蚓激酶对哮喘小鼠免疫相关转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3的影响北大核心CSCD

目的:观察蚓激酶对哮喘小鼠炎症因子IL-6、TGF-β、IL-1β、TNF-α水平和免疫相关转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白表达的影响。方法:40只BALB/c雄性小鼠随机分为4组:空白对照组(空白组)、哮喘模型组(模型组)、地塞米松组(地米组)和蚓激酶组,每组10只。第1、14天模型组、地米组和蚓激酶组腹腔注射OVA+Al(OH)3致敏,21~27 d雾化吸入5%OVA建立哮喘模型,每次雾化激发1 h后,地米组、蚓激酶组分别灌胃给予地塞米松溶液、蚓激酶溶液治疗7 d,空白组、模型组灌胃等量生理盐水。末次给药24 h后处死取材,HE染色观察肺组织病理学改变,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6、IL-1β、TGF-β、TNF-α水平,RT-PCR检测肺组织T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA水平,Western blot检测肺组织T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3蛋白表达。结果:肺组织病理观察显示,模型组小鼠管腔及周围炎症细胞浸润明显,黏膜水肿增厚,地米组和蚓激酶组小鼠肺部炎症浸润及黏膜增厚水肿均较模型组好转。与空白组相比,模型组IL-6、TGF-β、IL-1β、TNF-α水平显著升高,GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达增加(P<0.01),T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组相比,地米组和蚓激酶组IL-6、TGF-β、IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05,P<0.01),T-bet、Foxp3 mRNA表达升高(P<0.01),GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达降低(P<0.01)。结论:蚓激酶可降低炎症因子IL-6、TGF-β、IL-1β及TNF-α水平,抑制GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达,诱导T-bet、Foxp3 mRNA及其蛋白表达,且可能通过降低相关前炎症因子水平调节免疫细胞转录因子表达。     

不同类型HBV感染者外周血Treg/Th17细胞的变化及意义

目的:探讨不同类型HBV感染者外周血中CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞的变化及意义.方法:选取15例急性乙型肝炎(Acute Hepatitis B,AHB)患者、40例慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者、40例无症状携带者(Asymptomatic HBV carriers,AsC)及30例健康对照者,分别采用流式细胞术、RT-PCR和ELISA检测外周血CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞百分率、核转录因子foxhead winged-helix box protein 3 (Foxp3)/retinoid-related orphan receptor gamma-t (RORγt) mRNA的表达以及血浆转化生长因子-β1(Transforming growth factor-31,TGF-β1)/IL-17的水平.结果:AHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA及TGF-β1水平与正常对照组相比无明显差异(P＞0.05);而CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγtmRNA及IL-17水平与正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).CHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA、TGF-31水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平与正常对照组相比均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与正常对照组相比,AsC组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mR-NA、TGF-β1水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平无明显差异(P＞0.05).结论:在不同类型HBV感染者外周血中Treg/Th17细胞失衡,Treg/Th17细胞可能与HBV感染的状态有关.     

高血压合并颈动脉粥样硬化患者外周血效应性T细胞亚群的变化及意义

目的:探讨高血压合并颈动脉粥样硬化患者外周血效应性T细胞各亚群Th1、Th2和Th17细胞活性的变化。方法:行颈动脉超声检查选择20例高血压合并颈动脉粥样硬化患者(CA组),颈动脉正常的25例高血压患者(EH组)以及20例性别、年龄匹配的健康体检者作为对照组(Control组)。清晨空腹抽血。以流式细胞术检测外周血中Th1、Th2和Th17细胞比例,实时定量RT-PCR方法检测T-bet、GATA3和RORγt mRNA,ELISA法检测血浆中IFN-γ、IL-4和IL-17水平。结果:与EH组和Control组相比较,CA组Th1、Th17细胞比例显著升高,T-bet和RORγt mRNA表达增加,血浆IFN-γ和IL-17水平显著升高。与Control组相比较,EH组Th1、Th17细胞比例、T-bet和RORγt mRNA、血浆IFN-γ和IL-17水平均无统计学差异。三组间Th2细胞比例、GATA3 mRNA和血浆IL-4水平均无统计学差异。结论:高血压病患者的Th1、Th17细胞活性升高,这种改变可能与颈动脉粥样硬化的发生发展有关。     

