黄芪甲苷联合丹参酚酸B对肝细胞过氧化损伤的保护作用及其机制研究

目的:探讨黄芪甲苷联合丹参酚酸B对HHL-5肝细胞过氧化损伤的保护作用机理。方法:采用1640完全培养基培养HHL-5细胞株,3次传代后分为正常组、过氧化损伤模型组、黄芪甲苷组、丹参酚酸B组、黄芪甲苷联合丹参酚酸B组。采用过氧化氢诱导细胞过氧化损伤,丹参酚酸B和黄芪甲苷给药浓度均是10~(-5)mol/L。qRT-PCR法检测细胞TLR4、NF-κB mRNA的表达水平,细胞爬片免疫组化法检测TLR4、NF-κB蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中TNFα和SOD的含量。结果:与正常组比较,模型组TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的表达水平显著增加,细胞上清液中TNFα的含量明显升高,SOD的含量明显降低(P<0.001)。与模型组比较,丹参酚酸B和黄芪甲苷干预组TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的表达水平显著下降,细胞上清液中TNFα的含量明显降低,SOD的含量明显升高(P<0.01)。与黄芪甲苷或丹参酚酸B组比较,黄芪甲苷联合丹参酚酸B干预组TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的表达水平显著下降,细胞上清液中TNFα的含量明显降低,SOD的含量明显升高(P<0.05)。结论:丹参酚酸B和黄芪甲苷能保护肝细胞的过氧化损伤且二者具有协同作用,该保护作用与抑制TLR4-NF-κB-TNFα炎症损伤通路相关。     

小钻木脂素类化合物戈米辛R的体外抗炎机制研究

目的 通过脂多糖(LPS)诱导活化小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7建立炎症模型,探讨小钻木脂素类化合物戈米辛R对炎症细胞增殖及炎症因子分泌的影响,评价其抗炎活性及机制。方法 采用MTT比色法检测经LPS诱导的RAW264.7细胞存活率并计算半数抑制浓度(IC₅₀);采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子含量;利用RT-PCR法检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IκB-α、NF-κB p65的mRNA表达量;Western blot法检测细胞IκB-α及NF-κB p65蛋白表达量。结果 与LPS模型组比较,戈米辛R可显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞增殖;降低细胞分泌TNF-α、IL-1β及IL-6的含量;升高LPS所致降低的IκB-α mRNA的表达量同时降低LPS引起升高的TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA表达量;升高IκB-α并降低NF-κB p65的蛋白表达量,显示出良好的剂量依赖性,具有统计学差异(P<0.05)。结论 戈米辛R可通过抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA和NF-κB p65蛋白的表达,增加IκB-α mRNA和IκB-α蛋白的表达,减少致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的释放,从而发挥显著抗炎活性。     

芪冬活血饮对LPS致炎巨噬细胞炎症反应的作用及机制探讨

目的:通过观察芪冬活血饮大鼠药物血清对NF-κB抑制巨噬细胞炎症细胞因子及TLR4、Cav-1、NF-κBp65 mRNA表达的影响,探讨其炎症调控的机制。方法:将巨噬细胞分为空白对照组(UT组)、LPS组、NF-κB抑制组(NI组)、NF-κB抑制+LPS组(NL组)、LPS加空白血清组(LB组)、LPS加药物血清组(LD组)、NF-κB抑制+LPS+空白血清组(NLB组),NF-κB抑制+LPS+药物血清组(NLD组)8组。巨噬细胞予阻断剂阻断0.5 h后加入LPS致炎,并予药物血清干预,LPS处理12 h后测定各组细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-10水平,及TLR4、Cav-1、NF-κBp65 mRNA相对表达量。结果:LD组TNF-α、IL-1β、IL-10水平及NF-κBp65、Cav-1、TLR4 mRNA相对表达量均低于LB组和LPS组,比较有统计学意义;NLD组TNF-α、IL-1β、IL-10水平及NF-κBp65、Cav-1、TLR4mRNA相对表达量均低于NL组,两组TNF-α、IL-1β有显著统计学差异,NF-κBp65mRNA、IL-10比较差异无统计学意义,Cav-1、TLR4mRNA比较差异有统计学意义。结论:芪冬活血饮药物血清可减轻LPS刺激的巨噬细胞炎性反应;除TLR4/Cav-1/NF-κBp65途径外,芪冬活血饮还可以通过非NF-κBp65途径降低炎症反应。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨刺芒柄花素对LPS诱导的大鼠子宫内膜上皮细胞损伤的影响

