CXCL12对人胰腺癌细胞株PANC-1体外侵袭能力的影响

目的 探讨趋化因子CXCL12对人胰腺癌细胞株PANC-1侵袭能力的影响及其作用机制.方法 取人胰腺癌细胞株PANC-1,用不同浓度的CXCL12处理后,采用Transwell侵袭实验检测不同浓度组中PANC-1细胞侵袭能力的变化;用RT-PCR法检测细胞中MMP-9 mRNA和VEGF mRNA的表达,用ELISA法检测细胞培养液中MMP-9和VEGF蛋白的表达.结果 经CXCL12作用后,人胰腺癌PANC-1细胞侵袭能力明显增强,并具有一定的量效关系;细胞和上清液中MMP9和VEGF的表达亦呈剂量依赖性增强.结论 CXCL12可以通过上调MMP-9和VEGF的表达从而增强人胰腺癌细胞PANC-1的体外侵袭能力.     

SARI基因过表达对K562细胞系生物学影响的研究

目的:通过构建SARI慢病毒表达载体,探讨SARI基因过表达对K562细胞生物学功能的影响。方法:采用RT-PCR方法获得目的基因并重组p LOV.CMV.GFP质粒,构建pLOV.CMV.GFP-SARI表达载体。通过测序鉴定、病毒包装和滴度测定后,获得阳性病毒颗粒,并以病毒颗粒感染K562细胞系。采用Q-PCR及Western blot方法验证感染后K562细胞SARI基因转录和蛋白水平的表达情况,同时采用CCK-8法检测K562细胞的增殖情况,以流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期变化。结果:利用RT-PCR方法获得SARI基因并成功构建了含SARI基因的慢病毒表达载体,从分子及蛋白水平验证了其在感染后K562细胞中的高表达;与空白组和感染空载体的Mock组相比,过表达SARI载体组的细胞增殖显著受抑、细胞凋亡率增加,而细胞周期无显著变化。结论:SARI基因过表达可抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡,提示诱导SARI基因过表达可能对于抑制CML发生发展具有重要的作用。     

高侵袭胰腺癌亚群细胞系构建和生物学特性研究

目的建立具有高转移潜能的胰腺癌细胞株亚系并研究其生物特性。方法利用Transwell侵袭小室从人胰腺癌细胞株（PC-3）筛选高转移侵袭能力胰腺癌亚系PC-3-I-3,光镜下比较细胞形态;采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴（M1Tr）法检测细胞增殖能力;采用平板软琼脂克隆形成实验计算克隆形成数,比较其细胞克隆形成能力;采用Transwell小室体外转移和侵袭实验比较细胞肿瘤侵袭转移能力。结果光镜下细胞形态学显示,PC-3-I-3细胞多呈长梭形,较母系PC-3细长;MTr实验结果显示,PC-3-I-3的在1—5d吸光度值增长速度明显快于PC-3,在第5天时,PC-3-I-3的吸光度值（2．78＋0．12）高于PC-3的吸光度值（1．88_＋0．13）,差异有统计学意义（t=9．11,P〈0．05）;培养2周后,PC-3-I-3组克隆数（180．72＋5．01）明显高于PC-3组克隆数（139．00±6．10）,差异有统计学意义（t=8．73,P〈0．05）;Transwell小室体外迁移实验结果显示,PC-3-I-3吸光度值（0．40±0．05）高于PC-3吸光度值（0．21±0．06）,差异有统计学意义（t=5．76,P〈0．05）;Transwell小室体外侵袭实验结果显示,PC-3-I-3吸光度值（0．12＋0．03）高于PC-3吸光度值（0．04±0．02）,差异有统计学意义（t=4．76,P〈0．05）。结论在没有改变基因性质的前提下．筛选的胰腺癌细胞亚群PC-3-I-3的侵袭、转移能力明显增强．为探讨胰腺癌转移机制提供理想的细胞模型。     

