SYBR Green 实时荧光定量 PCR 法检测人乳腺球蛋白在乳腺癌诊断中的应用?

目的：探讨 SYBR Greens 实时荧光定量 PCR 法在乳腺癌诊断中的应用价值。方法以β-actin 为内对照,采用荧光定量 PCR(FQ-PCR)法检测45例健康女性体检者、91例良性乳腺疾病、193例乳腺癌以及87例其他肿瘤患者外周血中人乳腺球蛋白(human mammaglobin,HMAM)的表达量,分析其在不同临床病理因素情况下基因表达量的差异,并与 RT-PCR 法及其他乳腺癌标志物(CEA、CA125和 TSGF)进行灵敏度和特异性的比较。结果乳腺癌患者 HMAM 阳性率明显高于健康体检者、良性乳腺疾病和其他肿瘤患者(P <0.05);良性乳腺疾病和其他肿瘤患者 HMAM 阳性率高于健康体检者(P <0.05);良性乳腺疾病和其他肿瘤患者 HMAM 阳性率比较,差异无统计学意义(P >0.05)。乳腺癌患者 HMAM 表达与年龄、肿瘤大小、乳腺癌类型及雌激素受体、孕激素受体表达无关(P >0.05),与乳腺癌临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移及 HER2/neu 表达呈正相关(P <0.05)。HMAM 对乳腺癌诊断的灵敏度高于 TSGF 和 CEA(P <0.05),特异性高于 CA153、TSGF 和 CEA(P <0.05)。SYBR Green FQ-PCR 对乳腺癌检测的灵敏度和特异性均高于 RT-PCR(P <0.05)。结论SYBR Green FQ-PCR法检测 HMAM 灵敏度高、特异性强,可有效辅助乳腺癌的诊断。     

荧光定量反转录PCR检测新生儿脐血ζ珠蛋白mRNA的转录水平

目的 运用荧光定量反转录PCR技术,检测新生儿脐血ζ珠蛋白mRNA的转录水平。方法 以基因型为（αα/αα）的新生儿作为正常对照组,基因型为（――/αα）的新生儿为病例组。选择β肌动蛋白基因为校正基因,ζ珠蛋白基因为目的基因。运用双标准曲线法检测两组新生儿脐血的ζ珠蛋白mRNA的转录水平。结果 病例组的ζ珠蛋白mRNA的平均转录水平明显增高。结论 通过荧光定量反转录PCR技术能够检测出基因型为（――SEA/αα）的新生儿的ζ珠蛋白mRNA转录水平的增高,具有较好的诊断价值。     

实时荧光定量PCR法检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的临床价值

目的:比较运用实时荧光定量PCR法联合不同生物标志物细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)?乳珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)?小黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的临床价值?方法:运用实时荧光定量PCR法检测人乳腺癌细胞株MCF-7中的生物标志物CK19?hMAM?SBEM的表达情况,对20例健康志愿者和20例乳腺良性疾病患者(对照组人群)进行检测以确定CK19?hMAM?SBEM在外周血中的基础表达水平,检测94例可手术乳腺癌患者外周血中CK19?hMAM?SBEM表达情况?结果:人乳腺癌细胞株MCF-7中CK19?hMAM?SBEM均有表达,Ct值分别为13.87?34.47?20.14;40例对照组人群中有1例表达CK19,另有1例表达hMAM,未检测到SBEM表达;94例可手术乳腺癌患者中CK19表达率49%?hMAM表达率34%?SBEM表达率13%,联合CK19?hMAM?SBEM阳性率为56%?结论:运用多标志物(CK19?hMAM?SBEM)联合的实时荧光定量PCR法检测乳腺癌外周血CTCs具有较高的敏感性,同时特异性并不降低?     

