槐果碱对神经病理性疼痛小鼠GABA信号通路的影响

目的:研究槐果碱(Sohpocarpine,SC)对坐骨神经慢性缩窄性损伤神经病理性疼痛小鼠的镇痛作用,并探讨其GABA信号通路相关机制。方法:复制坐骨神经慢性缩窄性损伤神经病理性疼痛小鼠模型,采用Von Frey机械痛触觉阈测量系统、热刺痛仪及冷热板测痛仪测定槐果碱40、20、10 mg/kg对坐骨神经慢性缩窄性损伤小鼠的机械缩足反射阈值、热缩足反射潜伏期及冷缩足反射阈值的影响;用RT-PCR法检测槐果碱40、20、10 mg/kg对坐骨神经慢性缩窄性损伤小鼠脊髓组织GABA、GAD65及GAT1 mRNA表达的影响。结果 :与神经病理性疼痛坐骨神经慢性缩窄性损伤模型组小鼠比较,槐果碱40、20 mg/kg可提高坐骨神经慢性缩窄性损伤小鼠机械缩足反射阈值,延长热缩足反射潜伏期,降低冷缩足反射阈值;槐果碱40、20 mg/kg可上调坐骨神经慢性缩窄性损伤小鼠脊髓组织GABA、GAD65 mRNA表达水平,下调GAT1 mRNA表达。结论:槐果碱对坐骨神经慢性缩窄性损伤致神经病理性疼痛有较好的镇痛作用,其机制可能与其上调GABA、GAD65表达和下调GAT1表达有关。     

氧化槐定碱对新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究氧化槐定碱对原代培养新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后细胞调亡的影响。方法:以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象建立氧糖剥夺再灌注损伤模型。Hoechst 33342和TUNEL染色法检测海马神经细胞凋亡,透射电子显微镜术观察凋亡细胞形态学变化,化学比色法测定海马神经细胞Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8的活性,免疫蛋白印迹技术和实时荧光定量PCR技术检测凋亡相关因子Cytochrome C、Caspase-3、Bcl-2、Bax和PARP-1的蛋白和mRNA的表达。结果:与正常组比较,损伤组Hoechst 33342和TUNEL染色法显示神经细胞凋亡率明显升高;Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8活性显著提高;Cytochrome C、Caspase-3、Bax和PARP-1蛋白和mRNA水平明显上调,Bcl-2蛋白和mRNA水平明显下调,Bcl-2/Bax比率也明显下调。与损伤组比较,氧化槐定碱治疗组(20、5、1.25mg/L)可显著改善氧糖剥夺再灌注损伤所致的神经细胞凋亡的形态学变化,并降低神经细胞凋亡率;明显抑制Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8的活性。氧化槐定碱治疗组(20mg/L)可明显抑制Cytochrome C、Caspase-3、Bax和PARP-1蛋白和mRNA表达,增强Bcl-2蛋白和mRNA的表达,使Bcl-2/Bax比率上升。结论:氧化槐定碱通过抗凋亡作用对氧糖剥夺再灌注损伤的大鼠海马神经细胞发挥保护作用。     

丹参酮IIA对神经性痛大鼠脊髓背角Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨丹参酮IIA的镇痛机制,研究其对慢性神经病理性痛大鼠脊髓背角内Bcl-2蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达的影响。方法:45只SD大鼠被分为假手术组和模型组,假手术组仅暴露实验大鼠右侧坐骨神经干不予结扎,模型组结扎实验大鼠右侧坐骨神经干,生理盐水组是在模型组大鼠鞘内注射生理盐水,处理组是在模型组大鼠鞘内注射丹参酮IIA,检测各组大鼠机械痛阈和热痛阈,采用免疫荧光组织化学检测各组大鼠脊髓背角内Bcl-2蛋白、Caspase-3蛋白和Bax蛋白的表达。结果:假手术组大鼠的热痛阈和机械痛阈较高,脊髓背角内仅有少量的Bcl-2蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达;与之比较生理盐水组大鼠的热痛阈和机械痛阈降低,Bcl-2蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白的表达增多,Bcl-2/Bax比值减小,说明大鼠模型制备成功可以进行后续实验;与生理盐水组比较,处理组脊髓背角内Bcl-2蛋白的表达增多,但Bax蛋白和Caspase-3蛋白的表达下降,Bcl-2/Bax比值增大,处理组热痛阈和机械痛阈升高。结论:该研究中丹参酮IIA的镇痛作用可能与脊髓背角内Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白的增多以及Bax蛋白的降低有关。     

