用HRP——抗IgM法快速诊断流行性出血热

本文报道用流行性出血热(EHF)病毒抗原片,以酶标抗人IgMu链单克隆抗体染色法(简称HRP-抗IgM)检测患者血清中的IgM抗体,从而对EHF进行早期诊断。为确证本方法的可靠性,同时与间接免疫荧光IgG法(IFA-IgG)进行了比较.经阻断试验和2-巯基乙醇耐性试验证明,HRP-抗IgM检出的抗体系EHF特异性抗体.用双盲法检测了51份血清,结果全部符合。实验结果表明,HRP-抗IgM特异性强.敏感性高,用普通显微镜便可观察,结果清晰.4小时内可获得诊断结果,可以用作早期诊断.     

流行性出血热IgM抗体检测(抗体捕捉ELISA法)

本文报道应用IgM-抗体捕捉酶联免疫吸附法(IgM antibody-capture ELISA,或称反向间接酶联免疫吸附法,Reverse indirect ELISA)检测流行性出血热(Epidemic hemorrhagic fever,EHF)患者血清特异性IgM抗体的结果。该方法能特异、敏感地测出EHF患者发病第2天的血清IgM抗体,阳性率为87.5(7/8),第4病日阳性率达95％(57/60),而病程第7天的38例患者血清全部阳性。15例非EHF发热病人及10例正常人血清无1例阳性,并经2-MB试验与加热试验证明了其特异性。另外,研究表明,对于类风湿因子(RF)干扰所致假阳性反应,本实验所采用的阴性抗原平行对照设计能成功地予以校正而排除。     

酶联免疫吸附法同时检测血清中的HIV和HCV抗体

用酶联免疫吸附试验检测病毒抗体 ,多为对单一抗体的检测 ,我们将人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ 1 2 )和丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)抗原包被于同一载体 ,同时检测这两种病毒的抗体 ,取得了与单测法基本一致的效果。ＨＩＶ 1 2抗原和ＨＣＶ抗原为加拿大Ｙｅｓ生物技术研究有限公司产品 ;ＨＩＶ酶联免疫检测试剂盒批号 96 0 5 15 ,ＨＣＶ酶联免疫诊断试剂盒批号 96 0 72 3,均为厦门新创科技有限公司产品。ＨＩＶ和ＨＣＶ抗体阴、阳性国家参照品由卫生部药品生物制品检定所制备 ,批号分别为 96 0 1、96 0 4。 112 0份血清样品取自山东医科大学附属医院…     

重组抗原Em18双抗原夹心酶联免疫吸附试验法检测泡球蚴抗体的建立及初步评价

目的 建立双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测泡状棘球蚴抗体的方法.方法 重组抗原Em18(rEm18)作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记rEm18抗原为检测抗原,建立检测人血清中泡状棘球蚴抗体的双抗原夹心ELISA方法;应用方阵滴定法对包被抗原、酶标抗原等条件进行优化,并对该系统的灵敏性、特异性、重复性进行初步分析评价.结果 rEm18最佳包被浓度为2.5μg/mL,HRP标rEm18稀释度为1∶800.灵敏度为92％(46/50),特异性为94％(47/50),假阴性率为8％ (4/50),假阳性率为6％ (3/50),批内变异≤9.55％,批间变异≤14.79％,与Em2-ELISA试剂盒检测结果有良好的一致性.结论 本研究成功建立了快速检测泡球蚴特异性抗体的ELISA法,其可以用于人泡球蚴病的早期诊断.     

