尘肺患者肺泡巨噬细胞凋亡及其死亡信号调控机制研究

目的初步研究尘肺患者肺泡巨噬细胞(AM)的凋亡情况以及肿瘤坏死因子-α及其受体(TNF-α/TNFR)信号通路对AM凋亡的调控作用,为尘肺病的早期防治提供依据。方法选取30例尘肺患者为研究对象,收集其肺泡灌洗回收液,分离纯化AM,将实验分为5组,即未处理组、超氧化物歧化酶(SOD)组、TNF-α/TNFR组、抗-TNF-α组、半胱氨酰天冬氨酸特异蛋白(Caspase)-8抑制剂组。培养24h后,收获AM,分别用光学显微镜、透射电子显微镜、荧光共聚焦显微镜检测AM凋亡的情况。采用SAS8.2软件进行方差分析和2分析。结果光学显微镜、荧光共聚焦显微镜、透射电镜下均可见凋亡细胞染色质浓缩、边缘化、染色质分割成块状、核膜不完整和凋亡小体等典型的凋亡形态。SOD组、抗-TNF-α组、Caspase-8抑制剂组的AM凋亡指数均低于未处理组。结论尘肺患者AM存在一定程度的凋亡,表现为形态学的改变,凋亡程度与接尘性质有关,与尘肺期别、接尘工龄、脱尘年限无关。SOD复合酶、抗-TNF-α抗体、Caspase-8抑制剂可在信号通路的不同环节阻断信号转导,抑制AM凋亡的发生。     

活性氧对尘肺患者肺泡巨噬细胞凋亡信号转导途径的作用

目的 探讨活性氧(ROS)对Fas/FasL信号转导途径致肺泡巨噬细胞凋亡作用.方法 以中国北戴河煤炭工人疗养院无其他肺部疾病的Ⅰ期、Ⅱ期尘肺患者共45例为研究对象,将支气管肺泡灌洗液(BALF)中的肺泡巨噬细胞(AM)分两组培养,即对照组、超氧化物歧化酶(SOD)组.采用TUNEL技术检测AM凋亡情况,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA片段,Western blot法检测AM的Fas、FasL、caspase 8、caspase 3表达水平.结果 SOD组的凋亡指数(9.50±2.76)显著低于对照组(19.18±2.83,P< 0.05);SOD组的Fas、FasL、caspase 8、caspase 3蛋白表达水平(分别为0.107±0.065、0.115±0.047、0.231±0.139、0.312±0.114)均低于对照组(分别为0.209±0.084、0.210±0.097、0.374±0.071、0.441±0.095,P<0.05);对照组出现凋亡细胞特征性"梯状带",而SOD组未出现.结论 Fas/FasL信号转导途径介导的AM凋亡可能与ROS上调Fas/FasL系统的表达有关.     

煤工尘肺患者肺灌洗液中肺泡巨噬细胞自噬活动的研究

目的 比较不同期别煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞自噬活动的差别.方法 对116例行全肺灌洗的观察对象和煤工尘肺患者进行现场调查,并收集其肺灌洗液,纯化后得到肺巨噬细胞,用透射电镜观察其自噬形态,采用免疫印迹方法检测自噬标志性蛋白LC3及自噬调控蛋白beclin1、mTOR和p-mTOR的表达量,分析接尘观察对象、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞自噬活动的强弱变化.结果 透射电镜观察,发现自噬活动在不同期别煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞中Ⅱ期煤工尘肺肺泡巨噬细胞中有自噬溶酶体明显多于观察对象和Ⅰ期煤工尘肺,Ⅱ期煤工尘肺的肺泡巨噬细胞中自噬体和自噬溶酶体明显少于Ⅱ期煤工尘肺.Ⅱ期煤工尘肺患者肺巨噬细胞LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1蛋白表达量明显高于Ⅰ期,Ⅲ期煤工尘肺患者肺巨噬细胞LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1蛋白表达量明显低于Ⅱ期,Ⅲ期煤工尘肺患者肺巨噬细胞LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量明显高于Ⅰ期,Ⅱ期煤工尘肺患者Beclin1蛋白表达量高于接尘观察对象,差异均有统计学意义(P＜0.05).Ⅱ期煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞mTOR和p-mTOR的表达量明显低于接尘观察对象和Ⅰ期,Ⅲ期尘肺患者肺泡巨噬细胞mTOR和p-mTOR表达量明显高于Ⅱ期,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 不同期别煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞自噬活动不同.     