甘草次酸通过抑制Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路保护心脏骤停心肺复苏大鼠心脏功能

目的:观察甘草次酸防治心脏骤停心肺复苏(CA/CPR)大鼠心脏功能的作用,并探讨其抑制Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路分子机制。方法:将60只大鼠随机分为:阴性对照组、模型组、阳性对照组(依达拉奉6 mg/kg)及甘草次酸50、100、200mg/kg剂量组,每天给药1次,连续6 d。实验第7 d,除阴性对照组外,其它各组均采用窒息法建立大鼠CA/CPR模型,并再给予相应药物1次。末次给药后1 h,记录大鼠左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))、左室内压最大下降速率(-dp/dt_(min))及平均动脉压(MABP)等血流动力学参数;采用生化法测定血清LDH、CK及CK-MB含量的变化;取大鼠心尖组织,进行HE病理切片染色,镜下观察心肌组织病理学变化;采用生化法检测大鼠心肌组织SOD、MDA、GSH-Px及T-AOC水平;采用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)及Western blot法检测大鼠心肌组织Caspase 3、Bax及Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结果:与阴性对照组比较,模型组大鼠LVEDP升高,+dp/dt_(max)、-dp/dt_(min)、LVSP及MABP降低,血清LDH、CK及CK-MB含量明显升高;心肌组织SOD、GSH-Px及T-AOC含量降低,MDA含量明显增多;心肌组织肌纤维走行紊乱,有纤维化和断裂现象,部分细胞结构受损、变性或坏死,可见少量炎性细胞浸润,且Caspase 3、Bax mRNA和蛋白表达水平明显上调,Bcl-2 mRNA表达水平明显下调。与模型组比较,甘草次酸200 mg/kg组大鼠LVEDP降低,+dp/dt_(max)、-dp/dt_(min)、LVSP及MABP升高,血清LDH、CK及CK-MB活性下降;心肌组织SOD、GSH-Px及T-AOC含量明显升高,MDA含量明显下降;心肌组织病理损伤明显减轻,且Caspase 3、Bax mRNA和蛋白表达水平下调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调。结论:甘草次酸对CA/CPR大鼠心脏功能具有保护作用,其作用机制与抑制氧化应激和下调Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有关。     

桂郁金醇提物含药血清对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:探究桂郁金醇提物含药血清对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:32只SD大鼠随机分为4组:空白对照组及桂郁金醇提物高(10 g/kg)、中(5 g/kg)、低(1 g/kg)剂量组,灌胃给药2次/d,连续3 d,最后一次给药1 h后,用10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,制备含药血清。使用不同浓度的H_2O_2诱导HUVEC细胞3 h,建立细胞氧化应激模型,采用CCK-8试剂检测细胞存活率,明确H_2O_2的最适造模浓度为800μmol/L;利用CCK-8试剂进行含药血清对HUVEC细胞及H_2O_2损伤的HUVEC细胞存活率的影响;利用试剂盒检测细胞培养上清液中SOD、GSH-Px、MDA、LDH、NO、t-PA、PAI-1、IL-6、TNF-α水平;采用Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;利用RT-PCR技术检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达。结果:与模型组比较,各剂量含药血清均能升高细胞存活率,高剂量能升高SOD、GSH-Px、NO、PAI-1水平,降低LDH、MDA、t-PA、IL-6、TNF-α水平及Caspase-3、Bax mRNA表达,升高Bcl-2/Bax比值;中剂量能升高SOD、GSH-Px、NO、PAI-1水平及Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2/Bax比值,降低LDH、t-PA水平及Caspase-3 mRNA表达;低剂量能升高NO水平,降低t-RA水平及Caspase-3 mRNA表达。结论:桂郁金醇提物含药血清对H_2O_2诱导的HUVEC细胞具有保护作用,其机制可能与升高SOD、GSH-Px活性,降低LDH、MDA含量,升高扩血管因子NO,调节纤溶系统,减少炎症因子含量,减少细胞凋亡,调控Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表达有关。     

