红芪多糖对脑微血管内皮细胞氧化损伤保护作用的差异蛋白质研究

目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharides,HRP)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(Human bain microvascular endothelial cells,HBMEC)氧化损伤模型的保护作用及对其蛋白表达谱的影响。方法:采用50μg/ml ox-LDL建立HBMEC氧化损伤模型,使用红芪多糖对细胞模型进行干预,药物作用24h后,采用MTT检测细胞存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态。以40μg/ml的红芪多糖干预HBMEC氧化损伤模型24h后,使用细胞裂解液提取细胞总蛋白并纯化。应用双向凝胶电泳分离纯化后的细胞总蛋白,考马斯亮蓝染色后扫描细胞总蛋白图谱,使用PD Quest 8.0软件分析药物组与模型组间的差异蛋白点,应用质谱技术鉴定差异明显的蛋白点。结果:与氧化损伤模型组比较,红芪多糖组(40μg/ml)细胞存活率明显升高,细胞数目明显增多,细胞形态较模型组明显改善。红芪多糖组(40μg/ml)HBMEC细胞蛋白表达谱发生明显改变,分析得出11个差异蛋白点,采用质谱方法成功鉴定了7个差异蛋白质,分别为热休克蛋白70、谷胱甘肽合成酶、网腔钙结合蛋白、26S蛋白酶调节亚基、γ-烯醇酶、40S核糖体蛋白和78k Da葡萄糖调节蛋白,其中5个蛋白高表达,2个蛋白低表达。结论:红芪多糖对ox-LDL诱导的HBMEC氧化损伤模型具有明显保护作用,其机制与调节内质网应激及能量代谢、清除自由基、抑制细胞凋亡及抗氧化应激密切相关。     

红芪多糖对S180细胞体内化疗增效作用的差异蛋白质研究

目的:研究红芪多糖对S180瘤细胞化疗协同增效作用的差异蛋白质。方法:以环磷酰胺和红芪多糖联合环磷酰胺治疗S180荷瘤小鼠14天后测定小鼠免疫器官指数及抑瘤率,利用双向电泳分离提取的瘤细胞总蛋白,考染显色后应用PDQuest8.0软件分析电泳图谱,找出差异表达的蛋白质。结果:与环磷酰胺(20 mg/kg)组相比,红芪多糖(200 mg/kg)联合环磷酰胺(20 mg/kg)可明显抑制小鼠S180瘤生长(P<0.05),显著减轻环磷酰胺所致免疫器官指数的下降(P<0.01);建立了背景清晰、重复性好、分辨率高的S180瘤细胞双向电泳图谱,环磷酰胺组与红芪多糖联合环磷酰胺组蛋白质点数分别为:776±22和721±16;平均匹配率分别为:91.13%和89.37%。比较分析环磷酰胺组与红芪多糖联合环磷酰胺组双向电泳图谱,筛选出差异明显的蛋白质点28个,其中8个表达上调,19个表达下调,1个仅在环磷酰胺组表达。结论:红芪多糖联合环磷酰胺可减轻其对S180荷瘤小鼠的免疫抑制作用,增强环磷酰胺对S180瘤细胞的化疗效果,其作用可能与筛选出的28个差异蛋白质点有关,对这些差异蛋白质点的鉴定将为揭示红芪多糖的化疗协同增效作用提供实验依据。     

