河南地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变研究

Objective To study the characteristics of the phenylalanine hydroxylase gene (PAH)mutations in patients with phenylketonuria (PKU) in Henan province, in order to provide basic information for genetic counseling and prenatal diagnosis. Methods Mutations of the PAH gene were detected in exons 1-13 with flanking introns of PAH gene by PCR and DNA sequencing in 47 families with PKU. Results A total of 25 different mutations were detected in 83 out of 94 PAH alleles (88. 3%). Among them,E79fX13, H271R and D415Y have not been reported previously. It was the first time that IVS10-14C＞Gmutation was reported in Chinese PKU population. The mutations p. R243Q, EX6-96A＞G, p. Y356X,IVS4-1G＞A, p. R111X, p. V399V and p. R413P, were the prevalent mutations with relative frequencies of 20. 5 %, 12.0%, 9.6%, 9. 6%, 8. 4%, 8. 4% and 7.2% respectively. Conclusion The mutations of the PAH gene in patients with classical phenylketonuria in Henan province were similar to that in other areas of China. Prenatal gene diagnosis for PKU by PAH gene sequencing is efficient for most PKU families.     

河南地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变研究

Objective To study the characteristics of the phenylalanine hydroxylase gene (PAH)mutations in patients with phenylketonuria (PKU) in Henan province, in order to provide basic information for genetic counseling and prenatal diagnosis. Methods Mutations of the PAH gene were detected in exons 1-13 with flanking introns of PAH gene by PCR and DNA sequencing in 47 families with PKU. Results A total of 25 different mutations were detected in 83 out of 94 PAH alleles (88. 3%). Among them,E79fX13, H271R and D415Y have not been reported previously. It was the first time that IVS10-14C＞Gmutation was reported in Chinese PKU population. The mutations p. R243Q, EX6-96A＞G, p. Y356X,IVS4-1G＞A, p. R111X, p. V399V and p. R413P, were the prevalent mutations with relative frequencies of 20. 5 %, 12.0%, 9.6%, 9. 6%, 8. 4%, 8. 4% and 7.2% respectively. Conclusion The mutations of the PAH gene in patients with classical phenylketonuria in Henan province were similar to that in other areas of China. Prenatal gene diagnosis for PKU by PAH gene sequencing is efficient for most PKU families.     

河南地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变研究

目的 了解河南地区苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因突变情况,以便为苯丙酮尿症产前诊断和遗传咨询提供理论依据.方法 应用PCR产物直接测序对47例PKU患者及其父母PAH基因第1～13外显子及其两侧内含子进行序列分析.结果 在94条染色体中共检测到了83个PAH基因突变位点,检出率为88.3%(83/94),共发现了25种突变,其中突变E79fX13、H271R和D415Y国内外未见报道,突变VS10-14C＞G为国内首次报道.河南地区PKU患者的PAH基因突变集中在第6、7和11外显子,常见的7种突变是p.R243Q(20.5%)、EX6-96A＞G(12.0%)、p.Y356X(9.6%)、VS4-1G＞A(9.6%)、p.R111X(8.4%)、p.V399V(8.4%)、p.R413P(7.2%).结论 河南地区PKU患者PAH基因突变与中国其他地区相似,通过PAH基因直接测序可对大部分的PKU家系进行产前诊断.

Abstract：

Objective To study the characteristics of the phenylalanine hydroxylase gene (PAH)mutations in patients with phenylketonuria (PKU) in Henan province, in order to provide basic information for genetic counseling and prenatal diagnosis. Methods Mutations of the PAH gene were detected in exons 1-13 with flanking introns of PAH gene by PCR and DNA sequencing in 47 families with PKU. Results A total of 25 different mutations were detected in 83 out of 94 PAH alleles (88. 3%). Among them,E79fX13, H271R and D415Y have not been reported previously. It was the first time that IVS10-14C＞Gmutation was reported in Chinese PKU population. The mutations p. R243Q, EX6-96A＞G, p. Y356X,IVS4-1G＞A, p. R111X, p. V399V and p. R413P, were the prevalent mutations with relative frequencies of 20. 5 %, 12.0%, 9.6%, 9. 6%, 8. 4%, 8. 4% and 7.2% respectively. Conclusion The mutations of the PAH gene in patients with classical phenylketonuria in Henan province were similar to that in other areas of China. Prenatal gene diagnosis for PKU by PAH gene sequencing is efficient for most PKU families.     