丙型肝炎病毒核心抗原在血液透析患者中的检测和应用

目的 探讨丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫吸附法在血液透析患者HCV感染检测中的应用.方法 对本院250名血液透析患者,用第三代酶联免疫吸附试剂盒检测抗.HCV抗体、酶联免疫吸附法检测HCV核心总抗原,用巢式RT-PCR法对阳性标本进行确认.结果 250例血液透析患者中抗-HCV抗体阳性43例(阳性率17.2%),HCV-cAg阳性45例(阳性率18%),经配对x2检验,P=0.839,差异无统计学意义;43例抗-HCV抗体阳性中RT-PCR检测结果 为36例HCV-RNA阳性,其中32例HCV-cAg也呈阳性,另外4例HCV-cAg阴性;45例HCV-cAg阳性标本中HCV-RNA结果 全阳性;13例核心抗原阳性但抗体阴性的患者样本中也含有HCV-RNA,抗-HCV抗体的漏检率为23.2%(13/56);核心抗原阳性标本测出病毒载量是(49258±28682)拷贝/ml,高于抗-HCV抗体阳性组(23938±10780)拷贝/ml(P<0.05);4例核心抗原阴性但抗-HCV抗体及RT-PCR均阳性标本的病毒载量是(306±161)拷贝/ml,明显低于HCV核心抗原阳性组(P<0.001).结论 HCV核心总抗原酶联免疫吸附试验将有益于由于免疫抑制状态、窗口期更长的血液透析患者,与抗-HCV的检测结果 具有互补性;HCV-cAg能很好反映HCV RNA,相对于PCR来说,HCV-cAg检测既具有成本效益好又可减少人力资源,具有广阔的临床应用前景.     

ABC法检测人IgG的灵敏度

抗生物素蛋白—生物素系统(Avidin—Biotin system,ABS)可广泛应用于酶联免疫、放射免疫和荧光免疫等检测技术中。因为生物素标记抗体和酶的克分子比值很高,又不影响抗体和酶的活性,加之抗生物素蛋白有四个生物素结合位点,可以与生物素—酶结合物形成晶格状巨分子复合物。所以,酶联免疫、放射免疫和荧光免疫等方法,均可借ABS而大大提高方法的灵敏度,为微量杭原和抗体的检测开辟了新的途径,日益为国内外免疫工作者所重视。ABC(Avidin—Biotin—Engyme Complex)方法,是在试管中先形成抗生物素蛋白—生物素酶复合     

米诺地尔多克隆抗体的制备及其酶联免疫检测方法的建立

目的:在人工合成米诺地尔抗原基础上,制备其多克隆抗体并建立相应酶联免疫检测方法。方法:采用戊二醛法合成米诺地尔人工抗原,并通过紫外扫描进行鉴定。用免疫原(Minoxidil-BSA)免疫BALB/c雌性小鼠,制备抗minoxidil的多克隆抗体,并鉴定其效价。建立检测米诺地尔的竞争ELISA法。结果:紫外扫描结果表明米诺地尔成功地偶联到载体蛋白上。免疫制备得到的多克隆抗体,其效价为1∶12 800。其酶联免疫检测曲线方程y=-0.0 823x+0.938(R2=0.9811),minoxidil质量浓度与吸光度在0.001~10μg/ml范围内呈良好的线性关系。结论:本研究成功制备米诺地尔人工抗原及其多克隆抗体并建立了酶联免疫检测方法,为米诺地尔免疫检测方法的实际应用奠定了基础。     

用ELISA检测流行性出血热特异性免疫复合物的初步研究

为检测流行性出血热特异性循环免疫复合物,建立了抗原特异性双抗体夹心ELISA技术。以兔抗EHF IgG包被反应板,使待检标本内循环免疫复合物通过暴露的EHF病毒抗原位点而被结合到固相上,再以辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG进行示踪,从而检出EHF’特异性循环免疫复合物。在228份EHF患者血清中,用胶因素ELISA检出非特异性循环免疫复合物183份,抗原特异性ELISA检出特异性循环免疫复合物188份。本方法特异性强,重复性及稳定性较好,可应用于临床检测。     

酶联捕获法检测抗人巨细胞病毒-IgM抗体的实验分析

目的 建立检测人巨细胞病毒(HCMV)抗原特异性IgM抗体的酶联捕获技术。方法 应用酶联捕获法检测68例巨细胞病毒感染者血清中抗HCMV-IgM，并与常用的间接ELISA法进行比较。结果 酶联捕获法特异性及敏感性均高于间接ELISA法，且不受RF因子的影响。结论 酶联捕获法敏感性高、特异性强、简便、快速，重复性好，具有实际应用价值。     

抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA).用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡,水稀释法制备IgY抗体,以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体(IgY-E)和兔抗IgG抗体(IgG-E)分别作为检测抗体,IgY抗体和兔抗...     

