三叶青黄酮干预荷癌小鼠Treg细胞生成及其CD152表达的研究

目的:研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌模型小鼠脾脏Treg细胞生成及其CD152表达的影响。方法:将小鼠随机分为非造模组、生理盐水组、塞来昔布组、三叶青黄酮高、中、低剂量组,除非造模组外,其它各组皮下接种法建立Lewis肺癌小鼠模型,接种24 h后开始灌胃给药,每天1次,非造模组不灌胃。分别于给药14、23天后,处死半数动物,取脾脏,分离单个核细胞,流式细胞术测定脾脏单个核细胞中Treg细胞比例及CD152表达。结果:第23天时,与生理盐水组比较,塞来昔布组、三叶青黄酮高、中剂量组小鼠的瘤体明显减小,差异均有统计学意义(P0.01)。三叶青黄酮各剂量组间瘤体比较存在差异(P0.05),瘤体大小依次为:三叶青黄酮高剂量组三叶青黄酮中剂量组三叶青黄酮低剂量组;塞来昔布组抑瘤效果与中剂量组相近(P0.05)。与非造模组比较,其它各组小鼠Treg细胞比例和CD152的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P0.01)。第23天时,与生理盐水组比较,各给药组小鼠Treg细胞比例和CD152的表达均明显降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。三叶青黄酮各剂量组间Treg细胞比例比较存在差异(P0.01),Treg细胞比例依次为:三叶青黄酮高剂量组三叶青黄酮中剂量组三叶青黄酮低剂量组;塞来昔布组Treg比例与中剂量组相近(P0.05)。塞来昔布组下调CD152表达效果最佳,与三叶青黄酮中、低剂量组比较有显著差异(P0.05),三叶青黄酮各剂量组间无明显差异(P0.05)。结论:三叶青黄酮的抑瘤效果可能与下调Treg细胞比例和CD152表达有关,逆转免疫抑制,从而起到抗肿瘤的作用     

三叶青地上部分多糖对乳腺癌小鼠的抗肿瘤作用

目的探讨三叶青地上部分多糖对乳腺癌小鼠的抗肿瘤作用。方法小鼠乳房接种4T1细胞以建立乳腺癌荷瘤模型后,随机分为空白组、模型组、环磷酰胺组(40 mg/kg)及多糖低、中、高剂量(50、150、250 mg/kg)组,每组10只。给药28 d后,测定瘤质量及瘤体积,计算抑瘤率及脏器指数,观察肺组织转移灶,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群比例。结果与模型组比较,多糖组瘤质量、瘤体积、肝脏指数、肺转移灶数显著降低(P0.05,P0.01),但脾脏、胸腺指数无明显变化(P0.05);中、高剂量组CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例显著降低(P0.01),胸腺CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+比例及脾脏CD3~+CD4~+、CD4~+/CD8~+比例显著升高(P0.05,P0.01)。结论三叶青地上部分多糖能有效抑制乳腺癌小鼠肿瘤生长及远端肺转移,其机制可能与增加机体CD4~+、CD8~+T细胞比例,抑制Treg细胞数量和功能,提高机体免疫应答有关。     