甘肃地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

.2%),IVS4-1G>A(5.2%),较常见的突变有Y356X(3.4%),R111X(3.4%),INS7+2T>A(3.4%).结论 甘肃地区PAH基因突变与中国其他地区相似,但部分突变基因比例存在明显的差异.     

河南省苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变的构成

目的 了解河南省苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因突变的特点,为临床遗传咨询、基因诊断及产前诊断提供科学依据.方法 应用聚合酶链反应和DNA正反测序技术对34例经典型PKU患者的PAH基因全部13个外显子及两侧部分内含子进行鉴定分析.结果 34例患者共68个PAH等位基因中共检出23种致病突变(包括错义突变12种、无义突变4种、剪接突变4种和缺失3种)和9种其它基因变异.致病基因突变的总检出率为92.65%(63/68).第7外显子的基因突变种类最多,其次是第5外显于和第11外显子.检索PAH基因突变数据库和查阅相关文献,确定有2种突变[A156P和P69_S70delinsP(delCTT)]国际上未见报道,4种突变(IVS2+5G＞C、G332E、IVS10-14C＞G、L367＞Wfs)国内未见报道.结论 河南省PKU患者PAH基因的突变构成及频率与中国其它地区人群稍有不同.     

山西省经典型苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变研究

目的 探讨山西省经典型苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因第3、6、7、11和12外显子的突变特征.方法 通过测序及序列比对的方法对山西省59例经典型PKU患者和100名正常儿童PAH基因进行序列分析,以确定其突变位点、性质和突变频率.结果 通过序列分析,发现在患儿和正常儿童中均出现Q232Q(CAA→CAG)、V245V(GTG→GTA)和L385L(CTG→CTC)3种单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism,SNP),其中患儿cDNA 696位点的SNP发生率高达96.2%,正常儿童的SNP发生率为97.0%;患儿cDNA 735位点的SNP发生率为76.1%,正常儿童的SNP发生率为77.3%;患儿cDNA1155位点的SNP发生率仅为7.6%,正常儿童SNP发生率为8.3%.正常儿童的其它序列与GenBank中序列比较的无差异.在患儿的基因序列中还发现了16种共计72个突变基因,占全部PAH突变基因的61.0%.第3外显子发现3种突变R111X、H64＞TfsX9和S70 del,突变频率分别为5.1%、0.8%、0.8%;第6外显子仅发现1种突变EX6-96A＞G,突变频率达10.2%;第7外显子中R243Q的突变频率最高,占12.7%,其次是Ivs7+2T＞A,占5.1%,T278I占2.5%,G247V、R252Q、L255S、R261Q、E280K均占0.8%;第11外显子中,Y356 X占5.9%,V399V占5.1%;第12外显子中,R413P占5.9%,A434D占2.5%.在16种突变中,有9种错义突变、3种剪接位点突变、2种无义突变及2种缺失,其中,H64＞TfsX9为本次研究新发现.结论 明确了山西省经典型PKU患者PAH基因第3、6、7、11和12外显子的突变种类和分布等特征,EX6-96A＞G、R243Q可能属于山西人群中PAH基因突变的热点.     

