脑胶质瘤的基因治疗

本文介绍脑胶质瘤基因治疗的一些基本慨况，并对其存在的问题和发展前景提出看法。一、自杀基因目前用得最多的是单纯疱疹病毒胸腺呼院激酶（HSV－tk）基因，它能把抗病毒药GCV磷酸化成一种细胞毒药物，干扰靶细胞的DNA合成。Ezzedine等[1]把HSV－tk基因导人逆转录病毒载体，让其在NIH3T3（包装细胞）中复制，以产生具有感染性的病毒粒子。随后把转染过的包装细胞与胶质瘤细胞一起混合培养，以转染瘤细胞。结果被转染的瘤细胞中带有HSV－tk基因，当给GCV时，其生长受到明显抑制。Ram等还在小鼠、大鼠和报的实验中证实，其主要器官…     

脑胶质瘤生长调控基因的研究进展

脑胶质瘤是神经外科最常见的肿瘤之一 ,其较高的复发率使得患者常常需要多次手术 ,成为临床治疗的难题。随着分子生物学及免疫学研究的不断发展 ,基因治疗成为一个突破方向和研究热点。有关基因如何突变、抗癌基因如何杀伤肿瘤细胞及肿瘤细胞抗损伤机制 ,目前国内外学者进行了深入而广泛的研究 ,本文就此作一简要综述。1　染色体的突变关于胶质瘤活检组织及细胞系中染色体的异常已有许多文献报道 ,常见的有 7、14、2 0号染色体的增加 ,8、9、10、13、2 2号染色体的丢失和 9ｐ、10ｑ、13ｑ、17ｑ、17ｐ的片段丢失和双微体形成[1,2 ] 。肿瘤发…     

脑胶质瘤组织中P16／MTS1基因缺失研究

目的 探讨人脑胶质瘤组织中多重肿瘤抑制基因（Ｐ１６／ＭＴＳ１）异常。方法 用ＰＣＲ方法扩增Ｐ１６基因序列。结果 ５０例脑胶质瘤患者组织中Ｐ１６基因纯合性缺失１６例,缺失率为３２％,以胶质瘤Ⅲ～Ⅳ级缺失率较高（５７．８％）。结论 Ｐ１６／ＭＴＳ１基因纯合性缺失可能与脑胶质瘤的发生发展有关。     

一条脑胶质瘤相关的全长基因的生物信息学分析

目的报道一条脑胶质瘤相关的全长新基因的生物信息学分析及其研究的结果。方法对507E08克隆子进行了测序,生物信息学分析和Northern blot分析。结果507E08基因为全长基因,长度为2002bp,共编码203个氨基酸,命名为人核糖体蛋白L14．22。经Northern blot证实507E08基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达。结论生物信息学是一种有效分析未知基因的工具。507E08基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。     

MGMT基因在脑胶质瘤治疗中的意义

胶质瘤是颅内肿瘤中发病率最高的肿瘤,目前临床上多采取以手术治疗为主辅以化学治疗和放射治疗。氯乙基亚硝脲类烷化剂（CNUs）,以其高脂溶性和易于透过血脑屏障的特性,长期以来被看为治疗脑胶质的最有效的化疗药物。但抗药性的产生使其临床有效率不足30％,而成为脑胶质瘤化疗失败的主要原因。06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）修复亚硝类药物所造成的DNA损伤,是肿瘤细胞对亚硝类耐药的主要分子机制。     

纤支镜下肺癌患者MDR1基因的表达

目的：研究原发性肺癌患者ＭＤＲ１基因的表达及其与病理组织分型的关系。方法：通过纤维支气管镜应用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,对３３例未治、５例化疗后的原发性肺癌和１７例非癌组织ＭＤＲ１基因的表达进行分析。结果：在３８例癌标本中有１７例观察到ＭＤＲ１基因的表达,主要分布在非小细胞鳞癌中,而非癌组织仅有１例ＭＤＲ基因的表达。结论：在未治的原发性肺癌尤其是非小细胞肺癌中,可检测到ＭＤＲ１基因     

