大鼠腹腔异位心脏移植及移植物血管病模型的建立

目的探讨建立大鼠腹腔异位心脏移植及移植物血管病模型的方法和意义。方法将健康Witar大鼠和SD大鼠,建立腹腔异位心脏移植模型。分对照组、实验组和同系移植组,实验组腹腔注射CsA,对照组和同系移植组注射生理盐水。术后15、60d切取供心,观测移植物冠状血管的病理变化。结果大鼠腹腔异位心脏移植成功建立,手术成活率90%。实验组术后15d出现冠状血管内膜增厚,60d出现明显的移植物血管病理改变。结论建立Witar大鼠和SD大鼠腹腔异位心脏移植,可复制出移植物血管病病理变化,是一种理想的移植物血管病实验模型。     

雷帕霉素对大鼠移植心脏血管病变的作用

目的研究雷帕霉素在大鼠移植心脏血管病变中的作用。方法建立大鼠腹腔心脏移植模型。异系移植以近交系Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,随机分为雷帕霉素组(以雷帕霉素每天1.25 mg/kg灌胃)和环孢霉素组(以环孢霉素A每天10 mg/kg灌胃),于移植后90天留取移植心脏待检;同系移植组以Wistar大鼠作供、受体,行心脏移植未行抗免疫排斥治疗。假手术组为仅做腹部开关手术的Wistar大鼠。采用HE、Van Gie-son染色分析移植心脏血管狭窄的情况。结果假手术组心肌无炎性细胞浸润,冠状血管无狭窄。同系移植心脏无明显炎性细胞浸润,血管内膜稍增厚,管腔无狭窄。环孢霉素组可见冠状动脉管腔明显狭窄,血管壁及心肌内均可见大量炎性细胞浸润,心肌变性坏死,心肌纤维化。雷帕霉素组冠状血管狭窄程度及炎性细胞浸润情况明显减轻,与环孢霉素组比较差异有显著性(P<0.01)。结论雷帕霉素具有预防大鼠心脏移植物血管病变的作用。     

血小板源生长因子在大鼠移植心脏组织中的表达

目的 研究血小板源生长因子(PDGF)在大鼠移植心脏组织中的表达及意义.方法 取近交系Wistar大鼠为供体、SD大鼠为受体建立腹腔异位心脏移植模型,术后每天给环孢霉素A 10mg/kg皮下注射.另取供、受体均为SD大鼠各12只行同系移植作为对照.于移植后60天留取移植心脏,检测冠状血管狭窄程度.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法研究PDGF-A mRNA在移植心脏组织中的表达情况.结果 异系移植大鼠心脏血管明显狭窄,而同系移植大鼠心脏血管无明显狭窄.PDGF-A mRNA在异系移植组明显增高,与同系移植组比较具有显著性差异(p＜0.01).结论 血小板源生长因子在异系移植心脏组织中表达明显增高,血小板源生长因子的高表达可能与大鼠移植心脏血管病变的形成有关.     

氨基胍对大鼠心脏移植急性排斥期细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶的影响祆

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)对大鼠心脏移植后急性排斥反应期细胞凋亡的影响。方法:分3组建立大鼠腹腔异位心脏移植模型:同系移植组、同种移植组、同种移植后AG治疗(应用AG(600mg/(kg·d))皮下注射)组。各组分别在术后第3d,5d,7d采集移植心肌的心室组织,观察移植心脏排斥反应情况,细胞凋亡情况及心肌组织中iNOS活性的变化。结果:①同种移植组和同种移植后AG治疗组排斥反应差异有统计学意义(χ2分别为11.98,12.70,P<0.05);②心脏移植后各级排斥反应中均可见细胞凋亡的存在,且随着心脏移植排斥反应的加重,心肌细胞凋亡的量也在增加;③同种移植后AG治疗组与同种移植组相比各时间段iNOS活性均明显升高,而与同系移植组相比,差异无统计学意义。结论:AG可以通过抑制心脏移植术后急性排斥期的iNOS活性,从而抑制细胞凋亡,保护移植心脏的功能。     