快速免疫酶联染色法(IESA)检测流行性出血热抗体的研究

免疫酶染色法(缩写IESA)是70年代发展起来的一项诊断技术。Bvummer等首先用于流行性出血热(EHF)抗原抗体的研究,国内亦有类似报导。我们在IESA     

应用合成肽研究柯萨奇B病毒衣壳蛋白VP1的共同抗原表位

对柯萨奇B4病毒(CVB4)衣壳蛋白VPl保守区的亲水性和二级结构进行分析和预测,选择可能代表优势抗原表位的肽段进行合成(VPl-l肽,RIYF KPKHVK AYV),并截取了该肽段的前12个残基(VPI-2肽)用同样方法进行合成.用VP1-1肽免疫家兔制备出高效价抗体,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测,这些抗体与CVBI-6病毒均有结合反应,VP1-1肽与型特异性CVB1-6抗体均有良好的结合反应,表明VP1-1肽是CVB的共同抗原表位.用VP1-1肽检测心肌炎患者血清CVBIgM抗体,阳性率在40%左右.     

RFC-SPA和IFA法快速检测流行性出血热病人尿中抗体的研究

目前检测流行性出血热(EHF)抗体多采用血清标本,作者等于1986年首次报告了用EHF病人尿标本检测特异性抗体的可行性。流行性出血热的肾脏主要病理变化是肾小球和肾小管有不同程度的损伤;肾病患者尿蛋白与肾小球损害有关,尿IgG是测定肾病患者SpD(选择性尿蛋白指数)的检测内容。作者等用RFC—SpA和IFA法对111份尿标本EHF特异性IgG抗体的检测,获得满意结果,现报告如下。     

HBsAg人源噬菌体单链抗体的筛选及其在临床诊断中的应用

目的 筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)的人源噬菌体单链抗体，并探讨其在临床治疗和诊断中的应用价值。方法 以HBsAg阳性血清超速离心纯化的HBsAg为固相抗原，从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过5轮“吸附—洗脱—扩增”筛选过程，获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体(ScFv)；用该抗体对10例石蜡包埋的乙型肝炎患者肝组织进行免疫组化鉴定。结果 酶联免疫吸附法(ELISA)结果表明，制备的HBV人源单链抗体能与HBsAg抗原特异性结合；免疫组化结果表明，该抗体能够特异性识别乙型肝炎患者肝组织中的HBsAg抗原，与正常肝组织及丙型肝炎病毒(HCV)的抗原均无交叉反应。结论 此法制备的单链抗体亲和性好，特异性强，且制备方法简便，周期短，为HBV病原的检测提供了新的有效试剂，为今后HBsAg人源抗体的研究和应用奠定了基础。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测用于献血者筛查价值的探讨

目的应用酶联免疫吸附技术筛查献血员中丙型肝炎病毒核心抗原（HCV—cAg）和抗体（HCV—Ab），了解丙型肝炎病毒核心抗原筛查献血员应用价值。方法对我站2004年8-12月间的3972份献血者血清标本进行抗-HCV初、复检和HCV—cAg ELISA检测，将ELISA法阳性的25份血清标本，再做RT-PCR检测证实。结果3972份血清标本检测中，有10份仅初检抗-HCV阳性样本，经HCVRNA检测阳性有l份，12份仅复检抗-HCV阳性样本，经HCVRNA检测阳性有1份，HCV—cAg检测阳性有3份，经HCVRNA检测阳性有2份。结论HCV—cAg ELISA检测技术的敏感性与HCVRNA技术类似，但成本明显降低，可与HCV抗体联合检测应用献血员筛查。     