荧光定量反转录PCR检测新生儿脐血ξ珠蛋白mRNA的转录水平

目的运用荧光定量反转录PCR技术,检测新生儿脐血ξ珠蛋白mRNA的转录水平。方法以基因型为（αα/αα）的新生儿作为正常对照组,基因型为（--／αα）的新生儿为病例组。选择β肌动蛋白基因为校正基因,ξ珠蛋白基因为目的基因。运用双标准曲线法检测两组新生儿脐血的ξ珠蛋白mRNA的转录水平。结果病例组的ξ珠蛋白mRNA的平均转录水平明显增高。结论通过荧光定量反转录PCR技术能够检测出基因型为（--SEA／αα）的新生儿的ξ珠蛋白mRNA转录水平的增高,具有较好的诊断价值。     

人乳腺珠蛋白临床应用研究进展

人乳腺珠蛋白(hMAM)是一种分泌型球蛋白,在乳腺癌组织中高表达,具有乳腺组织特异性。hMAM是一种良好的乳腺肿瘤标志物,具有重要的临床应用价值,对乳腺癌早期诊断与鉴别诊断具显著意义,并为乳腺癌的免疫治疗、基因治疗提供广阔的应用前景。     

聚合酶链反应检测乳腺癌骨髓微小转移的意义

目的：探讨聚合酶链反应(PCR)检测乳腺癌骨髓微小转移方法的可能性及其意义，寻找一种特异性强、灵敏度高的技术检测骨髓微转移灶。方法：采用巢式PCR，通过扩增乳腺组织特异性基因hM-AM mRNA，对43例乳腺癌患者骨髓hMAM mRNA表达情况进行分析。结果：采用双侧髂前上嵴或髂后上嵴多点穿刺的方法，hMAM mRNA阳性率达55．81％(24／43)。结论：骨髓检测微转移相对于传统的组织学方法有明显进步，将对乳腺癌早期转移的诊断以及指导临床治疗和预后判断产生深刻影响。     

乳腺癌患者骨髓微小转移灶的检测及临床意义

目的：检测乳腺癌患者骨髓微小转移灶,分析其与临床病期及远处转移的关系,并探讨其临床意义。方法：采用上皮膜抗原（EMA）单克隆抗本为探针,用免疫组化ABC法检测乳腺癌患者骨髓中EMA表达阳性细胞。结果：58例乳腺癌患者有33例骨髓中找到EMA表达阳性细胞,阳性率为57％;晚期患者阳性细胞检出率显著增高;术后复发及有骨转移的患者较无复发及骨转移的患者阳性细胞检出率高;该方法与骨髓常规涂片检查比较,其阳性细胞检出率有显著差异。结论：骨髓中EMA表达阳性细胞的检测可作为评价乳腺癌患者病情、了解有无复发及骨转移的重要指标之一。     

乳腺癌骨髓微小转移的检测及其预后意义

采用免疫组化技术连续对我院８２例传统检查无远处转移且行手术治疗的乳腺癌患者，进行骨髓内上皮膜抗原（ＥＭＡ）和（或）角蛋白（ＫＴ）表达细胞的测定，６８例得到随访。结果发现，骨髓阳性患者２８例５年生存率仅为２５％，而４０例骨髓阴性患者高达８５％，两者差别明显（Ｐ＜０．００５）。此外，骨髓阳性与预后指标如腋淋巴结状态、临床分期有密切联系。研究表明，该方法判断乳腺癌预后敏感、特异、直接，是检测乳腺癌微小转移的好方法。同时该方法对术后综合治疗的选择有一定的指导意义。     

新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响

目的：观察新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响。方法：以48例具备新辅助化疗条件的乳腺癌患者为研究对象,采用RT—PCR技术,联合检测外周血中CK-19mRNA、VEGFmRNA和hMAMmRNA的表达,观察新辅助化疗前后血微转移因子变化。结果：本组乳腺癌微转移因子阳性率在病理分级中差异无显著性意义（P〉0．05）;在分期中,分期越高阳性率越高（P〈0．05）;化疗方案可影响微转移因子阳性率的变化（P〈0．01）。结论：通过检测乳腺癌患者外周血中微转移因子．有可能成为判断乳腺癌预后和指导治疗的指标。     

乳癌阴性淋巴结微转移检测的临床意义

目的 探讨乳癌淋巴结微转移与临床病理参数的关系及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法,用细胞角蛋白CK、上皮膜抗原EMA、癌胚抗原CEA检测36例常规病理检查无淋巴结转移的腋窝淋巴结389枚.结果 36例乳癌患者中12例有淋巴结微转移(33.3%).微转移与肿瘤大小、病理性质、淋巴结阳性率正相关(P<0.05).结论 对常规检测淋巴结阴性的乳癌,微转移检测可以准确地确定临床分期,对指导治疗、判断预后有积极的临床意义.     