氨基胍对大鼠心脏移植急性排斥期细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶的影响祆

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)对大鼠心脏移植后急性排斥反应期细胞凋亡的影响.方法:分3组建立大鼠腹腔异位心脏移植模型:同系移植组、同种移植组、同种移植后AG治疗(应用AG(600mg/(kg·d))皮下注射)组.各组分别在术后第3 d,5 d,7 d采集移植心肌的心室组织,观察移植心脏排斥反应情况,细胞凋亡情况及心肌组织中iNOS活性的变化.结果:①同种移植组和同种移植后AG治疗组排斥反应差异有统计学意义(χ2分别为11.98,12.70,P＜0.05);②心脏移植后各级排斥反应中均可见细胞凋亡的存在,且随着心脏移植排斥反应的加重,心肌细胞凋亡的量也在增加;③同种移植后AG治疗组与同种移植组相比各时间段iNOS活性均明显升高,而与同系移植组相比,差异无统计学意义.结论:AG可以通过抑制心脏移植术后急性排斥期的iNOS活性,从而抑制细胞凋亡,保护移植心脏的功能.     

诱生型一氧化氮合酶mRNA的表达对心脏移植术后移植物血管病的抑制作用

目的探讨诱导诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达以促进NO合成对移植物血管病(CAV)形成的抑制作用。方法建立大鼠异位(腹部)心脏移植模型,受者在接受环孢素A腹腔注射的同时,按分组要求分别给予左旋精氨酸(iNOS mRNA组)、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂左旋精氨酸甲酯(L-NAME组),术后测定血浆NO3-的含量、移植心脏冠状血管iNOS mRNA的表达以及冠状动脉内膜与中膜厚度比的改变。结果术后2周和4周,     

大鼠移植心脏组织中p27kip1表达及雷帕霉素的干预效应

目的:研究大鼠移植心脏冠状血管组织中p27kip1的表达情况以及雷帕霉素对其表达的影响.方法:取近交系Wistar大鼠16只做供体,SD大鼠16只作受体建立异系腹腔内心脏移植模型,随机分为环孢霉素组(n=8)和雷帕霉素组(n=8).环孢霉素组术后给予环孢霉素A 10 mg/kg·d-1皮下注射,雷帕霉素组术后给予雷帕霉素1.25 mg/kg·d-1灌胃.同系移植组 (n=8)取16只Wistar大鼠作供、受体行心脏移植,未行抗免疫排斥治疗.移植60 d后取移植心脏血管组织采用Van Gieson染色观察血管狭窄程度,用免疫组织化学染色(S-P)法检测p27kip1的表达情况.结果:雷帕霉素组较环孢霉素组血管狭窄程度明显减轻.p27kip1在正常心脏和同系移植组均为阳性表达(阳性率100%).在环孢霉素组和雷帕霉素组阳性表达率分别为62.5%、100%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05).在各移植组中,p27kip1的表达情况与移植心脏血管狭窄程度之间呈负相关(rs=-0.541,P=0.007 5).结论:雷帕霉素可提高移植大鼠心脏血管组织中p27kip1的表达水平.     

血管平滑肌肌动蛋白α在移植心脏血管病变及纤维化中的作用

目的：探讨血管平滑肌肌动蛋白α（vascular smooth muscle α-actin, VSMA-α）表达变化在移植心脏血管病变及纤维化中的作用。方法：建立大鼠心脏移植模型,并将实验大鼠分为急性排斥组、慢性排斥组、同系移植组、正常心脏组。采用Masson和Van Gieson染色观察心肌的纤维化,计算血管狭窄的指数。免疫组织化学染色分析VSMA-α表达变化与心肌纤维化和血管病变的关系。结果：正常心脏组、同系移植组、急性排斥组、慢性排斥组心肌纤维化评分分别为0.00±0.00, 0.63±0.52,1.75±0.71和2.75±0.46,慢性排斥组心肌纤维化明显高于正常心脏及同系移植心脏(均P＜0.01)。而冠状动脉狭窄指数分别为0.08±0.02,0.09±0.04,0.12±0.05和62.86±17.18,其中慢性排斥组移植心脏血管较其它组明显狭窄（均P＜0.01）。慢性排斥组移植心脏的心肌细胞大量表达VSMA-α。 结论：血管平滑肌肌动蛋白α基因的重新激活及其蛋白的异位表达与移植心脏血管病变及心肌纤维化有关。     