目的:探讨刺芒柄花素通过调控Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的大鼠子宫内膜上皮细胞损伤的影响。方法:以LPS诱导大鼠子宫内膜上皮细胞损伤,采用CCK8法检测细胞活性;采用RT-qPCR法检测TLR4过表达效率;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6含量;Western Blot法检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞抑制率、细胞凋亡率、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显增加,p-P65/P65、p-IκBα/IκBα、MyD88和TLR4蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,刺芒柄花素12μmol/L组细胞抑制率、细胞凋亡率、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显降低,p-P65/P65、p-IκBα/IκBα、MyD88和TLR4蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);TLR4过表达...     

黄芪甲苷对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究黄芪甲苷(astragaloside IV,As IV)对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)保护作用并探讨其可能的作用机制。方法:在37℃,5%CO2,95%空气饱和湿度的培养箱内体外培养HUVECs,将细胞分为正常组,模型组(过氧化氢180μmol·L-1),黄芪甲苷不同剂量(25,50,100μmol·L-1)+过氧化氢(180μmol·L-1)组。MTT法测定各组细胞活力,二氢乙锭原位定性细胞内超氧阴离子含量,Western blot测定细胞内核因子(NF)-κB p65,NF-κB抑制蛋白α亚基(IκB-α),内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测HUVECs外液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量。结果:与正常组比较,模型(H2O2)组细胞活力明显降低,细胞中超氧阴离子明显升高,NF-κ`B p65蛋白表达升高,IκB-α蛋白表达降低,e NOS蛋白表达升高,细胞上清液中TNF-α和IL-6的含量升高(P0.01)。与模型(H2O2)组相比,黄芪甲苷不同剂量组表现为细胞活力明显升高,细胞中超氧阴离子含量减少,e NOS,p65蛋白表达有不同程度的降低,IκB-α的蛋白含量增加,细胞上清液中TNF-α和IL-6的含量降低,且呈浓度依赖性(P0.05)。结论:黄芪甲苷能改善H2O2诱导的HUVECs的损伤,其机制可能是通过降低超氧阴离子量,抑制e NOS的解耦联,减少其产生超氧阴离子,从而减轻氧化应激,降低NF-κB和相关炎症因子表达。     

黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞的影响

目的:观察黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞干预作用。方法:H9c2心肌细胞培养,传代后随机分为5组,对照组、缺氧/复氧组、黄芪甲苷药物预处理组:培养液中加入终浓度分别为25、50和100μmol/L的黄芪甲苷预处理,12h后进行缺氧/复氧处理。分别收取细胞培养上清液,用酶联免疫吸附技术(Elisa)测定上清液中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),并检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;采用RT-PCR技术检测NF-κB的基因表达。结果:黄芪甲苷(25、50、100μmol/L)预处理12h后可明显降低IL-6、TNF-α、MDA的含量,可明显提高SOD含量,并可以减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平,并且具有一定的量效关系。结论:黄芪甲苷保护缺氧/复氧对H9c2心肌细胞损伤,通过提高SOD含量,降低MDA含量,发挥抗氧化作用,并且抑制炎性因子IL-6、TNF-α分泌,其机制与减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平有关。     

黄芪桂枝五物汤对糖尿病周围神经病变大鼠模型AGEs/RAGE/NF-κB信号通路的影响

目的:研究黄芪桂枝五物汤对糖尿病周围神经病变大鼠模型晚期糖基化终产物(AGEs)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨黄芪桂枝五物汤减轻糖尿病周围神经病变的作用机制。方法:以高脂饮食加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导法,制作糖尿病周围神经病变大鼠模型。造模成功后,按照随机数字表法分成模型组、黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组、甲钴胺组,共5组,另设正常组,自第5周开始黄芪桂枝五物汤干预,采用黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组(19. 40,4. 85,2. 43 g·kg-1·d-1)连续灌胃12周;甲钴胺组采用甲钴胺0. 25 mg·kg-1·d-1灌胃。实验结束后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测糖尿病周围神经病变大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测坐骨神经组织中RAGE,NF-κB p65 mRNA含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测坐骨神经组织中RAGE,NF-κB,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β,TNF-α含量,坐骨神经组织RAGE,NF-κB p65 mRNA含量,RAGE,NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达显著增加(P0. 01),p-NF-κB p65/NF-κB p65升高,p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P0. 01)。经黄芪桂枝五物汤干预后,与模型组比较,各给药组血清IL-1β,TNF-α含量,RAGE,NF-κB p65 mRNA含量,RAGE,NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达量均显著降低(P0. 01),黄芪桂枝五物汤高剂量组p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(P0. 01),且呈剂量相关性,随黄芪桂枝五物剂量增加而效果明显。结论:黄芪桂枝五物汤可减轻糖尿病周围神经病变,其机制可能与阻断AGEs/RAGE/NF-κB信号通路中组织细胞表面RAGE的表达、抑制NF-κB激活及其引发TNF-α触发的氧化应激和过度炎症反应,从而避免细胞受损和功能紊乱有关。     

黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨黄芪多糖抑制异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)炎症信号通路的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为6组(每组10只):对照组,异丙肾上腺素组,异丙肾上腺素+黄芪多糖(低、中和高剂量)组,异丙肾上腺素+普萘洛尔组。各给药组连续腹腔注射3周,并于给药1 d后腹腔注射异丙肾上腺素2周。给药3周后,各组动物分别检测全心质量指数(HMI)、左心质量指数(LVMI);取左心室组织进行苏木精—伊红染色法(HE)染色;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织心钠素(ANP)和TLR4的mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测心肌组织TLR4、p65蛋白(p65)和核因子κB抑制蛋白α(IκBα)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中TNF-α、IL-6的水平。结果与对照组相比,异丙肾上腺素组大鼠的HMI和LVMI显著增加,ANP、TLR4m RNA表达增加,TLR4、p65的蛋白水平增加和IκBα蛋白水平减少,血清中TNF-α、IL-6明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。与异丙肾上腺素组相比,黄芪多糖400、800mg/(kg·d)和普萘洛尔40 mg/(kg·d)组HMI和LVMI降低,ANP、TLR4 mRNA和TLR4、p65蛋白和血清中TNF-α、IL-6表达显著降低,IκBα蛋白的表达明显增加(P<0.01)。黄芪多糖200 mg/(kg·d)组ANP、TLR4 mRNA和TLR4、p65蛋白和血清中TNF-α的表达降低(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白的表达增高(P<0.05)。结论黄芪多糖能改善异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB炎症信号通路有关。     

黄芪甲苷联合血管内皮生长因子转染内皮祖细胞对心肌梗死模型大鼠的保护作用

为证实黄芪甲苷联合血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）转染内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells,EPCs）对心肌梗死大鼠的保护作用,建立心肌缺血/再灌注损伤（Myocardial Ischemia Reperfusion Injury,MIRI）模型。观察不同组别大鼠心肌组织、血管分布等病理学变化,以及相关炎性细胞因子及其上游调控基因和信号转导蛋白的关系,结果表明：黄芪甲苷联合基因干细胞具有促血管新生作用,并能有效抑制炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)及其上游调控因子核转录因子-κB p65(Nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)和信号转运蛋白Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的表达,减少心肌炎性反应。可见联合治疗对大鼠MIRI具有积极的保护作用。     

黄芪甲苷改善大鼠急性脑梗死神经运动功能及对梗死侧大脑皮层中NF-κB p65及IKKβ蛋白的影响

目的观察黄芪甲苷改善大鼠急性脑梗死神经运动功能及对梗死侧大脑皮层中核转录因子-κB(NF-κB) p65及IκB激酶β(IKKβ)蛋白的影响。方法将40只SD大鼠均分为假手术组、模型组、溶剂对照组和黄芪甲苷组4组,制备大鼠急性脑梗死模型,假手术组不阻塞血流。黄芪甲苷组腹腔注射80 mg/kg的黄芪甲苷应用液,从术后第1日开始,持续给予14 d,对照组和模型组给予等体积生理盐水,溶剂对照组给予等体积0.5%羟甲基纤维素钠溶液。在第14日对大鼠神经运动功能评分后处死大鼠,分离脑组织进行梗死体积、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NF-κB p65和IKKβ水平检测。结果假手术组未见梗死灶,其余各组均出现不同程度梗死;溶剂对照组与模型组各指标间均无明显差异(P 0.05);与模型组和溶剂对照组比较,黄芪甲苷组梗死体积明显减小,14 d后,黄芪甲苷组大鼠神经运动功能评分明显降低,差异有统计学意义(P 0.05)。与假手术组比较,各组梗死侧大脑皮层中IL-1β、TNF-α、NF-κB p65和IKKβ水平均增高,差异具有统计学意义(P 0.05);与模型组和溶剂对照组比较,黄芪甲苷组梗死侧大脑皮层中IL-1β、TNF-α、NF-κB p65和IKKβ水平降低显著,差异均具有统计学意义(P 0.05)。结论黄芪甲苷能改善急性脑梗死大鼠的神经运动功能,可能与NF-κB炎性信号通路相关。     