胃癌患者外周血单个核细胞RORγt和IL-17 mRNA水平的检测及临床意义

目的 检测胃癌患者外周血中单个核细胞(PBMC)中转录因子RORγt和细胞因子IL-17的表达水平及血浆IL-17的表达,探讨Th17细胞特异性RORγt及IL-17的变化在胃癌临床监测中的意义.方法 收集43例胃癌患者外周血标本,40例健康志愿者标本;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-17的表达;采用直线相关检验方法对健康人群和胃癌患者转录因子RORγt和IL-17表达水平进行相关性分析.结果 胃癌患者外周血PBMC的RORγt、IL-17 mRNA表达水平均明显高于健康对照组(P＜0.05),且二者呈现明显正相关(P＜0.01);胃癌转移组与未转移组相比,RORγt和IL-17 mRNA明显升高(P＜0.05),此外,血浆IL-17的表达也明显升高(P＜0.01).结论胃癌患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA表达水平及血浆IL-17明显升高,提示Th17细胞与胃癌的发生发展可能存在着一定的关系.     

过敏原对支气管哮喘患者Th1/Th2作用影响的研究

目的：通过测定哮喘患者外周血及外周血单个核细胞（PBMC）受特异性过敏原刺激后细胞因子IFN-γ/IL-4、转录因子T-bet/GATA-3的表达变化,探讨Th1、Th2与过敏性哮喘之间的关系。方法：①采用ELISA法检测发作期过敏性哮喘患者血浆IFN-γ/IL-4及PBMC在粉尘螨（Df）刺激下产生IFN-γ/IL-4的水平,并以正常人为对照。②采用半定量RT-PCR反应检测过敏性哮喘患者PBMC受过敏原刺激前后T-betmRNA、GATA-3mRNA的表达水平,并以正常人为对照。结果：①哮喘患者血浆IL-4水平较正常人升高（P=0.0017）,IFN-γ与正常人无明显差异（P=0.7600）,IFN-γ/IL-4的比值显著低于正常人（P=0.0001）。②经过敏原刺激后,哮喘患者PBMC产生的IL-4、IFN-γ水平均较正常人显著升高（t=3.5644,P=0.0010;t=3.3500,P=0.0020）,但哮喘患者IFN-γ/IL-4的比值仍显著低于正常组（t=6.3640,P=0.0001）。③哮喘患者PBMC中GATA-3的表达量较正常人显著增高（t=2.2743,P=0.0280）,而T-bet的表达量与正常人比较无显著变化（t=0.3823,P=0.7044）,哮喘患者T-bet/GATA-3比值与正常人也未见显著差异（t=1.1152,P=0.2834）。④经过敏原刺激后,哮喘患者PBMC中T-bet、GATA-3表达水平较正常人显著增高（t=2.2982,P=0.0276;t=3.7887,P=0.0006）,但T-bet/GATA-3的比值与正常人比较仍无显著差异（t=1.1959,P=0.2491）。结论：在细胞因子及转录因子水平上,过敏性哮喘患者不仅存在着Th2反应增强,也存在着Th1反应的增强,因此用Th1/Th2平衡失调学说尚不能满意解释过敏性哮喘的发病机制。     

1型糖尿病患儿CD4~+T细胞亚群变化初探

目的 探讨CD4~+细胞亚群[Th1、Th2、CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Tr)及Th17细胞]在1型糖尿病(TIDM)患儿免疫发病机制中的作用.方法 新诊断TIDM患儿20例,同年龄对照组(Ctrl组)20例.用流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Tr及Th17细胞比例.荧光定量PCR(real-time PCR)检测Th1、Th2、Tr、Th17细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3、ROR-γt、IFN-、IL-4、IL-10、IL-17A、CTLA-4、GITR等细胞因子和负性调节因子mRNA表达;应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4、TGF-β、IL-6血浆水平.结果 (1)与正常对照组相比,TIDM患儿Th1细胞比例明显增高(P<0.01),Th2细胞比例明显降低(P<0.01),Tr和Th17细胞比例与正常对照组相比无明显差别(P>0.05).(2)Th1细胞转录因子及细胞因子T-bet、IFN-γ较正常对照组明显升高(P<0.01);Th2细胞转录因子及细胞因子GATA-3、IL-4明显降低(P<0.01);Tr细胞转录因子Foxp3表达与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),Tr细胞相关细胞因子及负性调节因子IL-10、CTLA-4及GITR基因表达明显低于对照组(P<0.01);Th17细胞转录因子ROR-γt及细胞因子IL-17A基因表达与对照组相比无明显差异(P>0.05);(3)TIDM患儿外周血IFN-γ浓度明显增高,IL-4明显降低,TGF-β、IL-6浓度无明显改变(P>0.05).结论 TIDM患儿Th1/Th2失衡,加上Tr细胞抑制功能缺陷,可能导致TIDM严重细胞免疫功能紊乱.     

