脑源性神经营养因子基因重组慢病毒转染骨髓间质干细胞移植治疗大鼠脑出血的实验研究

目的 观察脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒转染骨髓间质干细胞(MSCs)移植治疗大鼠脑出血的疗效.方法 分离培养大鼠MSCs;将带有BDNF的慢病毒载体转染MSCs;RT-PCR、蛋白质印迹检测转基因MSCs BDNF基因及蛋白水平表达.制备大鼠脑出血模型,采用抽签法随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、MSCs组、空病毒转染骨髓问质干细胞(MSCs-EGFP)组、脑源性神经营养因子基因重组慢病毒转染骨髓间质干细胞(MSCs-EGFP-BDNF)组,每组15只.72 h后细胞移植,记录各组细胞移植后7、14、21 d神经功能缺损改善程度;免疫荧光双标检测MSCs脑内迁移和分化情况.结果 MSCs-EGFP-BDNF组BDNF基因及蛋白水平表达明显高于MSCs组及MSCs-EGFP组;与PBS组(7 d:2.0±0.4,14 d:1.7 ±0.2,21 d:1.3±0.2)相比,MSCs组(7 d:1.6±0.2,14 d:1.2 ±0.3,21 d:0.8±0.2)、MSCs-EGFP组(7 d:1.6±0.3,14 d:1.1 ±0.2,21 d:0.8 ±0.3)及MSCs-EGFP-BDNF组(7 d:1.2±0.3,14 d:0.6±0.1,21 d:0.2 ±0.2)大鼠神经功能评分均有不同程度改善(F=6.667、18.417、20.882,均P＜0.05),其中MSCs-EGFP-BDNF组改善最为显著;免疫荧光双标显示MSCs-EGFP-BDNF组胶原纤维酸性蛋白、神经元特异性核蛋白、环核苷酸磷酸二酯酶阳性率明显高于MSCs组及MSCs-EGFP组,而MSCs组与MSCs-EGFP组比较差异无统计学意义.结论 BDNF基因重组慢病毒修饰的MSCs基因及蛋白水平表达均增高;修饰的MSCs移植后可迁移至脑出血灶周围存活并分化表达神经细胞标志物,促进脑出血后神经功能修复.     

过表达BDNF基因重组慢病毒转染MSCs的实验研究

目的观察BDNF基因重组慢病毒修饰MSCs过表达BDNF的情况。方法构建携带BDNF基因的慢病毒载体;分离培养大鼠MSCs;将基因重组慢病毒转染MSCs;RT-PCR、Western blot检测各组BDNF基因及蛋白表达水平。结果绿色荧光试验证实BDNF基因重组慢病毒转染MSCs成功;RT-PCR、Western blot验证MSCs-EGFP-BDNF组BDNF基因及蛋白表达明显高于MSCs组及MSCs-EGFP组,MSCs组与MSCs-EGFP组比较差异无统计学意义。结论 BDNF基因重组慢病毒修饰的MSCs基因及蛋白表达均增高,MSCs成功过表达BDNF。     

