雌激素及其受体对低氧性肺血管重建的作用

 目的：探讨雌激素及其受体对低氧性肺血管重建的作用。 方法:采用间断常压低氧法建立大鼠低氧性肺动脉高压模型。将30只雄性SD大鼠随机分成：对照组、雌激素预防组、低氧组、雌激素治疗组、治疗对照组。以右心导管法测定平均肺动脉压(mPAP)；测定右心室肥厚指数［RV/(LV+S)］；图像分析技术测定肺小血管管壁厚度；用放射免疫法测定血清17-β雌二醇浓度。用RT-PCR方法检测肺组织中ERβ mRNA的表达，用免疫组化染色法检测肺小血管壁的ERβ蛋白表达。 结果:①低氧组、治疗对照组大鼠mPAP、RV/(LV+S)、WT%和WA%均高于对照组；雌激素预防组、雌激素治疗组大鼠mPAP、RV/(LV+S)、WT%和WA%均低于低氧组、治疗对照组。②低氧组、治疗对照组大鼠ERβ mRNA表达量和ERβ蛋白表达与正常对照组无差异。经雌激素干预后，雌激素预防组、雌激素治疗组的ERβ mRNA表达和ERβ蛋白表达显著高于低氧组、治疗对照组。 结论:17-β雌二醇能有效降低低氧性肺动脉高压大鼠的肺动脉压力、阻抑右心室肥厚,对低氧性肺动脉高压血管重建具有一定的预防和治疗作用，其作用可能是通过雌激素受体β实现的。     

持续光照对大鼠卵巢褪黑素受体表达的影响及与卵泡发育的相关性

目的:研究持续光照对青春期前雌性大鼠卵巢褪黑素受体的表达及与卵泡发育的相关性。方法:雌性大鼠随机分成对照组和24 h持续光照组,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中褪黑素、雌二醇水平,免疫组织化学法观察卵巢组织褪黑素受体(MR)的表达,RT-PCR法检测卵巢组织中雌激素受体α、β(ERα、ERβ)的mRNA的表达量。结果:与对照组相比,24 h持续光照组阴门开启时间提前,动情期延长,血清褪黑素显著下降,雌二醇水平显著增高,卵巢组织中MR表达下降,ER表达增高。结论:持续光照可以抑制青春期前雌性大鼠褪黑素及其受体表达,并促进卵泡发育和卵巢雌激素受体的表达,这可能与女性性早熟的发病机制相关。     

前列腺间质细胞中雌二醇对MMP-2，MMP-9及其组织抑制因子表达的影响

目的： 研究雌二醇(E2)对前列腺间质细胞中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9）及其组织抑制因子1(TIMP-1)、TIMP-2和雌激素受体α、β（ERα、ERβ）的影响。方法： 实时定量PCR法检测E2在前列腺间质细胞中对MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA水平的影响；半定量RT-PCR法检测E2对ERα、ERβ mRNA水平的影响。酶谱电泳法检测MMP-2、MMP-9的活性。Western blotting检测E2在前列腺间质细胞中对ERα蛋白水平的影响。结果： 前列腺间质细胞中有MMP-2和ERα mRNA的表达，未检测到MMP-9 mRNA；培养液中检测到MMP-2前体（pro-MMP-2），未检测到其活性形式，也未检测到MMP-9前体及其活性形式。用E2处理间质细胞后MMP-2 mRNA水平降低，pro-MMP-2蛋白量减少，雌激素受体抑制剂ICI 182.780可抑制此作用。E2对TIMP-1,2 mRNA表达无显著影响。E2能够增加前列腺间质细胞中ERα mRNA及其蛋白表达的水平。结论： E2能够通过ERα下调前列腺间质细胞中MMP-2的表达。     