TRAIL及其受体对煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞凋亡调控作用

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体(TRAILR)信号转导通路在煤工尘肺(CWP)患者肺泡巨噬细胞(AM)凋亡中的作用机制。方法以接触煤尘及煤矽尘的24例观察对象和CWP壹期、贰期患者各22例为研究对象,收集大容量肺灌洗回收液,分离、纯化AM后,分为对照组、超氧化物歧化酶(SOD)组、TRAIL组、抗-TRAIL抗体组、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8抑制组、核转录因子(NF)-κB抑制剂组,给予相应处理后进行培养。收获细胞后,检测细胞凋亡情况,并提取蛋白采用免疫印迹法检测TRAIL/TRAILR信号转导通路Caspase-3、Caspase-8和死亡受体5(DR5)蛋白相对表达水平。结果 5个处理组AM凋亡指数均低于对照组(P<0.05),TRAIL组AM凋亡指数分别高于SOD组、抗-TRAIL抗体组、Caspase-8抑制剂组和NF-κB抑制剂组(P<0.05);CWP壹期和贰期患者AM凋亡指数均高于观察对象(P<0.05),CWP贰期患者AM凋亡指数高于CWP壹期患者(P<0.05);不同处理和不同程度患者AM凋亡指数的交互作用有统计学意义(P<0.01)。5个处理组Caspase-3、Caspase-8和DR5的蛋白相对表达水平分别低于对照组(P<0.05),TRAIL组Caspase-3和Caspase-8的蛋白相对表达水平分别高于SOD组、抗-TRAIL抗体组、Caspase-8抑制剂组和NF-κB抑制剂组(P<0.05),SOD组DR5蛋白相对表达水平分别低于TRAIL组、抗-TRAIL抗体组、Caspase-8抑制剂组和NF-κB抑制剂组(P<0.05);CWP壹期和贰期患者Caspase-3、Caspase-8和DR5的蛋白相对表达水平均高于观察对象(P<0.05);不同处理和不同程度患者Caspase-3的蛋白相对表达水平的交互作用有统计学意义(P<0.01),不同处理和不同程度患者Caspase-8和DR5的蛋白相对表达水平的交互作用均无统计学意义(P>0.05)。结论 TRAIL/TRAILR信号转导通路介导的AM凋亡可能在CWP发病中发挥一定作用;在不同环节对TRAIL/TRAILR信号转导通路进行抑制或阻断,可有效抑制CWP患者AM凋亡的发生。     

小儿血管瘤Fas/FasL的表达及意义

目的 探讨Fas/FasL在小儿皮肤血管瘤不同时期的表达情况及其与血管瘤退化的可能关系.方法 采用免疫组化SP法检测不同时期小儿皮肤血管瘤和瘤体周围正常皮肤组织中Fas,FasL及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;用末端脱氧核苷酸基转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)-生物素颈端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞.结果 Fas抗原阳性表达率在增生期、退化期和退化完成期分别为33.3%、87.5%和18.7%.退化期的阳性表达高于增生期和退化完成期(P＜0.05).FasL阳性表达率在增生期、退化期和退化完成期分别为22.2%、75.0%和25.0%,退化期的阳性表达高于增生期和退化完成期(P＜0.05).PCNA阳性表达率在增生期、退化期和退化完成期分别为83.3%、37.5%和25.0%.增生期组与退化期和退化完成期组比较差异有统计学意义(P＜0.05).增生期、退化期和退化完成期血管瘤组凋亡指数(AI)分别为1.7778±0.7535、23.3563±14.5164和1.4375±0.6043.退化期组与增生期及退化完成期组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Fas及FasL共同参与了小儿皮肤血管瘤增生与退化的全过程,其机制可能与Fas/FasL介导和调控血管瘤内皮细胞凋亡有关.     

黄麻粉尘对肺泡巨噬细胞作用的剂量—反应关系

本实验中作者对省内生产使用范围校广,接尘工人多的黄麻份尘进行研究,从体外染尘肺泡巨噬细胞(Am)的受损情况、功能及形态学变化来探讨黄麻粉尘对细胞的作用特点。结果表明,黄麻粉尘5个剂量组(200～3200μg/ml)的Am存活率均低于对照组(P<0.05);5项生化免疫指标,即乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)、组织胺(HIS) 免疫复合物(IC)、gG的测定值均高于对照组,并随剂量增高而逐渐增大。经相关分析,呈现剂量-反应关系;此外,细胞形态的各种变化也存在剂量依赖性。培养液中TDH、IC、IgG是反映黄麻粉尘致Am受损及功能改变的较好指标。     