益气健脾化瘀方联合5-FU对MFC荷瘤小鼠皮下移植瘤的生长及免疫功能的影响

目的:探讨益气健脾化瘀方联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对MFC荷瘤615小鼠皮下移植瘤的生长及免疫功能的影响。方法:24只615小鼠随机分为模型组,益气健脾化瘀方(20 g·kg~(-1))组,5-FU(25 mg·kg~(-1))组,联合(益气健脾化瘀方20 g·kg~(-1)+5-FU 25 mg·kg~(-1))组,每组6只,皮下接种法建立小鼠胃癌移植瘤模型。于末次给药后完整剥离移植瘤、脾、胸腺,计算抑瘤率、胸腺、脾指数。流式细胞仪测定外周血、肿瘤组织中髓源抑制性细胞(MDSC)水平及其亚型多形核细胞样(PMNMDSC),单核细胞样(M-MDSC)的水平及外周血中各免疫细胞的水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测瘤组织中精氨酸酶-1(Arg-1),诱导型一氧化氮合酶(i NOS) mRNA表达水平。结果:与模型组比较,益气健脾化瘀方组小鼠体质量增加、瘤重减轻,5-FU组小鼠体质量、瘤重、胸腺、脾指数均下降(P 0. 05,P 0. 01)。与5-FU组比较,联合组体质量增加,瘤重减轻,胸腺、脾指数升高(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,联合组肿瘤组织及外周血中总MDSCs水平下降(P 0. 05,P 0. 01),益气健脾化瘀方组,5-FU组及联合组PMN-MDSC水平均下降(P 0. 01);与5-FU组比较,联合组PMN-MDSC水平下降(P 0. 05),M-MDSC水平下降(P 0. 05)。与模型组比较,益气健脾化瘀方组巨噬细胞及其M1型水平增加(P 0. 05),各T细胞群水平均增加(P 0. 05,P 0. 01),5-FU组巨噬细胞,CD3+,CD4+,CD8+T细胞群水平下降(P 0. 05,P 0. 01)。与5-FU组比较,联合组巨噬细胞,CD4+,CD8+T细胞群水平增高(P 0. 01)。与模型组比较,各组i NOS,Arg-1 mRNA表达均下降(P 0. 05,P 0. 01)。与5-FU组比较,联合组i NOS,Arg-1 mRNA表达均下降(P 0. 05,P 0. 01)。结论:益气健脾化瘀方对肿瘤有一定的抑制作用,且与5-FU联合使用能更好地抑制皮下移植瘤的生长,并改善化疗后机体的免疫状态,其机制可能与降低MDSCs的水平及增加T细胞、巨噬细胞的水平有关。     

三叶青黄酮干预荷肺癌小鼠MDSCs生成及相关因子表达的研究

目的:探讨三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠髓系来源的抑制细胞(MDSCs)、前列腺素2(PGE2)、环氧合酶-2(COX-2)的作用及其调节荷瘤鼠免疫功能、逆转肿瘤免疫逃逸的可能机制.方法:将40只C57BL/6小鼠分为模型组、塞来昔布组及三叶青黄酮高、中、低剂量组(以下简称高、中、低剂量组),每组8只.建立荷Lewi...     

六味安消散对MFC胃癌荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的探讨六味安消散对MFC胃癌荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法 60只小鼠随机分为模型组、5-氟尿嘧啶组(0.02 g/kg)及六味安消散高、中、低剂量组(8、4、2 g/kg),每组12只,灌胃给药1次/d。给药14 d后,检测瘤重、抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数,CD4~+、CD4~+CD25~+T细胞比例,ELISA法检测外周血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)水平。结果与模型组比较,六味安消散组小鼠体质量、脾脏及胸腺指数、CD4~+T细胞比例、TNF-α及IL-2水平明显增加(P<0.05,P<0.01),而且一般状态较好;小鼠瘤重、CD4~+CD25~+T细胞比例明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论六味安消散可通过提高MFC胃癌荷瘤小鼠的免疫功能来发挥抗肿瘤作用。     