下调ERα36提高他莫昔芬对卵巢癌细胞作用的敏感性

目的探讨新型膜性雌激素受体ERα36在他莫昔芬(tamoxifen, TAM)治疗卵巢癌中的作用。方法转染特异性的siRNA,下调卵巢癌细胞SKOV3、HO8910中ERα36的表达;TAM处理肿瘤细胞后,采用CCK-8、流式细胞术及Western blot等方法检测卵巢癌细胞的增殖、凋亡及相关信号通路关键蛋白的表达。结果 siRNA特异性下调ERα36蛋白的表达;CCK-8检测显示,1μmol/L TAM作用于卵巢癌细胞的抑制率较为适中,故作为后续实验的处理浓度;不同浓度的TAM作用ERα36下调的肿瘤细胞后,与siRNA对照组相比,肿瘤细胞抑制率明显上升(P0.01);下调ERα36表达后,p-Akt蛋白表达显著下降(P0.01),凋亡相关Caspase-3、Bax蛋白表达量显著升高(P0.01),BCL-2蛋白表达显著降低(P0.01)。结论利用特异性siRNA下调ERα36的表达后,可以增强TAM对卵巢癌细胞作用的敏感性。     

Wnt/β⁃catenin信号通路参与马蹄内翻足畸形形成的研究

目的　探讨Sox9（sex determining region Y-box9）和β-catenin对先天性马蹄内翻足（congenital talipes equinovarus，CTE）的影响以及Wnt/β-catenin信号通路作用机制。 方法　将孕10 d的SD大鼠随机均分为实验组及对照组，以135 mg/kg全反式维甲酸溶于矿物油对实验组大鼠进行灌胃制作胎鼠CTE模型，对照组予以等量矿物油灌胃处理，取大鼠足踝部组织，通过免疫组化、RT-PCR、Western blot检测β-catenin、Sox9以及磷酸化β-catenin-S552的表达水平。 结果　与对照组相比，HE染色可见CTE模型组织中有较多的胶原组织沉积，免疫组化结果显示实验组标本Sox9与β-catenin表达增高，RT-qPCR表明实验组Sox9与β-catenin的mRNA水平显著增高，Western blot结果显示实验组Sox9与β-catenin的表达增高而磷酸化β-catenin-S552表达降低。 结论　CTE大鼠的足踝部组织中Sox9高表达受Wnt/β-catenin信号通路调控，该通路参与先天性马蹄内翻足畸形的形成。     

法舒地尔对TGF-β诱导尿道成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成的影响

目的探究法舒地尔对TGF-β诱导尿道成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成的影响。方法无菌条件下获得家兔尿道瘢痕组织,采用酶解法提取原代尿道成纤维细胞,用10 ng/m L TGF-β或者联合不同浓度(0,25,50μM)法舒地尔处理后,通过Western blot检测α-SMA、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和自噬以及迁移相关蛋白的表达。采用Transwell实验和MTT实验分别检测成纤维细胞迁移以及增殖能力。结果 Western blot结果显示,TGF-β明显上调了α-SMA蛋白、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ,法舒地尔下调了胞外基质蛋白表达(P 0.05),并且呈浓度依赖性。Transwell实验和MTT实验显示,TGF-β增加了细胞迁移数量和细胞活性(P 0.05),而法舒地尔抑制了细胞迁移数量(P 0.05),下调了细胞活性(P 0.05)。Western blot结果还显示,TGF-β显著下调了p AKT、pm TOR和p62等蛋白表达(P 0.05),上调了ATG7、ATG5、LC3等自噬相关蛋白表达(P 0.05);而法舒地尔上调了p AKT、pm TOR和p62等蛋白表达(P 0.05),抑制了ATG7、ATG5、LC3等自噬相关蛋白表达(P 0.05)。结论法舒地尔可以通过激活细胞自噬从而抑制TGF-β诱导的成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成,其作用与促进AKT/m TOR信号通路相关。     

禁止交配下调成年雌性大鼠乳腺组织雌二醇水平及雌激素受体α的表达

目的 研究禁止交配对成年雌性大鼠乳腺组织雌二醇(E2)水平、雌激素受体α(ERα)表达的影响.方法 12只成年雌性SD大鼠随机分为对照组(交配组)和禁止交配组,实验第61天终止实验后在间情期采集标本,光镜下观察各组大鼠乳腺组织结构,透射电镜下观察乳腺组织超微结构;采用放射免疫法检测外周血及乳腺组织E2浓度;采用免疫组织化学染色和Western blotting技术检测乳腺组织ERα的表达变化. 结果禁止交配60d后,成年雌性大鼠乳腺组织E2水平下降,与对照组比较P<0.05;同时乳腺组织上皮细胞、基质细胞细胞核ERα表达下调,与对照组比较P<0.05;光镜、电镜下各组大鼠乳腺组织未见明显异常. 结论禁止交配可下调雌性大鼠乳腺组织E2水平和ERα的表达.     