乳腺癌患者外周血CK-19 mRNA检测的临床意义

目的探讨外周血CK-19mRNA表达与乳腺癌的关系，评价其在乳腺癌诊断上的价值。方法应用RT-PCR技术检测200例乳腺癌患者外周血中CK-19mRNA表达情况，并以66例乳腺良性疾病和60例正常健康女性作为对照。结果200例乳腺癌患者48例外周血CK-19为阳性，66例乳腺良性疾病患者中3例阳性，而同时检查的60位健康者，他们的外周血CK-19均为阴性；不同年龄病人的CK-19检测阳性率对比，彼此之间差异无统计学意义；肿瘤不同分期CK-19阳性率对比差异有统计学意义。结论RT—PCR法检测CK-19mRNA可作为乳腺癌诊断的指标。     

人乳腺球蛋白及Ki-67在乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨人乳腺球蛋白及Ki-67在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法随机选取152例乳腺癌病人作为实验组,并选取30例乳腺良性病变(纤维腺瘤)作为对照组,应用免疫组化Maxvision法检测人乳腺球蛋白及Ki-67在乳腺癌组织及乳腺良性病变组织中的表达,并比较其表达差异性和相关性。结果人乳腺球蛋白在乳腺癌组及乳腺良性病变组织中的表达率分别为51.3%、0.00%,人乳腺球蛋白在乳腺癌组和乳腺良性病变组表达差异有统计学意义(P<0.05)。人乳腺球蛋白的阳性表达与淋巴结转移、组织学分级、临床分期、c-erbB2(人表皮生长因子受体)有关(P<0.05),与年龄、月经情况、诊断时肿瘤大小无关(P>0.05)。Ki-67在乳腺癌组及乳腺良性病变组织中的表达率分别为68.7%、0.00%,Ki-67在乳腺癌组织和乳腺良性病变组表达差异有统计学意义(P<0.05)。Ki-67的阳性表达与临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移情况有显著相关性(P<0.05),与患者的年龄、月经状况无关(P>0.05)。结论人乳腺球蛋白及Ki-67可能参与了乳腺癌的发生发展过程,对乳腺癌的浸润和转移及预后评估具有一定的临床参考意义。     

外周血人类斯钙素1基因表达与消化道恶性肿瘤微转移关系的研究

目的：探讨靶基因人类斯钙素1(hSTC—1)在消化道恶性肿瘤患者外周血中的表达以及与肿瘤微转移的关系。方法：采用RT—PCR方法检测69例消化道恶性肿瘤患者外周血中的人类斯钙素1(hSTC—1)mRNA，12例健康成人、4例妊娠期妇女、14例消化道炎症疾病患者，并检测12例消化道恶性肿瘤患者手术中新鲜组织标本中的hSTC—1 mRNA。结果：69例消化道恶性肿瘤患者外周血中，食管癌组hSTC—lmRNA的阳性率为52．9％(9／17例)，胃癌组的阳性率为57．7％(15／26例)，大肠癌组的阳性率为53．8％(14／26例)，消化道恶性肿瘤患者手术中新鲜组织标本的阳性率为100％(12／12例)；而健康成人、妊娠期妇女、消化道炎症疾病患者外周血中无1例出现阳性。将肿瘤患者hSTC-1 mRNA检测结果与临床病理结合分析发现：外周血中的hSTC-1m RNA的表达与肿瘤的浸润深度、临床病理分期、淋巴结转移有显著相关性。结论：应用RT—PCR方法检测消化道恶性肿瘤患者外周血中的hSTC—1m RNA具有较高的敏感性和特异性，可成为检测肿瘤外周血微转移的一个新指标。     