反义miR-224对人胰腺癌细胞系Aspc-1和Bxpc-3侵袭、迁移的影响及机制研究

目的分析miR-224对胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响并探讨其分子机制。方法用miR-224反义寡核苷酸(ASO)降低胰腺癌细胞中miR-224的表达,通过Transwell实验和划痕实验观察miR-224 ASO对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,用western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9表达水平的变化。结果与空白对照组和转染无义ASO组相比,miR-224 ASO组miR-224的表达降低(P均0.05);Transwell实验和划痕实验结果显示miR-224 ASO组胰腺癌细胞的侵袭、迁移能力下降(P均0.05),MMP-2和MMP-9表达水平下降(P均0.05)。结论降低miR-224的表达可有效抑制胰腺癌细胞的侵袭和迁移;miR-224有可能成为胰腺癌侵袭转移调控的新靶点。     

microRNA-19对肝癌细胞系迁移与侵袭能力的影响

目的 比较不同转移潜能肝癌细胞系中microRNA-19（mir-19）表达变化,探讨mir-19对不同转移潜能肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 应用TaqMan MGB探针法定量分析mir-19在高转移潜能肝癌细胞系（MHCC97H、LM3）和低转移潜能肝癌细胞系（HepG2、7402）的表达差异.利用转染试剂将人工合成的mir-19的前体转染高转移潜能细胞系,人工合成的mir-19抑制剂转染低转移潜能细胞系.采用细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测mir-19对细胞增殖的影响,Transwell小室检测mir-19对细胞的迁移和侵袭能力的影响.结果 在不同转移潜能的细胞系中,mir-19表达水平在高转移潜能细胞系较低转移潜能细胞系表达下调（P〈0.05）.功能实验显示mir-19可抑制肝癌细胞的侵袭和增殖（P〈0.05）,利用生物信息学预测mir-19的靶基因发现,许多癌基因3＇UTR包含与mir-19的互补序列.结论 mir-19可能部分通过调节CREB3L4、PDE4A、JAM2、RUNX2等的表达来抑制肝癌细胞的增殖和侵袭转移.     

小干扰RNA抑制PTTG基因对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的研究P1TG基因沉默对胰腺癌细胞侵袭力的影响,探讨其与胰腺癌细胞侵袭性的关系及调控机制。方法阳离子脂质体转染PITG siRNA对PANC-1中的PITG基因进行干扰;利用RT-PCR和Western blot技术检测其基因沉默效应;通过Transwell小室法测定PANC-1细胞侵袭能力的改变。结果转染PTTG siRNA后,PANC-1细胞中PTTG的mRNA转录和蛋白表达受抑,显著低于未经处理的PANC-1细胞（P〈0．01）。利用PITGsiRNA对PITG进行RNA干扰后,PANC-1细胞的侵袭能力下降。结论设计的PITGsiRNA能有效抑制体外培养PANC-1细胞中PTIG的mRNA转录和蛋白表达水平,实现其基因沉默效应。P1TG与人胰腺癌的侵袭能力密切相关,其表达水平下降导致细胞侵袭能力降低。     

5,7-二甲氧基黄酮抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌干细胞特性的体外研究

[目的]探讨5,7-二甲氧基黄酮(DMF)对人胰腺癌干细胞特性的影响.[方法]体外培养人胰腺癌PANC-1细胞系得到微球细胞,流式细胞仪检测;划痕法分析不同浓度DMF对胰腺癌干细胞自我更新、体外细胞迁移和运动能力影响;Western Blot分析不同浓度DMF干预后PANC-1细胞系胰腺癌干细胞表面标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmil、E-cad、N-cad蛋白表达变化.[结果]DMF以浓度依赖方式抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌干细胞肿瘤球形成能力及抑制细胞体外迁移能力;DMF以浓度依赖方式使胰腺癌干细胞标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmi1、N-cad蛋白表达水平降低,而E-cad蛋白水平升高.[结论]DMF以浓度依赖方式显著抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌样干细胞自我更新、分化后细胞迁移、细胞标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmi1、N-cadherin蛋白表达,而增强E-cadherin蛋白表达.     

RNA干扰环氧化酶-2抑制人表皮样喉癌细胞系增殖和侵袭的研究

目的构建沉默环氧化酶-2(COX-2)基因重组慢病毒,观察其体外侵袭的抑制作用,从而探讨干扰COX-2抑制喉癌细胞增殖的作用机理,为喉癌的治疗提供新的思路。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2基因在人表皮样喉癌细胞(Hep-2)中的表达情况。利用上海吉凯公司RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体系统,构建针对COX-2基因慢病毒RNAi表达载体。转染Hep-2细胞,干扰COX-2基因的表达,实时定量PCR检测干扰前后基因表达变化。利用生长曲线测定干扰载体转染前后细胞生长速度变化。流式细胞仪检测细胞的生长周期。Boyden侵袭小室法测定体外侵袭力。结果成功构建了COX-2慢病毒RNAi表达载体,并建立了干扰COX-2基因的Hep-2细胞系。实时定量PCR检测COX-2基因在Hep-2细胞系中过表达被显著抑制。生长曲线测定,COX-2基因干扰后细胞增殖明显变慢。流式细胞仪检测细胞的生长周期可见干扰组诱导Hep-2细胞凋亡,转染G0～G1期细胞数量明显上升,S期细胞减少,表明siRNA干扰Hep-2细胞后,细胞由G0～G1期进入到S期受到阻滞,细胞增殖速度下降。体外侵袭实验中,Hep-2-AS侵袭细胞数(31.0±1.8)显著低于Hep-2细胞(104.0±2.6)及Hep-2-P细胞(99.0±2.7),差异有统计学意义(P<0.05)。结论喉癌中过表达的COX-2基因被干扰后表达明显降低并显著抑制细胞的生长速度和侵袭能力。同时验证了COX-2基因RNA干扰在进行抗肿瘤的治疗中潜在的应用前景。     