高分辨率熔解曲线分析技术检测苯丙酮尿症患者的苯丙氨酸羟化酶基因突变

目的 应用高分辨率熔解曲线（HRM）分析技术检测苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变.方法 利用PCR扩增13例苯丙酮尿症（PKU）患者的苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因第6、7、11及12外显子,然后对PCR产物进行HRM分析,通过DNA测序对HRM结果进行验证.结果 在13例PKU患者的26个PAH等位基因中共检测出5种不同突变基因,总检出率为38.5％.常见的突变类型是R243Q和A434D.检测出两种多态性位点为Q232Q和V245V.HRM分析结果与测序结果完全一致.结论 HRM技术具有简单、快速、易操作、准确等优点,可用于PKU患者PAH基因突变筛查.     

维吾尔族苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸合适摄入量的研究

目的研究适合维吾尔族苯丙酮尿症患儿的苯丙氨酸摄入量,为今后维吾尔族苯丙酮尿症患儿的饮食调整提供可参考和借鉴的临床证据。方法采用完全随机分组方式,将71名符合纳入标准的苯丙酮尿症患儿,分别给予苯丙氨酸推荐摄入量和推荐摄入量的半量,获得2w详细的每日膳食记录,计算苯丙氨酸摄入量,每7天检测干血片phe浓度。结果半量组干预后血phe均值为(5.47±3.32)mg/dl,全量组干预后为(8.76±3.30)mg/dl,差异有统计学意义(t=-3.625,P0.05);耐受量与月龄(12～48月)、确诊时血phe水平的相关系数均无统计学意义(P=0.277,0.826)。结论对于维吾尔族苯丙酮尿症患儿,给予推荐苯丙氨酸摄入量的半量可更有效控制血phe水平,但需注意血苯丙氨酸过低情况,本研究表明12～48月患儿苯丙氨酸模拟耐受量与确诊时phe值、当前月龄无关。     

经典型苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶基因的新突变鉴定

目的研究经典型苯丙酮尿症(phenylketonuria, PKU)基因突变.方法应用聚合酶链反应,单链构象多态分析和DNA直接测序等技术,对内蒙古地区32个PKU家系苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase, PAH)基因第3～12外显子进行了鉴定分析. 结果检出14种PAH基因点突变R243Q (12/64)、Y356X(6/64)、Y204C(5/64)、R261Q(2/64)、Y161S(2/64)、R252Q(1/64)、R111X(2/64)、D282G(1/64)、S303P(1/64)、G239D(1/64)、R413P(1/64)、IVS7nt+2(2/64)、IVS4nt+3(1/64)、IVS9nt+34(2/64),经检索国际PAH基因突变数据统计库(截至到2004年7月),确认IVS4nt+3(G>C)、IVS9nt+34(G>A)为国际首次发现的新突变,S303P(T>C) 、D282G(A>G)为国内首次报道的新突变.结论内蒙古人群苯丙氨酸羟化酶基因存在突变的多样性,R243Q、Y356X、Y204C是PAH基因的突变热点.     

石家庄地区74例苯丙酮尿症患儿饮食干预情况分析

目的通过对石家庄市74例低苯丙氨酸饮食治疗的苯丙酮尿症患儿,监测血苯丙氨酸,选用Geselt发育量表进行智能发育评估,总结分析饮食治疗干预效果。方法确诊的74例苯丙酮尿症患儿中59例给予低苯丙氨酸饮食治疗,其中48例经新生儿疾病筛查,治疗起始年龄在3个月内,11例未接受新生儿疾病筛查,出现症状而就诊,治疗起始年龄8个月至27月,15例因各种原因放弃治疗给予正常饮食。通过对74例患儿定期随访,监测血苯丙氨酸浓度、智能发育水平,进行调查结果总结分析。结果通过新生儿疾病筛查,治疗起始年龄〈3个月的PKU患儿,智能发育水平达到正常水平（98．62±3．61）,因未接受新生儿疾病筛查而延迟治疗的11例PKU患儿,智能发育水平治疗前后对比差异有统计学意义（P〈0．05）,放弃治疗给予普通饮食的15例PKU患儿,智能发育水平明显落后于两组干预治疗的患儿。结论开展新生儿疾病筛查是早期发现PKU的有效途径,通过低苯丙氨酸饮食干预治疗,可以明显改善预后,避免患儿智能低下的发生。达到降低出生缺陷的目的。     

