸化蛋白激酶/核转录因子p65(p38MAPK/NF-κBp65)介导的炎症因子的影响。方法 56只C57BL/6J雄性小鼠,随机选取10只作为假手术组,余46只采用5/6肾切除制备慢性肾衰模型,2周后将造模成功的33只小鼠按照肌酐水平分层分为模型组、雷帕霉素组及抗纤灵方组,每组11只。雷帕霉素、抗纤灵方组每日分别给予雷帕霉素(0.13 mg/100 g)及抗纤灵方组(2 g/100 g)各0.5 m L灌胃治疗,模型组及假手术组灌胃等量蒸馏水,连续用药8周后处死小鼠,采用免疫组化法观察中性粒细胞表达水平;应用免疫印迹法(Western blot)及real-time PCR法检测肾脏组织p38MAPK、NF-κBp65蛋白及TNF-α、IL-6 mRNA表达水平。结果与假手术组比较,模型组中性粒细胞阳性细胞数增多,p38MAPK、NF-κBp65蛋白及TNF-α、IL-6 mRNA表达水平增高(P0.05,P0.01);与模型组比较,雷帕霉素及抗纤灵方组中性粒细胞阳性细胞数减少,p38MAPK、NF-κBp65蛋白及TNF-α、IL-6 mRNA表达水平降低(P0.05,P0.01)。雷帕霉素除在降低p38MAPK蛋白表达方面优于抗纤灵方组(P0.05)外,余指标比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论抗纤灵方参与p38MAPK/NF-κBp65介导的炎症因子的调控,对肾纤维化所致的肾衰有一定的改善作用。     

补肺健脾方含药血清对香烟烟雾提取物诱导L6细胞中ROS、MnSOD和CAT表达的影响

目的探讨补肺健脾方治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)骨骼肌功能障碍的可能作用机制。方法50只大鼠分为空白对照组、补肺健脾方组各25只。空白对照组大鼠给予生理盐水2 ml/只灌胃,补肺健脾方组给予补肺健脾方悬乳液4. 51 g/(kg·d)的10倍剂量灌胃,每日1次。于第7日灌胃后1 h腹主动脉取血制备含药血清。正常培养的L6细胞分为正常组(10%空白对照组血清)、模型组[10%空白对照组血清+10%香烟烟雾提取物(CSE)]、补肺健脾组(10%补肺健脾方组血清+10%CSE)、西药组[10%空白对照组血清+10%CSE+5 mmol/L抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)]、补肺健脾+西药组(10%补肺健脾方组血清+10%CSE+5 mmol/L NAC)分别加入相应药物后,培养24 h。检测各组细胞中活性氧(ROS)水平及锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、过氧化氢酶(CAT) mRNA和蛋白表达。结果模型组细胞中ROS水平、Mn SOD和CAT mRNA和蛋白表达较正常组明显升高(P 0. 05或P 0. 01),补肺健脾组、西药组和补肺健脾+西药组ROS水平、Mn SOD mRNA和蛋白及补肺健脾组CAT mRNA的表达较模型组降低(P 0. 05或P 0. 01)。与补肺健脾组比较,西药组和补肺健脾+西药组MnSOD和CAT mRNA表达下降更为明显(P 0. 05或P 0. 01)。结论补肺健脾方和NAC均能降低L6细胞中ROS水平,减轻氧化应激,且两者联合运用效果更佳,这可能是其改善COPD骨骼肌功能障碍的机制之一。     