养阴清热化瘀方对急性放射性肺炎大鼠TLR-4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨养阴清热化瘀方对大鼠急性放射性肺炎的防护作用及可能机制。方法:采用随机数字表法将48只雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组(NC)、模型组(MD)、养阴清热化瘀方提前干预组(YHF-EI)及养阴清热化瘀方组(YHF-ST),分别于照射后4周时采集血清及取出右肺。观察大鼠的一般情况,应用HE染色观察肺组织病理改变,ELISA法检测血清中含量, RT-PCR和Western-blotting法分别检测肺组织内TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白的水平。结果:养阴清热化瘀方能显著减轻大鼠放射性肺炎的炎症表现;与空白对照组比较,血清中TNF-α、IL-6、TGF-β的含量升高,TLR4和NF-κB p65 mRNA转录活性增强,肺组织中TLR4和NF-κB p65的蛋白表达水平升高;与模型组比较,两组养阴清热化瘀方组血清中TNF-α、IL-6、TGF-β的含量降低,TLR4和NF-κB p65 mRNA转录活性下降,肺组织中TLR4和NF-κB p65的蛋白表达水平降低。结论:养阴清热化瘀方可能通过抑制"TLR4/NF-κB"信号通路,从而抑制TNF-α、IL-6、TGF-...     

淫羊藿苷对脑缺血再灌注大鼠的神经保护及小胶质细胞TLR4/NF-κB通路的影响

目的:探讨淫羊藿苷对脑缺血再灌注大鼠的神经保护及小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法:假手术组大鼠只分离不结扎阻塞血管,并予等体积的生理盐水腹腔注射,其余各组采用线栓法复制一侧大脑中动脉脑缺血再灌注模型(MCAO),造模成功后随机分为模型组,丁苯酞组(6 mg·kg~(-1)),淫羊藿苷高、中、低(40,20,10 mg·kg~(-1))剂量组,分别于缺血5,12,24 h各腹腔给药1次。进行神经功能评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色测脑梗死率,免疫组化法检测大鼠脑皮层小胶质细胞标志物海马离子钙结合适配分子1(Iba1)和TLR4的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大脑皮层NF-κB p65表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-1α(IL-1α),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经评分增加、大脑梗死率显著增加,小胶质细胞Iba1,TLR4活化量显著增加,NF-κB p65的蛋白水平上升(P0.01),炎症因子IL-1α,TNF-α含量显著增加(P0.01);经淫羊藿苷治疗后,与模型组比较,大鼠神经功能评分、脑梗死率均有改善,小胶质细胞Iba1,TLR4活化量减少,NF-κB p65的蛋白水平下降,炎症因子IL-1α,TNF-α含量明显下降(P0.05,P0.01)。结论:淫羊藿苷可能是通过调控小胶质细胞的活化,抑制TLR4及其下游NF-κB信号通路的活化,降低相关炎症因子IL-1α,TNF-α的表达,发挥卒中后的脑保护作用。     

电针对功能性消化不良肝郁脾虚模型大鼠十二指肠TLR4、NF-κB p65的影响

目的:探讨治疗功能性消化不良(FD)的作用机制。方法:将30只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、电针组各10只。模型组及电针组采用多因素干预法造模20 d,空白对照组不给予任何处置。造模成功后电针组针刺足三里穴、太冲穴后接电针治疗14 d,余组不采用任何干预措施。采用ELISA(酶联免疫吸附剂测定)检测各组血清IL-6(白介素-6)、TNF-α(肿瘤坏死因子α)水平,WB(免疫印迹法)检测大鼠十二指肠TLR4(Toll样受体4)、 NF-κB p65 (核转录因子κB p65)表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠十二指肠TLR4、NF-κB p65表达显著增高,血清IL-6、TNF-α水平显著升高;与模型组比较,电针组大鼠十二指肠TLR4、NF-κB p65及血清IL-6、TNF-α水平显著降低。结论:电针可能通过下调十二指肠TLR4、NF-κB p65表达,降低血清IL-6、TNF-α等炎性因子水平抑制炎症反应,发挥治疗FD作用。     

