肝癌临床发展与cyclin D1表达DNA含量及细胞凋亡发生的关系

Cyclin D1基因是近年来提出的重要原癌基因,其基因表达产物在细胞周期关键限速点G1-S转换中起重要正调控作用[1].此外,细胞凋亡的发生及细胞增殖在肝癌的发生发展中也起重要作用[2,3].本研究通过检测cyclin D1表达、细胞凋亡发生和细胞DNA含量,探讨三者与肝癌临床分期之间的关系,为寻找对临床有价值的肿瘤标记物和预后判断提供帮助.     

NDRG1基因与肝组织分化及癌变的相关性

目的：通过检测NDRG1基因在各种组织和细胞中的表达谱，探讨NDRG1与肝细胞分化及肝癌发生、发展的相关性。方法：通过：Northem blot和RT-PCR方法检验NDRG1在肝癌和配对的非癌肝组织、正常肝、不同发育时期小鼠肝和人胎肝组织、人胚胎各组织以及多种细胞系中的表达谱。结果：NDRG1在肝癌组织中的表达量显著高于配对的非癌肝组织和正常肝组织中的表达量；而正常肝组织与非癌肝组织相比，表达量差异无显著性。在所研究的10种细胞系中，NDRG1的表达量在293T人肾细胞系中最高，永生化人肝细胞系L02次之，在未分化的HLE肝癌细胞系及低分化的肝母细胞瘤HepG2中最低。NDRG1的表达量随婴鼠肝和人胎肝的发育而增高，至已达分化的成年肝又有所降低。结论：NDRG1可能与肝细胞的分化相关，并在分化的一定阶段高表达，但不宜作为分化的标志物。NDRG1在肝癌中的高表达提示肝癌的形成不单是一种简单的去分化，其增殖、分化紊乱的错综复杂关系和所涉及的基因需要进一步深入研究。     

p57kip2 mRNA在肝细胞癌发生过程中的表达

目的研究p57^kip2 mRNA在人体肝细胞癌发生不同阶段的表达状况,探讨与肝癌发生发展及分化的关系.方法采用原位分子杂交技术检测正常肝组织、慢性肝炎、肝硬化、癌周肝硬化和肝细胞癌共42例标本中p57^kip2 mRNA的表达.结果正常肝组织组未见p57^kip2 mRNA表达,慢性肝炎组阳性表达率为57.14%（4/7）,肝硬化组阳性表达率为40.00%（4/10）,癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率分别为70.00%（7/10）和20.00%（2/10）.肝癌组p57^kip2 mRNA阳性表达率明显下降,与癌周肝硬化组差异有统计学意义（P〈0.05）.肝癌组分化好者与分化差者表达差异有统计学意义（P〈0.05）.结论p57^kip2 mRNA表达下降在原发性肝癌的发生发展中起着重要作用,且可能与肝癌的分化有关.     

核转录因子κBp65在肝炎后肝癌中的表达

目的探讨肝癌组织、癌旁肝炎组织中核转录因子κBp65（nuclearfactorsκBp65,NF—κBp65）的定量表达及与细胞DNA含量、细胞增殖周期的关系。方法对50例肝细胞性肝癌组织、癌旁肝炎组织和10例非癌旁来源的正常肝组织及非癌旁来源的病毒性肝炎组织,采用流式细胞术检测NF—κBp65含量、细胞DNA含量和增殖指数。结果NF—κBp65在正常组织、非癌旁来源的肝炎组织、癌旁肝炎组织和肝癌中荧光指数（F1）值分别为1．00±0．19,1．28±0．21,1．32±0．15和1．66±0．23,肝癌NF-κBp65含量高于癌旁肝炎组织（P〈O．05）。正常组织、非癌旁来源的肝炎组织、癌旁肝炎组织和肝癌的DNA指数（DI）值分别为1．02±0．17、1．04±0．11,1．09±0．18和1．40±0．22,肝癌异倍体率达82．00％,癌组的DNA含量和异倍体率均高于其他组（P〈0．05）。正常组织、非癌旁来源的肝炎组织、癌旁肝炎组织和肝癌的增殖指数（PI）值分别11．00士2．79、11．95±2．16,12．81±2．87和24．28±4．19,癌组PI值显著高于其他组（P〈0．05）。结论NF—κBp65过量表达、DNA含量增加和增殖指数升高与肝炎后肝癌的发生发展密切相关。     