转录因子T-bet/GATA-3比率评价哮喘患者Th1/Th2失衡及CpG ODN干预机制的研究

目的: 探讨哮喘患者PBMCs中转录因子T-bet/GATA-3比率与Th1/Th2细胞失衡的关系及体外CpG干预后T-bet/GATA3比率的变化及其对Th1/Th2细胞平衡的调节作用。方法: 用RT-PCR法测定30例发作期哮喘患者（哮喘组）及20例慢性阻塞性肺病患者（COPD组）及20例正常人（对照组） PBMCs中T-bet mRNA、GATA-3 mRNA及TLR9 mRNA的表达强度，用ELISA法测定血浆IL-4、IL-5、IL-13和IFNγ的表达水平，以观察哮喘患者PBMCs中转录因子T-bet/GATA-3比率与Th1/Th2细胞失衡的关系。将20例发作期哮喘患者的PBMCs分为2部分，一份加入CpG ODN和PHA（CpG组），一份仅加入PHA（对照组），培养48 h后分别收集培养液和细胞，采用RT-PCR法测定细胞中T-bet mRNA、GATA-3 mRNA及TLR9 mRNA的表达强度，ELISA法测定培养液中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的表达水平。结果： 哮喘患者PBMCs中T-bet/GATA-3的比率显著低于COPD患者和正常人，IL-4、IL-5、IL-13的水平显著高于COPD患者和正常人，与T-bet/GATA-3的比率呈负相关，而IFN-γ的水平显著降低，与T-bet/GATA-3的比率呈正相关。哮喘组TLR9的表达强度显著弱于COPD患者和正常人。CpG干预组细胞培养液中IL-4、IL-5和IL-13的水平分别显著低于对照组，IFN-γ的水平显著高于对照组。CpG干预组细胞中T-bet mRNA和TLR9 mRNA的表达强度显著强于对照组，GATA-3 mRNA的表达强度显著低于对照组；T-bet/GATA-3的比率显著高于对照组。结论: 哮喘患者T-bet/GATA-3的比率降低，可以作为评价Th1/Th2细胞失衡的精确指标。CpG ODN可以上调T-bet的表达，下调GATA-3的表达，从而上调T-bet/GATA-3的比率，逆转Th1/Th2细胞失衡，是一种很有前景的哮喘治疗手段。     

低氧促进Th17细胞浸润于肺组织并与肺血管改建相关

目的:观察低压低氧时肺组织中维甲酸相关孤儿受体(ROR)γt的mRNA表达水平及白细胞介素17(IL-17)水平的变化,探讨Th17细胞与缺氧肺血管改建的关系。方法:50只雄性BALB/c小鼠按低氧时间随机分为0 d、3 d、7 d、14 d和28 d组,每组10只。低压低氧组小鼠均置入模拟海拔6 000 m的低压舱内饲养3 d、7 d、14 d和28 d。常氧组置常压常氧环境下饲养(即0 d组)。于相应时点通过心导管检测右室收缩压,随后快速处死取材,测量右心室重量指数,用流式细胞术检测脾脏组织Th17细胞(CD4+IL-17+RORγt+)的比例,用ELISA法检测血清中IL-4、IL-6、IL-17水平及肺组织中IL-17水平,采用real-time PCR法检测肺组织RORγt的mRNA表达水平。结果:与对照组(0 d组)相比,低压低氧7 d、14 d和28 d组小鼠右心室收缩压力、右心肥厚指数和血清IL-17含量均升高,其差异有统计学意义(P0.05);脾脏组织中IL-17+RORγt+CD4+T细胞的百分比随缺氧时间延长呈上升趋势,14 d和28 d组与对照组相比差异显著(P0.01);7 d、14 d和28 d组肺组织中RORγt的mRNA表达与对照组相比显著升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);14 d和28 d组肺组织中IL-17水平与对照组相比显著升高(P0.01)。肺组织中RORγt的mRNA表达水平、IL-17表达量与心室收缩压、右室肥厚指数呈显著正相关。结论:低压低氧促进脾脏T0细胞向Th17细胞分化,肺组织中RORγt的mRNA表达水平及IL-17水平显著升高,提示Th17细胞可能参与缺氧性肺动脉高压及肺血管改建的发生。     