骨髓间质干细胞联合脑源性神经营养因子用于大鼠脑出血的实验研究

目的观察骨髓间质干细胞(MSCs)联合脑源性神经营养因子(BDNF)治疗大鼠脑出血(ICH)的疗效。方法建立大鼠ICH模型,体外培养标记纯化的MSCs,经侧脑室植入脑部,同时局部注入BDNF。记录对照组、BDNF组、MSCs组和MSCs+BDNF组7d、14d、21d大鼠神经功能改善程度;免疫组化法检测MSCs脑内迁移及分化;电子显微镜观察神经凋亡细胞。结果 MSCs组大鼠运动功能有明显改善,MSCs+BDNF组对ICH损伤的修复作用最明显。MSCs+BDNF组各时间点MSCs阳性细胞数及NEUN、GFAP、CNP免疫阳性细胞数均高于MSCs组(P<0.01),且MSCs+BDNF组神经细胞凋亡程度最轻。结论 MSCs脑部移植可促进大鼠ICH损伤部位结构和功能修复,BDNF对其修复具有协同作用。     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血大鼠突触可塑性影响的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对脑缺血大鼠神经功能恢复及突触可塑性的影响。方法：采用大鼠大脑中动脉缺血模型，分为假手术组、模型组、PBS组和MSCs组，研究脑缺血24h后移植MSCs的大鼠神经功能缺损评分（NSS）；分别测定梗死灶周围脑组织突触素（SYN）和脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA的表达；电镜及免疫电镜下观察突触结构的变化。结果：与模型组及PBS组大鼠相比，MSCs组的NSS评分较低，SYN及BDNF mRNA的表达则明显较高；电镜检查示MSCs组大鼠突触界面曲率较大，突触后致密物质的厚度增加，突触间隙宽度变窄，突触活性带长度增加；免疫电镜示BrdU阳性细胞和宿主脑神经元形成非成熟的突触样结构。结论：MSCs移植可能通过神经营养效应调节脑缺血周围神经细胞的可塑性改善脑缺血大鼠的神经功能。     

神经干细胞移植对脑出血模型大鼠神经功能的影响☆

背景：外源性神经干细胞具有神经修复作用，可能对脑出血后的神经功能恢复起到一定的作用。 目的：观察胎鼠神经干细胞的体外生长、分化及移植到脑出血大鼠后的存活、迁徙、分化情况，探讨神经干细胞对脑出血模型大鼠受损神经功能的修复作用。 设计：完全随机分组设计，对照动物实验。 单位：复旦大学附属华山医院神经外科 材料：选用健康雄性成年SD大鼠18只为受体，体质量280~320 g，由中国科学院上海实验动物中心提供。实验用鼠抗BrdU为Neomarkers产品, 鼠抗胶质纤维酸性蛋白和兔抗微管相关蛋白2 为Chemicon产品。 方法：实验于2006-02/12在复旦大学附属上海医学院解剖组胚实验室完成。从胎龄14 d的胎鼠海马中分离、培养、鉴定神经干细胞。16只受体SD大鼠被随机分为3组：对照组，PBS组和移植神经干细胞组。均通过尾状核内注射自体动脉血制作大鼠脑出血模型。移植NSC组在造模后30 min在血肿腔周围四点分别移植浓度为2×1011 L-1神经干细胞悬液5μL；PBS组于相同时间点在脑内相同部位注射PBS；PBS和神经干细胞的移植方法同自体血的移植方法。对照组大鼠在造模后30 min只造成四点损伤，不注射任何物质。 主要观察指标：在造模后立即，1，3，5，14，21，28 d采用前肢评分和转身评分对大鼠神经功能进行评估。大鼠于造模后28 d麻醉后取脑，并通过双标胶质纤维酸性蛋白、微管相关蛋白2、BrdU免疫组化来检测移植入脑的神经干细胞在体内的分化情况。 结果：①神经功能评分：造模后5 d，各组差异无显著性意义（P > 0.05）。造模后14~28 d，干细胞移植组较其他3组明显改善（P < 0.05）。②脑组织切片双免疫组织学双标染色结果：干细胞移植组血肿周围凋亡细胞少于PBS组。受体大鼠脑组织切片显示有BrdU, 微管相关蛋白2,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞，说明神经干细胞可以在宿主脑内存活、迁徙和分化，可以分化为神经元样细胞和神经胶质样细胞。 结论：神经干细胞移植可能通过分化为神经元样细胞和神经胶质细胞促进大鼠脑出血的神经功能恢复。     

大鼠脑出血模型应用骨髓间质干细胞治疗的实验研究

目的 :研究骨髓间质干细胞 (MSCs)移植对脑出血大鼠的治疗效果及机制。方法 :分离MSCs后进行培养、扩增 ,并用流式细胞仪进行荧光三标检测鉴定 ,将标记后的MSCs通过颈动脉、颈静脉、侧脑室 3种途径移植入脑出血大鼠体内 ,用爬行计分法观察大鼠神经功能的改善程度 ,免疫组化法观察在脑内的迁移及分化。结果 :MSCs增殖明显 ,经流式细胞仪检测显示CD90、CD10 6阳性、CD45阴性 ,通过侧脑室、颈动脉移植后大鼠神经功能改善明显 ,移植的MSCs主要迁移到海马区、出血灶等处 ,且分化为神经细胞。结论 :MSCs移植治疗脑出血具有较好的疗效 ,可能分化为神经细胞是其主要机制之一。     