复方清热颗粒对病毒感染急性期患者淋巴细胞亚群表达的影响

目的观察中药复方清热颗粒对病毒感染急性期患者细胞免疫功能的干预作用。方法将30例病毒感染急性期患者分为两组,分别给予抗病毒治疗(简称西药组)或抗病毒联合中药复方清热颗粒治疗(简称中西医组)。观察治疗前、治疗7天后外周血淋巴细胞亚群变化,并与健康对照者(20名,作为正常对照组)比较。结果与正常对照比较,病毒感染急性期患者外周血T细胞比例升高,B细胞及NK细胞比例降低(P0.01);T细胞亚群中,CD4~+T细胞、CD4~+CD28~+T细胞、CD8~+CD28~+T细胞比例降低,CD8~+T细胞、CD8~+CD38~+T细胞比例升高(P0.05,P0.01)。治疗7天后,患者CD4~+T细胞、CD4~+CD28~+T细胞及CD8~+CD28~+T细胞比例较治疗前增高(P0.05,P0.01),CD8~+CD38~+T细胞比例降低(P0.01),且CD4~+T、CD4~+/CD8~+、CD8~+CD28~+T及CD8~+CD38~+T中西医组改变程度优于西药组(P0.05)。结论病毒感染急性期患者存在细胞免疫功能紊乱,中药复方清热颗粒联合抗病毒治疗可明显改善病毒感染导致的免疫紊乱及免疫损伤。     

益气清毒法治疗肺癌基础方及防癌茶对Lewis肺癌小鼠一般指标和免疫细胞的影响

目的研究益气清毒法治疗肺癌的基础方及其防癌茶对Lewis肺癌小鼠一般指标和免疫细胞的影响。方法 SPF级雄性C57BL/6J小鼠105只,体重(20±10)g随机分组,造模,造模后4天给药;给药20d后,处死小鼠,采集瘤体、内脏、外周血检测、分析相关指标。结果抑瘤率分别是顺铂组51.14%,中药中剂量组30.57%,高剂量组21.68%,低剂量组14.84%,防癌茶组32.58%,顺铂组抑瘤率与其它治疗组均有极其显著差异(P0.004)。益气清毒法基础方可以增加CD_4~+T细胞、CD_8~+T细胞、NK细胞,降低外周血TAM、MDSCs含量,降低脾脏MDSCs、CD4+Foxp3+Treg含量;防癌茶可以显著降低外周血TAM、MDSCs细胞,降低脾脏MDSCs、CD_4~+Foxp3~+Treg细胞。结论益气清毒法治疗肺癌基础方及其防癌茶抑瘤效果良好,基础方抗癌机制与增强杀伤性免疫细胞的免疫力和减轻免疫抑制细胞的免疫抑制有关;防癌茶抗癌机制主要是后者。     

四君子汤合当归补血汤提高化疗荷瘤小鼠免疫功能的实验研究

目的:观察四君子汤合当归补血汤对环磷酰胺化疗荷瘤小鼠的免疫保护作用。方法:建立小鼠肉瘤S180移植性肿瘤模型,24 h后随机分为5组:模型组、环磷酰胺(CTX)组及四君子汤合当归补血汤低、中、高剂量~+CTX组。各组接种肿瘤细胞24 h后开始用药,1次/d,连续10 d。分别检测溶血素、碳粒廓清速率、体温及外周血c AMP/c GMP、血小板和T细胞亚群,处死小鼠,检测腹腔巨噬细胞吞噬功能和骨髓有核细胞数。结果:与模型组比较,CTX组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、外周血CD3~+、CD4~+T细胞比例、CD4~+/CD8~+比值、外周血c AMP/c GMP、血小板计数和骨髓有核细胞显著降低(P0.05),CD8~+T细胞比例升高(P0.05)。与CTX组比较,四君子汤合当归补血汤各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、外周血CD3~+、CD4~+T细胞比例、CD4~+/CD8~+比值、外周血c AMP/c GMP、血小板计数和骨髓有核细胞均有不同程度提高(P0.05),CD8~+T细胞比例均有不同程度降低(P0.05)。结论:四君子汤合当归补血汤能拮抗化疗引起的机体免疫功能下降,增强机体免疫功能。     

鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠细胞免疫功能的干预作用

目的:观察鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠肿瘤细胞免疫功能的影响。方法:将50只小鼠分成实验组和正常组,对实验组小鼠进行肝癌荷瘤小鼠造模后,分为模型组和鳖甲煎丸高、中、低剂量组,连续灌胃给药15d。流式细胞仪对荷瘤小鼠外周血中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和CD4+T/CD8+T进行测定;采用ELISA法检测荷瘤小鼠外周血中白细胞介素-2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果:鳖甲煎丸可使荷瘤小鼠外周血中CD4+T淋巴细胞显著增加(P0.01),CD8+T淋巴细胞亚群的比例显著下降(P0.01),CD4+T/CD8+T升高显著(P0.01);同时,鳖甲煎丸还可以提高肝癌荷瘤小鼠血清IFN-γ水平(P0.01)和血清IL-2水平(P0.01)。结论:鳖甲煎丸抑制肝癌生长的作用可能是通过提高肝癌荷瘤小鼠外周血中CD4+T细胞亚群的比例和降低CD8+T细胞亚群的比例,来纠正CD4+T/CD8+T的失衡,改变Th1/Th2漂移现象,维持Th1功能亚群的优势来实现的。     

黄连素对高脂饲料联合链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠T细胞亚群及炎症因子的影响

目的探讨黄连素对高脂饲料联合链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠T细胞亚群及炎症因子的影响。方法以高脂饲料联合链脲佐菌素诱导SD大鼠复制2型糖尿病模型,将造模成功的40只大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、黄连素高剂量(300 mg/kg)组、黄连素低剂量(150 mg/kg)组各10只,另取10只正常SD大鼠作为正常组。造模后,二甲双胍组灌胃200 mg/kg二甲双胍,黄连素高、低剂量组分别灌胃300 mg/kg和150 mg/kg黄连素,正常组和模型组灌胃等体积的生理盐水,均连续2周。末次灌胃后12 h,采集各组大鼠腹主动脉血,检测空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)]及T淋巴细胞(CD4~+、CD8~+)表达水平;取大鼠脾脏组织,采用Western blot法检测CD4~+、CD8~+表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清中FPG、TC、TG、TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平及CD8~+比例和脾脏组织中CD8~+表达水平均显著升高,血清中CD4~+比例、CD4~+/CD8~+比值和脾脏组织中CD4~+表达水平均显著降低,差异均有统计学意义(P均0.05);与模型组比较,二甲双胍组和黄连素高、低剂量组大鼠血清中FPG、TC、TG、TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平及CD8~+比例和脾脏组织中CD8~+表达水平均显著降低,血清中CD4~+比例、CD4~+/CD8~+比值和脾脏组织中CD4~+表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(P均0.05),二甲双胍组和黄连素高、低剂量组各指标比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论黄连素可降低高脂饲料联合链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠血糖和血脂水平,其作用机制可能与调控炎症因子及T细胞水平有关。     