脑胶质瘤中pRB及其相关基因的异常表达

目的　研究视网膜母细胞瘤蛋白 (pRB)及其相关基因在脑胶质瘤中的异常表达情况。方法　用免疫组化的方法对 2 3例脑胶质瘤 (包括 14例星形细胞瘤和 9例胶质母细胞瘤 )以及 6例正常脑组织中 pRB以及cyclinD1、p16基因的表达进行检测。 结果　 2 3例肿瘤中有 8例 pRB缺失(34 8% ) ,17例cyclinD1过度表达 (73 9% ) ,13例 p16缺失 (5 6 5 % ) ,三种因子的异常均与肿瘤分型有关 (P <0 0 1)。由它们组成的调控路径作为整体在肿瘤组织中异常率为 82 6 % (19/ 2 3) ,与正常脑组织 (1/ 6 ,16 7% )相比有显著性差异 (P =0 0 0 6 ) ,而星形细胞瘤 (10 / 14,71 4% )和胶质母细胞瘤(9/ 9,10 0 % )之间并无统计学差别 (P =0 12 4) ,说明此路径异常与肿瘤发生有关而与分型无关。pRB在此调控路径中处于中心位置 ,与肿瘤的恶化有关。 结论　pRB及其相关基因的异常与脑胶质瘤发生关系密切 ,可以作为探讨肿瘤病因 ,诊断和治疗的重要靶位。     

整合生物信息学法与加权基因共表达网络分析联合分析脑胶质瘤特征基因

目的 利用脑胶质瘤（glioblastoma,GBM）芯片数据,采用整合生物信息学法和加权基因共表达网络分析（weighted gene correlation network analysis,WGCNA）法,寻找肿瘤发病特征基因、关键通路以及转录调控机制。方法 利用GEO数据库中高通量基因芯片数据,通过整合生物信息学法筛选出差异基因;利用WGCNA分析GBM关键基因hub基因;采用维恩分析法,整合这些差异基因与hub基因,筛选出GBM特征基因。采用基因本体论（Gene Ontology,GO）基因功能注释,京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路富集,分析GBM特征基因所富集的功能和通路。利用Kaplan-Meier分析特征基因与GBM生成率的关系。利用基因云生物信息平台（GCBI）,分析调控这些特征基因的转录因子。结果 经分析,发现273个特征基因。这些特征基因主要可影响离子通道、蛋白激酶、γ-氨基丁酸受体功能。CHD5,SYP,PHYHIP表达水平与GBM生存率显著相关;转录因子Sp1、Sp3、REST可能是调控这些特征基因的关键因子。结论 本研究从多种角度定义了GBM的特征基因及调控机制,为其精准治疗提供了依据。     

MDR1基因多态性及其临床相关性

P-糖蛋白作为一种广泛分布于全身各组织和器官的重要转运体,对多种药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄过程以及防止有害外源性物质的侵袭起重要作用。作为P-糖蛋白的编码基因,多药耐药基因(multidrug resistance-1,MDR1)的多态性在一定程度上决定了上述过程在个体与个体之间的差异,因此对许多疾病的易感性以及特定药物在体内的药动学,药效学和治疗效应均存在较大影响。本文将对MDR1基因多态性对疾病易感性和临床上药动、药效学过程的影响进行综述。     

脑胶质瘤中Hint1基因甲基化状态与表达的研究

目的探讨脑胶质瘤中Hint1基因启动子区的甲基化与表达情况。方法采用MSP和Western-blit法检测Hint1基因在脑胶质瘤和正常脑组织中甲基化状况及对应表达情况。实时荧光定量PCR的方法检测Hint1 mRNA的表达情况。结果经检测正常脑组织和胶质瘤Hint1基因启动子区域呈非甲基化状态,在83例胶质瘤患者脑组织中Hint1 mRNA的平均表达量为0.5190±0.0280,高于在30例正常脑组织中的平均表达量0.2236±0.0300。Hint1 mRNA的表达量与患者年龄、性别等临床特征无明显相关性而与患者的临床分期密切相关（P〈0.01）。结论脑胶质瘤中Hint1基因启动子区域呈非甲基化状态,其表达程度与患者的临床分期密切相关。     

MDR1 C3435T基因多态性与胃溃疡患者治疗相关性分析

目的 分析MDR1 C3435T基因多态性与胃溃疡患者治疗的相关性.方法 回顾性分析2010年10月至2015年10月来我院就诊的胃溃疡患者共80名,其中Hp阳性患者47例,另选取80例健康体检者作为对照组,测定两组入选对象MDR1 C3435T基因多态性,比较不同基因型胃溃疡患者治疗后Hp阳性率和耐药率.结果 观察组(Hp阳性)患者3435TT基因型频率和T等位基因频率均明显高于观察组(Hp阴性)和对照组(P＜0.05);观察组(Hp阴性)患者3435TT基因型频率和T等位基因频率亦均明显高于对照组(P＜0.05).治疗后3435TT基因型患者Hp阳性率和耐药率均明显高于C3435T和CC3435基因型患者(P＜0.05).结论 MDR1 C3435T基因多态性与胃溃疡患者的治疗具有相关性,3435TT基因型患者较难根除Hp,耐药性较强.     