丹红注射液对高糖引起腹膜间皮细胞损伤的作用

目的研究丹红注射液对高糖所致大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells,RPMCs)氧化应激、炎症反应及其损伤的影响。方法原代培养RPMCs,随机分为正常对照组、高糖组(100 mmol/L高糖分别作用RPMCs12、24、48、72 h)、丹红注射液组(80 m L/L丹红注射液单独作用RPMCs 48 h)、高糖+丹红注射液组(100 mmol/L高糖分别与40、80、160 m L/L丹红注射液共同作用48 h)。MTT测定各组RPMCs增值率。酶联免疫法检测细胞培养液中白介素-18(IL-18)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,试剂盒检测Caspase-3活性及活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物岐化酶(SOD)含有量,实时定量RT-PCR法检测各组凋亡相关基因(Bcl-2、Bax)、纤维连接蛋白(FN)、内皮素1(EDN1)和血红素氧化酶1(HMOX1)mRNA的表达。Western blot法检测EDN1和HMOX1蛋白表达。结果高糖明显抑制RPMCs的增殖,增强Caspase-3活性,增加IL-18、IL-6和TNF-α的表达量,诱导RPMCs中ROS、MDA过度产生和抑制GSH、SOD产生,同时增加EDN1 mRNA与蛋白、Bax mRNA、FN mRNA的表达,降低HMOX1 mRNA与蛋白、Bcl-2 mRNA表达。而丹红注射液+高糖组的RPMCs的增殖率明显高于高糖组,Caspase-3活性降低,IL-18、IL-6和TNF-α的表达减少,细胞内ROS水平及上清液中MDA的含有量显著降低,同时EDN1 mRNA与蛋白,Bax、FN mRNA的表达下降,而上清液中SOD及GSH的含有量明显上升,HMOX1 mRNA与蛋白、Bcl-2 mRNA表达增高。结论丹红注射液可减少高糖所致细胞凋亡,抑制高糖所致的氧化应激及炎性反应,进而起到对RPMCs的保护作用。     

血必净注射液通过调控p38 MAPK/NF-κB通路对百草枯中毒大鼠急性肺损伤保护作用的研究

目的观察血必净注射液通过调控p38 MAPK/NF-κB通路对百草枯中毒大鼠急性肺损伤的保护作用。方法选取SPF级Wistar雄性大鼠,分为5组,除正常组外,其他各组大鼠一次性灌胃百草枯(PQ)溶液染毒。染毒1 h后血必净低、中、高剂量组大鼠分别经尾巴静脉注射含生药0.43、0.86、1.72 g/kg的血必净注射液2 mL,模型组和正常组大鼠注射等剂量0.9%氯化钠注射液。观察大鼠饮食、活动、病理状况,肺组织Bax、Bcl-2和p38-MAPK蛋白及NF-κB及IκB mRNA相对表达量。结果与正常组相比,模型组大鼠肺组织内Bax及Bcl-2蛋白表达上升;与模型组相比,血必净中、高剂量组大鼠肺组织内Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达上升,差异有统计学意义(P 0.05);与正常组相比,模型组大鼠NF-κB m RNA、p38-MAPK蛋白表达上升,IκB mRNA表达下降;和模型组相比,血必净中、高剂量组大鼠NF-κB m RNA、p38-MAPK蛋白表达下降,IκB mRNA表达上升,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论血必净注射液通过调控p38 MAPK/NF-κB通路,降低PQ中毒大鼠炎症反应程度,对受损肺组织起到保护作用。     

参地颗粒对慢性肾炎脾肾亏虚证患者NF-κB信号通路的干预作用

目的探讨氧化应激介导的NF-κB信号通路对慢性肾炎脾肾亏虚证患者的影响及参地颗粒(茯苓、熟地、五味子、桑螵蛸、川芎)对其的干预作用。方法 50例慢性肾炎脾肾亏虚证患者随机分为贝那普利片组(对照组)和参地颗粒组(治疗组),实际完成对照组24例,治疗组22例,并选取20名健康体检者作为正常组,疗程12周。检测两组临床疗效、治疗前后24 h尿蛋白定量及血清活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平和核因子-κB p65(NF-κB p65)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、纤维连接蛋白(FN)的变化情况。结果治疗组临床疾病总有效率和中医证候疗效总有效率分别为81.82%和77.27%,优于对照组的66.67%和37.50%(P0.05或P0.01)。治疗组和对照组治疗后,24 h尿蛋白定量较治疗前降低,且治疗组的下降幅度大于对照组(P0.05)。两组患者治疗前血清ROS、MDA水平和NF-κB p65、MCP-1水平高于正常组,血清SOD水平和FN水平低于正常组(P0.05);治疗后两组血清ROS、MDA水平和NF-κB p65、MCP-1水平均较治疗前降低,血清SOD水平和FN水平较治疗前升高,治疗组优于对照组(P0.05)。结论参地颗粒能改善患者临床症状,降低24 h尿蛋白定量,其机理与通过抑制CGN脾肾亏虚证患者的氧化应激,增强机体的抗氧化能力,抑制NF-κB信号活化,下调MCP-1表达有关。