茯苓多糖对系统性红斑狼疮患者Th17/Treg平衡的影响

目的:研究茯苓多糖对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的免疫调节作用。方法:选取45例SLE患者和35例健康对照者,应用磁珠分选法分离外周血CD4~+ T细胞,流式细胞术检测CD4~+ T细胞中Th17和Treg细胞的比例。用茯苓多糖分别处理健康对照者及患者的CD4~+ T细胞,MTT法检测细胞活力以测定茯苓多糖毒性,ELISA检测细胞中白细胞介素17(IL-17)、IL-6、IL-10及转化生长因子β(TGF-β)的含量,RT-q PCR和Western blot法分别测定维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与叉头框蛋白P3(Foxp3)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与健康对照组相比,SLE患者的Th17细胞比例显著升高,Treg细胞比例明显降低(P0.05)。用100μg/L的茯苓多糖处理SLE患者CD4~+ T细胞,与空白对照组相比,IL-17和IL-6的含量显著降低,IL-10和TGF-β的含量明显上升(P0.05);RORγt的mRNA和蛋白表达显著下降,同时Foxp3的表达在mRNA和蛋白水平上明显增加(P0.05);并且Th17/Treg的比值降低(P0.05)。结论:茯苓多糖可以通过升高Treg并降低Th17细胞的比例,对SLE起到一定的治疗作用。     

黄芪甲苷Ⅳ对哮喘小鼠Th2转录因子表达的抑制作用

为探讨黄芪甲苷Ⅳ(astragaloside Ⅳ,AST Ⅳ)对哮喘小鼠免疫失衡的调节机制,用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)诱导小鼠支气管哮喘模型,随机分为对照组、模型组、AST Ⅳ治疗组和地塞米松治疗组。HE染色观察肺组织病理改变;ELISA检测肺组织匀浆中IFN-γ、IL-5、IL-13、IL-17A及TGF-β的含量变化;RT-PCR检测脾脏中转录因子T-bet、GATA-3、STAT-6、RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平。结果显示,AST Ⅳ作用后小鼠肺部炎症细胞浸润及气道上皮细胞损伤明显改善;IL-5、IL-13和IL-17A的表达水平明显低于模型组(P <0.05),而对IFN-γ和TGF-β没有显著作用;AST Ⅳ能显著抑制STAT-6 mRNA的表达(降低2.65倍),同时对GATA-3(降低1.82倍)和RORγt(降低2.22倍)的表达也有抑制作用;但对Foxp3和T-bet mRNA表达无显著影响。研究表明,AST Ⅳ主要通过显著抑制Th2转录因子表达来抑制炎性因子IL-5、IL-13以及IL-17A的产生,从而改善哮喘模型小鼠肺部炎症程度。故AST Ⅳ可能是一种哮喘治疗新的药物活性成分。     

基质金属蛋白酶2/9促进T细胞CD100脱落在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的作用

目的观察CD100、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2, MMP2)、MMP9在冠心病患者中的变化,评估MMP2/9对T细胞中CD100的调控在冠心病发病中的作用。方法 24例稳定性心绞痛(stable angina, SA)、22例不稳定性心绞痛(unstable angina, UA)、31例急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)和18例对照者入组本研究。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆可溶型CD100(sCD100)、MMP2、MMP9水平,流式细胞术检测T细胞中膜型CD100(mCD100)平均荧光强度(MFI)。分选CD4~+和CD8~+T细胞,使用CD100、MMP2/9和抗CD100抗体刺激,ELISA法检测上清中细胞因子水平,实时定量PCR法检测CD4~+T细胞中转录因子T-bet、GATA-3、FoxP3、RORγt和CD8~+T细胞中穿孔素、颗粒酶B mRNA相对表达量。结果 AMI组血浆sCD100、MMP2、MMP9水平高于对照组、SA组和UA组,AMI组CD4~+和CD8~+T细胞中mCD100 MFI低于对照组、SA组和UA组(P0.05)。CD100刺激后CD4~+T细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-17、IL-22水平及T-bet、RORγt mRNA相对表达量升高(P0.05)。CD100刺激后CD8~+T细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)、IFN-γ水平及穿孔素、颗粒酶B mRNA相对表达量升高(P0.05)。MMP2或MMP9单独刺激AMI患者CD4~+T细胞,上清sCD100、mCD100 MFI无明显变化,MMP2+MMP9联合刺激后,上清sCD100升高,mCD100 MFI降低,分泌IFN-γ、IL-17、IL-22水平及T-bet、RORγt mRNA相对表达量升高(P0.05),加入抗CD100抗体后CD4~+T细胞中上述指标较联合刺激组降低(P0.05)。MMP2、MMP9或MMP2+MMP9联合刺激AMI患者CD8~+T细胞,上清sCD100升高,mCD100 MFI降低,TNF-α、IFN-γ水平及穿孔素、颗粒酶B mRNA相对表达量升高(P0.05),加入抗CD100抗体后CD8~+T细胞中上述指标较联合刺激组降低(P0.05)。结论 AMI患者中,高表达的MMP2/9促进T细胞mCD100脱落,上调sCD100水平,诱导T细胞活化。     