MTA1在乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-435s细胞系的表达及与ERα甲基化的关系

目的用去甲基化药物5-Aza-d C处理雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)启动子甲基化的乳腺癌细胞系,探讨ERα启动子甲基化与MTA1在乳腺癌发生发展中的可能机制。方法用去甲基化药物5-Aza-d C逆转MDA-MB-231和MDA-MB-435s的ERα启动子甲基化,甲基化PCR验证其甲基化状态,用RT-PCR和Western blot研究去甲基化后MTA1 m RNA和蛋白表达情况,Transwell检测去甲基化后细胞侵袭能力的改变。结果在MDA-MB-231和MDA-MB-435s细胞系中,去甲基化药物5-Aza-d C逆转ERα启动子甲基化后,MTA1m RNA和蛋白表达水平下调,细胞侵袭能力下降。结论乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435s中ERα甲基化与MTA1表达存在相关性。     

甘草素通过抗炎发挥对阿尔茨海默病的保护作用

目的研究植物雌激素甘草素(liquiritigenin,LG)是否通过抗炎对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发挥保护作用。方法 LG是从中药甘草中提取的一种黄酮类化合物单体,具有多靶向作用,如抗炎、抗氧化等。本实验用N2A细胞(神经瘤母细胞)作为正常对照细胞和稳定表达瑞士突变型淀粉样蛋白前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的N2A细胞(N2AAPP)作为AD细胞模型,结合LG处理,通过MTT、ELISA、Western blot、RT-PCR检测LG对AD模型细胞的细胞活性、雌激素受体(ERβ)、炎症相关蛋白NLRP3和caspase-1以及炎症因子IL-1β、TNF-α的影响。结果与正常的N2A细胞相比,N2A-APP细胞中APP、BACE1蛋白表达以及Aβ水平显著增加,说明N2A-APP作为AD模型细胞的有效性。MTT结果显示LG不影响N2A的细胞活力(P0.05)。Westers blot结果显示,与正常N2A细胞相比,N2A-APP细胞内ERβ的表达显著下调,而LG处理可显著逆转ERβ的表达。Westers blot结果还发现,与正常细胞相比,N2A-APP细胞内炎症相关蛋白NLRP3和p-caspase-1蛋白表达显著增强,而LG处理可有效逆转NLRP3和p-caspase-1的表达上调(P0.01)。相应地,RT-PCR结果发现,LG可显著降低N2A-APP细胞内炎症因子IL-1β、TNF-α的水平。结论甘草素可有效抑制AD模型细胞的炎症反应,其机制可能与其上调ERβ蛋白的表达有关。     

ER拮抗剂对人子宫内膜样癌JEC细胞中ERα、ERβ、p57~(kip2)表达的影响

目的探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂对人子宫内膜样癌(endometrioid carcinoma,EC)JEC细胞(中分化)中ER亚型ERα、ERβ及p57~(kip2)表达的影响。方法分别用两种ER拮抗剂[他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)(10~(-6)mol/L)、氟维司群(Faslodex,ICI182780)(10~(-6)mol/L)]及雌二醇(β-Estradiol,E_2)(10~(-6)mol/L)干扰JEC细胞,体外培养24、48、72 h后,MTT法观察JEC细胞的生长曲线;光镜与电镜观察JEC细胞的形态变化;Western blot法检测JEC细胞中ERα、ERβ及p57~(kip2)蛋白表达的变化。结果 MTT结果显示,与对照组JEC细胞比较,E_2可明显促进JEC细胞增殖,ICI182780则明显抑制JEC细胞的增殖(P0.05);与E_2组比较,E_2+ICI182780组JEC细胞增殖能力明显降低(P0.05)。形态学改变:与对照组比较,E_2组细胞密度增大较明显,病理性核分裂象易见,ICI182780组细胞密度减小较明显;与E_2组比较,E_2+TAM组与E_2+ICI182780组细胞密度均有所减小,核分裂象不易见。Western blot结果显示:与对照组比较,E_2组ERβ蛋白表达增高,p57~(kip2)蛋白表达降低(P0.05);ICI182780组与TAM组ERβ蛋白表达均降低,p57~(kip2)蛋白表达均增高,但仅ICI182780组差异有统计学意义(P0.05)。与E_2组比较,E_2+ICI182780组与E_2+TAM组ERβ蛋白表达均降低,p57~(kip2)蛋白表达均增高,但仅E_2+ICI182780组差异有统计学意义(P0.05)。实验各组及对照组JEC细胞中均无ERα蛋白表达。结论 JEC细胞不表达ERα蛋白。ICI182780有较强的拮抗雌激素的作用,可能通过下调JEC细胞中ERβ蛋白表达,诱导p57~(kip2)蛋白的表达,发挥其阻滞细胞周期进程的作用,从而抑制肿瘤细胞生长;TAM则对JEC细胞生长有较弱的雌激素样作用。联合检测ERα、ERβ、p57~(kip2)蛋白在EC中的表达,对EC患者内分泌治疗的个体化选择有重要的参考价值。     