肠复方及拆方对肠癌MDSCs细胞iNOS、ARG1表达的影响

目的:探讨肠复方及拆方对肠癌髓源抑制性细胞(MDSCs)诱导型一氧化氮合酶(i NOS)及精氨酸酶1(ARG1)表达的影响。方法:采用不同浓度的肠复方干预肠癌CT26细胞,运用MTT法检测增殖情况,并探索肠复方最佳浓度及时间。建立小鼠结肠癌皮下移植瘤模型,21 d后取荷瘤小鼠脾脏,免疫磁珠法提取和流式细胞术检测MDSCs细胞。结合MTT试验筛选出抑制效果最佳的肠复方浓度,将20只大鼠,随机分为肠复方全方组、香菇多糖组、模型组、拆方Ⅰ组(健脾益气扶正)及拆方Ⅱ组(祛湿化瘀解毒),每组4只,制备含药血清,分组干预MDSCs细胞。运用Western blotting和RT-PCR法检测5组MDSCs细胞i NOS及ARG1的表达。结果:MTT检测显示肠复方全方对CT26细胞增殖有明显的抑制作用,且含药血清干预72 h较干预24、48 h增殖抑制作用更强,与时间呈正相关(P0.05),肠复方中剂量组在不同干预时间段对细胞增殖的抑制作用均明显强于高、低剂量组(P0.05)。通过流式细胞术检测小鼠脾脏MDSCs细胞为活性90%,纯度86.65%,Real-time PCR结果显示:与模型组比较,肠复方全方组、拆方Ⅰ组、拆方Ⅱ组MDSCs细胞i NOS mRNA、ARG1 mRNA表达均降低(P0.05),以肠复方全方组最优(P0.01),香菇多糖组有下降趋势,但差异无统计学意义(P0.05);肠复方全方对MDSCs细胞i NOS mRNA、ARG1 mRNA抑制作用明显优于拆方Ⅰ组(P0.05),与拆方Ⅱ组无明显差异(P0.05)。Western blotting结果显示:与模型组比较,肠复方全方组、拆方Ⅱ组MDSCs细胞i NOS、ARG1蛋白表达均降低(P0.05),拆方Ⅰ组、香菇多糖组差异无统计学意义(P0.05);肠复方全方对MDSCs细胞i NOS、ARG1蛋白表达的抑制作用与拆方Ⅱ组无明显差异(P0.05)。结论:肠复方全方及拆方能够抑制MDSCs细胞i NOS及ARG1的表达水平,肠复方全方抑制作用最优,且肠复方抗癌作用主要来自祛湿化瘀解毒组分,这可能是肠复方抑制肠癌细胞增殖和免疫抑制的作用机制之一。     

芪黄煎剂对大鼠胃切除后肠黏膜免疫屏障的影响

目的观察芪黄煎剂对大鼠胃切除后小肠黏膜免疫屏障的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、芪黄煎剂组(中药组),每组20只。模型组与中药组均行胃切除手术,模型组术后给予小肠内滴注肠内营养制剂能全素;中药组予小肠内滴注能全素和中药芪黄煎剂。假手术组仅行腹部正中切开及关腹处理,术后正常进食水,不予药物及营养干预。干预1周后,分离出大鼠小肠集合淋巴小结(Peyer's patches,PPs)细胞、固有层淋巴细胞(lamina propria lymphocytes,LPLs)、黏膜上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes,IELs)和肠腔黏膜表面分泌型免疫球蛋白A(secretory IgA,s IgA),应用流式细胞术、免疫组织化学、双抗体-PEG放射免疫等技术,检测肠黏膜不同解剖部位T细胞抗原受体(αβT cell antigen receptor)-CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞比例、IgA~+B细胞数量、s IgA含量。结果与假手术组比较,模型组肠黏膜s IgA含量、PPs中IgA~+B细胞数量和LPLs中IgA~+B细胞数量均降低(P0.01);模型组IELs中CD3~+、CD8~+T细胞比例,LPLs中CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞比例,PPs中CD3~+、CD4~+T细胞比例降低(P0.01,P0.05)。与模型组比较,中药组肠黏膜s IgA含量、PPs中IgA~+B细胞数量和LPLs中IgA~+B细胞数量升高(P0.01,P0.05),中药组IELs中CD3~+、CD8~+T细胞比例,LPLs中CD3~+、CD4~+T细胞比例,PPs中CD3~+、CD4~+T细胞比例升高(P0.01,P0.05)。结论芪黄煎剂能促进大鼠胃切除术后小肠黏膜免疫屏障中CD3~+、CD4~+、CD8~+T、IgA~+B淋巴细胞的增殖与分化及s IgA含量的增加,能够促进大鼠胃切除术后肠道免疫屏障功能障碍的恢复。     