乳腺癌组织中VEGF-C的表达与淋巴结转移及骨髓微转移的相关性的研究

【目的】探讨乳腺癌组织中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达及其与淋巴结转移和骨髓微转移的关系。【方法】应用免疫组织化学SP法,检测59例乳腺癌组织和10例乳腺良性病变组织中VEGF-C的表达情况;同时抽取相应的骨髓血标本,应用实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测标本中细胞角蛋白19（CK19） mRNA 的表达水平,并进行相关性分析。【结果】乳腺癌组织中 VEGF-C 阳性表达率62．71％（37/59）及表达程度均明显高于乳腺良性病变组（0％）,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。乳腺癌淋巴结转移阳性组VEGF-C表达阳性率及表达水平均高于淋巴结转移阴性组（ P ＜0．05）。VEGF-C表达水平与发病年龄、肿瘤大小、病理分型、临床分级、雌激素受体（ER ）水平、孕激素受体（PR ）水平无关,但其表达水平与人类表皮生长因子受体2（HER-2）表达水平显著相关（ P ＜0．05）。CK19 mRNA在乳腺纤维腺瘤患者骨髓标本中未见表达,在乳腺癌患者骨髓血中有34例57．6％（25/59）阳性表达,乳腺癌骨髓微转移阳性组VEGF-C阳性表达率及表达水平均高于骨髓阴性表达组（ P ＜0．05）。骨髓CK19 mRNA表达水平与VEGF-C蛋白表达水平呈正相关（ P ＜0．05）。【结论】乳腺癌患者VEGF-C表达水平与淋巴结转移及骨髓微转移密切相关,提示V EG F-C可能参与了乳腺癌细胞的侵袭和播散。     

乳腺癌合并糖尿病围手术期的血糖监测及护理

目的消除或减少乳腺癌术后并发症，提高治愈率。方法对31例乳腺癌合并糖尿病患者围手术期做好血糖监测，饮食控制，病情观察，预防感染；同时重视心理护理，早期指导患侧上肢功能锻炼，做好出院指导。结果31例患者出院前空腹血糖控制在6．6—8．3mmol／L左右，全身情况良好，情绪稳定，未发生因糖尿病引起的并发症。结论严密血糖监测，积极预防感染等护理干预能促进患者身心康复。     

乳腺癌患者外周血中角蛋白19 mRNA,乳腺小粘蛋白mRNA和泌乳素诱导蛋白mRNA的检测及其临床意义

目的:研究乳腺癌患者外周血中角蛋白(CK)19mRNA,乳腺小粘蛋白(SBEM)mRNA和泌乳素诱导蛋白(PIP)mRNA的表达,并探讨三者在微转移检测中的意义。方法:用RT-PCR检测乳腺癌患者50例、结直肠癌20例、乳腺良性肿瘤21例、健康者20例外周血中的CK19mRNA、SBEM mRNA、PIP mRNA。结果:CK19mRNA在乳腺癌组的阳性率(36.0%)明显高于乳腺良性肿瘤组(0.0%,P<0.05)与健康者(0.0%,P<0.05)。SBEM mRNA、PIP mRNA在乳腺癌组的阳性率(28.0%、18.0%)明显高于其它3组(0.0%,P<0.05)。联合检测3个基因,可将阳性率提高到62.0%。结论:乳腺癌患者外周血中的SBEM mRNA、PIP mRNA均可能作为微转移标志物;而CK19mRNA作为乳腺癌微转移标志物的特异性尚待探讨;联合检测三者可提高乳腺癌外周血微转移的检出率。     

CK20 mRNA在大肠癌患者外周血微转移中的表达

目的检测大肠癌患者外周血中细胞角蛋白20（CK20）mRNA的表达,探讨其能否作为判断大肠癌患者外周血微转移及预后的分子生物学指标。方法采用RT—PCR技术检测32例大肠癌患者、11例肠道良性病变患者和20例健康体检者外周血中CK20 mRNA定性和半定量表达。结果（1）CK20 mRNA在大肠癌患者中的阳性率为50．00％,相对系数为（0．89±0．17）;在肠道良性病变患者中阳性率为9．09％,相对系数为0．11;在健康体检者中阳性率及相对系数均为0。大肠癌患者与肠道良性病变患者、健康体检者相比,CK20 mRNA明显增高（P〈0．05）。（2）CK20 mRNA阳性率和相对系数在不同临床分期、远处转移中差异有统计学意义（P〈0．05）;其阳性率在浸润深度、淋巴结转移中无统计学意义,但相对系数有统计学意义（P〈0．05）。阳性者生存率低于阴性者（P〈0．05）。（3）CK20 mRNA与癌胚抗原（CEA）、糖链抗原199（CA199）表达呈正相关（P〈0．05）。结论CK20 mRNA的表达能预测大肠癌患者外周血微转移,可判断预后。