MG132抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化

目的探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化的影响及机制。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),随机分为对照组、TGF-β1组(10μg/L)和MG132(0.5μmol/L)处理组。Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1A1)的表达;RT-PCR和Western blot法分别检测细胞Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-βI型受体(TβRI)、Smad2和Smad3 mRNA及蛋白的表达。结果与对照组比较,TGF-β1促进了α-SMA和COL1A1蛋白表达(P0.05),MG132抑制了TGF-β1的上述作用(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN mRNA表达较对照组增加(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN蛋白表达较对照组减少(P0.05),而MG132组Smad7和SnoN蛋白水平较TGF-β1组增加(P0.05)。结论 MG132可能通过阻止Smad7和SnoN蛋白泛素化降解,抑制TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化。     

Wnt/β-catenin信号途径抑制Raw264.7分化

目的 了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控.方法 将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50 ng/mL RANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组).分别给予上述4组处理因素后常规细胞培养3、6和9d提取细胞总RNA,荧光定量real-time (RT-PCR)检测核因子受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)及金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,再于同样处理因素培养6d通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察Raw264.7的分化情况;Western blot检测TRAP、Cathepsin K蛋白的表达.结果 RT-PCR检测Ad-β-catenin组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表达;TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导Raw264.7成多核细胞,空白组和Ad-GFP组有个别多核细胞,Ad-β-catenin组为单核细胞;Western blot检测显示Ad-β-catenin组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低(P＜0.05).结论 Wnt/β-catenin信号途径能抑制RAW264.7分化成熟为破骨细胞.     

人ERβ AF1融合蛋白的表达及其多克隆抗体制备

目的: 制备雌激素受体β多克隆抗体.方法: 从人乳腺cDNA文库中PCR扩增ERβ AF1结构域(1～144位氨基酸), DNA 重组插入原核表达质粒pGEX-KG, 转化大肠杆菌DH5α, 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-ERβ AF1融合蛋白.纯化后免疫BALB/c小鼠, 制备鼠多抗血清.通过Western blot和免疫组织化学实验鉴定血清特异性和效价.结果: 成功构建了pGEX-KG/ERβ AF1原核表达载体, 转化DH5α后可高效表达融合蛋白GST-ERβ AF1, 免疫产生的ERβ多抗可特异检测ERβ真核表达载体转染人293T细胞及乳腺癌细胞中ERβ的表达.结论: 制备的ER 抗体对ERβ有反应原性, 效价高, 特异性好, 为进一步研究ERβ的生物学功能奠定基础.     