不同产地人参对脾虚小鼠细胞免疫功能影响的研究

目的:探讨辽宁、吉林、朝鲜三产地人参对小鼠细胞免疫功能的影响。方法:健康SCID小鼠80只,随机分为空白对照组、人参对照组(3组)、模型组、治疗组(3组)。以100%番泻叶浸液灌服小鼠10天,建立脾虚证模型。三产地人参煎剂治疗15天后流式细胞仪检测小鼠脾细胞悬液中CD3+、CD4+、CD8+T细胞比例,酶联分析法(ELISA)检测小鼠血清中γ-干扰素(IFN-γ)含量。结果:模型组小鼠脾细胞悬液中CD3+、CD4+T细胞比例显著下降,CD8+T细胞相对升高,CD4+/CD8+降低;血清IFN-γ浓度降低。给药后各治疗组CD3+、CD4+T细胞、CD4+/CD8+、IFN-γ浓度显著高于模型组(吉林人参、朝鲜人参>辽宁人参)。结论:人参能够调节脾虚证引起的CD3+、CD4+减少,CD8+相对升高,CD4+/CD8+、IFN-γ下降,从而改善脾虚证细胞免疫功能障碍。三产地人参比较结果显示朝鲜人参与吉林人参提高小鼠脾脏中T细胞亚群的作用好于辽宁人参,三组人参提高血清IFN-γ浓度的作用相同。     

桂枝汤对痹证（胶原诱导免疫性关节炎）小鼠肠黏膜免疫系统中CD4+、CD8+T淋巴细胞及SIgA的影响

目的 观察桂枝汤对痹证(胶原诱导免疫性关节炎)小鼠肠黏膜免疫学指标的影响。方法 将80只雄性DBA小鼠随机分为4组[即正常组、模型组、桂枝汤高剂量组(简称桂高组)、桂枝汤低剂量组(简称桂低组)]。模型组采用Ⅱ型胶原诱导性关节炎作为痹证模型,运用免疫组织化学染色法标记小鼠小肠及PP结中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞及SIgA数量,用图像分析仪进行统计计算其含量。结果与正常组比较,模型组Ⅱ型胶原免疫后小鼠肠黏膜免疫系统中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞及SIgA数量明显减少,差异有显著性(P<0．05或P<0．01),应用桂枝汤(高、低剂量)后,CD4^+T淋巴细胞及SIgA数量明显升高,但只有桂高组与模型组比较差异有显著性(P<0．05或P<0．01)。结论桂枝汤可以增强痹证小鼠肠道黏膜免疫功能,从而可能诱导免疫耐受和免疫抑制。     

火把花根片在小鼠骨髓移植模型中减轻急性移植物抗宿主病的实验研究

目的探讨火把花根片在小鼠骨髓移植模型中减轻急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的效果及可能的作用机制。方法建立小鼠异基因骨髓移植GVHD模型,预处理为放疗8．0Gy,分为：对照组(n=10)异基因骨髓细胞(2×10~6)加脾T淋巴细胞(2×10~6)移植组；火把花根片组(n=20)异基因骨髓细胞(2×10~6)加脾T淋巴细胞(2×10~6)移植加火把花根片预防组。比较受鼠生存时间和GVHD发生情况,受鼠外周血象中白细胞、血球压积等恢复情况和骨髓细胞中嵌合体H-2D~b阳性细胞百分比以评价造血重建。在移植后不同时间点分别采用流式细胞仪检测受鼠的脾细胞中CD4~+和CD8~+以及CD25和CD69的表达。结果移植后对照组受鼠均于25天内死于GVHD,火把花根片组GVHD的发生率为20%(4/20),与对照组小鼠相比,存活率和时间明显增高和延长(P＜0．01)；存活的火把花根片组小鼠(n=4)40天时骨髓细胞中的H-2D~b阳性细胞百分比达(93．38±4．32)%。移植后10天开始,火把花根片组小鼠CD4~+和CD8~+T细胞比例明显低于对照组(P＜0．...     