shRNA沉默EZH2表达对人肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨shRNA沉默EZH2表达对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法利用RT-PCR方法检测EZH2在人肺癌细胞株中的表达,特异性shRNA沉默EZH2表达后分析NCI-A549细胞增殖和侵袭能力的变化。结果检测14株非小细胞肺癌细胞中EZH2的mRNA表达,80%的细胞株EZH2较正常肺组织高表达;shRNA阻断EZH2表达可显著降低人肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论 EZH2基因沉默能有效抑制人肺癌细胞的增殖和侵袭能力,为深入研究EZH2在非小细胞肺癌中作用提供了研究基础。     

miR-192对结直肠癌细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 探究微小RNA-192(miR-192)对结直肠癌(CC)细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 分别设立A组(SW1116 CC细胞转染生理盐水)、B组(SW1116 CC细胞转染miR-192模拟物)及C组(SW1116 CC细胞转染miR-192抑制剂)。分别以MTT法检测各组细胞增殖情况,以流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,以划痕实验检测细胞迁移能力,以Transwell实验检测细胞侵袭能力。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-192及WNT家族成员2B(WNT2B)mRNA表达水平。结果 B组SW1116 CC细胞存活率、单克隆形成数目分别为(57.32±6.19)%、(284.59±15.08)个,均低于A组的(76.21±8.23)%、(601.47±23.16)个与C组的(89.52±10.62)%、(2 150.68±34.79)个,而凋亡率为(20.52±2.52)%,高于A组的(13.78±1.62)%与C组的(11.62±1.41)%;C组SW1116 CC细胞存活率、单克隆形成数目均高于A组,而凋亡率低于A组(均P<0...     

FHL1在人胰腺癌族中的表达及其与胰腺癌的侵袭及转移的相关性研究

目的:探讨FHL1蛋白在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌临床病理特征的关系。方法:利用Western blot检测62例胰腺癌手术切除标本与其相对应的癌旁胰腺组织中FHL1蛋白的表达。用Logrank检验分析FHL1蛋白表达与预后的关系。结果:FHL1的蛋白表达在胰腺癌中与对应癌旁胰腺组织相比下降明显(0.197±0.042 vs.0.508±0.272,P<0.01)。同时,FHL1在胰腺癌中的表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移、肿瘤累及范围、远处转移均有明显差异(P<0.05),与高表达FHL1组相比,低表达FHL1组患者术后生存时间明显缩短(P<0.01)。结论:FHL1的异常表达很可能与胰腺癌的侵袭、转移等密切相关,而这种异常表达又影响了胰腺癌患者的预后。     

RNA干扰质粒对胰腺癌细胞系Panc-1原癌基因AKT2表达的影响

  目的  探讨RNA干扰质粒抑制胰腺癌细胞系Panc-1原癌基因AKT2的表达对胰腺癌细胞生长和凋亡的影响, 并初步探讨其作用机制。  方法  选择胰腺癌细胞系Panc-1, 构建特异性抑制AKT2表达的RNA干扰质粒, 瞬时和稳定转染胰腺癌细胞, 采用MTT法及软琼脂克隆形成实验检测胰腺癌细胞生长能力, Heochst染色及Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡情况, 通过Western blot方法检测凋亡蛋白caspase-3表达; 并进行裸鼠移植瘤体内转染实验。  结果  采用RNA干扰质粒沉默胰腺癌细胞系Panc-1原癌基因AKT2, 能够有效抑制胰腺癌细胞Panc-1体外生长能力、促进细胞凋亡, 诱导凋亡激酶caspase-3的表达; 动物体内实验结果显示, 干扰质粒能够有效抑制胰腺癌细胞系Panc-1在动物体内的成瘤能力。  结论  RNA干扰质粒抑制原癌基因AKT2表达, 可有效抑制胰腺癌细胞生长, 促进凋亡, 针对原癌基因AKT2的基因治疗对胰腺癌具有重要的潜在应用价值。     