酶标A蛋白检测40例EHF病人血清结果报道

流行性出血热(EHF)的临床实验诊断,已有多种方法。本文利用酶标A蛋白(HRP—SPA)对EHF病人血清进行检测。检测结果如下。将东风试剂厂生产的SPA,按改良的过碘     

新型冠状病毒中和抗体两种检测方法的建立与评价

目的 建立基于酶联免疫法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)双抗原夹心法和竞争抑制法的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中和抗体检测方法,并评价两种方法的检测性能.方法 使用基因重组刺突蛋白受体结合域(spike protein receptor binding domain,S-RBD)作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记另1株基因重组蛋白SARS-CoV-2 S-RBD,建立S-RBD双抗原夹心法.使用基因重组人血管紧张素转化酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记S-RBD蛋白,建立竞争抑制法.优化各自的反应体系,使整个系统达到最佳检测性能,并对两种检测方法进行对比评价.结果 两种方法的灵敏度相近,临界值附近的重复性夹心法为7.51％,竞争抑制法为10.70％;未接种疫苗且核酸阴性的人群样本,两种方法的特异性均为100％;已接种疫苗的人群样本,夹心法的阳性检出率为75.0％,竞争抑制法为71.4％,与金斯瑞生物科技股份有限公司生产的新冠病毒中和抗体检测试剂盒(ELISA)的检测结果相比,Kappa指数分别为0.9、0.81,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 成功建立新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中和抗体双抗原夹心法和竞争抑制法两种酶联免疫检测方法,夹心法的重复性优于竞争抑制法.两种检测方法与已上市的同类产品的差异没有统计学意义,具有一定的临床应用价值.     

基于不同载体制备黄芪甲苷人工抗原的研究

目的:比较牛血清白蛋白(BSA)和匙孔型血蓝蛋白(KLH)两种蛋白载体合成黄芪甲苷人工抗原的免疫原性。方法:用高碘酸钠法将黄芪甲苷(AST)分别与蛋白载体BSA和KLH偶联成AST-BSA及AST-KLH免疫6~8周龄的BALB/c雌性小鼠,测定其血清抗体效价;以卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白同样以高碘酸钠法合成AST-OVA作为包被抗原。多抗血清经间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)和间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)检测其抗体效价及特异性。结果:经AST-KLH免疫的多抗血清较之AST-BSA免疫的特异性要高,与AST进行竞争酶联免疫检测,其IC50值约为5μg/ml。两种人工抗原免疫所得血清抗体效价均为1∶51 200左右。结论:AST-KLH具有更好的免疫原性,本次实验为进一步建立黄芪甲苷的免疫学检测方法奠定了研究基础。     

白喉和破伤风类毒素抗原ELISA检测方法的建立

目的建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。方法分别采用白喉、破伤风单抗包被酶标板,兔抗白喉、破伤风多抗作为二抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体作为酶标抗体,以平行线法建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原含量的夹心ELISA法,并进行方法学验证。结果两种定量检测ELISA方法的验证结果均符合规定。检测白喉类毒素抗原ELISA方法的定量限为8.90×10-4Lf/ml,回收率为98.35%,批内变异系数(CV)≤10.59%,批间CV≤13.51%;检测破伤风类毒素抗原ELISA方法的定量限为2.13×10~(-3)Lf/ml,回收率为107.28%,批内CV≤13.96%,批间CV≤10.06%。结论建立了白喉、破伤风类毒素抗原ELISA检测方法,该法特异性强、准确度高、重复性好,可用于白喉破伤风疫苗产品的质量控制和生产过程控制。     

淋球菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及临床初步应用（简报）

用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB／c小鼠脾细胞，与骨髓瘤细胞SP2／0融合，获得4A5，4C2，5C0．6B6四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA)，测知培养上清抗体滴度为1：16—1：128，接种同系小鼠腹腔诱生的腹水，