越鞠甘麦大枣汤对LPS诱导的BV2细胞损伤的保护作用机制研究

目的研究越鞠甘麦大枣汤(YG)对脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞损伤的保护作用。方法用LPS溶液建立BV2细胞损伤模型,制备YG无菌溶液,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞成活率,ELISA法测定各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-10(IL-10)的含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)法测定各组细胞内核因子-κB(NF-κB)p65,蛋白激酶B(AKT),磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平。结果模型组细胞成活率下降,细胞外液中TNF-α,IL-1β的含量上升,而IL-10的含量没有显著变化;细胞内AKT,p-AKT,NF-κB(p65)蛋白表达水平提高;YG能提高LPS模型条件下的细胞成活率,使细胞外液中TNF-α,IL-1β,IL-10的含量均下降,细胞内AKT,p-AKT,NF-κB(p65)蛋白表达水平下降。结论 YG对LPS诱导的BV2细胞损伤具有保护作用。     

汉黄芩苷对糖尿病大鼠肾组织炎症因子表达及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨汉黄芩苷对糖尿病模型大鼠肾组织炎症因子表达及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法采用腹腔注射STZ(60 mg/kg)法复制糖尿病大鼠模型,分为模型组、汉黄芩苷高(40 mg/kg)、中(20 mg/kg)、低(10 mg/kg)剂量组及正常组,每组10只;灌胃给药,连续8周。检测各组大鼠体质量,肾脏指数,FBG、INS、UmAlb、Scr、BUN水平,肾组织病理形态,TNF-α、IL-1β、IL-18、TLR4、NF-κB p-p65及NF-κB p65等指标变化情况。结果与模型组比较,汉黄芩苷组大鼠体质量升高(P<0.01),而肾脏指数及FBG、INS水平均降低(P<0.01);大鼠UmAlb水平及血清Scr、BUN水平均降低(P<0.01),且病理形态均有一定程度的改善,大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-18水平及肾组织TLR4、NF-κB p-p65蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论汉黄芩苷可以通过抑制炎症因子表达及调控TLR4/NF-κB信号通路的活化,发挥保护糖尿病模型大鼠肾组织损伤作用。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素致乳鼠心肌细胞肥大的影响及其机制

目的 探讨黄芪甲苷对异丙肾上腺素（ISO）致乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用及其机制。方法 原代培养新生SD大鼠心肌细胞48 h,分别加入不同浓度的黄芪甲苷、IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082、β-受体阻滞剂普萘洛尔作用30 min,加入ISO 10 μmol/L继续培养48 h。消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法检测细胞中蛋白的量;RT-PCR法检测心肌细胞ANP和TLR4基因的表达;Western blotting法检测心肌细胞TLR4、p65和IκBα蛋白的表达;ELISA法检测细胞外液中TNF-α、IL-6的量。结果 与对照组比较,模型组心肌细胞体积明显增大,总蛋白的量增加,ANP基因、TLR4基因和蛋白、p65蛋白表达上调,IκBα蛋白表达下调,细胞外液中TNF-α、IL-6的量显著增加（P＜0.01）。黄芪甲苷、BAY11-7082和普萘洛尔均能有效抑制ISO诱导的心肌细胞肥大,使心肌细胞体积减小,总蛋白的量降低,ANP 基因、TLR4基因和蛋白、p65蛋白表达下调,IκBα蛋白表达上调（P＜0.05）,且上述作用呈一定的剂量相关性。结论 黄芪甲苷对ISO诱导的心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

大黄素对脂多糖诱导后巨噬细胞释放炎症因子的影响

目的:研究大黄素对脂多糖(Lipopolysacchride,LPS)诱导后巨噬细胞RAW264.7释放炎症因子的影响及其分子机制。方法:将细胞分为6组,空白组,LPS组和不同浓度(1μM,5μM,10μM,25μM)大黄素+LPS组,不同浓度的大黄素预处理细胞2 h后,再加入1μg/m L LPS刺激细胞,用ELISA法检测细胞上清液中的TNF-α,IL-1β,IL-6蛋白水平,用RT-PCR法检测炎症因子mRNA表达,用Western-Blot检测核转录因子(NF-κB p65)的磷酸化。结果:LPS刺激后RAW264.7巨噬细胞炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的表达和分泌明显高于空白组,而给予大黄素的LPS组表达和分泌上述细胞因子明显降低,且呈剂量依赖性。LPS刺激后的细胞NF-κB p65磷酸化明显增强,而大黄素则能抑制NF-κB p65的磷酸化,且呈剂量依赖性。结论:大黄素能明显抑制巨噬细胞释放炎症因子,降低mRNA的表达,其作用机制主要通过抑制NF-κB p65磷酸化的信号通路。     