腺苷预处理对大鼠心脏移植缺血再灌注损伤心肌的保护作用

目的 探讨腺苷(adenosine, Ado)预处理在心脏移植缺血再灌注损伤的保护作用.方法 健康雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠40只,建立大鼠同系异位心脏移植模型.随机分为3组:假手术组、对照组、实验组(供体心在获取前15min给予Ado预处理后4℃改良St. Thoms液10mL.主动脉根部灌注停跳).术后5h测定血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,电镜观测心肌细胞超微结构变化.结果 实验组MDA、 CK-MB明显减少(P<0.01), SOD明显增加(P<0.01),心肌超微结构改变明显减轻.实验组的移植心脏存活时间较对照组明显延长[(22.1±2.9)d vs (12.0±1.8)d, P<0.01)].结论 Ado预处理对心脏移植缺血再灌注损伤有保护作用,使受者的移植心脏存活期延长.     

青藤碱对心脏移植大鼠急性排斥反应及环氧化酶2活性的影响

目的研究环氧化酶2(COX-2)抑制剂青藤碱在大鼠急性心脏移植物排斥反应模型中的作用。方法进行40次SD→W istar的大鼠腹部心脏移植,移植后大鼠随机分为实验组(20只)和对照组(20只),实验组大鼠给予青藤碱30 mg.kg-1.d-1,对照组给予生理盐水,评价生存时间,检测移植心切片,进行排斥反应的病理分析和评价COX-2活性。结果实验组移植物生存时间12.5 d±2.6 d明显高于对照组生存时间6.8 d±0.5 d(P=0.001),移植后3 d、5 d时,实验组的炎性反应、血管内膜炎症、心肌水肿心肌坏死明显减轻。移植心的细胞凋亡明显减少(P<0.05),移植后5 d COX-2蛋白和mRNA表达减少。结论青藤碱能够延长移植物生存时间,减轻心肌损坏和炎症反应。     

大鼠肾移植急性排斥反应中诱导型一氧化氮合酶的表达及其抑制剂的作用

目的:探讨大鼠移植肾组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及iNOS抑制药氨基胍(Aminoguanidine,AG)和免疫抑制药他克莫司(FK506)对移植术后急性排斥反应的影响。方法:实验分为同基因移植组(5只,供、受鼠均为SD大鼠)和异基因移植组,后者又分为急性排斥组、AG治疗组和他克莫司治疗组(各组大鼠均为5只,供鼠为SD大鼠,受鼠为Wistar大鼠)。术后第7 d取移植物进行病理检查,观察排斥反应发生情况,并运用RT-PCR、免疫组化法检测各组移植肾组织中iNOS的表达水平。结果:急性排斥组iNOS表达呈强阳性,与AG治疗组、他克莫司治疗组、同基因移植组比较,差异有显著性意义(P<0.01)。AG治疗组、他克莫司治疗组、同基因移植组之间比较,差异无显著性意义。结论:在大鼠原位肾移植发生急性排斥反应时,iNOS表达明显增高,增高程度与排斥反应的强度移植物损伤有明显关系。应用AG和他克莫司可抑制iNOS的表达,从而减轻移植肾组织的急性排斥反应。     

同种大鼠心脏移植急性排斥反应时诱生型一氧化氮合酶活性的实验研究

目的观察同种大鼠心脏移植急性排斥反应时诱生型一氧化氮合酶(iNOS)活性,及氨基胍(AG)与环孢素A(CsA)对其影响.方法 同种大鼠心脏移植动物模型,于术后4 d处死对照组、AG与高、低剂量CsA处理组的移植鼠, 测血清NO含量、心肌iNOS活性及进行移植物病理分析.结果对照组iNOS 活性及其移植物排斥反应等级均显著高于各处理组(P<0.05);AG与CsA对iNOS活性、NO 产生有抑制作用,并相应地缓解急性排斥反应.结论同种移植急性排斥反应早期移植物即有iNOS表达与NO产生,NO参与排斥反应;CsA抑制NO产生可能为其抗急性排斥作用的机制之一.     