miRNA-181c对人肺腺癌细胞系SPC-A1增殖和侵袭的影响

目的探讨miRNA-181c(miR-181c)在人肺腺癌组织中的表达及其对人肺腺癌细胞系SPC-A1增殖和侵袭的影响。方法收集37例肺腺癌患者组织标本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺腺癌组织及相应癌旁组织中miR-181c的表达水平。脂质体法将miR-181c模拟物和miR-181c抑制剂分别转染至SPC-A1细胞中,CCK-8增殖实验检测转染后SPC-A1细胞的增殖能力,Transwell法检测转染后SPC-A1细胞的侵袭能力。结果肺腺癌组织中miR-181c的表达水平[3.259(1.637,4.920)×10-3]高于癌旁组织[2.008(1.200,3.292)×10-3],差异有统计学意义(U=-641.0,P0.05)。miR-181c的表达水平与淋巴结转移密切相关(P0.05)。转染SPC-A1细胞120 h后,miR-181c模拟物转染组的细胞增殖能力高于于阴性对照组,差异有统计学意义(2.029±0.034 vs 1.476±0.071;t=7.044,P0.01);而miR-181c抑制剂转染组细胞的增殖能力弱于阴性对照组,差异有统计学意义(0.998±0.050 vs 1.414±0.058;t=5.461,P0.01)。Transwell结果显示,转染miR-181c模拟物后SPC-A1侵袭能力显著增强(432.00±12.22 vs 219.50±9.31;t=14.11,P0.01),转染抑制剂后侵袭能力显著减弱(73.60±5.32 vs 227.30±11.27;t=11.52,P0.01)。结论 miR-181c在肺腺癌组织中高表达,并能促进SPC-A1细胞的增殖与侵袭。     

谷氨酸对SW1990胰腺癌细胞系体外增殖的影响

目的:研究谷氨酸对SW1990胰腺癌细胞系的增殖、凋亡及细胞毒性的影响及其可能的作用机制.方法:在体外用不同浓度的谷氨酸与人SW1990胰腺癌细胞作用后,用MTT比色法、BrdUrd渗入法和LDH法检测SW1990胰腺癌细胞的增殖能力、细胞分裂和死亡情况,并用激光共聚焦显微镜测定胞浆内游离钙离子浓度.结果:谷氨酸可以呈剂量依赖性地促进SW1990胰腺癌细胞的增殖(P<0.01),谷氨酸可以促进胰腺癌肿瘤细胞的分裂,减少其死亡(P<0.01),并且可以呈剂量依赖性地增加胞浆内游离钙离子浓度(P<0.01).结论:谷氨酸可以促进肿瘤细胞的增殖,此作用可能是通过促进细胞的分裂、减少其死亡而实现的,且可能是通过增加胞浆内游离钙离子浓度介导的.     

hCG对滋养细胞系侵袭性相关基因表达的影响

目的：揭示人类绒毛膜促性腺激素（hCG）对滋养细胞侵袭性的影响。 方法：以永生化的滋养细胞系JEG-3为研究对象，采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）方法，观察了hCG对滋养细胞系侵袭性相关基因表达的影响。 结果：JEG-3细胞自身表达MMP-2，而不表达MMP-9或uPA，同时还表达这些蛋白酶的抑制因子TIMP-1、TIMP-2和PAI-1。JEG-3细胞还表达组织蛋白酶B，而未见组织蛋白酶D的表达。在与25 IU/ml hCG温育50h后，MMP-2的表达无显著变化，而TIMP-1和PAI-1的表达显著降低，同时TIMP-2的表达被诱导增加，其它基因的表达无明显变化。 结论：高浓度(25 IU/ml)的hCG可能通过改变蛋白水解酶及其抑制因子的表达而减弱滋养细胞的侵袭性。     

脉冲电场对人宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力的影响

背景：脉冲电场对肿瘤细胞侵袭转移能力是否具有抑制作用尚不十分清楚。目的：探讨不同强度脉冲电场对人宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力的影响及可能的机制。方法：以场强分别为0,500,1000和1500V/cm的脉冲电场作用人宫颈癌Hela细胞后,采用平板克隆形成实验,观察脉冲电场对细胞克隆能力的影响;采用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和转移实验,观察脉冲电场对细胞侵袭和转移能力的影响;采用RT-PCR法检测宫颈癌Hela细胞中基质金属蛋白酶2和RhoC基因mRNA的表达情况。结果与结论：脉冲电场作用后,宫颈癌Hela细胞的克隆能力受到抑制;细胞侵袭和转移能力明显降低;基质金属蛋白酶2和RhoC基因mRNA的表达均明显减弱,且有电场强度依赖性。结果表明,脉冲电场能抑制人宫颈癌Hela细胞的侵袭转移能力,其机制可能与降低RhoC和基质金属蛋白酶2的表达有关。     