Wistar大鼠SHG-44脑胶质瘤动物模型建立

目的:建立Wistar大鼠SHG-44脑胶质瘤模型,为胶质瘤药物的药效学研究提供实验基础。方法:采用立体定向技术,将体外培养的SHG-44胶质瘤细胞浓缩悬液,5×106/10μL接种于Wistar大鼠的右侧尾状核区,种植后连续观察大鼠的生存状态,并于7d行MRI扫描,将未成瘤的大鼠去除,分别于7d、14d、21d、自然死亡几个区间观察大鼠的生存状态,21d处死和自然死亡的大鼠,取脑制作病理切片,HE染色,光镜下观察。结果:1周内均较活泼,全部正常,术后1~2周表现为表现为精神萎靡,反应迟钝,食欲不振,活动减少,体重下降,步态不稳,2周后上述症状加重,逐渐有死亡的大鼠。HE染色可明显观察到大鼠脑胶质瘤的形成。结论:建立的Wistar大鼠SHG-44脑胶质瘤动物模型可靠稳定,其肿瘤生长特性及病理特征与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤研究的理想模型。     

脑胶质瘤治疗展望

脑恶性胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤,大多呈浸润性生长．单靠手术难以治愈,术后复发率高,而传统的放疗、化疗副作用较大,随着治疗手段的发展脑胶质瘤的治疗效果不断提高,手术以外的其他局部治疗措施包括局部放疗、化疗、生物治疗和免疫治疗都有较大进步,现总结国内外文献对脑胶质瘤的治疗的新发展作综述。     

显微手术治疗脑胶质瘤

目的分析83例脑胶质瘤显微手术治疗经验,评价其疗效和预后。方法回顾性分析自2005年3月至2009年3月共83例脑胶质瘤患者接受显微切除手术的疗效。结果80例患者术前诊断与术后病理诊断符合,符合率96．4％。治疗显效41例,占49．4％;有效率33例,占39．8％;无效9例,占10．8％。全组无围手术期死亡。结论显微手术以其损伤小,适应证宽,全切除率高等优点,临床效果好。     

脑胶质瘤2例误诊分析

例1,患者,男,40岁,头痛3个月,左眼失明1个月于2000年8月25日入院.患者于3月前无明显诱因出现头痛,低头时明显,以后枕部痛明显,卧床后可缓解,在当地予以对症治疗,症状减轻,1个月前突然出现左眼失明,就诊于当地及省级眼科医院,诊断为缺血性视乳头病变,给予对症、活血化瘀等治疗,未见明显好转.发病以来,无恶心、呕吐、头晕等,饮食及大小便正常,无意识障碍,头痛一直无明显缓解.     

携带反义MDR1基因的逆转录病毒载体的构建和表达

目的　建立逆转录病毒介导的反义多药耐药MDR1基因转移体系 ,探讨反义RNA封闭白血病耐药细胞中MDR1基因表达的能力。方法　逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法从白血病耐药细胞株HL 6 0 /VCRmRNA中扩增出含有启始密码子ATG的 5 2 4bp的MDR1基因cDNA片段 ,反向插入逆转录病毒载体 pLXSN ,通过脂质体转和乒乓感染单、双噬型包装细胞GP +E86和GP +envAM 12 ,以双嗜型病毒上清感染白血病耐药细胞K5 6 2 /MDR ,半定量RT PCR和流式细胞术(FCM)分析MDR1基因转录和P 糖蛋白 (P gp)的表达。 结果　酶切、PCR和DNA测序证实反义MDR1基因重组逆转录病毒载体 pLASSN构建正确 ;双嗜型病毒生产细胞的滴度为 1 3× 10 5CFU/ml,巢式PCR和补救分析均未检测到辅助病毒存在 ;PCR和RT PCR分析证实病毒生产细胞和反义修饰的耐药细胞K5 6 2MDR/LASSN中均有反义MDR1基因整合和MDR1基因反义RNA的转录 ;FCM分析K5 6 2MDR/LASSN细胞中P gp表达强度和表达率比对照细胞均有明显下降。 结论　逆转录病毒介导的反义基因转移系统安全有效 ,可用于肿瘤耐药逆转的研究     