红芪多糖对实验性肝损伤的保护作用

红芪多糖灌胃150mg／kg可降低由D-氨基半乳糖引起的肝损伤大鼠血清SGPT、AKP的活性,明显减轻肝脏的病理损害,提示HPS有保肝作用。     

红芪多糖对氧化低密度脂蛋白诱导人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型保护作用机制分析

目的:首先建立氧化低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型,然后分析红芪多糖对该模型的保护作用机制。方法:运用氧化低密度脂蛋白(规格为50μg/ml)诱导人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型,运用红芪中的红芪多糖对该氧化损伤模型进行处理,然后采用MTT法测红芪多糖对该模型的保护作用,在显微镜下分别检测各个组别的人脑微血管内皮细胞的形态学变化。用红芪多糖(20μg/ml)来干预人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型(时间为一天即24小时),然后提取纯化细胞总蛋白(使用细胞裂解液),凝胶电泳分离纯化后的细胞蛋白,染色后扫描凝胶得蛋白图谱。随机分为对照组(20例)、50μg/ml氧化低密度脂蛋白模型组(20例)和红芪多糖药物干预的试验组(20例),提取每组的人脑微血管内皮细胞总蛋白,得到蛋白图谱。分析各个组间的差异蛋白点,用MS技术鉴定并且定位差异明显的蛋白点。结果:红芪多糖药物干预试验组细胞的存活率、细胞数目、细胞形态比人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型组比较,差异均有统计学意义(P均0.05);对纯化分离后的人脑微血管内皮细胞蛋白,建立了人脑微血管内皮细胞蛋白双向电泳,获得蛋白图谱;所得蛋白图谱通过软件分析得到红芪多糖药物干预试验组人脑微血管内皮细胞蛋白表达谱与模型组比较,差异具有统计学意义(P0.05);分析得出两组有差异蛋白点有11个,采用MS技术鉴定得到7个差异蛋白质,经鉴定后指认这差异蛋白质分别为热休克蛋白70、谷胱甘肽合成酶、网腔钙结合蛋白、40S核糖体蛋白和78kDa葡萄糖调节蛋白,其中5个蛋白上调,2个蛋白下调。结论:红芪多糖对氧化低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞氧化损伤模型具有明显保护作用,作用机制可能主要是红芪多糖的抗氧化应激、清除自由基、抑制细胞凋亡以及调节内质网应激的作用机制。     

当归红芪多糖对急性心肌缺血大鼠的保护作用

目的:观察当归红芪多糖对急性心肌缺血大鼠的保护作用,并探讨其相关的作用机制。方法:将80只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(SH),缺血组(MI),当归红芪多糖3 g·kg-1组(LD),当归红芪多糖6 g·kg-1组(MD),当归红芪多糖12 g·kg-1组(HD),每组16只。通过结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型;缺血+当归红芪多糖干预组分别于缺血24 h时用当归红芪多糖3,6,12 g·kg-1ig,各组动物分别于治疗后36 h及14 d时取材。应用生化分析仪测定大鼠血清肌酸激酶(CK),肌酸激酶同工酶(CK-MB),乳酸盐脱氢酶(LDH),乳酸盐脱氢酶同工酶(LDHI)含量;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测大鼠心肌组织热休克蛋白70(Hsp70),Hsp32,血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达变化情况。结果:与SH组比较,MI组ST段均抬高(P0.05);与SH组比较,MI组CK,CK-MB,LDH,LDHI含量在36 h时有显著升高,Hsp70,Hsp32,VEGF mRNA表达量增加(P0.05,P0.01);与MI组比较,当归红芪多糖各剂量组CK,CK-MB,LDH,LDHI含量在36 h时明显升高,Hsp70,Hsp32,VEGF mRNA表达增高(P0.05,P0.01)。结论:当归红芪超滤物对急性心肌缺血大鼠具有明显的保护作用。     

红芪多糖增强LAK细胞对膀胱肿瘤细胞的杀伤作用

用ＭＴＴ法观察了红芪多糖（ＨＰＳ）对ＬＡＫ细胞的影响，结果表明ＨＰＳ无明显的促进ＬＡＫ细胞扩增的作用，但与ＬＡＫ细胞或ＰＢＭＣ合用可显著增强对膀胱肿瘤细胞株ＥＪ和原代肿瘤细胞的杀伤作用。     

红芪多糖对实验性肝损伤的保护作用（Ⅱ）

红芪多糖灌胃150mg/kg对四氯化碳所致小鼠肝脏丙二醛含量升高有明显抑制作用;对D-半乳糖胺所致大鼠肝脏丙二醛含量升高亦有明显降低作用,表明红芪多糖（HPS）对四氯化碳和D-半乳糖胺所致动物急性肝损伤有一定保护作用。     

红芪多糖3促进小鼠胸腺细胞增殖的差异蛋白质点分析

目的:寻找红芪多糖3(HPS-3)作用后小鼠胸腺组织差异表达的蛋白质点,探讨HPS-3提高免疫力的分子生物学水平机制。方法:正常小鼠给予不同剂量的HPS-3,测定胸腺、脾脏指数及T淋巴细胞增殖能力,并运用双向凝胶电泳技术对胸腺组织蛋白进行分离,银染显色、Image Scanner获取凝胶图谱后,通过PD Quest软件对其进行分析、寻找差异蛋白质点。结果:HPS-3(50mg/kg)对小鼠胸腺指数、脾脏指数及T淋巴细胞增殖能力无显著影响,而100 mg/kg HPS-3能显著增加小鼠胸腺、脾脏指数,增强T淋巴细胞增殖反应。实验所得2-DE图谱经PD Quest软件分析得出以下结果:空白组分离得到1129个蛋白点,HPS-3组得到1167个蛋白质点,仅在空白组出现的蛋白质点有316个,仅在HPS-3组出现的蛋白点有354个,两组共有的蛋白点中表达量差异两倍以上的有192个。结论:HPS-3能促进胸腺细胞增殖,显著影响小鼠胸腺细胞蛋白质表达。     