Ⅰ期煤工尘肺肺泡巨噬细胞功能和形态的研究

利用全肺大容量灌洗和小容量肺叶灌洗的方法分别观察了１５例和２５例Ⅰ期煤工尘肺肺泡巨噬细胞功能和形态的变化。肺泡巨噬细胞形态表现为多种形式，既有幼稚型、成熟型，又有衰老型和坏死型，部分细胞表面有网眼性结构，肺泡巨噬细胞内含有大量的粉尘，诱发活性氧自由基的产生，损伤细胞膜性结构，脂质过氧化产物增加，同时肺泡巨噬细胞处于机能代偿状态表现为细胞内容物增多，导致某些酶如乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性升高。     

石英和石棉尘对体外不同种属肺泡巨噬细胞的毒性作用

吸入石英和石棉粉尘可导致肺组织发生一系列病理变化。肺泡巨噬细胞(AM)在机体防御机制和肺纤维化的发展过程中起了关键的作用。虽然有关石英、石棉以及其它粉尘对不同种属的AM的毒性作用的研究很多,但迄今尚无粉尘对不同种属AM毒性作用间比较的报道。本研究通过体外实验的方法比较研究裸露的及表面结构变化的石英和温石棉粉尘对大鼠(R)、牛(B)、狗(D)、猴(M)和人[吸烟者(HS)和肉瘤患者(HSP)]的AM以及人类单核细胞系U937细胞株的细胞毒性作用。     

矽肺,煤工尘肺肺泡巨噬细胞膜性质和结构的改变

矽肺、煤工尘肺肺泡巨噬细胞膜性质和结构的改变刘保连，姚汝琳，郭鼐，张国高体外实验已经证明粉尘作用于肺泡巨噬细胞可引起细胞膜流动性和通透性发生变化〔１，２〕。而有关矽肺和煤矽肺患者肺泡巨噬细胞膜流动性和通透性的改变未见报道。本文阐述了上述指标和肺泡巨噬...     

尘肺患者血清超氧化物歧化酶的检测分析

目的检测尘肺患者血清中超氧化物歧化酶(SOD)的活力并分析与之有关的因素。方法采用黄嘌呤氧化酶法分别测定92例尘肺病人、98例0+者和100例正常对照血清中SOD的活力。结果尘肺患者血清SOD的活力低于0+者,而0+者SOD活力低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。尘肺患者及0+者血清SOD活力均与接尘工龄有关。结论尘肺患者及0+者血清SOD活力降低,且与工龄呈负相关关系(P<0.05)。     

老年性白内障患者血清及红细胞中超氧化物歧化酶水平研究

[目的]为探讨超氧化物歧化酶(SOD)与老年性白内障(SC)的关系。[方法]应用黄嘌呤氧化酶法,对128例老年性白内障患者血清T-SOD,红细胞Cu-ZnSOD活力进行检测,并与100例健康老年人作比较。[结果]老年性白内障患者T-SOD,Cu-ZnSOD活力都明显低于正常对照组,差异有显著性(P<0.01)。[结论]超氧化物歧化酶与老年性白内障密切相关,二者的动态检测和即时纠正有助于对老年性白内障预防与延缓病程。     