ApoM在不同肝细胞中的表达及其与临床病理因素的关系

目的:检测ApoM基因在肝硬化肝组织、正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织中的表达并探讨其与肝癌临床病理联系。方法:采用免疫组化方法检测79例肝癌及癌旁组织、32例肝硬化及7例正常标本中ApoM的表达。结果:肝细胞癌患者组织中ApoM表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001)。ApoM在肝细胞癌组织、癌旁组织肝硬化组织和正常肝组织中表达具有显著性差异(P<0.05)。ApoM在中、高分化肝癌组织中表达高于低分化型。结论:ApoM在正常肝细胞中呈弱表达,肝硬化组织中较高表达,但在肝癌组织中呈低表达。其表达水平与肝癌细胞分化有一定关联,这表明ApoM在肝癌细胞发生、发展中发挥着作用。     

GCF2选择性剪接区在肝癌组织及细胞株中的表达及意义

目的：研究肿瘤相关抗原GCF2选择性剪接区在人肝癌细胞株、肝癌组织、癌旁组织及正常成人肝细胞及组织中的表达及意义.方法：采用RT PCR检测GCF2 5个选择性剪接区（D1～D5）在人肝癌细胞株、43例肝癌组织、相对应的癌旁组织,以及正常成人肝细胞株及9例肝组织中的表达.结果：GCF2 4个选择性剪接区（D1～D4）在所检测的细胞株、肝癌组织、癌旁组织和正常成人肝组织中均未检测到表达;GCF2选择性剪接区D5仅在人肝癌细胞株检测到阳性表达;在43例肝癌组织及相应的癌旁组织中,有41例肝癌组织GCF2选择性剪接区D5呈阳性表达,阳性表达率为95.35％ （41/43）,而9例正常肝组织均未检测到GCF2选择性剪接区D5表达.结论：GCF2 D5选择性剪接区在肝癌组织中有较高阳性表达,GCF2选择性剪接区D5可能与肝癌的发生发展有关.     

细胞周期蛋白B_1与存活素蛋白在肝细胞癌中的表达

目的研究细胞周期蛋白B1和存活素蛋白在不同分化程度肝癌细胞中的表达情况及与临床因素之间的关系,以探讨两者在肝细胞癌发病机制中的作用。方法选取我院病理科手术切除肝细胞肝癌存档蜡块46例,另取正常肝组织13例作为对照,以免疫组化法染色,测定细胞周期蛋白B1和存活素蛋白的表达情况,并结合患者的临床资料,运用统计学分析数据。结果细胞周期蛋白B1及存活素蛋白均在正常肝组织无表达,均在肝癌组织中有明显表达（P〈0.01）,并随着肝癌细胞分化程度的降低,表达逐渐增强（P〈0.01）,在低分化肝癌组织中的表达最强。均与肝内转移与否及3年生存率有关（P〈0.05）。两者的阳性表达呈显著正相关（r=0.476,P〈0.001）。结论细胞周期蛋白B1与存活素蛋白在肝癌细胞中,均随肝癌分化程度的降低表达增强,且两者的表达呈正相关。     

Chk1在原发性肝癌和肝非肿瘤组织中的表达

目的:探讨细胞周期检测点启动DNA损伤修复的主要激酶Chk1蛋白在肝非肿瘤组织和原发性肝癌组织中的表达差异、以及与临床病理特征之间的关系。方法:应用免疫组织化学法检测15例肝非肿瘤组织(其中正常肝组织7例、肝硬化组织8例)和41例原发性肝癌组织Chk1蛋白的表达。结果:Chk1蛋白在原发性肝癌组织中表达阳性率为73.2%,在肝非肿瘤组织中表达阳性率为26.7%差异有统计学意义(P<0.05);Chk1蛋白在不同分化程度的原发性肝癌患者中的表达有差异,有统计学意义(P<0.05)。结论:Chk1在原发性肝癌中高表达可能与原发性肝癌的发生、发展有关。     