红芪多糖增强LAK细胞对膀胱肿瘤细胞杀伤作用的实验研究

用ＭＴＴ法观察了ＬＡＫ细胞和ＰＢＭＣ对红芪多糖（ＨＰＳ）预处理的膀胱肿瘤细胞株（ＥＪ）及原代肿瘤细胞杀伤作用的影响。结果表明将ＥＪ和原代肿瘤细胞经ＨＰＳ预处理后,ＬＡＫ细胞和ＰＢＭＣ对ＥＪ和原代肿瘤细胞的杀伤作用显著增强     

红芪总黄酮对氧化低密度脂蛋白致内皮细胞损伤的保护作用

目的研究红芪总黄酮对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用.方法建立ox-LDL致脐静脉内皮细胞损伤模型,化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性.结果红芪总黄酮可显著降低ox-LDL损伤脐静脉内皮细胞的LDH释放,使细胞分泌的NO含量升高,提高细胞内SOD及NOS活性.结论红芪总黄酮对ox-LDL诱导脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关.     

红芪多糖3促进小鼠脾淋巴细胞增殖的差异蛋白质点分析

目的:分析红芪多糖3(HPS-3)作用于小鼠脾淋巴细胞后的差异蛋白质点,探讨红芪多糖3调节免疫的分子生物学机制。方法:提取正常小鼠脾淋巴细胞进行体外培养,用MTT法检测红芪多糖对小鼠脾淋巴细胞的刺激增殖作用,ELISA试剂盒测定培养上清中的IL-2含量,并运用双向电泳技术对脾淋巴细胞总蛋白进行分离,银染显色,PDQuest软件对凝胶图谱进行差异点分析,找出差异明显的蛋白质点。结果:HPS-3能够提高T淋巴细胞增殖能力和IL-2的分泌,实验所得2-DE凝胶图谱经PDQuest软件分析得出以下结果:HPS-3组中共有16个蛋白点发生明显改变,其中11个蛋白质点高表达,4个蛋白质点消失,1个蛋白质点低表达。结论:HPS-3能促进脾淋巴细胞增殖,显著影响小鼠脾淋巴细胞蛋白质表达。     

红芪多糖对培养血管壁平滑肌细胞的影响

目的:观察红芪多糖对培养血管壁平滑肌细胞(VSMC)的影响。方法:应用组织贴块法,在正常培养条件和高脂血清损伤等条件下,观察红芪多糖对 VSMC 的增殖、自由基清除及超微结构等的影响。结果:在正常、高脂血清、巨噬细胞孵育液培养条件下,有显著抑制 VSMC 的作用(P<0.01);对肾系膜细胞孵育液、未融合状人内皮细胞孵育液及 VSMC 孵育液培养条件下刺激的 VSMC 增殖无显著抑制作用(P>0.05);对正常、高脂血清培养条件下的VSMC 内过氧化脂质可显著降低(P<0.01),对超氧化物歧化酶活性可以显著增高(P<0.01),并能提高高脂血清培养条件下前列环素/血栓素 B_2比值。结论:红芪多糖可在高脂血清培养条件下,保护 VSMC 形态结构,促进细胞新陈代谢,有益于延缓动脉粥样硬化的进程。     

红芪及红芪多糖对气虚血瘀模型小鼠血液流变性的影响

目的:观察红芪水煎液及红芪多糖对气虚血瘀模型小鼠血液流变性的影响。方法:通过低温强迫游泳并腰背部皮下注射3%角叉菜胶溶液,制造小鼠气虚血瘀模型。测定小鼠的游泳时间、尾部血栓形成长度、凝血时间,观察红芪水煎液及红芪多糖益气活血功效相关的部分药理作用。结果:红芪水煎液及红芪多糖能明显延长小鼠的游泳时间(P0.05);能缩短小鼠尾部血栓长度及其百分率(P0.05);能明显延长凝血时间(P0.01)。结论:红芪水煎液及红芪多糖能改善气虚血瘀模型小鼠血液流变性。     

红芪多糖对改善模型大鼠胰岛素抵抗的实验研究

目的:观察红芪多糖(HPS)对T2DM大鼠胰岛素抵抗的治疗作用。方法:采用高热量饲料加低剂量注射链脲佐菌素(STZ)造模,分别予二甲双胍及红芪多糖进行干预,测定干预后血糖(FPG)、血清胰岛素(INS)、C肽(CP)、游离脂肪酸(FFA)水平,计算胰岛素敏感指数(ISI)。结果:红芪多糖可降低高热量饲料加STZ所致T2DM大鼠FPG,增加ISI,降低INS及CP分泌,抑制FFA的产生的作用。结论:HPS可通过多途径多环节减轻糖尿病模型大鼠的胰岛素抵抗。     