糖皮质激素对重症肌无力患者外周血T淋巴细胞Fas表达的影响

目的 探讨糖皮质激素治疗重症肌无力(MG)与Fas介导的细胞凋亡的关系.方法 选择17例MG患者,其中6例接受糖皮质激素治疗(糖皮质激素治疗组),11例未接受糖皮质激素治疗(无糖皮质激素治疗组);另选择同期健康自愿献血者13例作为健康对照组,采用流式细胞技术检测三组外周血T淋巴细胞表面CD4、CDs及Fas的表达.结果 糖皮质激素治疗组外周血T淋巴细胞表面CD4-CD8+表达高于健康对照组[(36.75±11.56)%比(26.31±9.00)%],CD4-CD8-表达低于健康对照组[(30.56±9.72)%比(42.96±11.54)%],差异有统计学意义(P=0.027、0.018);糖皮质激素治疗组外周血T淋巴细胞表面CD4-CD8+表达高于无糖皮质激素治疗组[(36.75±11.56)%比(25.24±7.63)%],差异有统计学意义(P=0.019).糖皮质激素治疗组外周血T淋巴细胞表面Fas+、CD8+Fas+表达高于健康对照组[(46.10±7.13)%比(31.22±13.00)%,(62.86±12.29)%比(45.59±11.50)%],差异有统计学意义(P=0.006、0.003).糖皮质激素治疗组CD8+Fas+表达高于无糖皮质激素治疗组[(62.86±12.29)%比(50.84±8.31)%],差异有统计学意义(P=0.034).结论 糖皮质激素治疗对MG患者外周血T淋巴细胞亚群分布具有影响.Fas介导的细胞凋亡可能是糖皮质激素治疗MG的机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the relation between Fas-mediated apoptosis and glucocorticoid treatment in myasthenia gravis (MG). Methods In 17 patients with MG, 6 patients received glucocorticoid treatment (glucocorticoid treatment group),and 11 patients were treated without glucocorticoid (nonglucocorticoid treatment group). Meanwhile, 13 healthy cases were selected as healthy control group. CD4,CD8 and Fas expressions in peripheral blood T lymphocyte were detected by flow cytometry in three groups and analyzed. Results The percentage of CD4-CD8+ cells in peripheral blood T lymphocyte in glucocorticoid treatment group was significantly higher than that in healthy control group[(36.75 ± 11.56)% vs. (26.31 ±9.00)%, P = 0.027], while the percentage of CD4-CD8- cells was significantly lower [(30.56 ± 9.72)% vs.(42.96 ± 11.54)%, P =0.018]. The percentage of CD4-CD8+ cells in peripheral blood T lymphocyte in glucocorticoid treatment group was significantly higher than that in non-glucocorticoid treatment group [(36.75 ± 11.56)% vs. (25.24 ±7.63)% ,P =0.019]. The percentages of Fas+ and CD8 +Fas+ cells in peripheral blood T lymphocyte in glucocorticoid treatment group were significantly higher than those in healthy control group[(46.10 ± 7.13)% vs. (31.22 ± 13.00)%, P=0.006; (62.86 ± 12.29)% vs. (45.59 ±11.50)%, P = 0.003]. The percentage of CD8+ Fas+ cells in peripheral blood T lymphocyte in glucocorticoid treatment group was significantly higher than that in non-glucocorticoid treatment group [(62.86 ± 12.29)%vs (50.84 ± 8.31 )%, P = 0.034]. Conclusions Glucocorticoid treatment may have influence on peripheral blood T lymphocyte subsets in patients with MG. Fas-mediated apoptosis may be involved in the mechanism of glucocorticoid treatment in MG.     

SiO2刺激矽肺肺泡巨噬细胞对MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的 探讨SiO2对矽肺患者的肺泡巨噬细胞(AM)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1表达的影响.方法 收集矽肺患者肺泡AM,体外经SiO2刺激3、6、12、18、24、36 h,分别用明胶酶谱法和免疫细胞化学方法检测AM中TIMP-1、MMP-9蛋白表达和MMP-9活力.结果 实验组AM中6、12、18、24 h MMP-9的蛋白表达增强,在18 h时最高(积分吸光度值为0.386±0.037),与同期对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组12、18、24、36h AM中MMP-9活力的表达增强,在24 h最强(吸光度值3.061±0.153),与同期对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组与对照组各时间点TIMP-1蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外SiO2刺激矽肺肺泡AM可影响MMP-9蛋白及其活力的表达.     

Angiostatin和Fas基因对人结肠癌的协同抑制作用

目的 探讨血管生成抑素Angiosmtin(AS)基因和Fas基因对人结肠癌细胞系LOVO的协同抑制作用.方法 构建pcDNA3-AS和pcDNA3-Fas质粒,用脂质体法分别将AS、Fas、AS和Fas基因转染体外培养的人结肠癌细胞系LOVO,用Western blot法检测目的 基因的表达,用MTT法检测转染AS和Fas基因对体外培养的人结肠癌细胞生长的影响.通过瘤内注射分别将AS、Fas、AS和Fas基因转染裸鼠皮下移植的人结肠癌肿瘤,检测首次基因转染后14 d肿瘤的大小.结果 基因转染后12、24、48和72h,Fas和AS共转染组及Fas组对人结肠癌LOVO细胞的抑制作用明显强于对照组(P＜0.01).质粒转染后14 d,Fas和AS共转染组小鼠的肿瘤体积明显小于对照组、Fas组和AS组(P＜0.05);Fas组和AS组的肿瘤体积明显小于对照组(P＜0.05).结论 AS和Fas基因对体内人结肠癌有协同抑制作用.     