山精胶囊对心肌缺血大鼠NF-κB信号通路调控机制探讨

目的:探讨山精胶囊对心肌缺血大鼠能量代谢、氧自由基及细胞凋亡相关基因的作用及其机制。方法:选取Wista大鼠采用冠状动脉结扎法,建立慢性心肌缺血模型。将筛选出来的大鼠随机分为山精胶囊低、中、高剂量组(283.5,850.5,1 701.0 mg·kg~(-1))和阳性药组(心安胶囊324.0 mg·kg~(-1)),假手术组和模型组灌胃给予同等剂量的0.9%的氯化钠注射液,给药10 d。紫外可见分光光度计检测血清及组织中乳酸(LD),游离脂肪酸(NEFA),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),一氧化氮(NO)及三磷酸腺苷酶(ATP)水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌组织中核转录因子-κB(NF-κB),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LD,NEFA,MDA明显升高(P0.05),NO,Na~+-K~+-ATP,Ca~(2+)-ATP酶,SOD,GSH-Px明显降低(P0.05),心肌NF-κB,Caspase-3,Bax mRNA及蛋白表达明显上调(P0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调(P0.05);与模型组比较,山精胶囊能显著降低LD,NEFA,MDA(P0.05),NO,Na~+-K~+-ATP,Ca~(2+)-ATP酶,SOD,GSH-Px显著升高(P0.05),明显下调NF-κB,Caspase-3,Bax mRNA及蛋白表达(P0.05),明显上调Bcl-2的mRNA及蛋白表达(P0.05)。结论:山精胶囊可能通过调控NF-κB信号通路,提高心肌缺血大鼠清除氧自由基能力,改善心肌细胞能量代谢,调节凋亡相关蛋白和基因的表达,从而抑制了心肌细胞凋亡,减少缺血缺氧对心肌细胞的病理损害,起到保护心肌的作用。     

槐定碱对永久性大脑中动脉栓塞大鼠脑细胞的作用及机制研究

目的探究槐定碱对永久性大脑中动脉栓塞(permanent middle cerebral artery occlusion,p MCAO)大鼠脑细胞的作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组和槐定碱低、中、高剂量(2.5、5.0、10.0mg/kg)组,给予槐定碱5d后,建立p MCAO大鼠模型。考察槐定碱对pMCAO大鼠神经功能评分的影响;考察槐定碱对pMCAO大鼠脑梗死率的影响;采用流式细胞术检测各组大鼠缺血半暗带区细胞凋亡率;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠脑组织病理变化;采用Western blotting法考察各组大鼠脑组织B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated Xprotein,Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。结果与模型组比较,槐定碱组大鼠神经缺陷症状改善,脑梗死率显著降低(P0.05、0.01),缺血半暗带细胞凋亡率明显降低(P0.05、0.01),脑组织损伤有所改善,脑组织Caspase-3和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05、0.01)。结论槐定碱对pMCAO大鼠脑细胞具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2及下调Bax、Caspase-3蛋白表达水平,进而抑制细胞凋亡有关。     

冬虫夏草对糖尿病对比剂肾病大鼠肾细胞中线粒体凋亡途径的影响

目的:探讨冬虫夏草对糖尿病对比剂肾病(contrast-induced nephropathy, CIN)大鼠肾细胞中线粒体凋亡途径的影响。方法:大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,各组大鼠分别给予相应剂量冬虫夏草和生理盐水灌胃连续7 d,第8天大鼠经尾静脉注射碘克沙醇建立CIN模型,收集标本测定BUN、Scr、NGAL、KIM-1、NO、SOD、MDA和T-AOC,荧光定量PCR和WB法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2基因和蛋白水平,Tunel法检测肾细胞凋亡情况,HE染色法观察肾组织病理变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠BUN、Scr、NGAL、KIM-1和MDA水平升高、NO、SOD和T-AOC水平降低,Caspase-3、9和Bax表达升高、Bcl-2及Bcl-2/Bax比值降低,肾凋亡细胞明显增多;肾细胞出现空泡、坏死等表现。与模型组比较,低剂量组Scr和MDA含量降低,Caspase-3和Bax表达降低,而Bcl-2和Bcl-2/Bax比值升高,中、高剂量组Scr、BUN、NGAL、KIM-1和MDA水平降低、NO和SOD含量升高,Caspase-3、9和Bax表达降低、Bcl-2与Bcl-2/Bax比值均升高,高剂量组大鼠肾凋亡细胞明显减少,且肾小管病理性改变减少。结论:冬虫夏草可增强糖尿病CIN大鼠抗氧化应激能力,调控线粒体凋亡途径,减少肾细胞凋亡,保护肾损伤,高剂量冬虫夏草疗效更佳。     