神经干细胞移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

目的探讨胎鼠皮质培养的神经干细胞移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的可行性及疗效。方法取孕龄15d Sprague-Dawley(SD)胎鼠皮质细胞培养为神经干细胞;用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型;将24只健康SD大鼠分为假手术组、缺血对照组、缺血移植组,在移植后2周、4周依据Garcia的18分评分法对各组大鼠的神经功能进行评分;行脑灌注固定取材,免疫组化染色观察移植后神经干细胞的分化、迁移和整合情况。结果用胎鼠皮质培养的细胞nestin表达阳性;缺血移植组大鼠的神经功能评分明显高于缺血对照组(P<0.05);缺血移植组免疫组织化学染色能够检测到存活的BrdU阳性细胞,移植后4周时可见移植细胞向周围迁移、分化、参与血管形成,并可见梗死区边缘微血管明显增生;缺血移植组大鼠脑GFAP阳性细胞数较缺血对照组明显增多(P<0.05)。结论分离、培养胎鼠皮质细胞Nestin表达阳性,即是大鼠的神经干细胞;移植体外培养的神经干细胞能在脑缺血大鼠脑内存活、迁移、分化,并且对脑梗死大鼠的神经功能修复起到了积极作用。     

早期分化的神经干细胞移植治疗大鼠脑梗死的实验研究

目的研究早期分化的神经干细胞移植治疗脑梗死的可能性。方法从Wistar新生大鼠的大脑分离培养神经干细胞,取传代的神经干细胞诱导分化并经BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶)标记后移植到脑梗死对侧的侧脑室,移植后对大鼠的功能恢复进行评价,用免疫组织化学方法鉴定移植的细胞在脑内的迁移和分化情况。结果将早期分化的神经干细胞移植到鼠脑后2周在梗死灶对侧可发现移植的细胞,4周时移植的细胞在梗死灶内分化为神经细胞,大鼠的学习功能和神经功能恢复较对照组均有明显改善。结论早期分化的神经干细胞移植到大鼠脑内仍能存活,并能有效穿过脑脊液———脑屏障迁移到脑梗死的部位;且分化为神经细胞。     

胚胎神经干细胞在出血性脑卒中大鼠脑内移植的实验研究

目的 研究胚胎神经干细胞出血性脑卒中大鼠脑内移植对神经功能缺损改善作用.方法 30只SD大鼠随机分配到单纯脑出血组(A,10只)、培养液移植组(B,10只)及NSCs移植组(C,10只).制作脑出血模型后3d,C组将神经于细胞经Hoechst标记后移植到病灶区,B组注射等量培养液.通过移植前后神经功能评分检测神经功能缺损修复情况,以及冰冻切片后组织免疫荧光检测移植神经干细胞的分化情况.结果 实验中分离、培养的神经干细胞经标记移植人大鼠脑内后,经免疫荧光检测证实能够在血肿腔周边分化成神经元和星形胶质细胞.移植术后2周内3组间大鼠神经功能改善无明显差异.但从移植术后第21天到第28天,神经干细胞移植组大鼠的神经功能改善显著好于培养液移植组和单纯脑出血组P＜0.001,有统计学意义.结论 神经干细胞移植入脑出血大鼠脑内后能够存活并分化为神经元及星形胶质细胞,促进改善大鼠的神经功能,是一种很有发展前途的治疗方法,值得进一步深入研究.     