矽肺患者肺泡巨噬细胞培养上清对人胚肺成纤维细胞c-myc基因表达的影响

目的 探讨矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)培养上清对人胚肺成纤维细胞(HEFB)c-myc基因表达的影响.方法 AM分为加尘组(SiO2,30μg/ml)和对照组,培养1、2、6、12、24和36 h,收集培养上清.Ⅲ代HEFB用质量分数为0.5%的血清培养液培养48 h使大部分细胞处于静止期后,加人SiO2刺激6 h的AM培养上清(S6组),用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法观察c-mycmRNA和蛋白的时程变化.然后将各组AM上清与静止状态的HEFB孵育2和7 h,观察c-myc mRNA和蛋白表达的变化.结果 HEFB在静止状态时c-myc mRNA和蛋白的表达为0,在对照组中,培养不同时间的AM上清刺激了c-myc mRNA及蛋白的表达,以AM培养12 h的卜清作用最明显,比值分别为0.749±0.088和0.759±0.101.加尘组中各上清也刺激了c-myc mRNA和蛋白的表达,但作用高峰提前,以SiO2刺激6 h的上清作用最明显,比值分别0.982±0.147和0.978±0.141.与同期对照相比,SiO2刺激1、2和6 h的AM上清诱导mRNA和蛋白表达增多,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 SiO2激活的AM培养上清可促进HEFB c-myc基因的表达.     

Chemiluminescence and superoxide dismutase in the plasma in patients with alcoholic and non-alcoholic liver injuries

The chemiluminescence level and superoxide dismutase (SOD) activity were determined in the plasma of patients with alcoholic and non-alcoholic liver injuries. Chemiluminescence level was significantly higher in alcoholics than in non-alcoholics. It increased significantly in patients with fatty livers and had a tendency to increase with the progression of alcoholic liver injury from a fatty liver to liver cirrhosis. Mn-SOD activity was elevated in patients with alcoholic liver injuries. Furthermore, there was a positive correlation between the levels of plasma chemiluminescence and plasma Mn-SOD activity. The increases in chemiluminescence and Mn-SOD activity suggests that the generation of a large amount of activated oxygen is associated with the pathogenesis and progression of alcoholic liver injury in humans.     

老年肺炎患者血浆超氧化物歧化酶水平与肺炎严重程度的相关性分析

目的探讨老年社区获得性肺炎(CAP)患者血浆超氧化物歧化酶(SOD)水平变化及与脓毒症、炎症指标的相关性,以期通过干预手段降低老年CAP患者的并发症及病死率。方法选择2013年1-10月住院确诊的141例老年CAP患者为肺炎组,同期选择90例非肺炎患者为对照组,分别测定两组患者血浆SOD、降钙素原(PCT)及C-反应蛋白(CRP)水平,依据脓毒症诊断标准将患者分为脓毒症组98例和非脓毒症组43例。结果肺炎组与对照组患者血浆SOD水平分别为(103.41±25.30)、(124.30±28.20)U/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);脓毒症与非脓毒症组患者血浆SOD水平分别为(99.24±23.40)、(112.91±27.20)U/ml,两组之间比较差异有统计学意义(P<0.05),PCT水平分别为(2.05±7.70)、(0.20±0.50)ng/ml,CRP水平分别为(76.05±70.00)、(33.39±43.50)mg/L,PCT和CRP在两组之间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);肺炎组血浆SOD水平与PCT、CRP呈负相关(r=-0.199、-0.232,P<0.05)。结论老年CAP患者血浆SOD水平降低,并随炎症程度进展及合并脓毒症,下降更为显著,反映老年肺炎患者尤其合并脓毒症时抗自由基氧化能力减低。     

乙二醛对小鼠脂质过氧化物水平及SOD活性的影响

目的 测定乙二醛染毒小鼠血清及组织中脂质过氧化主要产物丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力的变化,以探讨乙二醛毒性的可能机制。方法 40只小鼠分成1个对照组和3个实验组,实验小鼠的染毒剂量分别为1．29,mmol／kg、2．58mmol／kg和5．16mmol／kg,每天腹腔注射1次,连续染毒30d。用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定血清及组织中MDA含量,用黄嘌呤氧化酶法测定全血及组织中SOD活性。结果 乙二醛染毒小鼠高剂量组肾脏MDA含量与对照组相比显著升高,其他各项指标与对照组相比差异均无显著性;小鼠全血、肝脏和肾脏中SOD活性变化与对照组相比差异均无显著性。结论 乙二醛能够增高小鼠肾脏MDA含量,提示有可能导致肾组织氧化损伤。