电针对神经病理性痛大鼠脊髓神经元型一氧化氮合酶蛋白及其mRNA表达的影响

目的:通过观察坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠脊髓神经元型一氧化氮合酶(nNOS)蛋白及其mRNA表达的变化和电针对其的影响,探讨电针干预神经病理性痛的脊髓一氧化氮机制。方法:雄性SD大鼠,随机分为3组(n=12):假手术组仅分离坐骨神经,但不进行结扎;模型组采用坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)法制备神经病理性痛模型;电针组于CCI术后11～17d时应用韩氏穴位神经刺激仪进行损伤侧"委中"穴与"环跳"穴电针干预,刺激频率2Hz,波宽0.6ms,起始电流强度1mA,每10min递增1mA,刺激时间30min,1次/d。于CCI前(基础状态),CCI后10、16d时测定机械痛阈和热痛阈。CCI后17d时各组随机取6只大鼠采用Western blot法测定脊髓nNOS蛋白的表达;另取6只大鼠采用逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)法测定脊髓nNOS mRNA的表达。结果:CCI后10d,与基础值比较,模型组和电针组机械痛阈和热痛阈降低(P0.01);与CCI后10d比较,电针组CCI后16d时机械痛阈和热痛阈均升高(P0.01)。与假手术组比较,模型组机械痛阈和热痛阈降低(P0.01),脊髓nNOS蛋白及其mRNA表达均上调(P0.05,P0.01);与模型组比较,电针组CCI后16d时机械痛阈和热痛阈升高(P0.01),脊髓nNOS蛋白及其mRNA表达均下调(P0.05)。结论:电针减轻大鼠神经病理性痛的机制可能与有效地抑制脊髓nNOS的活性有关。     

青钱柳三萜对链脲佐菌素损伤的INS-1细胞自噬和凋亡的影响

目的:观察青钱柳三萜对STZ损伤的INS-1细胞自噬和凋亡的影响。方法:用链脲佐菌素(STZ)诱导INS-1细胞建立损伤模型。MTT法检测不同浓度青钱柳三萜对INS-1细胞增殖的影响,荧光酶标仪检测青钱柳三萜对胞内活性氧(ROS)含量的影响,用放射免疫法测定其胰岛素分泌能力,比色法测定上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量;比色法测定心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值,Western blot检测细胞中自噬调控蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和凋亡调控蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达。结果:当青钱柳三萜浓度低于25μg/ml时,无论单用青钱柳三萜还是与STZ联用均对INS-1细胞增殖具有促进作用,但是当其浓度大于100μg/ml或与STZ联用大于50μg/ml时,均对其细胞生长具有抑制作用;青钱柳三萜(6.25、12.5、25μg/ml)可抑制INS-1细胞凋亡,促进INS-1细胞分泌胰岛素,降低细胞内ROS含量;升高上清液中SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量,降低自噬调控蛋白LC3-Ⅱ和凋亡调控蛋白Cleaved PARP的蛋白表达,上抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表达,下调促凋亡蛋白Bax mRNA表达及Bcl-2/Bax,降低Caspase-9及Caspase-3的活性。结论:青钱柳三萜对STZ损伤的INS-1细胞具有较好的保护作用。它通过抑制STZ损伤的INS-1细胞过量产生ROS,增强内源性抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT的活性,降低自噬调控蛋白LC3-Ⅱ和凋亡调控蛋白Cleaved PARP的表达,上抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax表达及降低Caspase-9及Caspase-3的活性,进而提高INS-1细胞存活率,来发挥对受损INS-1细胞的保护作用。     

苏木乙酸乙酯提取液通过miR-150/ELK1信号对血管内皮细胞凋亡的影响

目的观察苏木乙酸乙酯提取液对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞凋亡及miR-150/ELK1信号通路的影响。方法通过ox-LDL诱导构建内皮细胞损伤模型,并给予SAEE、miR-150或SAEE联合miR-150干预。分别采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,硫代巴比妥酸法、比色法和黄嘌呤氧化酶法测定MDA含量、LDH释放量、Caspase-3和SOD活性逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-150、ELK1、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达水平和Western blotting检测ELK1蛋白的表达水平。结果与模型组相比,SAEE能够显著改善ox-LDL诱导的HUVEC形态及排列,降低细胞内miR-150的表达和凋亡水平,增加ELK1蛋白及mRNA的表达水平,差异均具有统计学意义(P <0.05)。此外,SAEE组MDA含量和LDH释放量显著降低,SOD活性显著增加,Bax、Caspase-3 m RNA的表达水平和Caspase-3活性显著降低,Bcl-2 mRNA的表达水平显著增加,与模型组比较差异均具有统计学意义(P <0.05...     