基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖诱导脊髓星形胶质细胞凋亡的影响

目的:基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖(LPS)诱导的脊髓星形胶质细胞凋亡的影响。方法:从SD乳鼠脊髓中分离星形胶质细胞并鉴定。CCK-8法检测不同浓度八桂止痛散(2.5、5、10、20、40、80 mg/ml)对细胞存活的影响;随后分别设置对照组、LPS组、LPS+药物-L组、LPS+药物-M组、LPS+药物-H组、LPS+药物-H+Anisomycin组。CCK-8法、流式细胞术检测细胞存活、凋亡;ELISA法检测细胞中白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR检测细胞中JNK、p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达水平;Western blot检测JNK/p38 MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组相比,LPS组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JNK mRNA、p38 MAPK mRNA、NF-κB p65 mRNA表达、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加...     

芍药苷配伍小檗碱对 TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB/YY1 信号通路的影响

目的基于NF-κB/YY1信号通路探讨芍药苷配伍小檗碱对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响。方法体外培养HUVECs,分别设空白对照组、模型组(TNF-α20 ng/m L)、芍药苷组(PF 160μmol/L)、小檗碱组(BBR 20μmol/L)、配伍组(160μmol/L芍药苷+20μmol/L小檗碱组)。采用CCK8法检测各组细胞活力;LDH毒性实验检测细胞上清液中LDH释放量;ELISA法检测细胞上清液中IL-6和IL-8含量;RT-PCR检测NF-κB、YY1基因表达;Western Blot法检测NF-κB、YY1蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组细胞活力减弱,LDH漏出率增加,IL-6和IL-8含量增加,NF-κB和YY1基因及蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,芍药苷组、小檗碱组及配伍组干预后细胞活力增强,LDH漏出率减少,IL6和IL-8含量降低,NF-κB和YY1基因及蛋白表达下调,且芍药苷和小檗碱配伍组较单体组干预后效果更明显(P<0.05,P<0.01)。结论TNF-α可激活HUVECs NF-κB/YY1信号通路,诱导炎症反应,加重内皮损伤。芍药苷配伍小檗碱较单药使用可更有效地抑制NF-κB/YY1信号通路,减轻炎症反应进而起到血管内皮保护作用。     

苦地丁的抗炎药效物质基础组分及作用机制研究

苦地丁常用于治疗多种炎症,为确定其抗炎药效物质基础,该文利用自动纯化系统对苦地丁提取物进行分离制备,制备了黄酮组分和生物碱组分,并对所制备的组分进行了质谱鉴定;进一步检测组分对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的影响。首先,用LPS处理小鼠巨噬细胞(RAW264.7),观察其细胞存活率与LPS浓度的关系;然后检测不同给药浓度的黄酮组分和生物碱组分对细胞存活率的影响,确定最大给药浓度。其次,分别加入质量浓度为2.5,5,10,20μg·mL~(-1)生物碱组分和黄酮组分,观察不同浓度生物碱组分和黄酮组分对LPS导致的RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症的影响及其作用机制。Griess试剂法检测细胞上清液NO含量;ELISA法检测细胞上清液炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)的表达;Western blot法检测细胞内核因子κB(NF-κB)IκBα磷酸化(p-IκBα)、p65磷酸化(p-p65)以及TLR4和TLR2的蛋白表达。结果显示,生物碱组分在2.5～20μg·mL~(-1)呈剂量依赖地对NO,TNF-α,IL-1β,IL-6有显著抑制作用。在炎症上游通路,生物碱组分对TLR4表达水平的抑制作用强于TLR2,在炎症下游NF-κB通路,2.5～20μg·mL~(-1)生物碱组分呈剂量依赖方式显著抑制IκBα及p65磷酸化。由此可知,生物碱组分是苦地丁抗炎药效组分,其抗炎作用机制可能为,通过抑制炎症信号在以TLR4为主的TLRs/NF-κB信号通路的传导,干扰炎性基因的激活抑制其过量表达,下调炎性因子的分泌水平达到炎症抑制作用。