甘草酸二铵对脱毛小鼠治疗的药理作用机制研究

目的:探讨甘草酸二铵对环磷酰胺诱导小鼠脱毛动物模型治疗的药理作用机制。方法:采用环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)建立小鼠脱毛模型,甘草酸二铵(Diammonium Glycyrrhizinate,DG)组和生理盐水组脱毛后,分别灌胃DG(100mg/kg)和生理盐水(100mg/kg),持续8周。模型组不作任何处理。运用HE染色、电镜观察脱毛区毛囊的病理形态学改变,利用免疫组织化学法检测小鼠脱毛区CD4+T细胞(CD4+)、CD8+T细胞(CD8+)、INF-γ表达水平。利用流式细胞术检测外周血IL-2、IL-4以及INF-γ表达水平。采用ELISA检测外周血CD4+/CD8+比值。结果:给药8周后,肉眼观察到DG组脱毛区毛发生长与模型组和生理盐水组相比较为浓密;电镜观察到DG组残存毛囊细胞中线粒体模糊、空泡样化程度比模型组和生理盐水组较轻。在各个时间点,DG组脱毛区CD4+、CD8+、INF-γ表达和外周血IL-2、INF-γ表达水平及CD4+/CD8+比值明显低于生理盐水组和模型组(P0.05),而外周血IL-4表达显著升高(P0.05)。结论:CTX造成脱毛小鼠T淋巴细胞过度表达,DG通过抑制T淋巴细胞及其分泌的促炎因子过度表达、提高抗炎因子的表达来改善脱毛小鼠毛发的生长情况。     

升清降糖合剂对1型糖尿病小鼠T细胞功能影响

目的:研究升清降糖合剂(简称SQ)对1型糖尿病小鼠的降糖作用和对胰岛细胞的保护作用,探讨其对调节性T细胞数量的影响。方法:小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立1型糖尿病小鼠模型。根据不同的干预方式将1型糖尿病小鼠分为正常组、模型组、SQ低剂量组、SQ高剂量组。每周测小鼠体质量和血糖,干预6周后各组小鼠麻醉后心脏取血,ELISA法测定血清C肽水平,取胰腺组织一部分做HE染色观察病理学改变,另一部分免疫组化观察CD4+T细胞的浸润情况。取脾脏,流式细胞仪检测各组小鼠脾细胞CD4+CD25+Fox P3+T细胞的阳性率。结果:体质量:正常组(26.32±0.91)SQ高剂量组(24.40±1.42)SQ低剂量组(23.01±1.70)模型组(22.81±1.61),SQ高剂量组体质量比SQ低剂量组、模型组体质量较高,差异有显著性(P0.01)。空腹血糖:模型组(18.69±2.21)低剂量组(15.92±3.35)高剂量组(14.13±4.19)正常组(6.51±0.70),SQ高剂量组比模型组血糖明显降低,差异有显著性(P0.05)。血清C肽:正常组(0.72±0.09)高剂量组(0.66±0.11)低剂量组(0.68±0.07)模型组(0.48±0.17),SQ低剂量组、SQ高剂量组血清C肽与模型组相比均较高,差异有显著性(P0.01)。胰岛HE染色形态学观察发现:模型组小鼠胰岛变小,形状呈现出不规则扭曲,部分胰岛细胞出现严重挤压变形,胰岛内可见大量淋巴细胞浸润,SQ各组小鼠胰岛T淋巴细胞浸润现象减少或无浸润。胰岛CD4+抗体免疫组化观察:模型组胰岛细胞小,内可见大量CD4+阳性的T细胞浸润,SQ组胰岛损伤轻,可见少量CD4+阳性的T细胞浸润胰岛周边,或者无浸润。流式细胞仪测CD4+CD25+Fox P3+T细胞的阳性率结果:正常组(4.97±0.17)SQ高剂量组(4.20±0.73)SQ低剂量组(3.89±0.42)模型组(3.40±0.82),SQ高剂量组、SQ低剂量组脾细胞CD4+CD25+Fox P3+T细胞比率比模型组高,差异有显著性(P0.05)。结论:SQ能增加1型糖尿病小鼠体质量,降低空腹血糖,升高血清C肽,保护胰岛细胞免受T淋巴细胞浸润,增加脾CD4+CD25+Fox P3+T细胞比率。     