育肾助孕方对卵巢储备功能降低大鼠卵巢Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的观察育肾助孕方对卵巢储备功能降低模型大鼠卵巢Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。方法 48只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、补佳乐组及育肾助孕方低、中、高剂量组,每组8只。除对照组外,其余各组均采用雷公藤多苷药液灌胃建立卵巢储备功能降低大鼠模型。各组予相应药物干预2周。采用免疫组化及Western blot检测卵巢组织细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况,采用Real-time PCR检测卵巢细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达情况。结果与对照组比较,模型组Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05)。与模型组比较,补佳乐组和育肾助孕方各剂量组Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05);补佳乐组和育肾助孕方高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著高于模型组(P0.05)。与育肾助孕方低剂量组比较,育肾助孕方高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著升高,育肾助孕方高中剂量组Bax蛋白表达明显降低(P0.05)。结论育肾助孕方可通过上调卵巢组织细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白表达,下调Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达,促进卵巢颗粒细胞增殖,抑制其过度凋亡,从而改善卵巢储备功能。     

竹节参总提物对D-半乳糖致衰老小鼠的影响

目的观察竹节参总提物对衰老小鼠的学习记忆、抗氧化及抗凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法雄性昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、维生素E组和竹节参低、高剂量组。除正常组外,其余各组颈背部皮下注射D-半乳糖建立衰老模型。各给药组分别给予竹节参总提物和维生素E灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,1次/d,连续7周。第8周进行小鼠学习和记忆能力测试。测试结束后,苏木素-伊红染色观察海马CA1区神经元的形态变化,生化法检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,RT-PCR检测脑组织中Bcl-2、Bax mRNA表达。结果竹节参低、高剂量组均能缩短小鼠寻找平台时间,改善小鼠学习记忆能力;显著增强SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量;升高Bcl-2 mRNA、降低Bax mRNA表达水平。结论竹节参总提物具有抗衰老的作用。     

麸炒前后茅苍术挥发油对缺氧/复氧损伤心肌细胞的抗氧化与抗凋亡作用

目的:考察茅苍术挥发油对缺氧/复氧(H/R)损伤H9c2心肌细胞的抗氧化与抗凋亡活性,并比较生品和麸炒品的作用差异。方法:以连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)诱导H9c2缺氧/复氧损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色评估细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2同源的水溶性相关蛋白(Bax)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中裂解的Caspase-3(cleaved Caspase-3)、BAX、BCL-2的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组心肌细胞的存活率显著降低,SOD活力、Bcl-2 mRNA、蛋白表达明显降低,LDH、MDA含量、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、cleaved Caspase-3、BAX蛋白表达明显升高(P<0.05)。生品及麸炒茅苍术挥发油1μg/mL～100μg/mL能够提高H9c2心肌细胞的存活率;提高SOD的活力,降低LDH和MDA的含量;上调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,下调Caspase-3、Bax mRNA的表达;下调cleaved Caspase-3、BAX的蛋白表达,与同剂量的生品挥发油比较,麸炒品挥发油具有更好的作用。结论:茅苍术挥发油对H/R损伤心肌细胞具有抗氧化和抗凋亡的作用,麸炒品挥发油的作用优于生品挥发油。     

电针对坐骨神经慢性缩窄损伤大鼠脊髓N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的:通过观察坐骨神经慢性缩窄损伤(CCI)大鼠脊髓相应节段N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的变化和电针干预对其的影响,探讨电针干预神经病理性痛的脊髓机制。方法:清洁级雄性SD大鼠,随机分为3组,每组20只。假手术组仅分离坐骨神经,但不进行结扎;模型组采用CCI法制备神经病理性痛模型;电针组于CCI术后11¹7d应用韩氏穴位神经刺激仪进行电针干预,针灸美容针刺入大鼠损伤侧"委中"穴与"环跳"穴,刺激时间30min,1次/d。免疫组化法测定大鼠脊髓NMDA受体2B亚基(NR 2B)的表达;Western blot法测定大鼠脊髓NMDA受体1亚基(NR 1)和NR 2B蛋白的表达;逆转录-聚合酶链反应法测定大鼠脊髓NR 1mRNA和NR 2BmRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组脊髓NR 1蛋白及其mRNA表达量均升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,电针组脊髓NR 1蛋白及其mRNA表达均被逆转(均P<0.05)。各组脊髓NR 2B蛋白及其mRNA的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针减轻大鼠神经病理性痛的机制之一,可能与有效地下调脊髓NR 1的功能有关。     