大鼠肝损伤模型中Th17/Treg失衡的研究

目的探究Th17细胞和调节性T细胞(Treg)失衡在急、慢性大鼠免疫性肝损伤模型中的意义和作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分为3组。尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)分别建立急性肝损伤模型组(AC)和慢性肝损伤模型组(CC),尾静脉注射PBS作为健康对照组(HC)。流式细胞分析术(FCM)检测Th17细胞和Treg细胞频率变化,并计算Th17/Treg比值;免疫组织化学方法检测Foxp3、RORγt蛋白表达情况;ELISA法检测外周血IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β等相关细胞因子的含量。结果与HC组比较,AC组Th17细胞频率及其相关因子(Foxp3、IL-17、IL-6等)水平显著升高(P0.05),Treg细胞频率及其相关因子(RORγt、IL-10等)水平亦升高(P0.05),但Th17/Treg比值较正常组上升(P0.05);与AC组相比较,CC组Th17细胞水平显著降低,Treg细胞显著升高,Th17/Treg比值较正常组下降(P0.05)。结论 Th17/Treg比值在急性免疫性肝损伤模型中明显上升,在慢性肝损伤模型中明显下降,Th17/Treg的失衡可能与肝损伤的发生和发展密切相关。     

大鼠肝损伤模型中Th17/Treg失衡的研究

目的探究Th17细胞和调节性T细胞(Treg)失衡在急、慢性大鼠免疫性肝损伤模型中的意义和作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分为3组。尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)分别建立急性肝损伤模型组(AC)和慢性肝损伤模型组(CC),尾静脉注射PBS作为健康对照组(HC)。流式细胞分析术(FCM)检测Th17细胞和Treg细胞频率变化,并计算Th17/Treg比值;免疫组织化学方法检测Foxp3、RORγt蛋白表达情况;ELISA法检测外周血IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β等相关细胞因子的含量。结果与HC组比较,AC组Th17细胞频率及其相关因子(Foxp3、IL-17、IL-6等)水平显著升高(P0.05),Treg细胞频率及其相关因子(RORγt、IL-10等)水平亦升高(P0.05),但Th17/Treg比值较正常组上升(P0.05);与AC组相比较,CC组Th17细胞水平显著降低,Treg细胞显著升高,Th17/Treg比值较正常组下降(P0.05)。结论 Th17/Treg比值在急性免疫性肝损伤模型中明显上升,在慢性肝损伤模型中明显下降,Th17/Treg的失衡可能与肝损伤的发生和发展密切相关。     

TLR7激动剂咪喹莫特对MRL/lpr狼疮小鼠RORγt~+Th17细胞的影响

目的初步探讨TLR7激动剂咪喹莫特干预RORγt~+Th17细胞治疗MRL/lpr狼疮小鼠的免疫机理。方法将16周Balb/c正常小鼠和16周MRL/lpr狼疮小鼠随机分为生理盐水组、0.05 mg/kg咪喹莫特组、1 mg/kg地塞米组,每组5只,腹腔注射给药,1次/d,连续4周;采用流式细胞术检测小鼠脾脏中Th17(CD4~+IL-17A~+)细胞的比例和转录因子RORγt(RORγt~+Th17细胞)的表达水平,并分析细胞因子IL-17A(CD4~+IL-17A~+)和转录因子RORγt的相关性。结果 Balb/c正常小鼠中,咪喹莫特能降低脾脏中Th17细胞的比例(P0.05),对Th17细胞转录因子RORγt的表达有下调趋势,但无统计学差异(P=0.616);MRL/lpr狼疮小鼠中,咪喹莫特能明显下调小鼠脾脏中Th17细胞的比例(P0.01)和转录因子RORγt的表达(P0.01);细胞因子IL-17A和转录因子RORγt呈显著的正相关性(r=0.911,P0.000 1)。结论 TLR7激动剂咪喹莫特下调MRL/lpr狼疮小鼠脾脏中Th17细胞与转录因子RORγt的表达,降低IL-17的分泌,减缓SLE的发生,为咪喹莫特有望成为治疗SLE的药物提供了新的实验数据。     