余甘子叶提取物对荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞CD4~+、CD8~+亚群的影响

[目的]观察余甘子叶提取物(PL)对荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞CD4+、CD8+亚群的影响。[方法]建立H22荷瘤小鼠模型,灌胃给予余甘子叶提取物高、中、低剂量(1.982,0.991,0.496 g/kg),观察余甘子叶提取物对荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞CD4+、CD8+亚群的影响。[结果]余甘子叶提取物高、中剂量(1.982,0.991 g/kg)能显著提高荷瘤小鼠T淋巴细胞及其CD4+亚群相对数量(P0.05),上调CD4+/CD8+亚群比例(P0.05)。[结论]通过提高T淋巴细胞及其CD4+亚群相对数量,使CD4+/CD8+比例接近正常值,此可能是余甘子叶提取物抗肿瘤的免疫学机制之一。     

活血化瘀方对小鼠Hepa1-6肝癌转移和生长的作用及机制初探

目的:探讨活血化瘀方抑制小鼠Hepa1-6肝癌转移和生长的作用及其机制。方法:转染萤火虫荧光素酶基因(firefly luciferase gene)的C57BL/6小鼠肝癌Hepa1-6细胞,经筛选获得稳定表达GFP绿色荧光蛋白及荧光素酶基因的小鼠肝癌细胞株Hepa1-6 (luc2/GFP)。采用尾静脉注射及右侧腹部皮下注射的方法分别建立尾静脉肝癌转移模型及皮下肿瘤模型,并分别给予活血化瘀方52、104 g/kg组、索拉菲尼30 mg/kg组。造模后进行小动物成像荧光观测,16天后取皮下肿瘤组织,实时荧光定量PCR (q-PCR)法检测程序性死亡受体-1(PD-1)、白细胞介素-8 (IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;免疫组化(IHC)法检测CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、血小板-内皮细胞粘附分子标记的微血管密度(CD31-MVD)。结果:活血化瘀方能抑制小鼠Hepa1-6肝癌的转移和生长,与模型组比较,活血化瘀方52 g/kg、104 g/kg治疗组可使PD-1、IL-8、TNF-αmRNA的表达明显下调;同时上调CD4~+T蛋白表达、升高CD4~+T/CD8~+T比值,下调CD8~+T、CD31MVD蛋白的表达。结论:活血化瘀方可能是通过调控CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、PD-1、CD31、IL-8、TNF-α等多靶标来抑制小鼠Hepa1-6肝癌的转移和生长。     

益气通阳汤对血小板减少性紫癜小鼠模型的作用

目的:观察益气通阳汤对特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠外周血血小板(PLT)数、骨髓巨核细胞数和巨核细胞数分类、外周血T,B淋巴细胞亚群变化的影响。方法:设计用豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)连续注射小鼠,造成ITP小鼠模型,分别给益气通阳汤(150,75,37.5 g.kg-1.d-1)组,正常对照组、模型对照组给予生理盐水,连续给药14 d。应用血细胞分析仪测定PLT、显微镜观察巨核细胞形态分类、塑料包埋法计数小鼠股骨巨核细胞数、流式细胞仪检测T,B淋巴细胞亚群。结果:模型小鼠外周血PLT数持续明显减低、骨髓巨核细胞数增多、其中原幼巨核细胞比例明显增高,产板巨核细胞比例明显减低,外周血CD3+CD4+T细胞减低,CD3+CD8+T细胞明显增高,CD4+/CD8+明显降低。给予益气通阳汤治疗小鼠的PLT明显增高、巨核细胞数减少、产板巨核细胞比例明显增高,CD3+CD4+T细胞增高,CD3+CD8+T细胞比例降低,CD4+/CD8+升高。结论:益气通阳汤能提升ITP模型小鼠PLT数,提高产板巨核细胞比例,改善T淋巴细胞的失衡,达到治疗ITP的作用。