尾静脉移植骨髓间充质干细胞治疗脑缺血损伤大鼠的研究

目的通过尾静脉途径移植大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)到大脑中动脉闭塞模型(MCAO)的大鼠体内,观察MSCs移植对大鼠缺血性脑损伤后神经功能恢复的作用并探讨其作用机制。方法分离和培养大鼠的MSCs,线栓法制作脑缺血再灌注模型。将48只SD大鼠随机分为对照组和尾静脉移植组2组,移植组在造模7d后尾静脉途径将MSCs植入MCAO大鼠体内,对照组仅造模。比较两组大鼠在不同时间的神经功能评分的差异,免疫组化染色和脑源性神经生长因子(BDNF)分泌的情况。结果移植后1d两组之间无统计学差异;在2w、1m、2m、3m时移植组NSS评分均低于对照组;免疫组化结果发现尾静脉组见到双侧半球均可见较多的Brdu阳性细胞。移植后1m即可见到MSCs分化为Brdu+NSE、Brdu+GFAP免疫组化双阳性细胞。不同时间点移植组的BDNF分泌较对照组明显增高。结论 MSCs可以在体外分离、培养和传代,尾静脉移植的MSCs可在宿主脑内存活和分化并改善神经功能。MSCs移植后可促进脑内BDNF的分泌。     

Effects of GDNF-Transfected Marrow Stromal Cells on Rats with Intracerebral Hemorrhage

Objective: The present study aimed to investigate the effects of Mesenchymal stem cells/glial cell line derived neurotrophic factor (MSCs/GDNF) transplantation on nerve reconstruction in rats with intracerebral hemorrhage. Methods: GDNF transduction to MSCs was using adenovirus vector pAdEasy-1-pAdTrack-CMV prepared. Intracerebral hemorrhage (ICH) was induced by injection of collagenase and heparin into the caudate putamen. At the third day after a collagenase-induced ICH, adult male SD rats were randomly divided into saline group, MSCs group and MSCs/GDNF group. Immunofluorescence and RT-PCR were performed to detect the differentiation of MSCs or MSCs with an adenovirus vector encoding GDNF gene in vivo and in vitro. Result: After 6 hours of induction, both MSCs and MSCs/GDNF expressed neuro or glial specific markers and synaptic-associated proteins (SYN, GAP-43, PSD-95); additionally, they secreted bioactive compounds (BDNF, NGF-β). MSCs/GDNF transplantation, compared to MSCs and saline solution injection, significantly improved neurological functions after ICH. The grafted MSCs or MSCs/GDNF survived in the striatum after 2 weeks of transplantation and expressed the neural cell-specific biomarkers NSE, MAP2, and GFAP. Conclusion: These findings demonstrate that MSCs/GDNF transplantation contributes to improved neurological function in experimental ICH rats. The mechanisms are possibly due to neuronal replacement and enhanced neurotrophic factor secretion.     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血

目的探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗对脑出血患者外周血中内皮祖细胞活化度及神经功能的影响。方法选择2014-06—2016-06南阳南石医院86例脑出血患者,依据治疗方案不同分为2组各43例。对照组仅采取常规微创血肿清除术治疗,观察组在对照组基础上联合自体BMSCs移植治疗,统计对比2组治疗后1周、2周、3周、4周外周血内皮祖细胞活化度与治疗后3周、4周神经功能缺损评分、日常生活能力评分及神经营养因子[神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(BDNF)]水平。结果观察组治疗后1周、2周、3周、4周内皮祖细胞活化度较对照组提高,差异具有统计学意义(P0.05);观察组治疗后3周、4周神经功能缺损评分较对照组降低,日常生活能力评分均较对照组提高,差异具有统计学意义(P0.05);观察组治疗后3周、4周NGF、BDNF水平均较对照组提高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论对脑出血患者应用自体骨髓间充质干细胞移植治疗效果显著,可明显减轻患者神经功能损伤,提高内皮祖细胞与神经营养因子水平,促进其神经功能恢复,提升其日常生活能力。     

Therapeutic benefit of intracerebral transplantation of bone marrow stromal cells after cerebral ischemia in rats