人肝癌中SLIT2基因表达及启动子甲基化分析

目的 研究SLIT2在肝癌组织中表达和沉默的机制.方法 32个肝癌病人的癌组织及癌旁肝组织、3例正常肝组织及8个肝癌细胞系样本DNA和RNA抽提后,半定量RT-PCR检测SLIT2的表达.亚硫酸氢钠处理DNA,用MSP和测序法检测SLIT2启动子甲基化状态.结果 SLIT2启动子在肝癌组织中的甲基化率为84.3%,在相对应的癌旁肝组织中甲基化率为56.3%.肝癌细胞系的甲基化率为75%.而在正常肝组织中无甲基化.SLIT2启动子甲基化与肝癌的临床病理指标无相关性,但和患者的年龄有关.在用甲基化酶抑制剂5-aza-dC处理细胞后,SLIT2表达缺失的肝癌细胞系恢复了mRNA的表达.结论 SLIT2启动子甲基化是肝癌发生过程中的早期事件,可能是SLIT2在肝癌中表达沉默的主要机制.     

Fas相关磷酸酯酶-1在肝细胞肝癌组织中的表达及临床意义

目的:研究Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)在肝细胞肝癌组织中的表达及其在肿瘤细胞增殖和凋亡中的作用.方法:采用免疫组化SP法检测40例肝细胞肝癌、15例癌旁肝硬化和10例正常肝组织标本中FAP-1蛋白的表达水平并进行分析.结果:FAP-1在肝细胞肝癌组织中的阳性表达率为70%,而存癌旁肝硬化和正常肝组织中均未见表达.肝细胞肝癌组织中FAP-1的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小无明显差异(P>0.05);但与分化程度、转移有关,肿瘤分化越低,阳性率越高(P<0.05),转移组的阳性率高于无转移组(P>0.05).结论:FAP-1在肝细胞肝癌组织中广泛表达,且在临床有转移和病理分化低的组织中表达增高;表明FAP-1是凋亡抑制因子,并且可能促进了癌细胞异常增殖.     

Ⅱ.3′-甲基奶油黄诱癌不同阶段的肝细胞DNA含量变化

本文利用细胞分光光度技术,系统地、多阶段地观察了大鼠肝癌发生过程中 DNA 含量的变化规律。结果显示3′-Me-DAB 诱癌两个月后,二倍体肝细胞就有明显的增加,在癌前病变中二倍体肝细胞进一步增加;早期肝癌及癌旁细胞是二倍体型的,提示缺乏分化能力的二倍体肝细胞在肝癌发生发展中有着重要的意义,它们很可能是细胞转化的一个重要标志。此外,癌细胞 DNA 含量结合病理形态更能客观地反映肿瘤恶性程度。     

异基因造血干细胞移植后供体基质细胞植活证据的研究

目的:探讨转录因子GATA4在肝癌细胞中的表达及其在肝癌发生中的作用.方法:将GATA4真核表达载体转染小鼠正常肝细胞,RT-PCR、免疫组化鉴定转染效果,G418筛选稳定表达细胞克隆;进行细胞计数并绘制未转染、空转染、转染GATA4组及肝癌细胞组细胞生长曲线;RT-PCR法比较成纤维细胞(3T3,L1)、GATA4转染肝细胞(BNLG,L2)、未转染肝细胞(BNL,L3)、肝癌细胞株H22细胞(H22,L4)、肝癌细胞株Hepa1-6细胞(Hepa1-6,L5)和小鼠孕13.5 d胎肝细胞(孕13.5d胎肝,L6)的GATA4、胎蛋白转录因子(FTF)和甲胎蛋白(AFP)mRNA的表达.结果:GATA4真核表达载体转染效果较好;小鼠肝癌细胞株高表达GATA4 mRNA而正常肝细胞几乎不表达;GATA4转染组小鼠肝细胞增殖速度明显大干未转染和空转染组,但要小于肝癌细胞组.L1～L6的GATA4、FTF、AFP mRNA表达强度分别为0.04±0.02,0.28±0.03,0.04±0.02,0.26±0.03,0.32±0.04,0.24±0.03;0.04±0.02,0.26±0.02,0.08±0.02,0.22±0.02,0.26±0.02,0.26±0.01;0.04±0.01,0.37±0.03,0.14±0.02,0.50±0.03,0.51±0.03,0.49±0.03.L1、L3与L2、L4、L5、L6比较差异显著(P＜0.01),说明正常肝细胞的GATA4、FTF、AFP mRNA表达明显低于肝癌和胎肝细胞,转染后表达增高.结论:GATA4在肝癌细胞中高表达,并能够促进正常肝细胞增殖,促进FTF、AFP mRNA的表达,可能参与肝癌的发生、发展.     