Galectin-9对活化的CD4+T细胞免疫调节作用的机制研究

目的 研究Galectin-9对活化的CD4+T细胞的免疫调节作用,并进一步探讨其作用机制.方法 获取野生型C57BL/6小鼠淋巴细胞,利用MACS分选CD4+ na(i)ve T细胞,给予anti-CD3 (2.5 μg/ml)抗体、anti-CD28(5μg/ml)抗体和IL-2(100 ng/ml)刺激,培养3d.将活化的CD4+T细胞分为3组:正常对照组、Galectin-9组和Galectin-9+α-乳糖组.利用CFSE检测T细胞增殖情况,并动态观察细胞形态变化;检测CD4+ CD69+T细胞、Th1、Th2和Th17细胞的比例;并利用ELISA检测淋巴细胞分泌IFN-γ 、IL-4、IL-10、IL-12、IL-17A和TGF-β1等细胞因子的水平;利用Western blot检测T-bet、GATA-3和ROR-yt等T细胞分化调控蛋白的变化.结果 与正常对照组和Galectin-9+α-乳糖组相比,Galectin-9组于2h时开始出现细胞形态改变,同时CD4+ CD69+T细胞、Th1和Th17细胞表达减少(P＜0.05),但Th2细胞无明显变化;培养上清液中IFN-γ、IL-12、IL-17A和TGF-β1的表达水平降低(P＜0.05),而IL-4和IL-10等Th2型细胞因子水平无明显变化;同时T-bet和ROR-γt的表达水平减少(P＜0.05).结论 Galectin-9抑制活化CD4+T细胞的Th1和Th17型免疫应答,而对Th2型免疫应答无影响,免疫调节的机制可能与其在转录水平影响Th1和Th17特定转录因子的表达有关.     

反复自然流产患者外周血Th17和Treg细胞相关细胞因子的测定

目的 通过检测反复自然流产(RSA)患者外周血Th17和Treg细胞特异性转录因子RORγt和Foxp3 mRNA的表达及IL-6、IL-17、TGF-β1的水平,探讨Th17和Treg细胞在RSA发病中的作用.方法 选取2011-12/2012-04郑州大学第三附属医院50例RSA患者为研究对象,同期选取50名健康早孕女性作为对照组.采用实时荧光定量PCR检测外周血RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平,并分析二者之间的相关性;采用ELISA测定血清中IL-6、IL-17、TGF-β1的含量.结果 RSA组RORγt mRNA水平(25.358 ±9.236)显著高于正常对照组(10.611±5.792);Foxp3 mRNA水平(6.851±2.875)显著低于正常对照组(32.218±5.023).RSA患者RORγt和Foxp3 mRNA表达呈显著负相关(r=-0.530,P=0.018).RSA组IL-6、TGF-β1含量分别为(82.7±23.2)、(269.3±29.6) pg/mL,明显低于正常对照组(210.4±40.6)、(497.8±54.6)pg/mL;IL-17含量(172.8±33.9) pg/mL明显高于正常对照组(53.4±10.8) pg/mL.结论 RORγtmRNA表达上调与Foxp3mRNA表达下调所致的Th17和Treg细胞免疫失衡可能是RSA的原因之一;IL-6、IL-17、TGF-β1含量变化的异常在RSA的发生发展中可能起一定作用.     