We tested the hypothesis that bone marrow stromal cells (MSCs) transplanted into the ischemic boundary zone, survive, differentiate and improve functional recovery after middle cerebral artery occlusion (MCAo). MSCs were harvested from adult rats and cultured with or without nerve growth factor (NGF). For cellular identification, MSCs were prelabeled with bromodeoxyuridine (BrdU). Rats (n=24) were subjected to 2 h of MCAo, received grafts at 24 h and were euthanized at 14 days after MCAo. Test groups consisted of: (1) control-MCAo alone (n=8); (2) intracerebral transplantation of MSCs (n=8); (3) intracerebral transplantation of MSCs cultured with NGF (n=8). Immunohistochemistry was used to identify cells from MSCs. Behavioral tests (rotarod, adhesive-removal and modified neurological severity score [NSS]) were performed before and after MCAo. The data demonstrate that MSCs survive, migrate and differentiate into phenotypic neural cells. Significant recovery of somatosensory behavior (p<0.05) and NSS (p<0.05) were found in animals transplanted with MSCs compared with control animals. Animals that received MSCs cultured with NGF displayed significant recovery in motor (p<0.05), somatosensory (p<0.05) and NSS (p<0.05) behavioral tests compared with control animals. Our data suggest that intracerebral transplantation of MSCs may provide a powerful autoplastic therapy for stroke.     

Functional recovery and microenvironmental alterations in a rat model of spinal cord injury following human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells transplantation

BACKGROUND: Transplantation of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells (MSCs) has been shown to benefit spinal cord injury (SCI) repair. However, mechanisms of microenvironmental regulation during differentiation of transplanted MSCs remain poorly understood. OBJECTIVE: To observe changes in nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), and interleukin-8 (IL-8) expression following transplantation of human umbilical cord-derived MSCs, and to explore the association between microenvironment and neural functional recovery following MSCs transplantation.DESIGN, TIME AND SETTING: A randomized, controlled, animal experiment was performed at the Department of Orthopedics, First Affiliated Hospital of Soochow University from April 2005 to March 2007. MATERIALS: Human cord blood samples were provided by the Department of Gynecology and Obstetrics, First Affiliated Hospital of Soochow University. Written informed consent was obtained. METHODS: A total of 62 Wister rats were randomly assigned to control (n = 18), model (n = 22, SCI + PBS), and transplantation (n = 22, SCI + MSCs) groups. The rat SCI model was established using the weight compression method. MSCs were isolated from human umbilical cord blood and cultured in vitro for several passages. 5-bromodeoxyuridine (BrdU)-labeled MSCs (24 hours before injection) were intravascularly transplanted. MAIN OUTCOME MEASURES: The rats were evaluated using the Basso, Beattie and Bresnahan (BBB) locomotor score and inclined plane tests. Transplanted cells were analyzed following immunohistochemistry. Enzyme-linked immunosorbant assay was performed to determine NGF, BDNF, and IL-8 levels prior to and after cell transplantation.RESULTS: A large number of BrdU-positive MSCs were observed in the SCI region of the transplantation group, and MSCs were evenly distributed in injured spinal cord tissue 1 week after transplantation. BBB score and inclined plane test results revealed significant functional improvement in the transplantation group compared to the model group (P< 0.05), which was maintained for 2-3 weeks. Compared to the model group, NGF and BDNF levels were significantly increased in the injured region following MSCs transplantation at 3 weeks (P < 0.05), but IL-8 levels remained unchanged (P > 0.05).CONCLUSION: MSCs transplantation increased NGF and BDNF expression in injured spinal cord tissue. MSCs could promote neurological function recovery in SCI rats by upregulating NGF expression and improving regional microenvironments.     