PTEN在肝硬化、肝细胞性肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨抑癌基因PTEN在肝硬化、肝癌组织中的表达及临床意义.方法用S-P免疫组织化学方法分别检测62例肝细胞性肝癌(HCC)15例肝硬化及10例正常肝脏PTEN蛋白表达状况.结果 10例正常肝组织中PTEN蛋白均为阳性表达. HCC中PTEN 蛋白的阳性率69.4%(43/62),明显低于肝硬化组(93.3%)及正常肝组织组(100%)(P<0.01).PTEN蛋白在高分化、中分化、低分化肝细胞性肝癌中的阳性率分别为75.1%(21/28)、71.4%(15/21)和53.8%(7/13),肝细胞性肝癌中PTEN蛋白阳性表达率与肿瘤的组织分化及其它临床病理因素无关(P＞0.05).肝癌PTEN蛋白阳性表达率与有无合并肝硬化无关(P＞0.05).结论 PTEN表达缺失在肝细胞性肝癌的发生和发展过程中发挥重要作用,检测PTEN蛋白表达有助于肝细胞性肝癌的诊断.     

导向治疗后图象分析肝癌细胞核DNA含量

用图象分析技术测定正常肝、导向治疗后及未经治疗肝癌DNA含量共44例。结果发现二低异倍体(LAN)多见于导向治疗后病人;而高异倍体(HAN)则多见于未经治疗病例(P<0.05)。正常肝、治疗组与未治疗组的DNA含量υ值中位数分别为1.38、2.33和3.30。结果提示:HAN肝癌具有较高的放射敏感性,DNA含量高的癌细胞可能对射线致死性染色体损伤的敏感性也高。事实证明:DNA含量分析可为估价肝癌病人疗效和预后提供客观的定量参数。     

盘状结构域受体在人肝癌、肝硬化与正常肝组织中的表达及其意义

目的 研究人肝癌、肝硬化及正常肝组织中盘状结构域受体DDR1、DDR2的表达情况,了解DDRs表达在上述组织中的表达有无差异及其相关性.方法 分别采用免疫组化及Western blotting技术检测38例肝癌合并肝硬化患者的肝癌与肝硬化组织及正常肝组织中DDRs蛋白的表达,探讨DDRs表达情况与肝癌及肝硬化的关系.结果 DDR1在肝癌组织中的表达率及表达水平显著高于肝硬化及正常肝组织,DDR2在肝硬化组织中的表达率及表达水平高于肝癌及正常肝组织.结论 DDR1与肝癌的发生与发展可能相关,DDR2可能与肝硬化的发生发展相关.     

肝细胞肝癌组织中ET-1、MMP-2、CD31蛋白的表达及意义

目的:探讨内皮素-1(ET-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、CD31在肝细胞肝癌组织中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学方法分别检测30例肝细胞肝癌组织及相应癌旁正常肝组织中ET-1、MMP-2、CD31的表达.结果:ET-1蛋白、MMP-2蛋白、微血管密度(MVD)在正常肝组织及肝细胞肝癌组织中的表达差异有统计学意义(P均＜0.01).肝细胞肝癌组织中ET-1、MMP-2、MVD的表达差异与肿瘤的临床分期、分化程度有关(P均＜0.05);但与患者的年龄及性别无关(P＞0.05).肝细胞肝癌组织ET-1、MMP-2阴性组的MVD值较阳性组明显降低,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论:ET-1、MMP-2的高表达及MVD的增加与肝细胞肝癌的发生和恶性发展有关,与肿瘤的临床分期、分化程度有关.     