大庆地区新生儿苯丙酮尿症苯丙氨酸筛查切值的研究

目的探讨大庆地区新生儿苯丙氨酸（phenylalanine,Phe）测定时新生儿苯丙酮尿症筛查切值。方法以大庆地区出生的新生儿为筛查对象,于出生后48~72h,充分哺乳后采取足跟血,应用定量酶法检测标本中苯丙氨酸含量。结果2004年1月至2005年12月两年期间共筛查20214例,确定大庆市新生儿苯丙酮尿症的筛查切值为2.60mg/dl。结论新生儿足跟血Phe切值的确定为大庆市新生儿苯丙酮尿症的筛查工作提供依据,早发现早治疗可避免患儿的智力障碍,对提高我国人口素质有着十分重要的意义。     

西北五省区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因外显子12突变分析

目的研究分析西北五省区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因外显子12的突变特征,为该地区苯丙酮尿症(PKU)的产前诊断和遗传咨询提供理论依据。方法应用PCR产物直接测序法对276例PKU患儿及其父母的PAH基因启动子、第1~13外显子及其旁侧内含子区域进行基因突变分析。结果⑴PAH基因外显子12中突变基因检出率为7.4,共检出8种PAH基因突变,其中,错义突变7种、无义突变1种,最常见的突变是R413P(4.0);⑵PAH基因外显子12突变检出率由高到低依次为宁夏(11.3)、陕西(9.7)、甘肃(5.2)、新疆(3.3)和青海(3.1),R413P突变在新疆、宁夏、陕西和甘肃四省区中突变检出率分别为2.5、5.3、5.6和5.2,Y414X(0.7)和L430P(2.7)仅在宁夏检出,R408W(1.0)仅在青海检出;⑶R413P是西北及等国内大多数地区PAH基因外显子12最为常见的突变,R413P突变在西北地区中的检出率低于山西、河南、河北、天津、沈阳、云南等大多数国内省区,日本R413P、中国台湾R408Q突变和挪威、瑞典、北爱尔兰及苏格兰的R408W突变的检出率显著高于西北地区。西北五省区检出的Y414X、Q419R和L430P三种突变在我国其它地区尚未见报道。结论⑴西北地区PAH基因外显子12突变以R413P为主,与韩国、日本相似,但不同于挪威、瑞典等欧洲国家以R408W为主。推测R413P突变基因频率的高处在日本,R408Q和R408W突变基因频率的高处分别在中国台湾、欧洲。⑵西北五省区PAH基因外显子12突变特点有别于中国其他地区和部分欧洲国家,表现出多民族聚居地区基因突变特有的多样性和复杂性。     

苯丙酮尿症患儿治疗后气质特征的研究

目的探讨苯丙酮尿症患儿特殊饮食治疗后的气质特质以及与正常儿童气质的差别。方法 2000年至2009年采用中国儿童气质量表对潍坊市新生儿疾病筛查中心确诊的71例PKU患儿和135例正常儿童进行测查。结果苯丙酮尿症患儿气质类型分布：PKU组I-D型、D型、S型所占比例较多,与正常儿童组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。PKU组在活动水平、节律性、适应性、持久性、心境、注意分散和反应阈7个维度的得分与正常儿童组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论治疗后的PKU患儿的气质有其独特性,其消极气质类型比例高于正常儿童,应针对患儿的气质特征进行综合治疗。     