雌激素对大鼠心脏雌激素受体α和β表达的影响

目的研究雌激素受体（ER）α和β在新生、成年和卵巢切除大鼠心脏的表达。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法,分析新生和成年大鼠心脏各部的ERα和βmRNA及ER蛋白质的表达,探讨不同剂量的17β雌二醇对卵巢切除大鼠心脏ERα和βmRNA、ER蛋白质的表达调控及对心房、心室重量和它们与体重比变化的影响。结果ERα mRNA在新生大鼠心脏各部表达较低,而成年大鼠心脏各部ERα mRNA的转录水平提高3～20倍,这种差别体现在ERα蛋白质的表达水平不同。反之新生大鼠心脏ERβ mRNA表达水平较高,而成年大鼠心脏ERβ mRNA的表达降低2～7倍。卵巢切除减少成年大鼠心房ERαmRNA和蛋白质的表达,减轻心房重量及心房／体重比;17肛雌二醇替代却能反转这些改变,同时随着血浆17β-雌二醇水平的增高,这种影响在一定程度上呈剂量依赖关系。卵巢切除和178一雌二醇替代并不改变心脏和心室／体重比,也不影响ERβ mRNA的表达。结论雌激素受体α和β在新生和成年大鼠心脏的表达存在差别,ERβ可能在大鼠心脏的发育过程中起重要作用,ERα足雌激素对成年大鼠心脏调控的优势受体;雌激素的主要靶器官是心房,且通过其受体的介导促进心房肌细胞的增生。     

维生素D通过下调谷氨酰胺合成酶抑制乳腺癌细胞增殖

目的 探究维生素D对非三阴性乳腺癌(non-triple negative breast cancer, Non-TNBC)和TNBC癌细胞增殖的影响及分子机制。方法 收集TNBC和Non-TNBC患者乳腺组织,原代培养TNBC和Non-TNBC患者乳腺细胞;免疫荧光检测乳腺细胞雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和HER2蛋白表达;免疫荧光检测Non-TNBC和TNBC乳腺癌组织和乳腺细胞中VDR蛋白表达;CCK-8检测细胞活力变化;流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期的变化;光学比色法检测细胞谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)活力的变化;ELISA检测细胞培养上清和胞内谷氨酰胺的水平;Western blot检测细胞GS和VDR蛋白表达的变化;CHIP-PCR检测VDR对GS的转录调控。结果 TNBC患者外周血中维生素D水平和癌组织VDR蛋白表达明显低于Non-TNBC患者(P<0.05)。相比于原代Non-TNBC乳腺癌细胞,原代TNBC患者乳腺癌细胞低表达雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和HER2蛋白表达;TNBC乳腺癌细胞VDR表达水...     

补肾健脾活血中药干预膝骨关节炎模型大鼠软骨细胞IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路的变化

文题释义：膝骨关节炎：是一种以膝关节软骨退变、破坏和骨质增生为主要特征的慢性关节病，多患于中老年人群，主要表现为膝关节疼痛，上下楼梯时疼痛加重，休息后缓解，局部肿胀，活动受限，晚期膝关节畸形，严重影响患者的生活质量。 雌激素：主要由卵巢分泌，分泌的雌激素进入血液循环发挥生物学效应，妇女绝经后卵巢功能衰退，雌激素分泌减少从而诱发膝骨关节炎。 背景：膝骨关节炎是最常见的退行性关节疾病，其发病率和致残率高，已严重影响患者的生活质量。研究发现，补肾健脾活血中药能够改善膝骨关节炎临床症状，但其具体机制仍未阐明。 目的：通过膝骨关节炎去势大鼠模型研究补肾健脾活血中药调节IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法：6月龄SD雌性大鼠，随机分为空白对照组、模型组、实验组和阳性对照组，模型组、实验组和阳性对照组摘除卵巢及切除交叉韧带和内侧半月板制作去势大鼠膝骨关节炎模型，术后2周实验组采用补肾健脾活血中药灌胃，阳性对照组采用塞来昔布胶囊灌胃，空白对照组和模型组以生理盐水灌胃。连续灌胃6周后取血清及膝关节软骨组织，采用ELISA检测血清雌二醇含量，分别采用荧光定量PCR和Western blot检测关节软骨组织中IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路表达水平。结果与结论：与空白对照组比较，模型组白细胞介素1β表达量明显升高，雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显降低(P < 0.05)；与模型组比较，实验组白细胞介素1β表达量明显降低(P < 0.05)，雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P < 0.05)；与阳性对照组比较，实验组白细胞介素1β、雌激素受体相关受体α及Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P < 0.05)，SRY相关蛋白9表达量明显降低(P < 0.05)。实验结果表明，IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路参与膝骨关节炎软骨病变，补肾健脾活血中药可通过该机制发挥治疗作用。 ORCID: 0000-0002-5449-3942(霍少川) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程     