鼻敏感颗粒对变应性鼻炎大鼠模型细胞因子的影响

目的探讨鼻敏感颗粒对变应性鼻炎(AR)大鼠模型细胞因子的影响。方法将大鼠随机分为对照组、模型组(采用卵清蛋白为致敏原构建变异性鼻炎大鼠模型)、氯雷他定组[(10 g/(kg·d),灌胃治疗]和鼻敏感颗粒组[(10 g/(kg·d),灌胃治疗],每组各10只。ELISA检测细胞因子IL-1β、IL-17、IL-18和TGF-β1水平。采用Western blot和q-PCR检测各组T-bet和GATA-3蛋白和基因表达。结果与对照组比较,模型组IL-1β、IL-17和IL-18水平升高,TGF-β1水平降低(P0. 05);与模型组比较,鼻敏感颗粒组和氯雷他定组IL-1β、IL-17和IL-18水平降低,TGF-β1水平升高(P0. 05);与对照组比较,模型组GATA-3蛋白和基因表达水平升高,T-bet蛋白和基因表达水平降低(P0. 05);与模型组比较,鼻敏感颗粒组和氯雷他定组GATA-3蛋白和基因表达水平降低,T-bet表达蛋白和基因水平升高(P0. 05)。结论鼻敏感颗粒能够缓解AR大鼠鼻部炎性反应,其作用机制可能是下调GATA-3表达,上调T-bet表达,进而调控Th1/Th2细胞平衡。     

Th17细胞在系统性红斑狼疮免疫炎症反应中的作用机制研究

目的从Th17/Treg、IL-17及RORγt mRNA表达3方面进行研究,探讨Th17细胞在SLE免疫炎症反应中的作用机制。方法研究对象为26例活动期SLE患者、16例非活动期SLE患者和20例正常对照,采用细胞内染色流式细胞术检测Th17/Treg,ELISA法检测IL-17及RT-PCR法检测RORγt mRNA表达,并探讨它们与SLE疾病活动性的关系。结果活动期SLE患者组Th17/Treg、IL-17及RORγt mRNA表达水平显著高于非活动期及正常对照组;非活动期SLE患者组RORγt mRNA表达显著高于正常对照组,但两组间Th17/Treg、IL-17水平无显著差异。SLE患者Th17/Treg、IL-17及RORγt mRNA表达水平均与和SLEDAI呈正相关。结论 SLE患者存在着Th17细胞高表达现象,阻断Th17细胞分化的上游或下游均可能减轻SLE的免疫炎症反应而达到治疗SLE的目的。     

母-胎免疫调节机制在妊娠高血压综合征病理过程中的作用

目的：分析妊娠高血压综合征（PIH）患者外周血中免疫细胞因子水平变化及滋养层细胞中免疫相关转录因子的基因、蛋白表达情况,探讨母 胎免疫调节机制在妊娠高血压综合征病理过程中的作用。方法：纳入PIH患者50例作为观察组,选择同期分娩的正常妊娠妇女40例作为对照组。ELISA法检测两组孕妇外周血中IFN-γ、IL-4、IL-17及TGF β水平;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和蛋白质印迹法（Western blot）分别测定两组孕妇胎盘滋养层细胞中转录因子T-bet、GATA-3、RORC、Foxp3的mRNA及蛋白表达情况。结果：①观察组外周血中IFN-γ和IL 17水平明显高于对照组,TGF β水平明显低于对照组（P＜0.05）;两组间IL 4水平无明显差异（P＞0.05）;观察组IFN-γ/IL-4、IL-17/TGF β比值均明显大于对照组（P＜0.05）。②与对照组比,观察组T bet、RORC的mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）,而GATA 3、Foxp3的mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）,T-bet/GATA-3及RORC/Foxp3比值均显著增大（P＜0.05）。结论：PIH具有明显的Th1/Th2及Th17/Treg比例失衡现象,其病理机制可能与Th细胞介导的母 胎免疫耐受机制功能紊乱有关。     

Th17细胞分化的调节

Th17细胞是一群分泌IL-17的CD4+T细胞,它在分化发育及功能上不同于Th1细胞和Th2细胞。目前认为Th17细胞与自身免疫性疾病的发生发展密切相关,Th17细胞在病灶部位高表达,并与疾病的严重程度相一致。研究发现:CD4+CD25+Treg和Th17细胞的分化均需要TGF-β,并通过IL-6决定两者的分化比例,CD4+CD25+Treg和Th17细胞的动态平衡在机体免疫防御、免疫自稳中起着重要作用;RORγt是Th17细胞分化的关键转录因子,RORγt的表达依赖于IL-6和TGF-β;IL-23及其受体能上调Th17细胞的表达,而IL-12、IFN-γ、IL-4、T-bet抑制其表达。对Th17细胞的深入研究将有助于我们对自身免疫性疾病发病机制的深入了解。