丹瓜方对ApoE－/－糖尿病模型小鼠脑组织Caspase-3蛋白及Bcl-2、Bax mRNA表达水平的影响

目的研究丹瓜方对糖尿病模型Apo E－/－小鼠糖脂代谢、脑组织胱冬肽酶－3（Caspase-3）蛋白表达及β淋巴细胞瘤基因－2（Bcl-2）、Bax mRNA表达水平的影响。方法采用链脲佐菌素（streptozo tocin,STZ）注射法对Apo E－/－小鼠制备糖尿病模型。将成模后的32只小鼠按体重分层,再按血糖水平排序,采用随机数字表分为模型组［无菌水（SW）,15 mL/（kg·d）］、丹瓜方组［丹瓜方（DGR）, 15 mL/（kg·d）］、联合组［吡格列酮（PG） 4.3 mg/（kg·d）＋DGR 15 mL/（kg·d）］及吡格列酮组［PG, 4.3 mg/（kg·d）］,每组8只。另选血糖正常的8只同龄同品系C57小鼠作为对照组。灌胃干预12周。监测空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）,测定血清TC、LDL-C水平;实时荧光定量PCR（qPCR）法检测Apo E－/－小鼠脑组织Bcl-2、Bax mRNA表达,采用Western blot法测定脑组织Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组Apo E－/－小鼠血清FBG、TC、LDL-C及脑组织Caspase-3表达水平升高（P<0.01）;与模型组比较,丹瓜方组FBG、TC及LDL-C水平降低,Bcl-2、Bax mRNA水平升高（P<0.01, P<0.05）。丹瓜方组Caspase-3蛋白表达水平低于模型组、联合组及吡格列酮组各组（P<0.01）;联合组Bcl-2/Bax 比值高于模型组（P<0.05）,丹瓜方组高于吡格列酮组（P<0.01）。结论丹瓜方可调节糖尿病糖脂代谢及脑组织Caspase-3蛋白及Bcl-2、Bax mRNA表达,可能对糖尿病造成的脑组织细胞凋亡有一定的防治作用。     

甘草酸制剂对阿霉素所致小鼠心脏及肝脏损伤的抑制作用研究

目的 分析甘草酸制剂对阿霉素（ADM）所致小鼠心脏、肝脏损伤的抑制作用及机制。 方法 选择小鼠 60 只，按随机数字表法分为正常对照组、ADM 组、异甘草酸镁（MgIG）组，每组 20 只。 MgIG 组给予MgIG（40 mg/kg）腹腔注射，连续 10 日；第 8 日下午 MgIG 组、ADM 组给予 ADM（30 mg/kg）腹腔注射，正常对照组给予等体积生理盐水腹腔注射；第 10 日下午股动脉采血，离心后取血清，经全自动生化分析仪检测肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、AST、ALT 水平，利用试剂盒计算出超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力及丙二醛（MDA）含量，取心脏、肝脏组织进行 Bax、Bcl-2、Caspase-3、NF-κB p65 蛋白 Western Blot 检测及凋亡细胞的 TUNEL 检测。 结果 与正常对照组比较，ADM 组小鼠血清 CK、CK-MB、LDH、AST、ALT、MDA 水平升高（P<0.01），SOD、GSH-Px 水平降低（P<0.01），心脏、肝脏组织中 Bax/Bcl-2、Caspase-3、NF-κB p65 蛋白表达升高P<0.01），小鼠心脏、肝脏组织中 TUNEL 阳性细胞明显增加。 与 ADM 组比较，MgIG 组小鼠血清 CK、CK-MB、LDH、AST、ALT、MDA水平降低（P<0.01），SOD、GSH-Px 水平升高（P<0.01），心脏、肝脏组织中 Bax/Bcl-2、Caspase-3、NF-κBp65 蛋白表达降低（P<0.01），小鼠心脏、肝脏组织中 TUNEL 阳性细胞数量减少（P<0.01）。 结论 甘草酸制剂对 ADM 所致小鼠心脏、肝脏损伤具有明显的抑制作用，其可能与增强心肌及肝细胞的抗氧化能力和抑制凋亡有关。     