不同干燥工艺对红芪中红芪多糖含量的影响研究

目的比较不同干燥工艺对红芪多糖含量的影响,为建立红芪药材的最佳干燥工艺提供依据。方法采用晒干、阴干、电热鼓风干燥、微波、真空冷冻、真空干燥等六种不同的干燥方法对红芪进行干燥,采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果不同干燥工艺下红芪多糖含量有明显差异。其中微波干燥低温二层多糖含量最高为22.72%,其次为烘箱55℃一层17.82%,阴干17.32%,真空15.01%,冷冻12.00%,晒干11.55%。结论不同干燥方法对红芪中红芪多糖的含量有一定的影响,其中红芪微波低温二层干燥品中红芪多糖的含量最高,干燥效果较好。     

红芪多糖含量测定方法研究

目的 建立一种红芪多糖含量测定的方法.方法 采用80%乙醇回流除去蛋白、氨基酸、单糖、双糖、低聚糖等杂质,并用热水分离提取红芪多糖,以葡萄糖作为换算因子,绘制标准曲线,用蒽酮-硫酸分光光度法对红芪多糖含量进行测定.结果 检测波长为625nm,得到葡萄糖标准曲线回归方程为y=6.3263＊c＋0.1271,R2=0.9917,线性范围为0～0.2mg/ml.该测定方法供试液在2h内显色稳定,精密度、稳定性和重复性良好,平均回收率100.53%,RSD〈3.0%,测得红芪多糖的含量为6.62%.结论 蒽酮-硫酸法操作简便,重现性好,准确,可靠,可作为红芪多糖的测定.     

黄芪与红芪对脑缺血动物保护作用的研究

用尼龙线插入法造成大鼠大脑中动脉栓塞模型，黄芪水煎剂（４．２６，７．１ｇ／ｋｇ）与红芪水煎剂（７．１ｇ／ｋｇ）均可明显改善大鼠大脑中动脉栓塞所致的运动障碍和脑毛细血管通透性增加。黄芪水煎醇沉剂（１２．５ｇ／ｋｇ）可明显改善双侧结扎颈总动脉大鼠脑含水量的增加，红芪水煎醇沉剂有改善趋势。提示黄芪保护脑缺血的作用强于红芪     

黄芪与红芪对脑缺血动物保护作用的研究

用尼龙线插入法造成大鼠大脑中动脉栓塞模型，黄芪水煎剂（４．２６，７．１ｇ／ｋｇ）与红芪水煎剂（７．１ｇ／ｋｇ）均可明显改善大鼠大脑中动脉栓塞所致的运动障碍和脑毛细血管通透性增加。黄芪水煎醇沉剂（１２．５ｇ／ｋｇ）可明显改善双侧结扎颈总动脉大鼠脑含水量的增加，红芪水煎醇沉剂有改善趋势。提示黄芪保护脑缺血的作用强于红芪。     

枸杞多糖对NIT-β细胞损伤的保护作用及作用机制

目的:研究枸杞多糖对链脲佐菌素诱导的小鼠胰岛β细胞瘤细胞系凋亡或坏死是否有保护作用,并探讨其作用机制。方法:对NIT-β细胞进行体外培养,将其分为3组:A.NIT组;B.NIT+STZ组;C.NIT+STZ+LBP组。使用MTT法检测并对比各组细胞活性;采用流式细胞仪检测并对比三组细胞凋亡;使用硫代巴比妥酸法、硝酸还原酶法分别检测各组细胞培养液中丙二醛、一氧化氮浓度;使用黄嘌呤氧化酶法检测各组细胞裂解液中总SOD活性。结果:1枸杞多糖(LBP)可抵抗STZ诱导的NIT细胞损伤作用,明显提高其增殖活性,且随着LBP浓度的增加细胞增殖活性亦逐渐提高;2NIT+STZ组凋亡率明显高于NIT组(P<0.01),而加入保护剂LBP的NIT+STZ+LBP组凋亡率小于5%;3NIT+STZ组中的NO、MDA浓度显著高于NIT组(P<0.01),SOD活性明显低于NIT组;而NIT+STZ+LBP组的NO和MDA明显低于NIT+STZ组,P<0.01,SOD活性明显升高。结论:1LBP可对抗STZ对NIT细胞的损伤作用;2STZ可能通过NO途径和活性氧途径引起NIT细胞损伤,LBP则能降低NO浓度,提高细胞SOD活性,从而保护NIT细胞免受STZ引起的损伤作用。