开颅血肿清除术与微创钻孔引流术治疗高血压脑出血的对照研究

目的通过对比高血压脑出血开颅血肿清除术与微创钻孔引流术后患者血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、S100β蛋白、神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平及GCS评分的变化,比较2种方法对脑损伤的影响。 方法选取山西医科大学第一医院神经外科自2016年7月至2017年7月收治的高血压脑出血患者46例,分为钻孔组（22例）和开颅组（24例）;对照组为同期健康体检者20例。钻孔组和开颅组术后1、3、7、14 d检测血清TNF-α、S100β、NSE并进行GCS评分,对照组检测血清TNF-α、S100β、NSE。比较钻孔组和开颅组术后1、3、7、14 d及对照组的血清TNF-α、S100β、NSE及GCS评分。 结果钻孔组与开颅组术后初期的血清TNF-α、S100β、NSE均高于正常水平,先达到高峰,之后逐渐下降（TNF-α：F=38.629,P=0.000;S100β：F=33.381,P=0.000;NSE：F=25.619,P=0.000）;2组GCS评分于术后1~7 d均较低,术后14 d有所增加,但仍低于正常水平（F=11.569,P=0.000）。术后1、3、7、14 d,钻孔组与开颅组血清TNF-α、S100β、NSE和GCS评分差异无统计学意义（P>0.05）。 结论开颅血肿清除术与钻孔引流术对高血压脑出血患者血清TNF-α、S100β、NSE及GCS评分的影响无差异,即两种方案对脑损伤的影响无差异,不能断定开颅血肿清除术较钻孔引流术效果差,两种术式各有优缺点,临床上需根据不同情况灵活应用。     

骨髓基质细胞源神经干细胞移植对脑出血大鼠行为及神经细胞凋亡的动态影响

目的 探讨骨髓基质细胞源神经干细胞对实验性脑出血大鼠行为及神经细胞凋亡的影响.方法 采用自体血注入法建立大鼠脑出血模型.32只健康Sprague-Dawley(SD)大鼠分为假手术组、出血对照组、出血骨髓基质细胞移植组和出血骨髓基质细胞源神经干细胞移植组.分别于移植后1d、7d、14d对大鼠进行神经功能缺损评分和空间学习能力检测,并在移植后7d和14d,分别应用TUNEL法检测神经细胞凋亡.结果 移植后7d各组神经功能均有不同程度的恢复(P<0.05),BMSCs源神经干细胞移植组大鼠的神经功能评分显著优于BMSCs移植组(P<0.01).移植7d后可提高大鼠空间学习能力,且各时间点BMSCs源神经干细胞移植组的空间学习能力改善优于BMSCs组(P<0.05).BMSCs源神经干细胞移植组出血边缘区凋亡细胞数明显少于BMSCs移植(P<0.05).结论 骨髓基质细胞源神经干细胞移植可改善脑出血大鼠神经行为,减少神经细胞凋亡,显著优于BMSCs移植.

Abstract：

Objective To study the effects of bone marrow stromal cells ( BMSCs) derived neural stem cells on behavior and celluar apoptosis in experimental intracerebral hemorrhage (ICH) . Methods The model was established by ster-otactic infusing autologous caudate artery blood into right nucleus caudatus of SD rats. 32 Sprague-Dawley rats were divided into sham-operated group,ICH control group,BMSCs transplanted group and BMSCs derived neural stem cells transplanted group. The neurogenic behavior of the rats were evaluated on 1,7,14 days after transplantation. The rats were killed separat-edly on 7,14days after transplantation. The brain sections were used for TUNEL staining. Result The neurological function of rats were recovery on 7 days later after transplantation( P < 0. 05 ) . The recovery of neurological function in BMSCs derived neural stem cells transplantation group was much evidentl than BMSCs transplantation group( P < 0. 01). The abilities of spatial learning and memory of rats on 7 days later after transplantation got improved (P < 0. 05). More satisfactory outcome got in BMSCs derived neural stem cells transplanted group than in BMSCs transplanted group ( P < 0. 05 ) . The number of apoptotic cells in the group of BMSCs derived neural stem cells transplanted group decreased evidently compared with that of the BMSCs transplantation group (P <0.05). Conclusion BMSCs derived neural stem cells may make the neurogenic behavior recovery, and decrease the infarct volumes and the number of apoptotic cells in ICH.     