单核细胞趋化蛋白-1和NF-κB通路在心脏移植排斥反应中的作用

目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在心脏移植排斥反应中的表达及意义,并研究核因子-κB(NF-κB)通路在其中发挥的作用。方法 近交系SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,“套管连接技术”行颈部心脏移植术。将SD大鼠随机平均分为4组,急性排斥组：受体未采用任何治疗;CsA组：移植术后环孢霉素A(CsA) 10mg/kg治疗受体,术后60～90d采集移植心脏;免疫耐受组：采用Wistar大鼠脾细胞(SPC)和环磷酰胺(CP)预处理SD大鼠,14d后行颈部心脏移植术;PDTC组：移植术后腹腔注射吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)100mg/kg,1次/d,连续15d。Masson染色观察移植心脏纤维化程度,免疫组化及Western blotting检测MCP-1的表达。结果 急性排斥组、CsA组、免疫耐受组和PDTC组移植心脏存活时间分别为(6.53±2.48)d、(93.51±20.07)d、 (201.42±40.36)d和(142.37±24.64)d,PDTC组明显高于CsA组和急性排斥组(P＜0.05),且心肌纤维化程度明显减轻。各组MCP-1表达的积分光密度(IOD)值依次为(1.86±0.23)、(1.58±0.16)、(0.57±0.15)及(1.16±0.28),免疫耐受组明显低于其他３组,PDTC组显著低于急性排斥组和CsA组(P＜0.05)。结论 MCP-1的表达与排斥反应程度呈正相关,测定MCP-1的水平可预测移植心脏的功能状况;抑制NF-κB通路可减少MCP-1表达,明显减轻心脏移植排斥反应。     

大鼠异位心脏移植急性免疫排斥期中血管内皮生长因子表达变化研究

目的:观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)在大鼠心脏移植急性排斥期中的表达及意义。方法:实验分为对照组和环孢霉素A(C sA)组,每组32只。采用腹部心脏异位移植术式建立移植模型,于心脏移植手术后分别灌胃给予生理盐水或C sA干预。常规监测排斥反应发生情况。每组8只用于观察移植物存活时间,余24只移植术后1、3、5、7 d各切取6例移植心标本。样本采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测移植心VEGF的DNA表达水平。结果:C sA组移植心存活时间15.4±5.1d,长于对照组7.6±1.5d,P<0.01;对照组各采样时段凋亡指数及VEGF的表达强度均强于C sA组,P<0.01。结论:VEGF高表达与移植心的炎性浸润及急性排斥反应密切相关,可能在同种移植免疫调节中起着重要的作用。     

诱导型一氧化氮合酶mRNA在心脏移植急性排斥反应中的表达

目的研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达与心脏移植急性排斥反应的动态关系,以探讨iNOS基因mRNA表达能否作为心脏移植急性排斥反应的监测指标.方法复制大鼠同种异位心脏移植模型,并采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测移植心心肌iNOS基因mRNA表达水平.结果实验组第3、5、7、9、11天移植心心肌表达iNOS mRNA吸光度测定依次为:(0.44±0.19、0.97±0.25、1.20±0.45、0.89±0.27、0.77±0.22)以β-actin为内参照.对照组移植后各天均无iNOSmRNA表达.结论急性排斥反应中移植心心肌iNOS基因mRNA表达早且表达水平显著升高,故iNOS基因mRNA表达可作为心脏移植急性排斥反应早期的一个监测指标.     

Cy7.SE标记ICOS-Ab荧光示踪技术评估小鼠心脏移植术后急性排斥反应

目的 探讨以T细胞活化表达的可诱导共刺激分子(inducible co-stimulatory molecule, ICOS)为基础的荧光示踪技术无创诊断小鼠心脏移植后急性排斥反应的可行性。方法 以小鼠颈部异位心脏移植为模型,分为同系移植、同种移植、同种移植+他克莫司(tacrolimus,FK506)治疗(同种移植治疗组)及同种移植治疗后停药组,分别在移植术后1、3、5、7 d,采用荧光染料Cy7.SE标记抗小鼠ICOS抗体(Cy7.SE-ICOS-Ab)经尾静脉注入移植小鼠,用荧光实时显像仪观察移植物荧光图像变化;同时用流式细胞仪检测各组小鼠脾脏T细胞表面ICOS表达,H-E染色分析心脏移植物病理改变。结果 同系移植及同种移植治疗组小鼠移植术后各时间点基本不显影;同种移植术后1 d,移植物荧光图像无明显变化,但术后3、5、7 d荧光逐渐增强,术后7 d时荧光强度最明显;同种移植治疗后停药组停药3 d移植物荧光强度逐渐增强,停药5、7 d后强度明显增强。H-E染色表明:各时间点同系移植及同种移植治疗组小鼠心脏移植物无明显排斥反应;同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)1 d移植物无明显排斥反应,术后3、5、7 d排斥反应逐渐出现并加重。流式细胞仪检测显示:术后1 d,各组脾脏T细胞表达ICOS水平无明显差异;同系移植及同种移植治疗组在各时间点基本不表达ICOS,但同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)3、5、7 d ICOS表达逐渐增加(P<0.05)。结论 ICOS表达强度与心脏移植后排斥反应强度有关,荧光标记的ICOS抗体可能有助于无创评估移植术后急性排斥反应的发生及程度。     