转录因子GATA4和甲胎蛋白在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达对比及相关性

目的:探讨转录因子GATA4和甲胎蛋白(AFP)在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达及二者相关性.方法:获取小鼠孕10.5 d、孕13.5 d、孕15.5 d、孕17.5 d、出生后0.5 d的肝组织,半定量RT-PCR检测GATA4和AFP mRNA的表达,并以成鼠肝、正常肝细胞株和肝癌细胞株作为对照.将小鼠GATA4真核表达载体成功转染正常肝细胞并鉴定,将多柔比星作用肝癌细胞,然后均进行以下指标监测:半定量RT-PCR法检测GATA4、AFP和胎蛋白转录因子(FTF)mRNA的表达,免疫印迹法检测GATA4和AFP蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清AFP的含量.结果:随着胎肝细胞分化的不断成熟,GATA4和AFP的表达逐渐下降,至出生后0.5 d已降至成肝水平.GATA4、FTF和AFP在正常肝细胞不表达,而在肝癌细胞高表达;正常肝细胞转染GATA4后,FTF和AFP表达显著增高,其细胞上清液AFP含量亦明显增高.多柔比星作用肝癌细胞后,6 h内GATA4的表达首先降低;随着时间延长(≥12 h),FTF和AFP表达逐渐降低,细胞上清液AFP含量亦逐渐降低,差别具有显著的统计学意义.结论:GATA4在胎肝组织和肝癌细胞中高表达并可能对AFP也有一定的上调作用.     

大鼠再生肝与BERH-2肝癌细胞核转录调控的比较研究

我们以正常分裂增殖能力强并具有部分胚胎性质的再生肝细胞与BERH-2肝癌细胞进行基因表达转录水平调控的比较研究,结果显示,再生肝和肝癌细胞核转录活性,尤其RNA聚合酶A的转录活性明显高于正常。RNA聚合酶B在再生肝中转录活性升高,但在肝癌却无明显变化,随着保温时间延长,反而略有下降。 利用DNA酶I为探针,对再生肝和肝癌细胞核进行DNA消化动力学研究表明,再生肝染色质DNA酶I消化百分率与正常相同,说明转录活性部位的数量不变;而肝癌细胞核经短暂消化,其染色质对DNA酶I的敏感性增加,说明转录活性部位数量增加。 利用DNA饱和分析法,在完整细胞核中测定了RNA聚合酶相对含量和相对比活性,显示再生肝RNA聚合酶含量增加,但比活性无明显变化;而肝癌细胞RNA聚合酶含量和比活性都高于正常。     

肝癌组织中Raf激酶抑制蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)在肝癌中的表达及其临床意义.方法 采用RT-PCR方法 检测肝细胞癌、癌旁组织及正常肝组织中RKIP mRNA的表达;采用组织芯片的免疫组织化学方法 检测RKIP蛋白和磷酸化的RKIP蛋白的表达,并分析RKIP蛋白和磷酸化的RKIP的表达与肝细胞癌临床病理学特征的关系.结果 RKIP mRNA在肝细胞痛组织、癌旁肝组织及正常肝组织的表达差异无统计学意义(P>0.05).肝细胞癌、癌旁肝组织及正常肝组织中RKIP蛋白表达的阳性率分别为22.2%、86%、93.8%,磷酸化的RKIP蛋白表达的阳性率分别为29.2%、84%、93.8%;肝癌组织中RKIP和磷酸化的RKIP蛋白表达均显著低于癌旁及正常肝组织(P<0.05);RKIP和磷酸化的RKIP蛋白表达与肿瘤大小、AFP水平及有无门静脉或胆管癌栓无关(P>0.05);RKIP和磷酸化的RKIP蛋白表达与肝细胞癌分化程度及有无肝内或淋巴转移有关,中高分化组RKIP和磷酸化的RKIP蛋白表达高于低分化组,无肝内或淋巴转移组高于有肝内或淋巴转移组(P<0.05).结论 RKIP和磷酸化的 RKIP 蛋白表达的减少或缺失与肝癌的发生、发展、侵袭转移密切相关.     

大鼠肝癌细胞与磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2过表达细胞蛋白含量及增殖情况的比较

目的　比较大鼠肝癌细胞与磷脂酰乙醇胺N 甲基转移酶 2 (PEMT 2 )过表达细胞蛋白含量及增殖情况。方法　采用载体构建、质粒转染和鉴定方法 ,得到PEMT 2过表达细胞 ,用细胞培养、计数及考马斯亮蓝法分析大鼠肝癌细胞与PEMT 2过表达细胞蛋白含量及增殖情况。结果　PEMT 2过表达细胞的生长速度明显低于大鼠肝癌细胞 ,而胞浆蛋白及总蛋白含量却明显高于大鼠肝癌细胞 (P <0 .0 1)。结论　PEMT 2过表达抑制了大鼠肝癌细胞的生长并使其趋向分化状态