慢病毒转染胶质细胞源性神经营养因子脂肪干细胞脑移植的研究

目的 探讨慢病毒转染胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的脂肪干细胞(ADSCs)脑移植的应用价值.方法 分离、培养SD大鼠ADSCs,用高滴度慢病毒将GDNF转染入细胞,观察细胞形态及用免疫荧光法观察神经标志物的表达.用立体定向仪将转染ADSCs植入大鼠的纹状体,移植1个月和2个月后,用荧光显微镜观察ADSCs脑内存活和分布状况,用Western blot检测GDNF蛋白的表达,并与正常对照组比较.结果 慢病毒转染ADSCs形态类似神经元,胞浆神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达阳性.ADSCs移植到大鼠纹状体1个月后,移植部位有大量存活的ADSCs,2个月后,仍有部分存活细胞,并向远处移行,GDNF蛋白水平显著高于正常对照组(均P<0.01).结论 慢病毒转染GDNF的ADSCs可为干细胞移植治疗中枢神经系统疾病提供新的供体.     

3D-slicer辅助神经内镜治疗不同时期基底节区脑出血的研究

目的探讨不同时期基底节区脑出血应用3D-slicer辅助神经内镜的治疗效果。 方法回顾性分析邢台市第三医院神经外科自2017年1月至2019年1月收治的96例高血压基底节区脑出血患者。根据手术时机不同将患者分为超早期组（发病时间<6 h,50例）和早期组（发病时间6~24 h,46例）。2组患者均在3D-slicer辅助下行神经内镜手术,对比其并发症、临床预后及脑脊液中神经元特异性烯醇化酶（NSE）的变化。 结果超早期组患者的再出血、颅内感染与早期组比较差异无统计学意义（P>0.05）,而肺炎、应激性溃疡发生人数少于早期组,差异有统计学意义（P<0.05）。超早期组的GOS评分中轻度残疾多于早期组,重度残疾少于早期组,差异有统计学意义（P<0.05）;超早期组在术后第7、14天脑脊液中NSE的含量低于早期组,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论超早期应用3D-slicer辅助神经内镜治疗能有效地改善基底节区脑出血患者的临床预后,减少脑出血后相关并发症的发生,但不增加再出血率。     

骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞后电生理特性的改变

背景：目前体外实验对骨髓间充质干细胞来源的神经元样细胞的研究多集中于形态学层面和神经标志物方面,对分化后的电生理功能研究较少。 目的：观察脑源性神经营养因子/碱性成纤维细胞生长因子/全反式维甲酸诱导Wistar大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞后电生理特性的变化。 设计、时间及地点：细胞学体外培养,对比观察,于2005-06/2007-10在天津市环湖医院细胞室和南开大学生命科学院完成。 材料：6周龄雄性Wistar大鼠3只,体质量160 g左右。 方法：贴壁培养法体外分离纯化间充质干细胞,用脑源性神经营养因子/碱性成纤维细胞生长因子/全反式维甲酸联合诱导间充质干细胞向神经元样细胞分化。诱导前和诱导3 d后分别用膜片钳技术检测细胞膜电流。 主要观察指标：流式细胞仪检测间充质干细胞表型;倒置显微镜观察诱导分化前后细胞形态变化;免疫细胞化学鉴定神经元特异性烯醇化酶的表达,以及全细胞电流测定结果。 结果：①流式细胞仪检测结果显示,CD90阳性率(99±3)%,CD31阳性率(3.4±0.8)%,CD34阳性率(0.3±0.1)%。说明这一细胞群大部分处于未分化的干细胞状态,其纯度可达95%。②光镜下可见未经诱导的间充质干细胞多为扁平形带突起的细胞,似纤维样细胞,诱导3 d后出现神经元样细胞。③免疫细胞化学结果显示,诱导前间充质干细胞的神经元特异性烯醇化酶呈弱阳性,诱导后呈强阳性。诱导72 h时分化率为(24.01±3.76)%。④诱导组神经元样细胞外向电流峰值及最大外向电流密度高于对照组(P < 0.05),但未发现内向钠电流。 结论：脑源性神经营养因子/碱性成纤维细胞生长因子/全反式维甲酸诱导方法可以诱导间充质干细胞向神经元方向分化,虽未发现具有成熟神经元电生理功能,但有向成熟神经元分化的趋势。