BMI-1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:通过检测人宫颈癌组织中BMI-1的表达,探讨其与宫颈癌临床病理特征的关系。方法:分别采用RT-PCR和Western blot方法检测BMI-1基因在宫颈癌细胞株CasKi中mRNA水平及蛋白质水平的表达,进一步采用免疫组化SP法检测57例宫颈癌组织中BMI-1蛋白的表达情况,并结合患者的临床病理资料分析与其相关性。结果:BMI-1在宫颈癌细胞CasKi中,在mRNA水平和蛋白质水平均有表达,免疫组织化学检测的57例宫颈癌标本中BMI-1蛋白强阳性表达23例(80.70%),且BMI-1的强阳性表达与宫颈癌的淋巴结转移及临床分期密切相关(P0.05),而与肿瘤大小、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)等临床病理特征无显著性相关(P0.05)。结论:BMI-1蛋白在宫颈癌组织中的高表达与肿瘤进展和淋巴结转移相关,提示高表达BMI-1的宫颈癌具有高度转移潜能,同时预示BMI-1可能成为预测宫颈癌高度转移的新的分子标志物。     

龙血素A对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞生长和雌激素受体表达的影响

目的:观察龙血素A对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞生长和雌激素受体(ER)表达的影响。方法:采用龙血素A与MCF-7细胞体外共培养(药物组)干预手段,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞的增殖情况;Hoechst33258染色检测细胞凋亡率;免疫荧光和免疫印迹检测ERα和ERβ蛋白的表达。结果:与对照组相比,药物组细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加;免疫荧光和免疫印迹检测结果显示药物组ERα表达显著减少,而ERβ的表达显著增加。结论:龙血素A对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞具有明显抑制生长和促进凋亡作用,其机制可能与龙血素A能下调ERα表达和上调ERβ表达有关。     

ERα和ERβ在正常子宫内膜、异常增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达及意义

目的探讨雌激素受体（ER）亚型α和β mRNA及蛋白的异常表达与子宫内膜癌的发生发展的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法（SP法）,检测18例正常子宫内膜组织、29例异常增生组织和50例子宫内膜癌组织中ERα、ERβ mRNA及蛋白的表达。结果①ERα mRNA在内膜癌组织中的阳性表达率和阳性表达水平明显低于异常增生内膜组织及正常内膜组织,三者比较有显著性差异（P〈0．01）,ERα蛋白在这三组间的表达率变化相同（P〈0．05）。②ERβ mRNA在内膜癌组织中的阳性表达率和阳性表达水平明显低于增生性内膜组织及正常内膜组织,三者比较有显著性差异（P〈0．01）,ERβ蛋白在这三组间的表达率变化相同（P〈0．01）。③ERα和ERβ mRNA平均表达水平比值（ERα／ERβ）在内膜癌组低于异常增生子宫内膜组织和正常子宫内膜组（P〈0．05）。结论ERα和ERβ表达的下调可能与子宫内膜癌的发生有关,在这个过程中ERα的下调起的作用大于ERβ。     

细胞增殖抑制基因调控慢性阻塞性肺疾病大鼠 Wnt/PCP通路抑制气道成纤维细胞增殖

目的探讨细胞增殖抑制基因(HSG)在大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重建中Wnt/PCP通路的作用及其机制。方法将大鼠分为对照组和COPD模型组;采用烟熏+气道内注射脂多糖建立;取气管做小气道成纤维细胞原代培养,第3代细胞系用于实验。HE染色鉴定肺组织是否造模成功。ELISA检测培养上清液中MMP-9、PDGF和TGF-β1的表达;real-time PCR检测成纤维细胞中HSG、PDGF、TGF-β1和RhoA的mRNA的表达;Western blot法检测成纤维细胞HSG和RhoA蛋白表达。结果模型组成纤维细胞上清液中PDGF、TGF-β1和MMP-9表达显著高于对照组(P0.01);模型组成纤维细胞中HSG mRNA及蛋白表达显著低于对照组(P0.01);RhoA蛋白及PDGF、TGF-β1和RhoA mRNA表达显著高于对照组(P0.01)。HSG表达与MMP-9、PDGF、TGF-β1和RhoA表达呈负相关(P0.01)。结论 HSG可能通过调控Wnt/PCP通路,抑制大鼠气道成纤维细胞的增殖从而参与气道重建。