The inhibitory effect of astilbin on the arteriosclerosis of murine thoracic aorta transplant

The inhibitory effect of astilbin on transplant arteriosclerosis in murine model of thoracic aorta transplantation was examined. Model of rat thoracic aorta transplantation was established. Ninety rats were divided into three groups. In isograft group, the thoracic aorta of Brown Norway （BN） rat was anastomosed with the abdominal aorta of another BN rat. In allograft group, the thoracic aorta of BN rat was anastomosed with the abdominal aorta of Lewis rat. In astilbin group, the rats receiving allo-transplantation were given astilbin 5 mg/kg per day for a time of 28 days. The donor thoracic aorta and the recipient abdominal aorta were anastomosed by means of a polyethylene can- nula （inner diameter： 1.5 mm, length： 3 mm length）. The grafts were histologically examined for structural changes. The areas of arterial lumen and endatrium were calculated. Our results showed that, in the allograft group, 28 days after allografting, conspicuous proliferation of smooth muscles and infiltration with a great number of inflammatory cells were found in the tunica intima and tunica media. Astilbin significantly inhibited the proliferation of smooth muscles and ameliorated the infiltration of inflammatory cells thereyby prevent against the development of transplant arteriosclerosis. It is concluded that asltilbin can effectively prevent the development of arteriosclerosis in allotransplant by inhibiting the proliferation of smooth muscles and inhibit the proliferation of smooth muscles in tunica of intima and media and reducing infiltration of the inflammatory cells.     

Anti-CD25 monoclonal antibody modulates cytokine expression and prolongs allografts survival in rats cardiac transplantation

Objective To investigate the role of anti- interleukin-2 receptor（CD25) monoclonal antibody in the regulation of cytokine mRNA expression of IL-1β, IL-2, CD25, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, tumour necrosis factor-α (TNFα), and interferon-γ (IFNγ) in cardiac allografts to elucidate its immunological mechanism and role in rats that have undergone cardiac transplantation. Methods These in vivo studies were conducted using a rat MHC mismatch SD to Wistar heterotopic cardiac transplant model. Simulect, an anti-CD25 antibody, was used to prevent allograft rejection. An increase in the rate of allograft survival was observed. Rats were sacrificed on day 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14 post-transplantation and hearts were harvested for furgher study. Cytokine mRNA expression was determined by semiquantitative RT-PCR. Results In the control group, cardiac allografts were rejected at 8.3±1.7 days after transplantation (mean±s).The rats who received CsA rejected the cardiac allograft at 26.4±5.7 days post-transplant. Allograft survival of Simulect-treated rats was 29.2±7.1 days (P&lt;0.05 vs controls). Rats treated with simulect and CsA had the longest survival of 55.0±11.6 days (P&lt;0.001 vs controls). CD25 mRNA expression in the heart tissue samples of treated rats was undetectable or very weak. However, the untreated group, CD25 expression increased, although anti-CD25 decreased this CD25 expression in the heart graft. Furthermore, in untreated allografts, IL-2, TNFα and IFN-γ were strongly expressed, an effect that markedly decreased after simulect treatment. Finally, IL-4, IL-5, IL-6 and IL-10 expression was strong in anti-CD25-treated allografts. Conclusions These results suggest that anti-CD25 antibody treatment may not only neutralize CD25 activity but also play a role in altering cytokine mRNA expression and prolong the survival of allografts.