背部循经推拿手法对亚健康模型大鼠海马神经元凋亡相关基因Bcl-2、Bax及Casepase-3表达的影响

目的:观察背部循经推拿对亚健康模型大鼠海马神经元凋亡相关基因Bcl-2、Bax及Casepase-3蛋白表达的影响。方法:60只wistar大鼠随机分为正常组、模型组和推拿干预组,后两组予束缚应激,推拿干预组予背部循经推拿。实验结束后,采用免疫组化法检测3组大鼠海马组织Bcl-2、Bax及Casepase-3蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测Casepase-3 mRNA的表达情况。结果:模型组大鼠海马组织Bcl-2蛋白表达下降、Bax与Caspase-3蛋白表达上升,与空白组比较,差异有显著性(P0.05);推拿干预组海马组织Bcl-2蛋白表达上调、Bax蛋白表达下调、Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA表达均上升,与模型组比较,差异有显著性(P0.05)。结论:背部循经推拿手法可以通过抑制Bax与Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA表达、上调Bcl-2蛋白表达,从而发挥对慢性应激所致亚健康状态的脑神经保护作用。     

四氢大麻酚对大鼠心肌梗死的保护作用

目的:观察四氢大麻酚对大鼠心肌梗死的保护作用及机制。方法:通过结扎左冠状动脉前降支建立大鼠心肌梗死模型,随机分为模型组、四氢大麻酚组(25和50 mg/kg),灌胃给予相应的药物,每天灌胃1次,连续给药4周。4周后进行心功能检测;取血清,检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)的含量;心脏经HE和Masson染色后,分析心肌组织形态学和计算心肌梗死面积、心室扩张程度;实时定量PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达。结果:四氢大麻酚25和50 mg/kg能明显改善心功能,降低血液中CK、LDH和MDA水平,增加SOD、GSH-Px、CAT酶的活性,降低心肌梗死面积和心室扩张程度,改善心脏组织形态学;下调Bax和Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2/Bax的比值。结论:四氢大麻酚对大鼠心肌梗死具有保护作用,增强内源性抗氧化系统功能和抑制线粒体凋亡通路可能是其作用机制之一。     

槐果碱对酒精性肝病大鼠的保护作用及对细胞凋亡的影响

目的观察槐果碱对酒精性肝病大鼠的保护作用及对细胞凋亡的影响。方法将40只健康雄性清洁级Wistar大鼠按照随机数字法分为正常组、模型组、槐果碱低剂量组和槐果碱高剂量组,每组10只。除正常组外,其余3组均给予酒精灌胃12周;槐果碱低剂量组和槐果碱高剂量组分别于灌胃第9周起同时给予槐果碱20 mg/(kg·d)和40 mg/(kg·d)背部皮下注射,共4周;正常组灌胃生理盐水及皮下注射生理盐水。实验结束后称取各组大鼠体质量、肝质量,计算肝指数,取血检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平,HE染色进行肝脏组织病理学观察,用流式细胞技术检测肝脏细胞凋亡指数,分别用RT-PCR和Western blot法检测肝脏组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-12 mRNA和蛋白表达水平。结果模型组大鼠体质量明显低于正常组(P 0. 05),肝指数和血清ALT、AST、TC、TG水平均明显高于正常组(P均0. 05);槐果碱低剂量组和槐果碱高剂量组大鼠体质量均明显高于模型组(P均0. 05),肝质量、肝指数和血清ALT、AST、TC水平均明显低于模型组(P均0. 05),且槐果碱高剂量组升高及降低更为明显(P均0. 05)。HE染色显示槐果碱低剂量组和槐果碱高剂量组肝脏细胞损伤明显减轻,并且呈剂量依赖性。模型组肝细胞凋亡指数和肝组织中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-12 mRNA和蛋白表达水平均明显高于正常组(P均0. 05),槐果碱低剂量组和槐果碱高剂量组均明显低于模型组(P均0. 05),且槐果碱高剂量组均明显低于槐果碱低剂量组(P均0. 05)。结论槐果碱具有明显保护酒精性肝病大鼠肝脏损伤的作用,可减少肝脏细胞凋亡,可能与抑制线粒体和内质网凋亡有关。