脉冲电场对人宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力的影响

背景:脉冲电场对肿瘤细胞侵袭转移能力是否具有抑制作用尚不十分清楚.目的:探讨不同强度脉冲电场对人宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力的影响及可能的机制.方法:以场强分别为0,500,1 000和1 500 V/cm的脉冲电场作用人宫颈癌Hela细胞后,采用平板克隆形成实验,观察脉冲电场对细胞克隆能力的影响;采用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和转移实验,观察脉冲电场对细胞侵袭和转移能力的影响;采用RT-PCR法检测宫颈癌Hela细胞中基质金属蛋白酶2和RhoC基因mRNA的表达情况.结果与结论:脉冲电场作用后,宫颈癌Hela细胞的克隆能力受到抑制;细胞侵袭和转移能力明显降低;基质金属蛋白酶2和RhoC基因mRNA的表达均明显减弱,且有电场强度依赖性.结果表明,脉冲电场能抑制人宫颈癌Hela细胞的侵袭转移能力,其机制可能与降低RhoC和基质金属蛋白酶2的表达有关.     

苦参碱对人胃癌细胞株SGC-7901体外侵袭能力的抑制作用

目的探讨苦参碱对人胃癌细胞株SGC-7901体外侵袭能力及乙酰肝素酶(HPSE)mRNA表达的影响作用。方法SGC-7901细胞体外培养,以0.125、0.25和0.5mg/m l不同浓度苦参碱进行预处理48h后,采用半定量RT-PCR检测各组培养细胞HPSE mRNA表达的变化,应用细胞黏附实验检测细胞黏附能力的改变,Transwell小室检测侵袭及趋化能力的变化。结果与对照组比较,各浓度苦参碱处理组SGC-7901细胞HPSE mRNA的表达和细胞黏附侵袭能力均受到明显的抑制(P<0.01),其抑制效应与药物的浓度呈正相关,组间比较,P<0.01。结论苦参碱可能通过下调SGC-7901细胞HPSE mRNA的表达而显著抑制细胞的体外侵袭能力,其抑制作用呈剂量依赖性。     

沉默SOX2对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响及机制研究

【目的】探讨转录因子 SOX2表达下调对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响。【方法】将特异性短发夹（shRNA）SOX2干扰载体转染宫颈鳞癌细胞 SiHa获得稳转细胞系（SOX2干扰组）,MTT法检测细胞增殖能力变化,Transwell小室法测定细胞侵袭能力差异,Western Blot检测 SOX2、MMP2、MMP9及上皮间质转化相关因子变化,并与阴性对照转染组与空白对照组比较。【结果】与阴性对照转染组和空白对照组比较, SOX2干扰组 MTT结果显示细胞增殖能力明显降低,Transwell结果显示细胞穿膜数显著减少、侵袭能力降低（P＜0．05）,Western Blot检测 SOX2显著下调、MMP2、MMP9表达下调、E-cadherin蛋白水平升高、Vim-entin表达降低（P＜0．05）;而阴性对照转染组与空白对照组相比各项指标无明显变化。【结论】抑制 SOX2表达能够抑制宫颈鳞癌细胞的体外增殖与侵袭能力,可能与抑制上皮间质转化过程有关。     

JAG2基因沉默影响大肠癌细胞株侵袭能力的研究

目的 Notch信号在肠上皮细胞种系分化和引发肠腺瘤和肠癌中起着关键的作用。本文试图探讨Notch信号的配体JAG2在大肠癌中的作用。方法 Real-Time PCR和Western blot分别检测JAG2特异性si RNA对JAG2 m RNA及蛋白表达的抑制率,细胞增殖实验和细胞侵袭实验观察si RNA对细胞增殖及侵袭能力的影响,人类肿瘤转移RT2 Profiler?PCR Array用于筛选JAG2下游靶基因,并应用特异性抑制化合物抑制靶蛋白活性。结果特异性si RNA对JAG2 m RNA及蛋白的表达具有抑制作用(P<0.05),对细胞增殖无明显影响(P>0.05),对细胞侵袭能力明显抑制(P<0.05),而组织蛋白K(CTSK)活性降低可能参与了这一过程。结论 JAG2基因可能对大肠癌细胞的侵袭转移能力起促进作用。