基于TCGA数据库挖掘恶性脑胶质瘤乏氧与免疫微环境相关预后价值基因

目的 挖掘恶性脑胶质瘤中与乏氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）表达存在相关性的免疫通路或基因,并进一步分析其对脑胶质瘤预后的影响。方法 从肿瘤基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库提取脑胶质瘤HIF-1α基因表达谱数据,采用R语言分析HIF-1α基因与其他基因之间的相关性,通过GO和KEGG数据库对差异表达基因进行功能注释,包括细胞组分、生物学过程、分子功能及相关信号通路。并采集了74例人脑胶质瘤组织进一步验证分析。结果 TCGA数据库中共收集到169例脑胶质瘤患者的数据,其中与HIF-1α基因有相关性的基因有455个。对455个满足条件的相关性基因进行GO和Pathway富集分析,共得到66个KEGG Pathway;最终发现基因TNFRSF1α的P值具有统计差异。进一步对比分析TCGA数据库169例脑胶质瘤患者与529例非肿瘤患者数据中TNFRSF1α表达的情况。结果 提示TNFRSF1α与HIF-1α在脑胶质瘤组织中显著高于癌旁组织。且人脑胶质瘤组织TNFRSF1α表达水平与胶质瘤的病理分级正相关。结论 KEGG通路发现TNFRSF1α基因与乏氧有关,提示TNFRSF1α基因可能与乏氧共同影响脑胶质瘤患者的预后。     

125碘体内放射治疗脑胶质瘤1例

患者 ,女 ,50岁 ,头痛伴言语不清入院。查体 :呈慢性颅高压表现。头ＣＴ表现为左额低密度占位 ,中线移位 ,同侧脑室受压。ＭＲ表现为左额大片异常信号病变 ,边界不清 ,在Ｔ1Ｗ1像上呈不同程度的低信号 ,其中可见厚薄不均的分隔 ,在Ｔ2Ｗ2像上呈不同程度的高信号 ,在ＦＬＡ2 Ｒ像上呈等高混杂信号 ,病灶强化呈不均匀明显强化 ,其中囊变坏死区无强化 ,诊断为左额胶质瘤。患者入院手术治疗同时行体内种植放射性1 2 5 碘颗粒。手术全切肿瘤 ,病理提示星型细胞Ⅱ级 ,在残腔侧壁分放三枚1 2 5碘颗粒 ,使其各自放射半径为 1.7ｃｍ ,然后常规关颅。…     

沙培林治疗鼠脑胶质瘤基因的PCR检测

目的 研究沙培林治疗裸鼠脑胶质瘤基因的PCR检测.方法 16只BALB/C裸小鼠皮下接种U251脑胶质瘤成功后随机分为4组,每组四只.接种后10 d,肿瘤长至约3～4 mm大小时开始给药,对照组0.2 ml生理盐水,低剂量组沙培林0.2 KE、中剂量组0.4 KE、高荆量组0.8 KE,隔日1次,瘤周注射.给药8次后解瘤实验.从组织中提取总RNA,取20 mg组织加液氮,匀浆研磨,加入TRIZOL裂解液1 ml,采用一步法抽取总RNA,经由紫外分光光度计比色鉴定RNA纯度与浓度,结果 在1.9～2.0之间.逆转录(RT):各取总RNA 1.5、、μg,在终体积为20μl反应条件下,-37℃逆转录1 h,-94℃预变性5 min,获得单链cDNA模板.PCR:各取模板cDNA 2μl,据不同检测对象设计引物,分别进行终体积为30μl的PCR反应,扩增30～50个循环.结果 不同组U251瘤细胞Fas、Bc1-2、Bcl-x、Bax、P53的mRNA从左至右依次为C1、C2、L1、L2、M1、M2、H1、H2、Marker,Bcl-2及P53(突变型)的表达由C至L、M、H逐渐下降,而Bax、Fas及Bcl-xs的表达则又由C至L、M、H逐渐升高.结论 不同基因rt-PCR的检测结果 同样证实了沙培林对脑胶质瘤患者瘤细胞凋亡的调控作用.它是通过上调促凋亡基因Bax、Fas、Bcl-xs及下调抗凋亡基因Bcl-2、P53(突变型)而发挥杀伤瘤细胞、抑制其生长的.