潍坊地区苯丙酮尿症患儿饮食治疗后智力发育情况分析

目的探讨苯丙酮尿症患儿特殊饮食治疗后智力发育情况以及与开始治疗时间和依从性的关系。方法采用0~6岁儿童神经心理发育量表对2002~2011年潍坊市新生儿疾病筛查中心确诊的60例PKU患儿和60例正常儿童进行测查。结果开始治疗年龄40天组与开始治疗年龄40天组比较,在适应性、大运动、语言3个能区差异有统计学意义(P0.05),而在精细运动、个人-社交2个能区差异无统计学意义(P0.05)。正常儿童组与饮食配合组智力发育差异无统计学意义(P0.05),饮食配合组与不配合组患儿智力发育差异有统计学意义(P0.05)。结论经饮食控制的PKU患儿智力发育正常,治疗的起始时间以及严格的饮食治疗对于PKU患儿至关重要。     

低苯丙氨酸饮食治疗苯丙酮尿症的临床研究

目的总结20年对652例苯丙酮尿症患儿进行低苯丙氨酸饮食治疗经验,探讨有效的饮食控制方案。方法由营养师计算制定食谱,对治疗患儿进行严格饮食控制,并定期测定血中苯丙氨酸浓度,根据血浓度调整饮食,使其维持在理想水平。结果严格随诊早治疗的60例患儿,其体重、身高、头围均在正常儿童相应标准值的±2s之间。<3个月开始治疗的56例智商可达96±10,晚治疗的83例,治疗前为61±23,治疗后为72±26。治疗前后智商比较有显著性差异( P<0．05)。结论合理安排食谱,正确添加辅食是保证患儿正常生长、发育、维持血苯丙氨酸浓度在理想范围的关键,而且一定要在营养师指导下注意患儿的全方位营养。     

2000年～2009年潍坊地区苯丙酮尿症患儿筛查及治疗情况分析

目的探讨潍坊地区苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患儿的筛查及治疗情况。方法对2000年1月至2009年9月655769例新生儿采足跟血,滴于专用滤纸片上,应用化学荧光法测血斑中的苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)浓度,根据血phe浓度确诊PKU。确诊者予低phe饮食,定期查患儿血phe浓度及体格、智力发育水平,评价患儿气质特征的变化。结果确诊PKU患儿73例,2例自动放弃治疗,余患儿经早期治疗后,智力、体格发育均于正常范围,但气质特征有别于正常儿童,难养型气质类型高于正常儿。结论早发现、早治疗对预防PKU智力低下的发生是十分必要的。     

福建省新生儿苯丙酮尿症苯丙氨酸筛查切值的研究

目的探讨新生儿足跟血苯丙氨酸(Phe)测定在新生儿苯丙酮尿症筛查的切值(cut-off).方法新生儿出生72h后采足跟血,滴在规定的滤纸上.采用荧光测量法测定Phe浓度.结果通过一年半的新生儿足跟血筛查结果确定福建省新生儿苯丙酮尿症的筛查(Phe)切值为2.0mg/dL.结论新生儿足跟血Phe切值的确定为福建省今后开展大规模的新生儿苯丙酮尿症筛查提供依据:目前各实验室各自确定本实验室的Phe筛查切值,建议由国家卫生部组织进行苯丙酮尿症筛查Phe切值统一确定.     

苯丙酮尿症位点:不同群体中苯丙氨酸羟化酶基因的等位基因与突变的近代研究

本文主要在以下两方面介绍了笨丙酮尿症(PK)位点的近代研究:(1)DNA 单体型分析系统在苯丙氨酸羟化酶(PAH)缺陷的群体遗传研完中的应用;(2)基因型及其不同的结合研究,可作为预测 PAH 缺陷病和表型变异性的观察方法。     

徐州地区444323例新生儿筛查苯丙酮尿症情况分析

目的研究徐州地区新生儿疾病苯丙酮尿症(PKU)的发生、分布及治疗情况。方法采用干血滤纸片法,对出生72h的新生儿采集足跟血,用荧光法检测血苯丙氨酸浓度,并对确诊患儿做临床流行病学分析。结果 PKU发病率为1:7934,流行病学调查未见近亲结婚和遗传家族史,母孕期正常。结论 PKU在徐州地区散在发生和分布;进行新生儿筛查,使得患儿得到早期诊治,是提高本地区人口素质的重要措施。